一種判斷曲妥珠單抗輔助治療乳腺癌療效的試劑盒及應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種判斷曲妥珠單抗輔助治療乳腺癌療效的試劑盒及應(yīng)用，該試劑盒包括能夠用于檢測(cè)HER2基因中rs1058808位點(diǎn)和/或rs2517954位點(diǎn)的基因型的試劑。發(fā)明人通過對(duì)患者進(jìn)行基因分型，分析SNP位點(diǎn)基因型同曲妥珠單抗輔助治療HER2陽性乳腺癌患者的療效的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)根據(jù)rs1058808和/或rs2517954位點(diǎn)的基因型，可以判斷曲妥珠單抗輔助治療HER2陽性乳腺癌患者的療效。本發(fā)明的試劑盒的開發(fā)為HER2陽性乳腺癌患者治療方案的確定提供了一種可靠、靈敏的方式。
【專利說明】一種判斷曲妥珠單抗輔助治療乳腺癌療效的試劑盒及應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，涉及一種判斷曲妥珠單抗輔助治療HER2陽性乳腺癌 患者的療效的試劑盒以及SNP在制備該試劑盒中的用途。

【背景技術(shù)】
[0002] 乳腺癌是全球女性最常見的惡性腫瘤，大多數(shù)國家在過去20年中乳腺癌發(fā)病率 持續(xù)增長。據(jù)世界衛(wèi)生組織國際癌癥研究中心（International Agency for Research on Cancer，IARC)統(tǒng)計(jì)，2008年全球女性乳腺癌新發(fā)病例達(dá)138萬，占全部女性惡性腫瘤發(fā)病 的22. 9% ;46萬女性因乳腺癌死亡，占所有女性惡性腫瘤死亡的13. 7%，占所有女性死亡 的1. 7%。中國女性乳腺癌世界標(biāo)準(zhǔn)人口調(diào)整發(fā)病率為21. 6/10萬，死亡率為5. 7/10萬。 我國2003-2007年全國32個(gè)腫瘤登記點(diǎn)女性乳腺癌合計(jì)發(fā)病率為41. 64/10萬，居女性癌 癥發(fā)病的第1位；合計(jì)死亡率為9. 63/10萬，居女性癌癥死因的第6位。研究和了解中國女 性乳腺癌的流行因素和遺傳規(guī)律，并采取相應(yīng)的干預(yù)措施，對(duì)降低乳腺癌的發(fā)病率具有重 要意義。
[0003] 乳腺癌是一種高度異質(zhì)性疾病，在組織形態(tài)、分子表型、臨床表現(xiàn)、治療效果及預(yù) 后等各方面都存在很大的差異。人類基因組計(jì)劃的研究結(jié)果表明，不同個(gè)體的基因99. 9% 是相同的，僅僅在序列上有極?。ī? 1% )的遺傳差異。單核苷酸多態(tài)（SNP)是指在基因組 DNA序列中單個(gè)核苷酸的變異，一般指頻率大于1 %的單核苷酸變異，是最常見的遺傳變異 類型。SNP在人類基因組中廣泛存在，占所有已知多態(tài)性的90%以上，人類基因組中SNP總 量約為3*10 6個(gè)，大概每1000個(gè)堿基就有一個(gè)SNP。研究SNP可以幫助解釋不同群體和個(gè) 體疾病易感性、個(gè)體間表型、對(duì)藥物的耐受性及對(duì)環(huán)境因子的反應(yīng)的差異。因此乳腺癌SNP 導(dǎo)致的遺傳變異如何決定了乳腺癌的表型及轉(zhuǎn)歸值得我們深入研究。
[0004] 在乳腺癌患者中，有20%-30%存在人表皮生長因子受體2(human印idermal growth factor receptor 2, HER2)基因的擴(kuò)增及其編碼蛋白的過度表達(dá)[Slamon DJ et al.，1987]，且HER2過度表達(dá)常提示乳腺癌預(yù)后不良[Tandon AK et al.，1989]。曲妥珠單 抗是人源化抗HER2單克隆抗體，已廣泛用于HER2陽性乳腺癌的臨床治療，單藥治療HER2 陽性轉(zhuǎn)移性乳腺癌的有效率為35%。曲妥珠單抗單藥或聯(lián)合化療可延長HER2陽性轉(zhuǎn)移性 乳腺癌病人的總生存期，改善這類病人的預(yù)后。NSABP B-31、NCCTG N983UBCIRG 006和 HERA 4個(gè)大型隨機(jī)III期臨床研究的結(jié)果顯示，曲妥珠單抗可使HER2陽性早期乳腺癌患者 輔助化療后的復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)降低52 %，死亡風(fēng)險(xiǎn)降低33 %。2006年FDA批準(zhǔn)曲妥珠單抗輔助治 療HER2陽性早期乳腺癌。
[0005] 本發(fā)明通過SNP分析，從基因表型分型上分析其與曲妥珠單抗治療的HER2陽性早 期乳腺癌的臨床特征及預(yù)后是否相關(guān)。采用病例-對(duì)照研究的方法，深入研究這些關(guān)鍵基 因的多態(tài)性與乳腺癌病理分型及治療之間的關(guān)系，尋找有意義的分子標(biāo)記物，為判斷預(yù)后、 篩選高危復(fù)發(fā)人群、選擇個(gè)體化治療提供依據(jù)，從而最終指導(dǎo)臨床。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 發(fā)明人發(fā)現(xiàn)了 rsl058808位點(diǎn)和/或rs2517954位點(diǎn)與曲妥珠單抗輔助治療HER2 陽性乳腺癌患者的療效的相關(guān)性，并據(jù)此開發(fā)了能夠判斷曲妥珠單抗輔助治療HER2陽性 乳腺癌患者療效的試劑盒，和rsl058808位點(diǎn)和/或rs2517954位點(diǎn)在制備曲妥珠單抗輔 助治療HER2陽性乳腺癌患者的療效的試劑盒中的應(yīng)用。
[0007] -方面，本發(fā)明提供了用于判斷曲妥珠單抗輔助治療HER2陽性乳腺癌患者的療 效的兩個(gè)SNP位點(diǎn)，所述的SNP位點(diǎn)是rsl058808位點(diǎn)和rs2517954,當(dāng)rsl058808位點(diǎn)基 因型是CC時(shí)，曲妥珠單抗輔助治療HER2陽性乳腺癌患者的療效差，應(yīng)改變患者的治療方 案，當(dāng)rsl058808位點(diǎn)基因型為CG或GG時(shí)，曲妥珠單抗輔助治療HER2陽性乳腺癌患者的 療效好，患者不易復(fù)發(fā)；當(dāng)rs2517954位點(diǎn)基因型是CC時(shí)，曲妥珠單抗輔助治療HER2陽性 乳腺癌患者的療效好，患者不易復(fù)發(fā)，當(dāng)rs2517954位點(diǎn)基因型是CT或TT時(shí)，曲妥珠單抗 輔助治療HER2陽性乳腺癌患者的療效差，應(yīng)改變患者的治療方案。
[0008] 另一方面，本發(fā)明提供了用于檢測(cè)SNP位點(diǎn)基因型的試劑，所述試劑可以為采用 本領(lǐng)域已知的任何技術(shù)檢測(cè)SNP所需的試劑，只要其能夠檢測(cè)樣本中rsl058808位點(diǎn)和/ 或rs2517954位點(diǎn)的基因型即可。
[0009] 本領(lǐng)域技術(shù)人員已知，可以用多種技術(shù)在DNA水平上體外檢測(cè)CETP基因序列的多 態(tài)性位點(diǎn)。可以經(jīng)與用放射性標(biāo)記的反義RNA或DNA探針與擴(kuò)增后的DNA序列雜交，以鑒 別位點(diǎn)多態(tài)性。也可以基于已知的核苷酸順序的改變，合成正常的和具有特定多態(tài)性的PCR 引物，在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR反應(yīng)）的底物中加入熒光標(biāo)記的核苷酸，根據(jù)反應(yīng)產(chǎn)物中有 無熒光出現(xiàn)，確定在擴(kuò)增所用的引物中有無堿基變化，從而檢測(cè)特定多態(tài)性。通過DNA直接 測(cè)序可以直接揭示對(duì)照基因和攜帶具有特定多態(tài)性基因之間的序列差異。當(dāng)與PCR結(jié)合使 用時(shí)，這種方法的靈敏性大大提高。各種DNA及DNA片段的核苷酸序列的測(cè)定也可用常規(guī)方 法如雙脫氧鏈終止法。此外，核苷酸序列測(cè)定也可用商業(yè)測(cè)序試劑盒或自動(dòng)測(cè)序儀等。常 規(guī)的自動(dòng)測(cè)序法用放射性標(biāo)記或熒光標(biāo)記來確定核酸序列。也可以采用限制性片段多態(tài)性 分析（RFLP)來體外檢測(cè)CETP基因序列的多態(tài)性位點(diǎn)。
[0010] 本發(fā)明提供的用于檢測(cè)SNP位點(diǎn)基因型的試劑，包括用于擴(kuò)增SNP位點(diǎn)在內(nèi)的核 苷酸序列的引物和/或能夠使用MassARRAY Sequenom檢測(cè)SNP位點(diǎn)基因型的單堿基擴(kuò)展 引物。對(duì)于rsl058808位點(diǎn)來說，用于擴(kuò)增rsl058808位點(diǎn)在內(nèi)的核苷酸序列的引物序列 如下：正向引物 5' -ACGTTGGATGACCTGCTGGTGCCACTCTG-3' ；反向引物 5' -ACGTTGGATGAAAACG TCTTTGACGACCCC-3' ；對(duì)于rs2517954位點(diǎn)來說，所述用于擴(kuò)增所述rs2517954位點(diǎn)在內(nèi)的 核苷酸序列的引物序列如下：正向引物5' -ACGTTGGATGCCCCATCTGTAAAACTGGGA-3' ；反向引 物 5'-ACGTTGGATGTTGAGCACTCACTGTGTGAC-3'。對(duì)于 rsl058808 位點(diǎn)來說，所述單堿基擴(kuò)展 引物序列為：5' -GCCACTCTGGAAAGG-3' ；對(duì)于rs2517954位點(diǎn)來說，所述單堿基擴(kuò)展引物序 列為：5' -aTCAAAGGGTGTGATAAAAATTAC-3'。
[0011] 又一方面，本發(fā)明提供了用于檢測(cè)SNP位點(diǎn)基因型的試劑盒，該試劑盒包括采用 本領(lǐng)域已知的任何技術(shù)檢測(cè)SNP所需的試劑，只要其能夠檢測(cè)樣本中rsl058808位點(diǎn)和/ 或rs2517954位點(diǎn)的基因型。
[0012] 本發(fā)明提供的用于檢測(cè)SNP位點(diǎn)基因型的試劑盒包括用于擴(kuò)增SNP位點(diǎn)在內(nèi)的核 苷酸序列的引物和/或能夠使用MassARRAY Sequenom檢測(cè)SNP位點(diǎn)基因型的單堿基擴(kuò)展 引物。對(duì)于rsl058808位點(diǎn)來說，用于擴(kuò)增rsl058808位點(diǎn)在內(nèi)的核苷酸序列的引物序列 如下：正向引物 5' -ACGTTGGATGACCTGCTGGTGCCACTCTG-3' ；反向引物 5' -ACGTTGGATGAAAACG TCTTTGACGACCCC-3' ；對(duì)于rs2517954位點(diǎn)來說，所述用于擴(kuò)增所述rs2517954位點(diǎn)在內(nèi)的 核苷酸序列的引物序列如下：正向引物5' -ACGTTGGATGCCCCATCTGTAAAACTGGGA-3' ；反向引 物 5'-ACGTTGGATGTTGAGCACTCACTGTGTGAC-3'。對(duì)于 rsl058808 位點(diǎn)來說，所述單堿基擴(kuò)展 引物序列為：5' -GCCACTCTGGAAAGG-3' ；對(duì)于rs2517954位點(diǎn)來說，所述單堿基擴(kuò)展引物序 列為：5' -aTCAAAGGGTGTGATAAAAATTAC-3'。
[0013] 本發(fā)明提供了用于判斷曲妥珠單抗輔助治療HER2陽性乳腺癌患者的療效的試劑 盒，該試劑盒的判斷原理是利用試劑盒中的試劑檢測(cè)rsl058808位點(diǎn)和/或rs2517954位 點(diǎn)的基因型，根據(jù)所測(cè)患者的上述SNP位點(diǎn)的基因型判斷曲妥珠單抗輔助治療HER2陽性乳 腺癌患者的療效。當(dāng)rsl058808位點(diǎn)基因型是CC時(shí)，曲妥珠單抗輔助治療HER2陽性乳腺 癌患者的療效差，應(yīng)改變患者的治療方案，當(dāng)rsl058808位點(diǎn)基因型為CG或GG時(shí)，曲妥珠 單抗輔助治療HER2陽性乳腺癌患者的療效好，患者不易復(fù)發(fā)；當(dāng)rs2517954位點(diǎn)基因型是 CC時(shí)，曲妥珠單抗輔助治療HER2陽性乳腺癌患者的療效好，患者不易復(fù)發(fā)，當(dāng)rs2517954位 點(diǎn)基因型是CT或TT時(shí)，曲妥珠單抗輔助治療HER2陽性乳腺癌患者的療效差，應(yīng)改變患者 的治療方案。
[0014] 該試劑盒中包括采用本領(lǐng)域已知的任何技術(shù)檢測(cè)SNP基因型所需的試劑，只要其 能夠檢測(cè)樣本中rsl058808位點(diǎn)和/或rs2517954位點(diǎn)的基因型即可。本發(fā)明提供的用于 判斷曲妥珠單抗輔助治療HER2陽性乳腺癌患者的療效的試劑盒包括用于擴(kuò)增SNP位點(diǎn)在 內(nèi)的核苷酸序列的引物和/或能夠使用MassARRAY Sequenom檢測(cè)SNP位點(diǎn)基因型的單堿 基擴(kuò)展引物。對(duì)于rsl058808位點(diǎn)來說，用于擴(kuò)增rsl058808位點(diǎn)在內(nèi)的核苷酸序列的引 物序列如下：正向引物 5' -ACGTTGGATGACCTGCTGGTGCCACTCTG-3' ；反向引物 5' -ACGTTGGATG AAAACGTCTTTGACGACCCC-3 ' ；對(duì)于rs2517954位點(diǎn)來說，所述用于擴(kuò)增所述rs2517954位點(diǎn) 在內(nèi)的核苷酸序列的引物序列如下：正向引物5' -ACGTTGGATGCCCCATCTGTAAAACTGGGA-3' ； 反向引物 5' - ACGTTGGATGTTGAGCACTCACTGTGTGAC-3'。對(duì)于 rsl058808 位點(diǎn)來說，所述單 堿基擴(kuò)展引物序列為：5' -GCCACTCTGGAAAGG-3' ；對(duì)于rs2517954位點(diǎn)來說，所述單堿基擴(kuò) 展引物序列為：5' -aTCAAAGGGTGTGATAAAAATTAC-3'。
[0015] 本發(fā)明還提供了 rsl058808位點(diǎn)和/或rs2517954位點(diǎn)在制備檢測(cè)SNP位點(diǎn)基因 型的試劑中的應(yīng)用。所述試劑可以為采用本領(lǐng)域已知的任何技術(shù)檢測(cè)SNP基因型所需的試 齊U，只要其能夠檢測(cè)樣本中rsl058808位點(diǎn)和/或rs2517954位點(diǎn)的基因型即可。
[0016] 本發(fā)明還提供了 rsl058808位點(diǎn)和/或rs2517954位點(diǎn)在制備檢測(cè)SNP位點(diǎn)基因 型的試劑盒中的應(yīng)用。所述試劑盒中包括能夠檢測(cè)SNP位點(diǎn)基因型的試劑。在一個(gè)具體 的實(shí)施方案中，所述試劑包括用于擴(kuò)增SNP位點(diǎn)在內(nèi)的核苷酸序列的引物和/或能夠使用 MassARRAY Sequenom檢測(cè)SNP位點(diǎn)基因型的單堿基擴(kuò)展引物。對(duì)于rsl058808位點(diǎn)來說，用 于擴(kuò)增rs 1058808位點(diǎn)在內(nèi)的核苷酸序列的引物序列如下：正向引物5'-ACGTTGGATGACCTG CTGGTGCCACTCTG-3' ；反向引物 5' -ACGTTGGATGAAAACGTCTTTGACGACCCC-3' ；對(duì)于 rs2517954 位點(diǎn)來說，所述用于擴(kuò)增所述rs2517954位點(diǎn)在內(nèi)的核苷酸序列的引物序列如下：正向引 物 5 ' -ACGTTGGATGCCCCATCTGTAAAACTGGGA-3 ' ；反向引物 5 ' -ACGTTGGATGTTGAGCACTCACTGTGT GAC-3'。對(duì)于rsl058808位點(diǎn)來說，所述單堿基擴(kuò)展引物序列為：5'-GCCACTCTGGMAGG-3';對(duì) 于rs2517954位點(diǎn)來說，所述單堿基擴(kuò)展引物序列為：5' -aTCAAAGGGTGTGATAAAAATTAC-3'。
[0017] 本發(fā)明還提供了 rsl058808位點(diǎn)和/或rs2517954位點(diǎn)在制備用于判斷曲妥珠 單抗輔助治療HER2陽性乳腺癌患者的療效的試劑盒中的應(yīng)用。所述試劑盒的判斷原理 是利用試劑盒中的試劑檢測(cè)rsl058808位點(diǎn)和/或rs2517954位點(diǎn)的基因型，根據(jù)所測(cè)患 者的上述SNP位點(diǎn)的基因型判斷曲妥珠單抗輔助治療HER2陽性乳腺癌患者的療效。當(dāng) rsl058808位點(diǎn)基因型是CC時(shí)，曲妥珠單抗輔助治療HER2陽性乳腺癌患者的療效差，應(yīng)改 變患者的治療方案，當(dāng)rsl058808位點(diǎn)基因型為CG或GG時(shí)，曲妥珠單抗輔助治療HER2陽 性乳腺癌患者的療效好，患者不易復(fù)發(fā)；當(dāng)rs2517954位點(diǎn)基因型是CC時(shí)，曲妥珠單抗輔助 治療HER2陽性乳腺癌患者的療效好，患者不易復(fù)發(fā)，當(dāng)rs2517954位點(diǎn)基因型是CT或TT 時(shí)，曲妥珠單抗輔助治療HER2陽性乳腺癌患者的療效差，應(yīng)改變患者的治療方案。
[0018] 本發(fā)明還提供了用于檢測(cè)rsl058808位點(diǎn)和/或rs2517954位點(diǎn)基因型的試劑在 制備用于檢測(cè)rsl058808位點(diǎn)和/或rs2517954位點(diǎn)基因型的試劑盒中的應(yīng)用。
[0019] 本發(fā)明還提供了用于檢測(cè)rsl058808位點(diǎn)和/或rs2517954位點(diǎn)基因型的試劑在 制備用于判斷曲妥珠單抗輔助治療HER2陽性乳腺癌患者的療效的試劑盒中的應(yīng)用。
[0020] 本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)和有益效果如下：首次發(fā)現(xiàn)HER2基因中rs 1058808位點(diǎn)和/或 rs2517954位點(diǎn)與曲妥珠單抗輔助治療HER2陽性乳腺癌患者的療效的相關(guān)性，通過檢測(cè)上 述SNP位點(diǎn)的基因型即可判斷HER2陽性乳腺癌患者對(duì)曲妥珠單抗輔助治療的敏感性，為醫(yī) 生確定患者的治療方案提供一種可靠、靈敏的方法。
[0021] 具體的實(shí)施方式
[0022] 下面通過具體的實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明，應(yīng)注意，如無特別指出，本發(fā)明的實(shí)施 例僅用于解釋本發(fā)明，并不意味著限定本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0023] 1.研究對(duì)象：研究納入的對(duì)象為中國漢族女性，中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院內(nèi)科收 治的經(jīng)曲妥珠單抗治療的HER2陽性早期乳腺癌患者，且收集有血液標(biāo)本的患者共190例。 所有研究對(duì)象均有可供病理組織學(xué)或細(xì)胞學(xué)診斷的標(biāo)本，并經(jīng)我院病理科醫(yī)生閱片診斷， 無第二原發(fā)腫瘤。HER2陽性定義為免疫組化3+或熒光原位雜交（FISH)方法檢測(cè)HER2基 因擴(kuò)增。ER和PR根據(jù)免疫組化進(jìn)行判斷。腫瘤分期按照2002年美國腫瘤研究聯(lián)合委員會(huì) (AJCC)乳腺癌分期標(biāo)準(zhǔn)（第6版）進(jìn)行?；仡櫺圆殚喕颊咴卺t(yī)院收治的病歷記錄，詳細(xì)記 錄患者腫瘤類型、分期、術(shù)后化療方案、復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移情況，采用門診隨訪及電話隨訪的方式 對(duì)入組患者進(jìn)行隨訪。
[0024] 2.用藥方法：曲妥珠單抗的應(yīng)用為3周方案（首次8mg/kg，以后每次6mg/kg)或 與化療同時(shí)進(jìn)行時(shí)采用每周方案（首次4mg/kg，以后每次2mg/kg)，曲妥珠單抗用藥時(shí)間為 1年。
[0025] 3. HER2基因 SNP位點(diǎn)的選擇：在國際人類基因組單體型圖計(jì)劃提供的SNP公共數(shù) 據(jù)庫（http://hapmap:ncbL· nlm· nih. gov/)中檢索HER2基因，首先選取已知漢族人群中信 息的SNP位點(diǎn)，再以其中的標(biāo)簽SNP作為進(jìn)一步分型的候選多態(tài)位點(diǎn)，然后結(jié)合最小基因頻 率（MAF)以及哈迪-溫伯格平衡P值（HWPval)等統(tǒng)計(jì)特征對(duì)候選標(biāo)簽SNP進(jìn)行篩選以 得出最佳的標(biāo)簽SNP。選取要求：MAF>0. 1且HWPval>0. 1。針對(duì)HER2基因進(jìn)行了基于標(biāo)簽 SNP為主體的全面SNP位點(diǎn)選擇，并且將與之關(guān)聯(lián)的部分功能SNP替換進(jìn)去，HER2基因的候 選SNP位點(diǎn)信息如表1所示：
[0026] 表1 HER2基因候選SNP位點(diǎn)信息
[0027]

【權(quán)利要求】
1. 一種檢測(cè)用于判斷曲妥珠單抗輔助治療HER2陽性乳腺癌患者療效的SNP marker的 基因型的試劑，其特征在于，所述SNP marker是rsl058808位點(diǎn)和/或rs2517954位點(diǎn)。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑，其特征在于，對(duì)于rsl058808位點(diǎn)來說，所述試劑包括 用于擴(kuò)增所述rsl058808位點(diǎn)在內(nèi)的核苷酸序列的引物；對(duì)于rs2517954位點(diǎn)來說，所述試 劑包括用于擴(kuò)增所述rs2517954位點(diǎn)在內(nèi)的核苷酸序列的引物。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的試劑，其特征在于，對(duì)于rsl058808位點(diǎn)來說，所述用于擴(kuò)增 所述rs 1058808位點(diǎn)在內(nèi)的核苷酸序列的引物序列如下：正向引物5 '-ACGTTGGATGACCTGCT GGTGCCACTCTG-3' ；反向引物 5' -ACGTTGGATGAAAACGTCTTTGACGACCCC-3' ；對(duì)于 rs2517954 位 點(diǎn)來說，所述用于擴(kuò)增所述rs2517954位點(diǎn)在內(nèi)的核苷酸序列的引物序列如下：正向引物5 ' -ACGTTGGATGCCCCATCTGTAAAACTGGGA-3，；反向引物 5，-ACGTTGGATGTTGAGCACTCACTGTGTGAC -3，。
4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的試劑，其特征在于，對(duì)于rsl058808位點(diǎn)來說，所述試劑還 包括能夠使用MassARRAY Sequenom檢測(cè)rsl058808位點(diǎn)基因型的單堿基擴(kuò)展引物；對(duì)于 rs2517954位點(diǎn)來說，所述試劑還包括能夠使用MassARRAY Sequenom檢測(cè)rs2517954位點(diǎn) 基因型的單堿基擴(kuò)展引物。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的試劑，其特征在于，對(duì)于rsl058808位點(diǎn)來說，所述單堿基擴(kuò) 展引物序列為：5' -GCCACTCTGGAAAGG-3' ；對(duì)于rs2517954位點(diǎn)來說，所述單堿基擴(kuò)展引物 序列為：5' -aTCAAAGGGTGTGATAAAAATTAC-3'。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑，其特征在于，對(duì)于rsl058808位點(diǎn)來說，所述試劑包 括能夠使用MassARRAY Sequenom檢測(cè)rsl058808位點(diǎn)基因型的單堿基擴(kuò)展引物；對(duì)于 rs2517954位點(diǎn)來說，所述試劑包括能夠使用MassARRAY Sequenom檢測(cè)rs2517954位點(diǎn)基 因型的單堿基擴(kuò)展引物。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的試劑，其特征在于，對(duì)于rsl058808位點(diǎn)來說，所述單堿基擴(kuò) 展引物序列為：5' -GCCACTCTGGAAAGG-3' ；對(duì)于rs2517954位點(diǎn)來說，所述單堿基擴(kuò)展引物 序列為：5' -aTCAAAGGGTGTGATAAAAATTAC-3'。
8. -種檢測(cè)權(quán)利要求1所述的SNP marker基因型的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒 包括權(quán)利要求2所述的試劑和/或權(quán)利要求6所述的試劑。
9. 一種用于判斷曲妥珠單抗輔助治療HER2陽性乳腺癌患者的療效的試劑盒，其特征 在于，所述試劑盒包括權(quán)利要求2所述的試劑和/或權(quán)利要求6所述的試劑。
10. 權(quán)利要求1所述的SNP marker在制備權(quán)利要求2和/或權(quán)利要求6所述的試劑、 和/或權(quán)利要求8或權(quán)利要求9所述的試劑盒中的用途，權(quán)利要求2至7中任一項(xiàng)所述的 試劑在制備權(quán)利要求8或權(quán)利要求9所述的試劑盒中的用途。
【文檔編號(hào)】C12Q1/68GK104152556SQ201410386781
【公開日】2014年11月19日 申請(qǐng)日期:2014年8月7日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月7日
【發(fā)明者】徐兵河, 馬飛, 郭繼紅 申請(qǐng)人:中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院