一種豇豆抗枯萎病的苗期鑒定方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于園藝作物抗病性檢測領(lǐng)域，涉及一種豇豆抗枯萎病的苗期鑒定方法，包括豇豆種子催芽、播種與育苗；接種專用菌株的分離、培養(yǎng)，枯萎病菌孢子懸浮液制備；病原菌侵染；發(fā)病調(diào)查等步驟。采用菌液浸泡侵染幼苗根系方式使豇豆幼苗人工感染枯萎病菌，將豇豆種子在育苗基質(zhì)中培養(yǎng)至二葉一心，再拔出侵染，故豇豆幼苗的長勢、大小易于控制，容易拔起，保證了鑒定結(jié)果的一致性和可靠性。本發(fā)明采用了專用的指示菌株、合適的侵染時(shí)間、合適的枯萎病菌孢子懸浮液濃度，侵染效果較好，接菌均勻，發(fā)病迅速。本發(fā)明只需將長勢一致的不同植株直接自然摩擦傷根后侵染病菌，操作簡便、鑒定迅速、結(jié)果可靠，尤其適合大批量豇豆育種材料的枯萎病抗性鑒定。
【專利說明】一種豇豆抗枯萎病的苗期鑒定方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于園藝作物抗病性鑒定【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種豇豆抗枯萎病的苗期鑒定方法，與作物抗病育種中抗性材料的早期快速鑒定【技術(shù)領(lǐng)域】有關(guān)。

【背景技術(shù)】
[0002]豇豆(學(xué)名Vigna unguiculata)俗稱角豆、姜豆、帶豆、掛豆角，屬于豆科一年生植物，主要產(chǎn)于熱帶、亞熱帶和溫帶地區(qū)。豇豆在我國栽培歷史悠久，種植分布面積廣，除青海和西藏外，全國各省市區(qū)均有種植。近年來，我國豇豆種植面積維持在33萬公頃以上。河北、河南、江蘇、浙江、安徽、四川、重慶、湖北、湖南、廣西等地每年栽培面積超過I萬公頃，并形成了浙江麗水、江西豐城、湖北雙柳等面積超過1000公頃的大型專業(yè)化豇豆生產(chǎn)基地。一般以春夏栽培為主，其次是秋季栽培。由于豇豆生長于高溫濕熱的環(huán)境，易誘發(fā)豇豆枯萎病的發(fā)生。
[0003]紅豆枯萎病菌(Fusarium oxysporum Schl.)以菌絲體和厚垣孢子隨病殘?bào)w遺落在土中越冬(種子也能帶菌)，能在土中營長時(shí)間的腐生生活。病菌借助灌溉水、農(nóng)具、施肥等傳播，從傷口或根冠部侵入，在維管束組織的導(dǎo)管中繁殖，并向上擴(kuò)展。豇豆枯萎病多數(shù)從開花期開始，結(jié)莢盛期可造成植株大量枯死。初期病株下部葉片先變黃，逐漸向上發(fā)展，病葉葉脈變褐，近脈的葉肉組織變黃，終致葉片干枯、脫落，病株易被拔起。檢視根部及莖基部，根部變褐腐爛，根莖維管束變紅褐色至黑褐色。嚴(yán)重危害時(shí)，全田植株死亡，僅?？萏僖黄?，相當(dāng)觸目。
[0004]培育抗病品種是防治豇豆枯萎病的重要方法之一，抗性資源的獲得對于抗病育種意義重大，客觀、快速地評價(jià)豇豆品種枯萎病抗性的強(qiáng)弱是豇豆抗枯萎病育種過程中最基礎(chǔ)、最重要的環(huán)節(jié)。目前豇豆枯萎病抗性鑒定主要是通過人工病圃鑒定和室內(nèi)苗期鑒定。人工病圃鑒定被認(rèn)為是最接近自然實(shí)際，最為可靠的抗性鑒定方法，在抗病育種過程中應(yīng)用最為普遍。但此鑒定方法過于依賴自然發(fā)病條件，如果環(huán)境條件不適合發(fā)病或者病圃病菌分布不均勻，容易造成抗性誤判，歷時(shí)太長，且具有較強(qiáng)的季節(jié)性。豇豆苗期鑒定方法簡便、迅速、容易控制外界環(huán)境條件。常用的方法為，剪根幼苗浸根法(方木壬等.豇豆枯萎病抗原篩選研究，華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，1984，5 (4):57-61.)、胚根法(張衍榮等.豇豆枯萎病抗病性鑒定技術(shù)研究，華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2005，26 (3):22-25.)。其中胚根法發(fā)芽率與成苗生長勢的差異常造成結(jié)果不一致，不能準(zhǔn)確反映苗期的抗性，并且胚根接種到苗期顯癥的周期比較長。剪根幼苗浸根法，雖然周期較短，簡便可行，但剪根長短易不均勻，且剪根費(fèi)時(shí)費(fèi)力。兩種鑒定方法均有一定的缺點(diǎn)，這是造成苗期鑒定結(jié)果與人工病圃鑒定存在顯著差異的原因之一。因此探索一套發(fā)病迅速、育苗時(shí)間短、管理簡便、適合大批量育種材料的豇豆枯萎病抗性快速鑒定方法對于評價(jià)豇豆種植材料的抗病性、培育抗病新品種、進(jìn)行合理品種布局具有重要意義。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種豇豆抗枯萎病的苗期接種鑒定方法。該方法簡便易行，所需設(shè)備較少，結(jié)果可靠，能較為準(zhǔn)確地反映不同豇豆品種對枯萎病的抗性表現(xiàn)。
[0006]實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的技術(shù)方案為:
[0007]一種豇豆抗枯萎病的苗期接種鑒定方法，包括以下步驟:
[0008]A、豇豆種子催芽:
[0009]選擇市售和常用栽培的豇豆品種作為鑒定對象；
[0010]挑選籽粒飽滿的豇豆品種種子，用紗布包好，在55°C恒溫水浴鍋中溫湯浸種2小時(shí)，進(jìn)行種子消毒，再將種子放在鋪有吸水紙的培養(yǎng)皿中，最后33°C恒溫處理，直至得到萌發(fā)種子。
[0011]B、播種與幼苗培育:
[0012]將萌發(fā)的種子播種于育苗基質(zhì)(簡稱基質(zhì)，配方見后)，進(jìn)行培養(yǎng)，得到二葉一心的幼苗。
[0013]C、豇豆枯萎病菌孢子懸浮液的制備:
[0014]a.選擇豇豆枯萎病田間典型病株，在發(fā)病植株莖基部病健交界處切取2mmX 2mm組織，用無菌水沖洗干凈；
[0015]b.對上述組織進(jìn)行消毒處理，用70%酒精消毒0.5min，再用0.1 %的升汞溶液消毒0.5-lmin，然后用無菌水沖洗3次，每次lmin，得到消毒處理后的病組織；
[0016]c.將消毒處理后的病組織接入PDA平板上，置25°C恒溫條件下培養(yǎng)；
[0017]d.當(dāng)接種后的PDA平板培養(yǎng)基的表面即植物病組織周圍長出菌落后，將該菌落轉(zhuǎn)入PDA斜面培養(yǎng)基中(在4°C冰箱內(nèi)貯存?zhèn)溆?，或可長期應(yīng)用)，篩選得到鑒定豇豆枯萎病的指不菌即5[豆枯萎病菌JWS-1,Fusarium oxysporum Schl.JWS-1,于2014年7月3日送中國.武漢.武漢大學(xué)中國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，其保藏號為CCTCC NO:M2014314 ；
[0018]e.從轉(zhuǎn)入菌落的PDA斜面培養(yǎng)基中取豇豆枯萎病菌JWS-1，轉(zhuǎn)入PDA平板培養(yǎng)基中，25°C恒溫培養(yǎng)7天，得到培養(yǎng)好的豇豆枯萎病菌；
[0019]g.將培養(yǎng)好的豇豆枯萎病菌，每皿加1mL滅菌水，用滅菌的蓋玻片刮取表面菌絲層，用三層紗布過濾得到分生孢子濾液，用血球計(jì)數(shù)板調(diào)整孢子濃度，得到枯萎病菌孢子懸浮液，孢子懸浮液濃度為3-7 X 16個(gè)/mL，優(yōu)選為5 X 16個(gè)/mL。
[0020]D、病原菌侵染處理:
[0021]a.用鏟子將二葉一心的幼苗從所述育苗基質(zhì)中取出(在提苗過程使之自然摩擦傷根，不需人工剪根來傷根)輕輕提苗并抖動(dòng)，進(jìn)行清洗處理，無需進(jìn)行傷根處理，得到自然傷根幼苗；
[0022]b.將自然傷根后的幼苗進(jìn)行侵染豇豆枯萎病菌處理，放置到枯萎病菌孢子懸浮液中，浸泡1min得到侵染苗，然后將所述的侵染苗移植到裝有消毒沙土基質(zhì)的營養(yǎng)缽中，置于塑料大棚中培養(yǎng)，溫度控制在28±2°C，相對濕度控制在85%或以上，進(jìn)行正常栽培管理，10天后調(diào)查發(fā)病情況。
[0023]E、發(fā)病調(diào)查:
[0024]分別于侵染處理后的10d、15d、20d、25d，調(diào)查所述侵染苗的發(fā)病狀況，根據(jù)豇豆枯萎病病情分級標(biāo)準(zhǔn)確定O、1、3、5、7、9共6個(gè)發(fā)病等級，再根據(jù)該發(fā)病等級計(jì)算病情指數(shù)，最后根據(jù)該病情指數(shù)判斷所述豇豆品種的豇豆枯萎病抗性分級。
[0025]上述育苗基質(zhì)及制備方法為:蛭石和干河沙按重量比為1:10混勻，再加入福爾馬林溶液或?qū)⒒|(zhì)在陽光下高溫燜曬消毒，得到育苗基質(zhì)。
[0026]豇豆枯萎病病情分級標(biāo)準(zhǔn)見表1:
[0027]表I豇豆枯萎病分級標(biāo)準(zhǔn)
[0028]
病級苗期分級標(biāo)準(zhǔn)
0健株，無癥狀
1子葉出現(xiàn)輕微病癥，但生長正常
3I片子葉黃化，影響生長
52片子葉黃化，或一片子葉枯死
72片子葉生長僵化，植株部分萎蔫或停止生長
9整株萎蔫、倒伏或枯死
[0029]病情指數(shù)(DI)計(jì)算方式為:
[0030]病情指數(shù)=Σ (級數(shù)X株數(shù))/(最高級數(shù)X總株數(shù))X 100。式中Σ為和
[0031]上述的的豇豆枯萎病抗性分級標(biāo)準(zhǔn)如下:
[0032]按病情指數(shù)(DI)分別劃分為，高抗(HR):0 < DI彡15 ;抗(R): 15 < DI彡35沖等(M):35 < DI ^ 55 ;感⑶:55 < DI ^ 75 ;高感(HS):DI > 75。
[0033]本發(fā)明的試驗(yàn)材料的豇豆品種包括之豇28、寧豇三號、臺灣七號豆角王、桂星101長豆角、雪龍888白玉豇豆、油白長豆角810以及美國無架豆和紫秋豇。
[0034]本發(fā)明的PDA平板培養(yǎng)基及制備方法為:去皮馬鈴薯200g，切成厚約2mm的片，力口入100mL水煮沸30min，用4層紗布過濾，向?yàn)V液中加入葡萄糖20g和瓊脂20g，加熱溶解后再補(bǔ)足水份至100mL ；自然pH(不調(diào)整)，于121°C高壓蒸汽下滅菌30min ;之后在超凈工作臺上倒平板，得到PDA平板培養(yǎng)基。
[0035]作為優(yōu)選方案，上述的枯萎病菌孢子懸浮液孢子濃度為3-7X 16個(gè)/mL，優(yōu)選為5 X 16 個(gè)/mL。
[0036]作為優(yōu)選方案，上述的浸泡豇豆枯萎病菌孢子懸浮液時(shí)間為lOmin。
[0037]本發(fā)明相比現(xiàn)有技術(shù)具有以下有益效果:
[0038]1、按步驟進(jìn)行鑒定的方法與大田成株期接種相比，避免了氣候條件不適宜、環(huán)境中其它病蟲害等因素的影響，在室內(nèi)進(jìn)行苗期抗病性鑒定條件較易控制，鑒定周期短、操作簡便、能節(jié)省大量人力物力，尤其適合大批量的豇豆材料的枯萎病抗性鑒定。
[0039]2、豇豆出苗好，根系發(fā)育完整。采用蛭石沙土做培養(yǎng)土吸水好，透氣性強(qiáng)，有利于豇豆出苗整齊一致。苗期鑒定中，需要在豇豆兩片真葉平展時(shí)，取出幼苗接種枯萎病菌孢子懸浮液，要求豇豆苗的根系發(fā)育良好。
[0040]3、由于將豇豆幼苗先統(tǒng)一在育苗基質(zhì)中培養(yǎng)至二葉一心再進(jìn)行侵染，豇豆幼苗的長勢、大小易于控制，保證了鑒定結(jié)果的一致性和可靠性。
[0041]4、由于采取了合適的侵染時(shí)間、調(diào)整了枯萎病菌孢子懸浮液的濃度，因此侵染效果較好，接菌均勻，發(fā)病迅速。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0042]圖1:在育苗基質(zhì)培養(yǎng)的待接菌的豇豆幼苗。
[0043]圖2:接菌后在PDA培養(yǎng)基中豇豆枯萎病菌菌落的顯微結(jié)構(gòu)圖。
[0044]圖3:侵染處理后15d，之豇28和桂星101長豆角的抗病性鑒定結(jié)果圖。圖3中的A圖為未接菌只接種清水的對照(圖3的A圖的上圖品種為桂星101長豆角，圖3的A圖的下圖品種為之豇28)，圖3中的B為接菌處理(圖3的B圖的上圖品種為桂星101長豆角，圖3的B圖的下圖品種為之豇28)。

【具體實(shí)施方式】
[0045]實(shí)施例1
[0046]豇豆抗枯萎病苗期接種鑒定方法步驟如下:
[0047]A、豇豆種子消毒催芽:
[0048]選擇不同類型豇豆材料作為鑒定對象(豇豆的分類為常用方法)，本實(shí)施例的接菌的試驗(yàn)品種包括之豇28、寧豇三號、臺灣七號豆角王、桂星101長豆角、雪龍888白玉豇豆、油白長豆角810、美國無架豆、紫秋豇(上述用于接菌品種為現(xiàn)有的常見栽培品種，作為抗病性鑒定試驗(yàn)，品種不限于此)；
[0049]挑選豇豆材料的籽粒飽滿的種子，用紗布包好，在55°C恒溫水浴鍋中溫湯浸種2小時(shí)，進(jìn)行種子消毒，再將種子放在鋪有吸水紙的培養(yǎng)皿中，最后33°C恒溫處理，直至種子萌發(fā)露白。
[0050]B、播種與幼苗培育:
[0051]將萌發(fā)的種子播種于裝有育苗基質(zhì)的白色盒子中，進(jìn)行培養(yǎng)，得到二葉一心的幼苗(見圖1);
[0052]育苗培養(yǎng)基質(zhì)及制備方法為:蛭石和干河沙按重量比1:10混勻，再加入福爾馬林溶液消毒或?qū)⑸鲜龌|(zhì)在陽光下高溫燜曬消毒，得到育苗基質(zhì)；
[0053]播種:將育苗白塑料盒(尺寸為650*450*165mm，不限于此)用質(zhì)量濃度為1%高錳酸鉀溶液消毒；再在塑料盒內(nèi)裝入約1cm厚的育苗基質(zhì)，澆透水；再用小耙子耙出約2cm厚的小溝將萌發(fā)的種子放在溝內(nèi)，再撫平育苗基質(zhì)，蓋住萌發(fā)種子；
[0054]培養(yǎng)是在大棚中常規(guī)管理育苗，將播種后的種子培養(yǎng)至二葉一心(見圖1)，即為待接菌材料。
[0055]C、豇豆枯萎病菌孢子懸浮液的制備:
[0056]a.按照報(bào)道的柯赫氏法則進(jìn)行分離鑒定，選擇豇豆枯萎病田間典型病株，在發(fā)病植株莖基部病健交界處切取2mmX 2mm組織(本發(fā)明有時(shí)稱之為病組織，二者為同一組織)，沖洗干凈；
[0057]b.對上述病組織(或稱組織、病健部組織)進(jìn)行消毒處理:用70%酒精消毒
0.5min,再用0.1 %的升萊溶液消毒0.5_lmin,然后用無菌水沖洗3次,每次lmin,得到消毒處理后的病組織；
[0058]c.將消毒處理后的病組織接入PDA平板上，置25°C恒溫條件下培養(yǎng)；
[0059]PDA平板培養(yǎng)基及制備方法為:去皮馬鈴薯200g，切成厚約2mm的片，加入100mL水煮沸30min，用4層紗布過濾，向?yàn)V液中加入葡萄糖20g和瓊脂20g，加熱溶解后再補(bǔ)足水份至100mL ;自然pH(即不調(diào)整培養(yǎng)基的pH，為本領(lǐng)域的常用方法之一)，于121°C高壓蒸汽下滅菌30min ;之后在超凈工作臺上倒平板，得到PDA平板培養(yǎng)基；
[0060]d.當(dāng)接種后的PDA平板培養(yǎng)基的表面即植物病組織周圍長出菌落后，將該菌落進(jìn)行鏡檢(結(jié)果見圖2)，由圖2所示:在圖2中:A為分離后菌落，B為小型分生孢子，C為大型分生孢子，D為厚垣孢子。將鏡檢確認(rèn)后的菌落轉(zhuǎn)入PDA斜面培養(yǎng)基中保存，4°C冰箱內(nèi)存?zhèn)溆茫?br> [0061]e.從轉(zhuǎn)入菌落的PDA斜面培養(yǎng)基中取豇豆枯萎病菌，轉(zhuǎn)入PDA平板培養(yǎng)基中，25°C恒溫培養(yǎng)7天，得到培養(yǎng)好的豇豆枯萎病菌；
[0062]f.將培養(yǎng)好的豇豆枯萎病菌，每皿加1mL滅菌水，用滅菌的蓋玻片刮取表面菌絲層，三層紗布過濾得到分生孢子濾液，用血球計(jì)數(shù)板調(diào)整孢子濃度，得到枯萎病菌孢子懸浮液，孢子懸浮液濃度為3-7 X 16個(gè)/mL，優(yōu)選為5 X 16個(gè)/mL。
[0063]D、病原菌侵染處理:
[0064]a.將二葉一心的幼苗從培養(yǎng)育苗的基質(zhì)中取出，輕輕提起幼苗并抖動(dòng)再進(jìn)行清洗處理，即用蒸餾水洗去二葉一心幼苗的根部的育苗基質(zhì)，無需再傷根，得到自然傷根后的幼苗；
[0065]b.將自然傷根后的幼苗放置到豇豆枯萎病菌孢子懸浮液中，浸泡lOmin，然后移植到裝好消毒過基質(zhì)的營養(yǎng)缽中，置于塑料大棚中培養(yǎng)，溫度控制在28±2°C，相對濕度控制在85%或以上，按正常的栽培管理，得到侵染苗。
[0066]E、發(fā)病調(diào)查:
[0067]分別于侵染處理后的10天、15天、20天、25天，調(diào)查所述侵染苗的發(fā)病狀況，根據(jù)豇豆枯萎病病情分級標(biāo)準(zhǔn)確定0、1、3、5、7、9共6個(gè)發(fā)病等級，再根據(jù)該發(fā)病等級計(jì)算病情指數(shù)，最后根據(jù)該病情指數(shù)判斷所述豇豆品種的豇豆枯萎病抗性分級。
[0068]豇豆枯萎病病情分級標(biāo)準(zhǔn)按表I。
[0069]病情指數(shù)(DI)計(jì)算方式為:
[0070]病情指數(shù)=Σ (級數(shù)X株數(shù))/(最高級數(shù)X總株數(shù))X 100。式中Σ為和。
[0071]公式說明:
[0072]級數(shù):發(fā)病等級，0-9級；
[0073]株數(shù):相同發(fā)病等級對應(yīng)的株數(shù)；
[0074]最聞級數(shù):最聞分級級別；
[0075]總株數(shù):進(jìn)行病情調(diào)查的所有豇豆植株數(shù)。
[0076]豇豆枯萎病抗性分級標(biāo)準(zhǔn)如下:
[0077]按病情指數(shù)(DI)分別劃分為，高抗(HR):0 < DI彡15 ;抗(R): 15 < DI彡35沖等(M):35 < DI ^ 55 ;感⑶:55 < DI ^ 75 ;高感(HS):DI > 75。
[0078]結(jié)果見表2:侵染處理后10d，除桂星101長豆角外，其他試材出現(xiàn)輕微的黃葉；侵染處理后15d，各材料均不同程度的感??；侵染處理后25d，病情指數(shù)同侵染后20d相似，不同品種抗病性呈現(xiàn)明顯不同。
[0079]表2不同豇豆品種的枯萎病抗性鑒定
[0080]

【權(quán)利要求】
1.一種豇豆抗枯萎病的苗期鑒定方法，其特征在于，包括以下步驟: A、浸種催芽:以常用栽培豇豆品種為鑒定對象，挑選籽粒飽滿的豇豆品種種子，用紗布包好，在55°C恒溫水浴鍋中溫湯浸種2小時(shí)進(jìn)行種子消毒，再將種子放在鋪有吸水紙的培養(yǎng)皿中，最后用33°C恒溫處理，直至得到萌發(fā)種子； B、播種與幼苗培育:將萌發(fā)的種子播種于育苗基質(zhì)上進(jìn)行培養(yǎng)，得到二葉一心的幼苗； C、豇豆枯萎病菌孢子懸浮液的制備: a.選擇豇豆枯萎病田間典型病株，在發(fā)病植株莖基部病健交界處切取2mmX2mm組織，用無菌水沖洗干凈； b.對上述組織用70%酒精消毒處理0.5min，再用0.1 %的升汞溶液消毒0.5_lmin，然后用無菌水沖洗3次，每次lmin，得到消毒處理后的病組織； c.將消毒處理后的病組織接入PDA平板上，置25°C恒溫條件下培養(yǎng)； d.當(dāng)接種后的PDA平板培養(yǎng)基的表面即植物病組織周圍長出菌落后，將該菌落轉(zhuǎn)入PDA斜面培養(yǎng)基中，篩選得到鑒定豇豆枯萎病的指示菌即豇豆枯萎病菌(Fusariumoxysporum Schl.) JffS-1，送中國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，其保藏號為CCTCC NO:M2014314 ； e.從轉(zhuǎn)入菌落的PDA斜面培養(yǎng)基中取豇豆枯萎病菌JWS-1，轉(zhuǎn)入PDA平板培養(yǎng)基中，于25°C下恒溫培養(yǎng)7天，得到培養(yǎng)好的豇豆枯萎病菌； f.將培養(yǎng)好的豇豆枯萎病菌，每皿加1mL滅菌水，用滅菌的蓋玻片刮取表面菌絲層，用三層紗布過濾得到分生孢子濾液，用血球計(jì)數(shù)板調(diào)整孢子濃度，得到豇豆枯萎病菌孢子懸浮液，孢子懸浮液濃度為3-7 X 16個(gè)/mL，優(yōu)選為5 X 16個(gè)/mL。 D、病原菌侵染處理: a.用鏟子將二葉一心的豇豆幼苗從育苗培養(yǎng)基質(zhì)中取出，輕輕抖動(dòng)，進(jìn)行清洗處理，無需人為傷根，得到自然傷根幼苗； b.將自然傷根后的豇豆幼苗進(jìn)行枯萎病菌的侵染處理； E、發(fā)病調(diào)查: 分別于侵染處理后的10d、15d、20d、25d，調(diào)查侵染苗的發(fā)病狀況，根據(jù)豇豆枯萎病病情分級標(biāo)準(zhǔn)確定O、1、3、5、7、9共6個(gè)發(fā)病等級，再根據(jù)該發(fā)病等級計(jì)算病情指數(shù)，最后根據(jù)該病情指數(shù)判斷所述豇豆品種的豇豆枯萎病抗性分級； 其中: 步驟B中育苗基質(zhì)為蛭石和干河沙，按重量比為1:10混勻，加福爾馬林溶液或采用高溫燜曬方法消毒。 步驟D的b步驟中的所述的侵染處理，是將自然傷根的豇豆幼苗放到枯萎病菌的孢子懸浮液中浸泡lOmin，取出后定植于裝有滅菌培養(yǎng)基質(zhì)的營養(yǎng)缽中，放置于塑料大棚中培養(yǎng)，控制溫度為28±2°C，控制相對濕度為85%或以上。
2.—種分離的適用于St豆枯萎病抗性鑒定的St豆枯萎病菌(Fusarium oxysporumSchl.) JWS-1，保藏在中國典型培養(yǎng)物保藏中心，其保藏號為CCTCC NO:M2014314。
3.權(quán)利要求2所述的紅豆枯萎病菌(Fusariumoxysporum Schl.) JWS-1在紅豆枯萎病抗性鑒定中的應(yīng)用。
【文檔編號】C12R1/77GK104160846SQ201410334010
【公開日】2014年11月26日 申請日期:2014年7月15日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月15日
【發(fā)明者】吳仁鋒, 楊紹麗 申請人:武漢市蔬菜科學(xué)研究所