雪白絲衣霉菌ff1-2及其篩選方法和應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】一種雪白絲衣霉菌株，命名為雪白絲衣霉菌FF1-2，保藏編號(hào)為CCTCC NO：M2013547。雪白絲衣霉菌FF1-2菌株的篩選方法由分離、純化步驟組成。雪白絲衣霉菌FF1-2菌株在棒曲霉素降解中的用途。采用本發(fā)明篩選方法篩選出的雪白絲衣霉菌FF1-2菌株，在含有500μg/mL棒曲霉素的液體培養(yǎng)基中使用，降解率達(dá)到100％，在含有500μg/mL棒曲霉素的蘋果漿中使用，降解率達(dá)到97％以上，降解率不受待降解物的pH值的影響。可應(yīng)用于水果及其制品、果渣飼料生產(chǎn)中。
CCTCC NO：M2013547
2013.11.05
【專利說明】雪白絲衣霉菌FF1-2及其篩選方法和應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于微生物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及到雪白絲衣霉的一種菌株。

【背景技術(shù)】
[0002] 棒曲霉素（Patulin，PAT)，又稱展青霉素，是一種具有較強(qiáng)毒性的真菌代謝產(chǎn)物， 晶體無色棱形，分子式為C7H 6O4，分子量為154,化學(xué)名稱為4-羥基4-氫-呋喃（3, 2-碳） 餅批喃 _2 (6_氧）麗[4-hydroxy-4_H-furo (3, 2c) pyran-2 (6H) -one]。具有基因毒性和細(xì)胞 毒性，能導(dǎo)致哺乳動(dòng)物細(xì)胞的DNA損傷，染色體畸變，并具有致癌性，免疫毒性和生殖毒性， 在動(dòng)物活體內(nèi)，會(huì)損害腎臟、肝臟和腸等器官組織，長期或短期接觸棒曲霉素會(huì)引起人及動(dòng) 物嚴(yán)重的健康問題。
[0003] 除棒曲霉以外，多種真菌可以產(chǎn)生棒曲霉素。在許多因霉菌腐敗的水果，如蘋果、 杏子、藍(lán)莓、櫻桃、葡萄、梨、桃子和李子及其制品中都有發(fā)現(xiàn)，以蘋果發(fā)霉最易產(chǎn)生該種毒 素。在酸性條件下，該毒素穩(wěn)定，耐熱，在水果制品生產(chǎn)過程中不易去除，成為判斷食品質(zhì)量 安全的一個(gè)重要指標(biāo)，受到世界各國及國際組織的極大關(guān)注。我國是水果及其制品生產(chǎn)和 出口的大國，棒曲霉素的污染問題，也成為限制我國水果及制品出口的瓶頸問題之一。因 此，為了保障人們的食品安全和身體健康，保證水果制品的順利出口，研發(fā)環(huán)保、安全、經(jīng) 濟(jì)、高效、實(shí)用的棒曲霉素新型脫除技術(shù)顯得尤為重要。
[0004] 目前，對(duì)棒曲霉素采用的脫毒方法主要是物理吸附，輻照處理，化學(xué)處理和生物 降解。雖然所有的這些處理都在一定程度上減輕毒素污染，但其不足在于：吸附脫除法處 理，棒曲霉素沒有得到根本的降解，而是轉(zhuǎn)移進(jìn)了吸附劑，7K，果渣和沉淀物中，依然對(duì)食用 果渣飼料的動(dòng)物及環(huán)境造成潛在的危害（張小平等，蘋果汁中棒曲霉素控制技術(shù)研究進(jìn) 展.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)，2004, 37 (11) :1672-1676);輻照和化學(xué)處理法可能造成水果制品重要 營養(yǎng)物質(zhì)的丟失，品質(zhì)劣化，成本較高等。
[0005] 由于物理和化學(xué)方法去除棒曲霉素存在種種應(yīng)用缺陷，目前生物降解成為安全、 高效且環(huán)保的解毒方法而備受國內(nèi)外關(guān)注，研究對(duì)象主要是酵母菌。培養(yǎng)液中棒曲霉素 的濃度不超過200 μ g/mL時(shí)，降解率最高可達(dá)到99%，同樣條件處理果汁效果極不理想 (Harwig^,Disappearance of patulin from apple juice fermented by Saccharomyces spp. Can Inst Food Sci Technol J,1973,6(I):45-46. Stinson 等，Disappearance of patulin during alcoholic fermentation of apple juice. Appl Environ Microbiol, 1978,36 (4):620 - 622 ;Castoria 等，Conversion of the Mycotoxin Patulin to the Less Toxic Desoxypatulinic Acid by the Biocontrol Yeast Rhodosporidium kratochvilovae Strain LSll， Journal of Agricultural and Food Chemistry，2011，59 (21): 11571-11578.)。利用酵母菌進(jìn)行棒曲霉素的生物控制是有效的，但酵母本身對(duì)該毒素 是敏感的，當(dāng)濃度大于200 μ g/mL時(shí)，酵母發(fā)酵解毒就會(huì)被完全抑制（Sumbu等，Action of patulin on a yeast. Appl Environ Microbiol, 1983,45 (I) :110-115)。因此，生物方法 降解更高濃度棒曲霉素的研究還未見報(bào)道。
[0006] 由于微生物數(shù)量大、種類多，基因資源豐富，幾乎所有導(dǎo)致環(huán)境污染的有機(jī)物都能 被微生物所分解，而且干凈徹底、無二次污染。因此，尋找不同微生物消除棒曲霉素污染的 潛力巨大。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明所要解決的一個(gè)技術(shù)問題在于提供一株雪白絲衣霉菌FF1-2。
[0008] 本發(fā)明所要解決的另一個(gè)技術(shù)問題在于為雪白絲衣霉菌FF1-2菌株提供一種篩 選方法。
[0009] 本發(fā)明所要解決的還有一個(gè)技術(shù)問題在于為雪白絲衣霉菌FF1-2菌株提供一種 新用途。
[0010] 解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是：命名為雪白絲衣霉菌FF1-2,于2013年 11月5日保藏于武漢武漢大學(xué)中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為CCTCC NO :M2013547。
[0011] 雪白絲衣霉菌FF1-2菌株的ITS-5.

【權(quán)利要求】
1. 一種雪白絲衣霉菌株，命名為雪白絲衣霉菌FF1-2,保藏編號(hào)為CCTCCNO: M2013547。
2. -種權(quán)利要求1雪白絲衣霉菌FF1-2菌株的篩選方法，其特征在于它是由下述步驟 組成： (1) 分離 含有雪白絲衣霉菌FF1-2菌株的酒窖窖泥每LOg加入到裝有50?IOOmL無機(jī)鹽 液體培養(yǎng)基的三角瓶中，加入7mg/mL的棒曲霉素水溶液作為碳源，使棒曲霉素的終濃度 為0. 3mg/mL，37°C，200r/min避光振蕩培養(yǎng)120小時(shí)制成培養(yǎng)物，吸取5ml培養(yǎng)物轉(zhuǎn)接于 50?IOOmL無機(jī)鹽液體培養(yǎng)基中，加入相同濃度的棒曲霉素水溶液，使棒曲霉素的終濃 度為0. 45mg/mL，37°C，200r/min避光振蕩培養(yǎng)120小時(shí)制備成菌懸液；取5ml菌懸液于 50?IOOmL無機(jī)鹽液體培養(yǎng)基中，加入相同濃度的棒曲霉素水溶液，使棒曲霉素的終濃度 為0. 6mg/mL，37°C，200r/min避光振蕩培養(yǎng)120小時(shí)，選擇含有微生物的菌懸液重復(fù)1次得 最終菌懸液； (2) 純化 吸取0. 5mL最終菌懸液，涂布于含0. 5mg/mL棒曲霉素的無機(jī)鹽固體培養(yǎng)基上，37°C避 光培養(yǎng)至長出單菌落，挑取較大的單菌落，獲得純培養(yǎng)物，于PDA固體培養(yǎng)基富集，得到雪 白絲衣霉菌株，命名為雪白絲衣霉菌FF1 -2，PDA斜面4 °C保存。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的雪白絲衣霉菌FF1-2菌株的篩選方法，其特征在于在分離步 驟（1)中所述的無機(jī)鹽液體培養(yǎng)基由下述的原料及其配比按常規(guī)方法制備成： Na2HPO4 4.3g KH2PO4 2.7g MgS04'7H20 0.2 g CaCI2 0.1 g (NH4)2SO4Ig NH4NO3Ig H3BO1 1.2xl〇-3g ZnSO4-TH2O 1.2xl0':,g MnS04*4H20 1.6xl0'3g CuS04v5H20 3.8XKT4g CoCI2.6H20 2.4x10'4g NaMo〇4-2H20 2.4^10'5g FeSO4WH2O 2.8xl0'3g 蒸饋水 加全I(xiàn)OOOmL 攪拌溶解，調(diào)pH至5. 0,121°C滅菌20分鐘，制備成無機(jī)鹽液體培養(yǎng)基； 在純化步驟（2)所述的無機(jī)鹽固體培養(yǎng)基的原料及其配比是在無機(jī)鹽液體培養(yǎng)基的 原料配比基礎(chǔ)上增加瓊脂20g，于滅菌前加入，制備成無機(jī)鹽固體培養(yǎng)基。
4. 權(quán)利要求1所述的雪白絲衣霉菌FF1-2菌株在棒曲霉素降解中的用途。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的雪白絲衣霉菌FF1-2菌株在棒曲霉素降解中的用途，其特征 在于用該菌株降解棒曲霉素的方法如下： 雪白絲衣霉菌FF1-2菌株于PDA斜面37°C活化7天，加入IOmL無菌水，制備成濃度為IO6個(gè)/mL的孢子懸液，用高效液相色譜儀檢測待降解物中棒曲霉素的含量，待降解物的pH 值為3?5時(shí)，加入孢子懸液，使每含1μg棒曲霉素的待降解物中含有20?200個(gè)孢子， 30?37°C振蕩培養(yǎng)至檢測不出棒曲霉素或30?37°C存放至檢測不出棒曲霉素止； 上述的含棒曲霉素的待降解物可以是蘋果汁、蘋果渣、蘋果漿、培養(yǎng)液以及含有棒曲霉 素的水果制品。
【文檔編號(hào)】C12N1/14GK104312924SQ201410305038
【公開日】2015年1月28日 申請(qǐng)日期:2014年6月30日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月30日
【發(fā)明者】張曉瑞, 郭玉蓉, 馬瑜, 孟永宏, 鄧紅 申請(qǐng)人:陜西師范大學(xué)