四苯乙烯衍生物在檢測甲基轉移酶活性和甲基轉移酶抑制劑濃度上的應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供四苯乙烯衍生物在檢測甲基轉移酶活性上的應用，屬于生物【技術領域】。該檢測方法首先制備淬滅分子修飾的雙鏈核酸；然后將淬滅分子修飾的雙鏈核酸與S-腺苷甲硫氨酸、限制性內切酶、不同濃度的甲基轉移酶和酶反應的緩沖溶液反應，得到混合溶液；最后將得到的混合溶液與四苯乙烯衍生物水溶液反應，對甲基轉移酶的活性進行檢測。本發(fā)明還提供四苯乙烯衍生物在檢測甲基轉移酶抑制劑濃度上的應用。本發(fā)明的檢測方法簡單、快速、靈敏度高。
【專利說明】四苯乙烯衍生物在檢測甲基轉移酶活性和甲基轉移酶抑制 劑濃度上的應用

【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物【技術領域】，具體涉及一種四苯乙烯衍生物在檢測甲基轉移酶活性 和甲基轉移酶抑制劑濃度上的應用。

【背景技術】
[0002] 帶有電荷的熒光共軛聚合物，能與帶相反電荷的熒光淬滅分子發(fā)生相互作用。促 成淬滅的激發(fā)態(tài)能通過電荷（或能量）轉移在共軛聚合物的大量重復單元中連續(xù)傳遞， 從而少量的淬滅分子就可以使聚合物的熒光發(fā)生高效淬滅。研究者們基于這個原理，發(fā) 展出了許多相關的生物分析，生物傳感新方法。例如，將熒光共軛聚合物和淬滅分子共價 修飾到具有發(fā)卡（hairpin)結構的核酸分子兩端，可以得到具有超淬滅性質的分子信標 (molecularbeacon)。突光共軛聚合物的突光被淬滅分子高效淬滅，當加入與之互補的核 酸鏈時，發(fā)卡結構被打開，聚合物的熒光恢復?；诖藢崿F(xiàn)對核酸分子的靈敏檢測（Angew. Chem. Int. Ed. 2005, 44, 2572 - 2576)。又如，帶有負電荷的熒光共軛聚合物因為靜電吸引 和帶正電荷的淬滅分子相互接近，從而熒光淬滅。而淬滅分子修飾了乙酰膽堿酯（ACh)的 衍生物，可以被乙酰膽堿酯酶（AChE)水解而生成帶負電荷的分子。這樣一來，淬滅分子因 靜電排斥而遠離熒光共軛聚合物，熒光恢復。基于此實現(xiàn)對乙酰膽堿酯酶活性的靈敏檢測 (Angew. Chem. Int. Ed. 2007, 46, 7882 - 7886) 〇
[0003] 現(xiàn)有報道的超淬滅方法都是針對熒光共軛聚合物的，而熒光共軛聚合物的合成繁 瑣，費時，成本高，其較差的水溶性和生物相容性也限制了在生物分析，生物傳感中的進一 步應用。
[0004] 與熒光共軛聚合物將重復的熒光單體共價連接不同，熒光小分子可以通過次極力 (如靜電作用等）形成非共價的聚集體，該聚集體的熒光同樣可以被淬滅分子高效淬滅。由 于熒光小分子合成容易，水溶性及生物相容性好，在生物分析和生物傳感發(fā)面具有更好的 應用前景。四苯乙烯（TPE)是一種十分經典的具有AIE性質的有機小分子，它的AIE性質 在此前的文獻里已有大量報道。唐本忠等人報道過帶有正電荷的四苯乙烯衍生物及其制備 方法（Chem. Eur. J. 2008, 14, 6428 - 6437 ;Chem. Eur. J. 2010, 16, 1232 - 1245)，現(xiàn)有技術中 還沒有將帶有正電荷的四苯乙烯衍生物用于檢測甲基轉移酶活性和甲基轉移酶抑制劑方 面的報道。


【發(fā)明內容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供四苯乙烯衍生物在檢測甲基轉移酶活性和甲基轉移酶抑制 劑濃度上的應用，該四苯乙烯衍生物具有較高的水溶性和生物相容性，且檢測靈敏度高。
[0006] 本發(fā)明首先提供四苯乙烯衍生物在檢測甲基轉移酶活性上的應用。
[0007] 優(yōu)選的是，所述的四苯乙烯衍生物檢測甲基轉移酶活性的方法，包括：
[0008] 步驟一：制備淬滅分子修飾的雙鏈核酸；
[0009] 步驟二：將步驟一得到的淬滅分子修飾的雙鏈核酸與S-腺苷甲硫氨酸、限制性內 切酶、不同濃度的甲基轉移酶和酶反應的緩沖溶液反應，得到混合溶液；
[0010] 步驟三：將步驟二得到的混合溶液與四苯乙烯衍生物水溶液反應，對甲基轉移酶 的活性進行檢測。
[0011] 優(yōu)選的是，所述的甲基轉移酶為Dam、HpaII MTase或MSssI。
[0012] 優(yōu)選的是，所述的甲基轉移酶的濃度范圍為0_160U/mL。
[0013] 優(yōu)選的是，所述的步驟二的反應是先在37°C反應5h，然后再升溫至90°C反應 10min〇
[0014] 優(yōu)選的是，所述的四苯乙烯衍生物的結構式為：
[0015]

【權利要求】
1. 四苯乙烯衍生物在檢測甲基轉移酶活性上的應用。
2. 根據(jù)權利要求1所述的四苯乙烯衍生物在檢測甲基轉移酶活性上的應用，其特征在 于，四苯乙烯衍生物檢測甲基轉移酶活性的方法，包括 ： 步驟一：制備淬滅分子修飾的雙鏈核酸； 步驟二：將步驟一得到的淬滅分子修飾的雙鏈核酸與S-腺苷甲硫氨酸、限制性內切 酶、不同濃度的甲基轉移酶和酶反應的緩沖溶液反應，得到混合溶液； 步驟三：將步驟二得到的混合溶液與四苯乙烯衍生物水溶液反應，對甲基轉移酶的活 性進行檢測。
3. 根據(jù)權利要求2所述的四苯乙烯衍生物在檢測甲基轉移酶活性上的應用，其特征在 于，所述的甲基轉移酶為Dam、Hpall MTase或M. SssI。
4. 根據(jù)權利要求2所述的四苯乙烯衍生物在檢測甲基轉移酶活性上的應用，其特征在 于，所述的甲基轉移酶的濃度范圍為0-160U/mL。
5. 根據(jù)權利要求2所述的四苯乙烯衍生物在檢測甲基轉移酶活性上的應用，其特征在 于，所述的步驟二的反應是先在37°C反應5h，然后再升溫至90°C反應lOmin。
6. 根據(jù)權利要求2所述的四苯乙烯衍生物在檢測甲基轉移酶活性上的應用，其特征在 于，所述的四苯乙烯衍生物的結構式為：
7. 四苯乙烯衍生物在檢測甲基轉移酶抑制劑濃度上的應用。
8. 根據(jù)權利要求7所述的四苯乙烯衍生物在檢測甲基轉移酶抑制劑濃度上的應用，其 特征在于，四苯乙烯衍生物檢測甲基轉移酶抑制劑的方法，包括 ： 步驟一：制備淬滅分子修飾的雙鏈核酸； 步驟二：將步驟一得到的淬滅分子修飾的雙鏈核酸與S-腺苷甲硫氨酸、限制性內切 酶、甲基轉移酶、不同濃度的甲基轉移酶抑制劑和酶反應的緩沖溶液反應，得到混合溶液； 步驟三：將步驟二得到的混合溶液與四苯乙烯衍生物水溶液反應，對甲基轉移酶抑制 劑的濃度進行檢測。
9. 根據(jù)權利要求8所述的四苯乙烯衍生物在檢測甲基轉移酶抑制劑濃度上的應用，其 特征在于，所述的甲基轉移酶抑制劑為慶大霉素、5-氟尿嘧啶、卞青霉素或絲裂霉素。
10. 根據(jù)權利要求8所述的四苯乙烯衍生物在檢測甲基轉移酶抑制劑濃度上的應用， 其特征在于，所述的四苯乙烯衍生物的結構式為：
【文檔編號】C12Q1/68GK104195242SQ201410417947
【公開日】2014年12月10日 申請日期:2014年8月20日 優(yōu)先權日:2014年8月20日
【發(fā)明者】于聰, 陳健, 王燕, 李文英, 周會鵬, 李永新 申請人:中國科學院長春應用化學研究所