一種超氧化物歧化酶的提取方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及生物提取【技術(shù)領(lǐng)域】，特別涉及一種超氧化物歧化酶的提取方法，包括以下步驟：取新鮮葉子，打漿破碎得到葉子漿料；葉子漿料采用緩沖溶液KH2PO4-K2HPO4浸泡，葉子漿料與緩沖溶液的質(zhì)量比為1:6-10，浸泡液pH為7.3-7.8，浸泡溫度為45-55℃；浸泡36-40h后，將浸泡物離心，得到上清液；將上清液濃縮，干燥，得到超氧化物歧化酶產(chǎn)品。本發(fā)明提供的超氧化物歧化酶的提取方法，是將新鮮葉子破碎后浸泡，然后離心得到上清液，對上清液進行濃縮和干燥，得到固態(tài)超氧化物歧化酶，整個提取過程簡單易行，能耗低，且得到的超氧化物歧化酶無任何有機溶劑，品質(zhì)高；降低了20-30％的成本。
【專利說明】一種超氧化物歧化酶的提取方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物提取【技術(shù)領(lǐng)域】，具體而言，涉及一種超氧化物歧化酶的提取方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 超氧化物歧化酶（SOD, super oxide dismutase)是一種源于生命體的活性物質(zhì)， 能消除生物體在新陳代謝過程中產(chǎn)生的有害物質(zhì)，具有抗衰老的特殊功效。它在大自然中 普遍存在，不僅在需氧代謝細胞中存在，甚至在厭氧細菌中也有發(fā)現(xiàn)。S0D是人體內(nèi)最重要 的酶之一，它是一種極其有效的抗氧化劑，能抵御超氧陰離子自由基對細胞的破壞，能有效 控制超氧陰離子自由基，保持人體細胞膜處于年青、柔軟和健康的狀態(tài)。但是，S0D也像其 它存在于人體內(nèi)的保護性成分一樣，隨著年齡的增加而減少，這樣就使細胞更易受到氧化 劑的攻擊，從而引起老化和疾病。
[0003] 銀杏葉中富含S0D，能催化超氧負離子發(fā)生歧化反應，是一種具有抗氧化、抗衰老、 抗腫瘤、抗輻射和消炎作用的金屬酶，在臨床醫(yī)學、藥學等領(lǐng)域得到廣泛應用。
[0004] 目前，銀杏葉中S0D采用有機溶劑進行提取，工藝生產(chǎn)過程中需要用到蒸煮、二次 濃縮和烘干共計四道耗汽單元操作，整體能源消耗高，工藝生產(chǎn)流程復雜；有機溶劑使用種 類和數(shù)量較大，有乙醇、正己烷等，容易在終產(chǎn)品中殘留，影響產(chǎn)品質(zhì)量；并且制得的產(chǎn)品成 本較高，不利于產(chǎn)品推廣與發(fā)展。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供一種超氧化物歧化酶的提取方法，以解決上述的問題。
[0006] 在本發(fā)明的實施例中提供了一種超氧化物歧化酶的提取方法，包括以下步驟：
[0007] (a)、取新鮮葉子，打漿破碎得到葉子漿料；
[0008] (b)、所述葉子漿料采用緩沖溶液KH2P04-K2HP04浸泡，所述葉子漿料與所述緩沖 溶液的質(zhì)量比為1:6-10,浸泡液pH為7. 3-7. 8,浸泡溫度為45-55°C ;
[0009] (C)、浸泡36-40h后，將浸泡物離心，得到上清液；
[0010] (d)、將所述上清液濃縮，干燥，得到超氧化物歧化酶產(chǎn)品。
[0011] 優(yōu)選地，所述新鮮葉子包括甘薯葉、山楂葉、銀杏葉、串葉松香草葉、北海道黃楊 葉、大葉黃楊葉、金心黃楊葉中的任意一種或多種。
[0012] 優(yōu)選地，所述新鮮葉子為新鮮嫩葉。
[0013] 優(yōu)選地，在所述步驟（a)中，破碎的粒度大于4目。
[0014] 優(yōu)選地，在所述步驟（b)中，所述緩沖溶液ΚΗ2Ρ04-Κ2ΗΡ0 4的質(zhì)量濃度為 30% -40%，ΚΗ2Ρ04 與 Κ2ΗΡ04 的摩爾數(shù)比為 0· 8-1. 2 :0· 8-1. 2。
[0015] 優(yōu)選地，在所述步驟（b)中，浸泡罐內(nèi)含有的物質(zhì)占其體積的1/3-2/3。
[0016] 優(yōu)選地，在所述步驟（b)中，浸泡過程中進行攪拌，攪拌速度為25-30轉(zhuǎn)/分鐘。
[0017] 優(yōu)選地，在所述步驟（c)中，離心速度為3000-3500轉(zhuǎn)/分鐘。
[0018] 優(yōu)選地，在所述步驟（c)中，所述上清液的濁度小于8NTU。
[0019] 優(yōu)選地，在所述步驟（d)中，濃縮的倍數(shù)為4-4. 5倍，干燥至所述超氧化物歧化酶 產(chǎn)品的水分含量為3-4%。
[0020] 優(yōu)選地，在所述步驟（d)中，采用四效真空降膜錯流蒸發(fā)對所述上清液濃縮，采用 噴霧干燥進行干燥。
[0021] 本發(fā)明實施例提供的超氧化物歧化酶的提取方法，是將新鮮葉子破碎后浸泡，然 后離心得到上清液，對上清液進行濃縮和干燥，得到固態(tài)超氧化物歧化酶，整個提取過程簡 單易行，能耗低，且得到的超氧化物歧化酶無任何有機溶劑，品質(zhì)高；降低了 20-30%的成 本。

【具體實施方式】
[0022] 下面通過具體的實施例子對本發(fā)明做進一步的詳細描述。
[0023] 本發(fā)明的實施例中提供了一種超氧化物歧化酶的提取方法，包括以下步驟：
[0024] (a)、取新鮮葉子，打漿破碎得到葉子漿料；
[0025] (b)、所述葉子漿料采用緩沖溶液ΚΗ2Ρ04-Κ 2ΗΡ04浸泡，所述葉子漿料與所述緩沖溶 液的質(zhì)量比為1:6-10，浸泡液？!1為7.3-7.8，浸泡溫度為45-551： ;
[0026] (c)、浸泡36_40h后，將浸泡物離心，得到上清液；
[0027] (d)、將所述上清液濃縮，干燥，得到超氧化物歧化酶產(chǎn)品。
[0028] 本發(fā)明實施例提供的超氧化物歧化酶的提取方法，是將新鮮葉子破碎后浸泡，然 后離心得到上清液，對上清液進行濃縮和干燥，得到固態(tài)超氧化物歧化酶，整個提取過程簡 單易行，能耗低，且得到的超氧化物歧化酶無任何有機溶劑，品質(zhì)高；降低了 20-30%的成 本。
[0029] 甘薯葉、山楂葉、銀杏葉、串葉松香草葉、北海道黃楊葉、大葉黃楊葉、金心黃楊葉 中富含S0D，優(yōu)選地，所述新鮮葉子包括甘薯葉、山楂葉、銀杏葉、串葉松香草葉、北海道黃楊 葉、大葉黃楊葉、金心黃楊葉中的任意一種或多種。
[0030] 新鮮嫩葉含有較為豐富的S0D，其他雜質(zhì)少，纖維少，發(fā)酵后易于提取，優(yōu)選地，所 述新鮮葉子為新鮮嫩葉。新鮮嫩葉一般選自植株的最上面幾片。
[0031] 后續(xù)浸泡過程中攪拌，葉子破碎的粒度就不需要太小，優(yōu)選地，在所述步驟（a) 中，破碎的粒度大于4目。這樣破碎的葉子既節(jié)省破碎的工序，后續(xù)浸泡過程效果好，得到 的S0D含量高。
[0032] 根據(jù)緩沖溶液的pH可以算出需要加入的ΚΗ2Ρ04與Κ 2ΗΡ04的摩爾比，以及總?cè)芤旱?質(zhì)量。優(yōu)選地，在所述步驟（b)中，所述緩沖溶液ΚΗ 2Ρ04-Κ2ΗΡ04的質(zhì)量濃度為30% -40%， ΚΗ2Ρ04與1(2即04的摩爾數(shù)比為0. 8-1. 2 :0. 8-1. 2。該緩沖溶液浸泡葉子漿料，pH為7. 4-7. 6， 該pH條件下，S0D活性好，且得到的浸泡效果好，提取得到的S0D含量高。
[0033] 浸泡罐內(nèi)放置太多原料，容易浸泡效果不均一，并且容易生成有害代謝產(chǎn)物；而放 置太少的原料，會造成效率低下；優(yōu)選地，在所述步驟（b)中，浸泡罐內(nèi)含有的物質(zhì)占其體 積的1/3-2/3。該浸泡罐內(nèi)盛放的原料，浸泡物之間相互融合反應，浸出物得率高，且得到的 浸出物活性成分活性好。
[0034] 在浸泡過程中，為了浸泡的更為均勻，增加葉子中的物質(zhì)浸出，優(yōu)選地，在所述步 驟（b)中，浸泡過程中進行攪拌，攪拌速度為25-30轉(zhuǎn)/分鐘。
[0035] 為了將浸泡物中的SOD更好的分離出來，優(yōu)選地，在所述步驟（c)中，離心速度為 3000-3500 轉(zhuǎn) / 分鐘。
[0036] 為了使得到的S0D含量高，純度好，進一步地，在所述步驟（c)中，所述上清液的濁 度小于8NTU。
[0037] 為了使得到的S0D易于保藏，優(yōu)選地，在所述步驟（d)中，濃縮的倍數(shù)為4-4.5倍， 干燥至所述超氧化物歧化酶產(chǎn)品的水分含量為3-4%。得到的S0D產(chǎn)品為白色粉狀，S0D含 量為80% -90%，同時含有其它有益美容的蛋白質(zhì)，含量合計為7% -20%。產(chǎn)品保存環(huán)境 為干燥、25°C以下、避光（包括紫外線照射等），產(chǎn)品保存期為1.5年。
[0038] 進一步地，在所述步驟（d)中，采用四效真空降膜錯流蒸發(fā)對所述上清液濃縮，采 用噴霧干燥進行干燥。采用四效真空降膜錯流蒸發(fā)對上清液濃縮，料液加熱時間非常短，較 大的保存了食品的營養(yǎng)成份；加熱均勻，料液為液膜式流動蒸發(fā)，傳熱效率高，加熱時間短， 節(jié)能；得到的濃縮液中無泡沫；自動化操作，提高了效率，節(jié)約了人力。噴霧干燥是系統(tǒng)化 技術(shù)應用于物料干燥的一種方法，于干燥室中將稀料經(jīng)霧化后，在與熱空氣的接觸中，水分 迅速汽化，即得到干燥產(chǎn)品，該法能直接使溶液、乳濁液干燥成粉狀或顆粒狀制品，可省去 蒸發(fā)、粉碎等工序。
[0039] 實施例1
[0040] 取新鮮甘薯嫩葉，打漿破碎得到葉子漿料，破碎的粒度大于4目；
[0041] 葉子漿料采用緩沖溶液ΚΗ2Ρ04-Κ2ΗΡ0 4浸泡，葉子漿料與緩沖溶液的質(zhì)量比為1:6， ΚΗ2Ρ04與Κ2ΗΡ04的摩爾數(shù)比為0· 9 :1，浸泡液pH為7. 3,浸泡溫度為45°C，浸泡過程中攪拌， 攪拌速度為25轉(zhuǎn)/分鐘；
[0042] 浸泡36h后，將浸泡物離心，離心速度為3000轉(zhuǎn)/分鐘，得到上清液，上清液的濁 度小于8NTU ;
[0043] 將上清液濃縮4倍，干燥至含水量為3%，得到超氧化物歧化酶產(chǎn)品。得到的S0D 產(chǎn)品為白色粉狀，SOD含量為85%，其他成分為12%，以新鮮甘薯嫩葉計，SOD產(chǎn)品的收率為 8%。
[0044] 實施例2
[0045] 取新鮮銀杏嫩葉，打漿破碎得到葉子漿料，破碎的粒度大于4目；
[0046] 葉子漿料采用緩沖溶液ΚΗ2Ρ04-Κ2ΗΡ0 4浸泡，葉子漿料與緩沖溶液的質(zhì)量比為1: 7， 緩沖溶液ΚΗ2Ρ04-Κ2ΗΡ04的質(zhì)量濃度為30%，ΚΗ 2Ρ04與Κ2ΗΡ04的摩爾數(shù)比為1 :1，浸泡液pH 為7. 6,浸泡溫度為50°C，浸泡過程中攪拌，攪拌速度為30轉(zhuǎn)/分鐘；
[0047] 浸泡38h后，將浸泡物離心，離心速度為3200轉(zhuǎn)/分鐘，得到上清液，上清液的濁 度小于8NTU ;
[0048] 將上清液采用四效真空降膜錯流蒸發(fā)濃縮4. 5倍，噴霧干燥至含水量為3. 5%，得 到超氧化物歧化酶產(chǎn)品。得到的S0D產(chǎn)品為白色粉狀，S0D含量為90%，其他成分為6. 5%， 以新鮮銀杏嫩葉計，S0D產(chǎn)品的收率為12%。
[0049] 實施例3
[0050] 取新鮮串葉松香草嫩葉，打漿破碎得到葉子漿料，破碎的粒度大于4目；
[0051] 葉子漿料采用緩沖溶液ΚΗ2Ρ04-Κ2ΗΡ0 4浸泡，葉子漿料與緩沖溶液的質(zhì)量比為1:8， 緩沖溶液ΚΗ2Ρ04-Κ 2ΗΡ04的質(zhì)量濃度為40%，ΚΗ2Ρ04與Κ2ΗΡ0 4的摩爾數(shù)比為0. 8 :1. 2,浸泡
【權(quán)利要求】
1. 一種超氧化物歧化酶的提取方法，其特征在于，包括以下步驟： (a) 、取新鮮葉子，打漿破碎得到葉子漿料； (b) 、所述葉子漿料采用緩沖溶液ΚΗ2Ρ04-Κ2ΗΡ04浸泡，所述葉子漿料與所述緩沖溶液的 質(zhì)量比為1:6-10，浸泡液？!1為7.3-7.8，浸泡溫度為45-551： ; (c) 、浸泡36-40h后，將浸泡物離心，得到上清液； (d) 、將所述上清液濃縮，干燥，得到超氧化物歧化酶產(chǎn)品。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的超氧化物歧化酶的提取方法，其特征在于，所述新鮮葉子包 括甘薯葉、山楂葉、銀杏葉、串葉松香草葉、北海道黃楊葉、大葉黃楊葉、金心黃楊葉中的任 意一種或多種。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的超氧化物歧化酶的提取方法，其特征在于，所述新鮮葉子為 新鮮嫩葉。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的超氧化物歧化酶的提取方法，其特征在于，在所述步驟（a) 中，破碎的粒度大于4目。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的超氧化物歧化酶的提取方法，其特征在于，在所述步驟（b) 中，所述緩沖溶液ΚΗ2Ρ0 4-Κ2ΗΡ04的質(zhì)量濃度為30% -40%，ΚΗ2Ρ04與Κ2ΗΡ04的摩爾數(shù)比為 0. 8-1. 2 ：0. 8-1. 2〇
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的超氧化物歧化酶的提取方法，其特征在于，在所述步驟（b) 中，浸泡過程中進行攪拌，攪拌速度為25-30轉(zhuǎn)/分鐘。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的超氧化物歧化酶的提取方法，其特征在于，在所述步驟（c) 中，離心速度為3000-3500轉(zhuǎn)/分鐘。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的超氧化物歧化酶的提取方法，其特征在于，在所述步驟（c) 中，所述上清液的濁度小于8NTU。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的超氧化物歧化酶的提取方法，其特征在于，在所述步驟（d) 中，濃縮的倍數(shù)為4-4. 5倍，干燥至所述超氧化物歧化酶產(chǎn)品的水分含量為3-4%。
10. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的超氧化物歧化酶的提取方法，其特征在于，在所述步驟（d) 中，采用四效真空降膜錯流蒸發(fā)對所述上清液濃縮，采用噴霧干燥進行干燥。
【文檔編號】C12N9/02GK104087562SQ201410357344
【公開日】2014年10月8日 申請日期:2014年7月24日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月24日
【發(fā)明者】黃海軍, 王若林 申請人:北京翰若生物科技有限公司