卵裂培養(yǎng)液及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種卵裂培養(yǎng)液及其制備方法，該卵裂培養(yǎng)液包含對受精卵進行處理培養(yǎng)的組合物、殺菌劑以及選擇性添加的指示劑和選擇性添加人血清白蛋白。本發(fā)明的卵裂培養(yǎng)液各項指標達到體外培養(yǎng)液的標準使用安全為輔助生殖技術(shù)提供有力保證，加入指示劑易于判斷培養(yǎng)液是否變質(zhì)，使用更安全、方便。
【專利說明】卵裂培養(yǎng)液及其制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及人工輔助生殖技術(shù)，尤其涉及一種卵裂培養(yǎng)液及其制備方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 卵裂培養(yǎng)液對受精卵的分裂培養(yǎng)已廣泛應用于試管嬰兒技術(shù)中。卵裂培養(yǎng)液的目 的是：一是提供受精卵發(fā)育的營養(yǎng)；二是為受精卵的發(fā)育提供必要的環(huán)境。卵裂培養(yǎng)液的 用途：實驗室或臨床在二氧化碳環(huán)境下對人的受精卵第一天到第三天的培養(yǎng)。
[0003] 目前，我國輔助生殖技術(shù)中的卵裂培養(yǎng)液依賴進口成品，成本高且溶液的有效性 的好壞不能很好的表現(xiàn)，如果在培養(yǎng)液變質(zhì)后仍繼續(xù)使用將對實驗或臨床操作造成不可逆 轉(zhuǎn)的結(jié)果。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種各項指標達到體外培養(yǎng)液的標準使用安全、易于判斷 培養(yǎng)液是否變質(zhì)的卵裂培養(yǎng)液，為輔助生殖技術(shù)提供有力保證。
[0005] 本發(fā)明的卵裂培養(yǎng)液，包含對受精卵進行處理培養(yǎng)的組合物、殺菌劑。
[0006] 所述殺菌劑為慶大霉素，濃度9. 5-10. 5mg/L。
[0007] 所述組合物中包含氯化鈉90. 25-99. 75mmol/L，氯化鉀2. 375-2. 625 mmol/L，硫 酸鎂 0· 38-0. 42mmol/L，葡萄糖 0· 19-0. 21mmol/L，氯化鈣 0· 19-0. 21 mmol/L，乙二胺四乙 酸 0· 012-0. 014mmol/L，乳酸鈉 1. 4176-1. 5669g/L，丙酮酸鈉 0· 19-0. 21mmol/L，碳酸氫鈉 23. 75-26. 25mmol/L，丙氨酰谷氨酰胺 0. 95-1. 05mmol/L，?；撬?0. 38-0. 42mmol/L，4-羥 乙基哌嗪乙磺酸HEPES 2. 375-2. 625mmol/L，非必需氨基酸0. 95-1. 05% (v/v)，慶大霉素 9. 5-10. 5mg/L〇
[0008] 所述非必需氨基酸為L-丙氨酸、L-天冬酰胺、L-天冬氨酸、L-谷氨酸、甘氨 酸、L-脯氨酸、L-絲氨酸中的一種或者幾種。
[0009] 卵裂培養(yǎng)液的溶劑采用超純水。
[0010] 卵裂培養(yǎng)液中含有人血清白蛋白9. 5-10. 5%，v/v，可在使用時添加或分裝前添加。
[0011] 所述卵裂培養(yǎng)液中還可以選擇性加入指示劑酚紅，濃度4. 75-5. 25mg/L。
[0012] 本發(fā)明的卵裂培養(yǎng)液的ρΗ=7· 20-7. 40,滲透壓260-290m0sm/Kg。
[0013] 本發(fā)明卵裂培養(yǎng)液的制備方法，包括下面步驟： (1)基礎(chǔ)液的配制 a、 先按照比例稱量各組分，并分開放置； b、 先將稱量好的組分（除殺菌劑、選擇性添加指示劑、碳酸氫鈉、人血清白蛋白）溶于超 純水中，溶解過程中遵循先固體后液體，NaHC0 3最后加入的原則； c、 向步驟b所得溶液中加入稱量好的殺菌劑、選擇性添加指示劑和NaHC03 ; d、 將配置好的基礎(chǔ)液放置37°C、5. 5%的C02培養(yǎng)箱中平衡6-12小時，此步驟用來調(diào)節(jié) PH在7. 20-7. 40范圍內(nèi)。
[0014] (2)卵裂培養(yǎng)液的原液配制 a、 將卵裂培養(yǎng)液的基礎(chǔ)液在超凈工作臺下利用0. 2 μ m的濾膜過濾除菌，得到濾液A ; b、 在濾液A中加入人血清白蛋白，震蕩或攪拌混合均勻，得到卵裂培養(yǎng)液的原液；或省 略該步驟，將濾液A作為卵裂培養(yǎng)液的原液，醫(yī)生使用時根據(jù)需要自行添加人血清白蛋白。
[0015] (3)卵裂培養(yǎng)液原液的處理 在無菌環(huán)境下對卵裂培養(yǎng)液的原液進行分裝封口，得到市售的卵裂培養(yǎng)液，將其放置 冰箱或冷庫內(nèi)保存。
[0016] (4)卵裂培養(yǎng)液進行檢測 取分裝好的卵裂培養(yǎng)液進行檢測，檢測項目是pH值、滲透壓、細胞毒性、皮內(nèi)刺激、致 敏、無菌、熱原、細菌內(nèi)毒素、體外鼠胚試驗來判斷卵裂培養(yǎng)液是否合格。
[0017] 本發(fā)明的有益效果是，1、本發(fā)明卵裂培養(yǎng)液的原料均是已經(jīng)證明其安全性的物 質(zhì)，在制備過程中其溶劑采用超純水，超純水的總有機碳（T0C)超低，避免了因雜質(zhì)過多影 響測定的結(jié)果。2、使用抗生素來抑制細菌的生長，如慶大霉素是一種廣譜、熱穩(wěn)定性好的 抗生素，在卵裂培養(yǎng)液中添加慶大霉素可以有效抑制細菌的生長。3、國內(nèi)還沒有成型的 用于試管嬰兒技術(shù)的培養(yǎng)液，此配方和制備方法為國內(nèi)的試管嬰兒技術(shù)提供了有力的保 證，避免了國外產(chǎn)品因長途運輸帶來的不明因素，同時配制工藝操作簡單合理，檢測嚴密， 能夠提供新鮮的培養(yǎng)液供生殖中心或科研院所使用。4、卵裂培養(yǎng)液中選擇性加入指示劑 酚紅，酚紅在pH變化時顏色變化明顯，pH在7. 20-7. 40,范圍內(nèi)酚紅溶液為粉紅色到橙紅 色，當pH值小于6. 8時為黃色，當pH值大于8. 4時為紅色，變色比較明顯，卵裂培養(yǎng)液的 pH7. 20-7. 40在此范圍內(nèi)溶液為粉紅色到橙紅色，當卵裂培養(yǎng)液顏色與此不符時，說明該卵 裂培養(yǎng)液變質(zhì)，不能用于實驗或臨床，從而避免了使用變質(zhì)卵裂培養(yǎng)液而產(chǎn)生的風險。如不 含酚紅指示劑，則溶液呈透明、清澈，在有效期內(nèi)能保證無菌且正常使用，需特別關(guān)注產(chǎn)品 儲存、運輸條件及有效期。

【具體實施方式】
[0018] 以下通過實施例對本發(fā)明做進一步的說明。
[0019] 一、卵裂培養(yǎng)液配方及制備方法 表1卵裂培養(yǎng)液配方

【權(quán)利要求】
1. 卵裂培養(yǎng)液，其特征在于：包含對受精卵進行處理培養(yǎng)的組合物、殺菌劑。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的卵裂培養(yǎng)液，其特征在于，所述殺菌劑為慶大霉素，濃度 9. 5-10. 5mg/L〇
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的卵裂培養(yǎng)液，其特征在于，所述組合物中包含氯化鈉 90. 25-99. 75mmol/L，氯化鉀 2. 375-2. 625 mmol/L，硫酸鎂(λ 38-0. 42mmol/L，葡萄糖 0· 19-0. 21mmol/L，氯化鈣 0· 19-0. 21 mmol/L，乙二胺四乙酸 0· 012-0. 014mmol/L，乳酸 鈉 1. 4176-1. 5669g/L，丙酮酸鈉 0· 19-0. 21mmol/L，碳酸氫鈉 23. 75-26. 25mmol/L，丙氨 酰谷氨酰胺〇. 95-1. 05mmol/L，牛磺酸0. 38-0. 42mmol/L，4-羥乙基哌嗪乙磺酸HEPES 2. 375-2. 625mmol/L，非必需氨基酸 0. 95-1. 05%，v/v，慶大霉素 9. 5-10. 5mg/L。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的卵裂培養(yǎng)液，其特征在于，所述非必需氨基酸為L-丙氨酸、 L-天冬酰胺、L-天冬氨酸、L-谷氨酸、甘氨酸、L-脯氨酸、L-絲氨酸中的一種或者幾 種。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的卵裂培養(yǎng)液，其特征在于，卵裂培養(yǎng)液的溶劑采用超純水。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項所述的卵裂培養(yǎng)液，其特征在于，在所述卵裂培養(yǎng)液中含 有人血清白蛋白9. 5%-10. 5%，v/v，可在使用時添加或分裝前添加。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項所述的卵裂培養(yǎng)液，其特征在于，所述卵裂培養(yǎng)液中選擇 性加入指示劑酚紅，酚紅濃度4. 75-5. 25mg/L。
8. 制備權(quán)利要求1-7項卵裂培養(yǎng)液的方法，其特征在于包括下面步驟： (1) 基礎(chǔ)液的配制 a、 先按照比例稱量各組分，并分開放置； b、 先將除殺菌劑、選擇性添加的指示劑、碳酸氫鈉、人血清白蛋白外的稱量好的組分溶 于超純水中； c、 向步驟b所得溶液中加入稱量好的殺菌劑、選擇性添加指示劑和NaHC03 ; d、 將配置好的基礎(chǔ)液放置37°C、5. 5%的C02培養(yǎng)箱中平衡6-12小時； (2) 卵裂培養(yǎng)液的原液配制 a、 將卵裂培養(yǎng)液的基礎(chǔ)液在超凈工作臺下利用0. 2 μ m的濾膜過濾除菌，得到濾液A ; b、 在濾液A中加入人血清白蛋白，震蕩或攪拌混合均勻，得到卵裂培養(yǎng)液的原液；或省 略該步驟，將濾液A作為卵裂培養(yǎng)液的原液，醫(yī)生使用時根據(jù)需要自行添加人血清白蛋白； (3) 卵裂培養(yǎng)液原液的處理 在無菌環(huán)境下對卵裂培養(yǎng)液的原液進行分裝封口，得到市售的卵裂培養(yǎng)液，將其放置 冰箱或冷庫內(nèi)保存； (4) 卵裂培養(yǎng)液進行檢測 取分裝好的卵裂培養(yǎng)液進行檢測，檢測項目是pH值、滲透壓、細胞毒性、皮內(nèi)刺激、致 敏、無菌、熱原、細菌內(nèi)毒素、體外鼠胚試驗來判斷卵裂培養(yǎng)液是否合格。
【文檔編號】C12N5/073GK104140950SQ201410390997
【公開日】2014年11月12日 申請日期:2014年8月8日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月8日
【發(fā)明者】王維華, 呂汝舉, 劉美靜, 莊巍, 王英超 申請人:山東威高新生醫(yī)療器械有限公司