一種薄殼山核桃MADS-box類轉(zhuǎn)錄因子CiMAD9及其編碼基因與應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種薄殼山核桃MADS-box類轉(zhuǎn)錄因子CiMADS9及其編碼基因與應(yīng)用。該薄殼山核桃MADS-box類轉(zhuǎn)錄因子CiMADS9，是具有序列表中的SEQIDNO.2所述氨基酸序列的蛋白質(zhì)，其編碼基因?yàn)镃iMADS9基因SEQIDNO.1的DNA序列。薄殼山核桃MADS-box類轉(zhuǎn)錄因子CiMADS9基因可用于培育晚花植物品種。CiMADS9為特異表達(dá)基因，其表達(dá)模式與組織以及植株的發(fā)育階段相關(guān)。過(guò)量表達(dá)CiMADS9的轉(zhuǎn)基因擬南芥與對(duì)照組相比，開(kāi)花比野生型植株晚，開(kāi)花時(shí)間推遲8d以上，開(kāi)花時(shí)基葉數(shù)較對(duì)照增加6片以上，說(shuō)明CiMADS9可以控制植物的成花轉(zhuǎn)變，影響植物的花期和營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)，進(jìn)而調(diào)控植物的生殖生長(zhǎng)。
【專利說(shuō)明】-種薄殼山核桃MADS-box類轉(zhuǎn)錄因子CiMAD9及其編碼基 因與應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及植物基因工程領(lǐng)域，具體涉及一種薄殼山核桃MADS-b〇X類轉(zhuǎn)錄因子 CiMAD9及其編碼基因與應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 植物的開(kāi)花時(shí)間直接控制植物營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)期和生育期的長(zhǎng)短，在相當(dāng)程度上決定著 繁育的成功與否，也與植物的產(chǎn)量和質(zhì)量性狀密切相關(guān)。MADS-box是一個(gè)保守性很強(qiáng)的 DNA 結(jié)合結(jié)構(gòu)域，最早在酵母Mini Chromosome Maintenancel (MCM1)、擬南芥AGAMOUS(AG)、 金魚(yú)草DEFICIENS(DEF)和人類血清應(yīng)答因子Serum ResponseFactor(SRF)中發(fā)現(xiàn)，因此具 有此結(jié)構(gòu)的功能基因被命名為MADS-box基因。MADS-box基因參與所有植物花發(fā)育過(guò)程的 調(diào)節(jié)。最初認(rèn)為MADS-box基因主要參與花器官的形態(tài)建成，目前發(fā)現(xiàn)MADS-bo基因功能具 有多樣性，參與幾乎所有器官的形態(tài)建成及從胚到配子體的生長(zhǎng)發(fā)育的每一個(gè)階段。有些 MADS-box基因的功能是多方面的，具有多效性，不僅僅參與某一方面的調(diào)節(jié)，在植物發(fā)育中 的各個(gè)層次和方向發(fā)揮作用。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 發(fā)明目的：
[0004] 本發(fā)明的目的是提供一種薄殼山核桃MADS-box類轉(zhuǎn)錄因子CiMAD9。
[0005] 本發(fā)明的另一目的是提供該轉(zhuǎn)錄因子CiMAD9的編碼基因。
[0006] 本發(fā)明的又一目的是提供該轉(zhuǎn)錄因子的功能。
[0007] 本發(fā)明的目的可通過(guò)如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：
[0008] 本發(fā)明所提供的一種薄殼山核桃MADS-box類轉(zhuǎn)錄因子，命名為CiMAD9,來(lái)源于薄 殼山核桃（Carya illinoensis(Wangench.)K.Koch)優(yōu)良品種'馬罕'，氨基酸序列如SEQ ID NO. 2所示。
[0009] 本發(fā)明所述的的薄殼山核桃MADS-box類轉(zhuǎn)錄因子的編碼基因，其cDNA序列如SEQ ID NO. 1所示，含有768bp的最大開(kāi)放閱讀框，編碼SEQ ID N0. 2所示的255個(gè)氨基酸殘基 序列。
[0010] 含有本發(fā)明CiMAD9基因 SEQ ID NO. 1的表達(dá)載體。
[0011] 所述的表達(dá)載體優(yōu)選將所述的薄殼山核桃MADS-box類轉(zhuǎn)錄因子CiMAD9的編碼基 因插入到PCAMBIA1301載體的Κρη I和Sac I酶切位點(diǎn)間所得。
[0012] 宿主菌是指將pCAMBIA1301-CiMAD9轉(zhuǎn)入的根癌農(nóng)桿菌EHA105.
[0013] 擴(kuò)增CiMAD9cDNA全長(zhǎng)的引物為：
[0014] CiMADS9-0RF sense :5'-ATGGGGAGAGGGAGGATAG-3'
[0015] CiMADS9-0RF antisense :5'-CCATCAGCCAAACCTTCT-3'
[0016] 實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR分析中涉及的CiMAD9的qPCR引物為：
[0017] CiMADS9-qPCR sense :5'-GGTACAACGAGTGTGTAGATTCTCC-3'
[0018] CiMADS9-qPCR antisense :5,-TCCTCTCCTTCACAGACAATAACCC-3，
[0019] 上述薄殼山核桃MADS-box類轉(zhuǎn)錄因子CiMAD9、其編碼基因、含有編碼基因的表達(dá) 載體在培育晚花植物中的應(yīng)用。
[0020] 有益效果：
[0021] 本發(fā)明在薄殼山核桃中克隆到一個(gè)MADS-box類轉(zhuǎn)錄因子CiMAD9基因，CiMAD9可 能參與薄殼山核桃花發(fā)育、果實(shí)發(fā)育等生殖發(fā)育的大部分進(jìn)程。CiMAD9編碼基因在雄花、雌 花和幼果中特異性表達(dá)。轉(zhuǎn)基因擬南芥中過(guò)量表達(dá)CiMAD9編碼基因，與對(duì)照組相比，轉(zhuǎn)基 因材料表現(xiàn)為晚花，開(kāi)花時(shí)間推遲8d以上，開(kāi)花時(shí)基葉數(shù)較WT增加6片以上。這一結(jié)果說(shuō) 明CiMAD9基因可以控制植物的成花轉(zhuǎn)變過(guò)程，同時(shí)可以延長(zhǎng)植株的營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)。
[0022] 本發(fā)明的CiMAD9對(duì)于培育晚花植物品種具有重要意義，在作物育種方面尤其是 培育以營(yíng)養(yǎng)器官為主的植物具有廣泛的應(yīng)用前景。
[0023] 利用本發(fā)明的植物表達(dá)載體，將CiMAD9基因?qū)胫参矬w內(nèi)，可以獲得開(kāi)花延遲的 轉(zhuǎn)基因植株。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0024] 圖lCiMAD9基因在薄殼山核桃的表達(dá)特性
[0025] 1，葉；2,當(dāng)年生枝條；3,雌花；4,雄花；5,幼果
[0026] 圖2. CiMAD9過(guò)量表達(dá)表達(dá)載體的構(gòu)建
[0027] 圖3.轉(zhuǎn)CiMAD9基因擬南芥和對(duì)照組RT-PCR檢測(cè)。
[0028] WT:野生型；1-5 :轉(zhuǎn)基因型
[0029] 圖4轉(zhuǎn)CiMAD9基因擬南芥和對(duì)照的表型觀察
[0030] WT:野生型；T :轉(zhuǎn)基因株系
[0031] 圖5轉(zhuǎn)基因與對(duì)照植株的基生葉數(shù)和開(kāi)花時(shí)間比較

【具體實(shí)施方式】
[0032] 下列實(shí)例中所有的方法無(wú)特別說(shuō)明，均為常規(guī)方法
[0033] 實(shí)施例1薄殼山核桃CiMAD9基因的克隆與鑒定
[0034] 實(shí)驗(yàn)材料為薄殼山核桃品種'馬罕'，根據(jù)本實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)克隆得到的保守片段（莫 正海等，2013,南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，44(5) :730-734.),設(shè)計(jì)兩條特異引物，進(jìn)行3'RACE PCR?；?因特異引物序列分別為，GSP1 :5'-ATGCAAATAGCAGGCAAGTCACATTCTC-3'（SEQ ID N0.3); GSP2:5'-CGCTGTTCTCTGTGATGCTGAGGTCG-3'（SEQIDN0·4)，與其搭配的引物為接頭引物 均為AUAP :5'-GGCCACGCGTCGACTAGTAC-3'（SEQIDN0.5)。取馬罕雄花，進(jìn)行RNA的提取， 參照BioTeke通用植物總RNA提取試劑盒（離心柱型）進(jìn)行。取總RNA1 μ g，cDNA合成采 用 PrimeScript RTase(Takara)反轉(zhuǎn)錄酶，以帶接頭的 Oligo d(T)引物 AP :5' -GGCCACGC GTCGACTAGTACTTTTTTTTTTTTTTTTT-3'（SEQ ID NO. 6)進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，獲得第一鏈 cDNA。以薄 殼山核桃雄花第一鏈cDNA為模板，進(jìn)行巢式PCR，第一輪PCR反應(yīng)條件為：94°C 5min熱變 性；94°C 45s，65°C 45s，72°C lmin，共 35 個(gè)循環(huán)；72°C延伸 10min。將第一輪 PCR 溶液稀釋 10倍，以此作為模板，進(jìn)行第二輪PCR，反應(yīng)條件同第一輪。將第二輪PCR產(chǎn)物用膠回收試 劑盒（Genscript)回收后，與pMD19-T載體（Takara, Japan)連接，然后轉(zhuǎn)化大腸菌DH5a， 挑選陽(yáng)性克隆，進(jìn)行測(cè)序。將測(cè)序得到的片段與原來(lái)的保守片段進(jìn)行比對(duì)、拼接，獲得序列 長(zhǎng)度為 l〇77bp(SEQ ID NO. 7)。
[0035] 為了獲得其最大開(kāi)放閱讀框，在其兩端設(shè)計(jì)基因特異引物，CiMADS9_0RF sense :5，-ATGGGGAGAGGGAGGATAG-3，（SEQ ID NO. 8)和 CiMADS9-0RF antisense: 5' -CCATCAGCCAAACCTTCT-3'（SEQ ID NO. 9)，以薄殼山核桃雄花第一鏈cDNA為模板，進(jìn)行 ?0?擴(kuò)增沖0?反應(yīng)條件為941：51^11熱變性；941：458,481：458,721：11^11，35個(gè)循環(huán) ；721： 延伸10min，4°C保存，將PCR產(chǎn)物回收、克隆、測(cè)序，經(jīng)分析后獲得SEQ ID NO. 1所示序列。 CiMAD9的0RF為768bp，編碼255個(gè)氨基酸，氨基酸序列如SEQ ID N0. 2所示。將所得到的 序列SEQ ID N0. 2在NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行Blastp比對(duì)，結(jié)果表明，該序列與甜橙AGL15基因、 川桑AGL15基因、鷹嘴豆AGL15基因的同源性分別為73%、71%、70%。
[0036] 實(shí)施例2薄殼山核桃CiMAD9基因在不同器官中的表達(dá)特征
[0037] 以薄殼山核桃三個(gè)品種（紹興、波尼、馬罕）為材料，利用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR 技術(shù)對(duì)薄殼山核桃不同組織葉片、當(dāng)年生枝條、雌花、雄花、幼果中的表達(dá)情況進(jìn)行了研 究。各組織總RNA的提取同實(shí)施例1，cDNA的合成用能消除RNA中殘留DNA的試劑盒， PrimeScriopt RT reagent kit with gDNA Eraser (Takara, Japan)，具體步驟參照試劑盒 說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。內(nèi)參使用山核桃actin基因（周秦.山核桃果實(shí)成熟期間基因表達(dá)的初步分 析[J].臨安：浙江農(nóng)林大學(xué)，2010)，引物序列為ACTIN-F :5' -GCTGAACGGGAAATTGTC-3'（SEQ ID N0. 10)，ACTIN-R :5' -AGAGATGGCTGGAAGAGG-3'（SEQ ID N0. 11)。根據(jù) CiMAD9 基因序 列設(shè)計(jì)表達(dá)檢測(cè)引物 CiMADS9-qPCR sense :5'-GGTACAACGAGTGTGTAGATTCTCC-3'（SEQ ID NO. 12)和CiMADS9-qPCR antisense :5'-TCCTCTCCTTCACAGACAATAACCC-3'（SEQ ID NO. 13)。 以來(lái)自不同組織的cDNA為模板進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR分析。
[0038] 結(jié)果分析表明（圖1)，CiMADS9基因在三個(gè)品種中均有表達(dá)，在雄花中的表達(dá)量最 高。三個(gè)品種的表達(dá)分析均表明，CiMADS9基因在生殖組織（雄花、雌花、幼果）中的表達(dá) 量顯著高于營(yíng)養(yǎng)組織（葉片、枝條）中的表達(dá)量。
[0039] 實(shí)施例3 CiMADS9轉(zhuǎn)錄因子的功能鑒定
[0040] 提取含有CiMADS9編碼基因目的片段的T-載體及表達(dá)載體pCAMBIA1301質(zhì)粒 DNA，用限制性內(nèi)切酶Κρη I和Sac I雙酶切，切膠回收，然后用T4DNA連接酶連接，轉(zhuǎn)化大 腸桿菌。提取質(zhì)粒，PCR和酶切鑒定。將大腸桿菌質(zhì)粒用凍融法轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌（EHA105)感受態(tài) 細(xì)胞，菌液PCR鑒定陽(yáng)性克隆。獲得CiMADS9過(guò)量表達(dá)表達(dá)載體pCAMBIA1301-CiMADS9 (圖 2)。將過(guò)量表達(dá)載體通過(guò)用凍融法將pCAMBIA1301-CiMADS9轉(zhuǎn)入根癌農(nóng)桿菌株 EHA105(Avsian_Kretchmer et al,2004, Plant Physiology,135:1685-1696)中。 pCAMBIA1301-CiMADS9通過(guò)農(nóng)桿菌株EHA105的介導(dǎo)，轉(zhuǎn)化擬南芥，利用抗生素篩選和PCR技 術(shù)篩選陽(yáng)性轉(zhuǎn)基因植株。以經(jīng)抗生素篩選的抗性植株總RNA為模板，以未轉(zhuǎn)基因擬南芥植 株總RNA為陰性對(duì)照進(jìn)行RT-PCR反應(yīng)（圖3)，擬南芥18S作為RNA提取和cDNA合成成功 的對(duì)照。將鑒定出的轉(zhuǎn)基因 T2代種子和野生型擬南芥種子同時(shí)播到栽培基質(zhì)中，人工培養(yǎng) 條件為：相對(duì)濕度80%，光照強(qiáng)度80-200 μ mol/M2/S，溫光周期為16h光照，22°C /8h黑暗， 17°C。對(duì)其表型進(jìn)行分析，與WT相比，轉(zhuǎn)基因材料表現(xiàn)為晚花（圖4)，開(kāi)花時(shí)間推遲8d以 上，開(kāi)花時(shí)基葉數(shù)較WT增加6片以上（圖5)。
[0001] _序列表_ <ι-->江蘇省中國(guó)科學(xué)院植物研究所 <120> -種薄殼山核桃MADS-box類轉(zhuǎn)錄因子CiMAD9及其編碼基因與應(yīng)用 <160〉 15 <210> 1 <211〉 768 <212> DNA <213〉薄殼山核桃迎··⑶成(WangencL)A'&x^)'馬罕' <220> <223〉薄殼山核桃MADS-box類轉(zhuǎn)錄因子的編碼基囚cDNA <400〉 1 atggggagag ggaggataga gatcaagagg atcgagaatg caaatagcag gcaagtcaca 60 ttctcaaaaa gacgtgctgg cctgctcaaa aaggctcagg aactcgctgt tctctgtgat 120 gccgaggttg ccgttattat cttctccaac actggaaagc tctttgattt ctctagttct 180 ggtatgaagg gaacactttc aaggtacaac gagtgtgtag attctcccga ggctgcatta 240 gtagaataca aagcagagaa gcaaRattca aaggaggtag atgttctcaa agatgaaatc 300 tcaaagctac acatgaaaca cttacgcctg ttgggtaagg acctgactgg cttgggctta 360 aaagaattgc agcagcttga acagcaatta agtgaagggt tattgtGtgt gaaggagagg 420 aaggaacaat tactgatgga gcagctggag caatcaagga tgcaggagca gcagaccatg 480 ctRgagaatg aaactttgcg cagacaggtt gaggagcttc gaggtttctt tccaccagct 540 gaccaccctg tcccatctta tcgtgattat tatcctgtaa aaat^caaaa taccctcgca 600 gatcatggtg ttgggagtcc tgaagtgcgc tacaattacc aaatgcagaa agaagattca 660 gacattacct tgcacttggg gttgccaatt gatgtttata gcaagatgaa ggaaccagag 720 acagggatcc tttccaatga ttcagggagt caaatggcca tcttctga 768 <210> 2 <211> 255 <212> FR'l <213> 薄殼山核桃（咖(Wangench.)尤ATocA)'馬罕'
[0002] <220> 〈223>薄殼山核桃MADS-box類轉(zhuǎn)錄因子氨基酸序列 <400> 2 Met Gly Arg Gly Arg lie Glu lie Lys Arg lie Glu Asn Ala Asn 1 5 10 15 Ser Arg Gin Val Thr Phe Ser Lys Arg Arg Ala Gly Leu Leu Lys 20 25 30 Lys Ala Gin Glu Leu Ala Val Leu Cys Asp Ala Glu Val Ala Val 35 40 45 lie lie Phe Ser Asn Thr Gly Lys Leu Phe Asp Phe Ser Ser Ser 50 55 60 Gly Met Lys Gly Thr Leu Ser Arg Tyr Asn Glu Cys Val Asp Ser 65 70 75 Pro Glu Ala Ala Leu Val Glu Tyr Lys Ala Glu Lys Gin Asp Ser 80 85 90 Lys Glu Val Asp Val Leu Lys Asp Glu lie Ser Lys Leu His Met 95 100 105 Lys His Leu Arg Leu Leu Gly Lys Asp Leu Thr Gly Leu Gly Leu 110 115 120 Lys Glu Leu Gin Gin Leu Glu Gin Gin Leu Ser Glu Gly Leu Leu 125 130 135 Ser Val Lys Glu Arg Lys Glu Gin Leu Leu Met Glu Gin Leu Glu 140 145 150 Gin Ser Arg Met Gin Glu Gin Gin Thr Met Leu Glu Asn Glu Thr 155 160 165 Leu Arg Arg Gin Val Glu Glu Leu Arg Gly Phe Phe Pro Pro Ala 170 175 180 Asp His Pro Val Pro Ser Tyr Arg Asp Tyr Tyr Pro Val Lys Met 185 190 195 Gin Asn Thr Leu Ala Asp His Gly Val Gly Ser Pro Glu Val Arg
[0003] 200 205 210 Tyr Asn Tyr Gin Met Gin Lys Glu Asp Ser Asp lie Thr Leu Ilis 215 220 225 Leu Gly Leu Pro lie Asp Val Tyr Ser Lys Met Lys Glu Pro Glu 230 235 240 Thr Gly lie Leu Ser Asn Asp Ser Gly Ser Gin Met Ala lie Phe 245 250 255 <210〉 3 <211> 28 <212> DNA <213〉人工序列 <220〉 <223〉引物 GSP1 <400> 3 atgcaaatag caggcaagtc acattctc 28 <210> 4 <211〉 26 <212〉 DNA <213〉人工序列 <220> <223〉引物 GSP2 <400〉 4 cgctgttctc tgtgatgctg aggtcg 26 <210〉 5 <211〉 20 <212〉 DNA <213〉人工序列
[0004] <220> <223〉引物 GSP2 <400> 5 ggccacgcgt cgactagtac 20 <210> 6 <211〉 37 <212〉 DNA <213〉人工序列 <220〉 <223〉引物 AP <400> 6 ggccacgcgt cgactagtac tttttttttt ttttttt 37 <210〉 7 <211〉 1077 <212〉 DNA <213〉薄殼山核桃（Ca/ja f///m?m^(Wangench.)HocA) 6馬罕5 <220> <223〉薄殼山核桃MADS-box類轉(zhuǎn)錄因子編碼基因 <400〉 7 atggggagag ggaggataga gatcaagagg atcgagaatg caaatagcag gcaagtcaca 60 ttctcaaaaa gacgtgctgg cctgctcaaa aaggctcagg aactcgctgt tctctgtgat 120 gccgaggttg ccgttattat cttGtccaac actggaaagc tctttgattt ctctagttct 180 ggtatgaagg gaacactttc aaggtacaac gagtgtgtag attctcccga ggctgcatta 240 gtagaataca aagcagagaa gcaagattca aaggaggtag atgttctcaa agatgaaatc 300 tcaaagctac acatgaaaca. cttacgcctg ttgggtaagg acctgactgg cttgggctta 360 aaagaattgc agcagcttga acagcaatta agtgaagggt tattgtctgt gaaggagagg 420 aaggaacaat tactgatgga gcagctggag caatcaagga tgcaggagca gcagaccatg 480 ctggagaatg aaactttgcg cagacaggtt gaggagcttc gaggtttctt tccaccagct 540
[0005] gaccaccctg tcccatctta tcgtgattat tatcctgtaa aaatgcaaaa taccctcgca 600 gatcatggtg ttgggagtcc tgaagtgcgc tacaattacc aaatgcagaa agaagattca 660 gacattacct tRcacttggg gttgccaatt gatgtttata gcaagatgaa ggaaccagag 720 acagggatcc tttccaatga ttcagggagt caaatggcca tcttctgatc tcgttattcc 780 tgggcacctg gtcatctcct ttcgattaca acataacaga tggagctgac ttcatagagt 840 tgtctagttt tggcagtttt tgctattaca cctttccatg ccatgtaaaa gggaaaaaaa 900 aggagagact gctaggattc ctaggtggat gatacaagat ggtcccttgt agaaggtt.tg 960 gctgatgggg atgcaaaatt ggt.agctgtl: tttaccagtt tttattgcaa ttxtaataca 1020 cattgcaaaa tatagtagca ttctgtttta gtttgtcaaa aaaaaaaaaa aaaaaaa 1077 <210> 8 <211> 20 <212> DNA <213〉人工序列 <220〉 <223〉引物 QMADS9-ORF sense <400〉 8 atggggagag ggaggatag 20 <210〉 9 <211> 18 <212> DNA <213〉人工序列 <220〉 <223> 'j丨物 CiM/\DS9-ORF amiscnse <400> 9 ccatcagcca aaccttct 18 <210> 10 111、18
[0006] <212> DNA <213〉人工序列 <220〉 〈223> 引物 ACTIN-F <400〉 10 gctgaacggg aaattgtc 18 <210〉 11 <211〉 18 <212〉DN/\ <213〉人工序列 <220〉 <223〉引物 ACTIN-R <400〉 11 agagatggct ggaagagg 18 <210> 12 <211> 25 <212> DNA <213〉人工序列 <220〉 <223〉引物 CiMADS9- qPCR sense <400> 12 ggtacaacga gtgtgtagat tctrc 25 <210> 13 <211> 25 <212〉 DNA <213〉人工序列 <220〉
[0007] <223〉引物 GMADS9- qPCR aniiscnse <400> 13 tcctctcctt cacagacaat aaccc 25
【權(quán)利要求】
1. 一種薄殼山核桃MADS - box類轉(zhuǎn)錄因子CiMAD9,氨基酸序列如SEQ ID NO. 2所示。
2. 權(quán)利要求1所述的薄殼山核桃MADS - box類轉(zhuǎn)錄因子CiMAD9的編碼基因。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的編碼基因，其特征在于所述的薄殼山核桃MADS - box類轉(zhuǎn)錄 因子的cDNA基因核苷酸序列如SEQ ID NO. 1所示。
4. 含有權(quán)利要求2或3所述的薄殼山核桃MADS -box類轉(zhuǎn)錄因子的編碼基因的表達(dá)載 體。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的表達(dá)載體，其特征在于所述的表達(dá)載體是將所述的薄殼山核 桃MADS - box類轉(zhuǎn)錄因子CiMAD9的編碼基因插入到pCAMBIA1301載體的Κρη I和Sac I 酶切位點(diǎn)間所得。
6. 含有權(quán)利要求2和3所述基因的宿主菌。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的宿主菌，其特征在于所述的宿主菌是將pCAMBIA1301 -CiMAD9 轉(zhuǎn)入根癌農(nóng)桿菌EHA105所得。
8. 權(quán)利要求1所述的薄殼山核桃MADS - box類轉(zhuǎn)錄因子CiMAD9在培育晚花植物或延 長(zhǎng)植株的營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)中的應(yīng)用。
9. 權(quán)利要求2或3中所述的薄殼山核桃MADS - box類轉(zhuǎn)錄因子CiMAD9的編碼基因在 培育晚花植物或延長(zhǎng)植株的營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)中的應(yīng)用。
10. 權(quán)利要求4或5所述的表達(dá)載體在培育晚花植物或延長(zhǎng)植株的營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】C12N1/21GK104119432SQ201410348435
【公開(kāi)日】2014年10月29日 申請(qǐng)日期:2014年7月21日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月21日
【發(fā)明者】張計(jì)育, 莫正海, 郭忠仁, 宣繼萍, 賈曉東, 王剛, 黃勝男 申請(qǐng)人:江蘇省中國(guó)科學(xué)院植物研究所