一種吲哚-四氫吡咯-2-酮類生物堿及其制備方法與應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種吲哚-四氫吡咯-2-酮類生物堿及其制備方法和應(yīng)用。吲哚-四氫吡咯-2-酮類生物堿是以青霉屬分枝青霉組( Penicilliumramigena ， YNCA0361)菌株經(jīng)發(fā)酵、提取、層析、純化后得到，其分子式為C21H24N2O7，結(jié)構(gòu)式為：該化合物命名為：aspergillineD；青霉屬分枝青霉組( Penicilliumramigena ， YNCA0361)菌株，菌株保藏編號為CGMCCNo.4824，保藏日期為2011年5月2日。制備方法是青霉屬分枝青霉組菌株的固體發(fā)酵物為原料，經(jīng)有機溶劑提取、硅膠柱層析、高壓液相色譜分離步驟。應(yīng)用為該生物堿類化合物在制備抗癌和抗煙草花葉病毒藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明化合物結(jié)構(gòu)新穎，化合物活性好，可作為抗癌藥物和抗煙草花葉病毒的先導(dǎo)化合物，有較好的應(yīng)用前景。CGMCC No. 48242011.05.02
【專利說明】-種吲哚-四氫吡咯-2-酮類生物堿及其制備方法與應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種吲哚-四氫吡咯-2-酮類生物堿及其制 備方法與應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 吲哚-四氫吡咯-2-酮類生物堿隸屬于異戊烯基類生物堿，是一類數(shù)量少且結(jié)構(gòu) 非常特殊的生物堿。吲哚-四氫吡咯-2-酮類生物堿由于具有四氫吡咯_2, 4-二酮或四氫 吡咯-2-酮的活性中心而表現(xiàn)了一些列的生物活性。其代表化合物為明星分子環(huán)匹阿尼酸 (cyclopiazonicacid),該分子表現(xiàn)出較強的心肌肌楽網(wǎng)Ca2+-ATP酶（SERCA)抑制活性。 但從第一個吲哚-四氫吡咯-2-酮類生物堿于1968年發(fā)現(xiàn)至今，很少有該類分子類似物報 道，國內(nèi)外文獻報道不到十例。并且已經(jīng)報道的吲哚-四氫吡咯-2-酮類生物堿都具有氧 化度低、化合物結(jié)構(gòu)單一的特點。因此，開發(fā)一種氧化度高的吲哚-四氫吡咯-2-酮類生物 堿是非常必要的。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的第一目的在于提供一種吲哚-四氫吡咯-2-酮類生物堿；第二目的在于 提供所述的吲哚-四氫吡咯-2-酮類生物堿的制備方法；第三目的在于提供所述吲哚-四 氫吡咯-2-酮類生物堿的應(yīng)用。
[0004] 本發(fā)明的第一目的是這樣實現(xiàn)的，所述的吲哚-四氫吡咯-2-酮類生物堿是以青 霉屬分枝青霉組菌株經(jīng)發(fā)酵、提取、層析、純化后得到， 其分子式為C21H24N2O7，結(jié)構(gòu)式為：

【權(quán)利要求】
1. 一種吲哚-四氫吡咯-2-酮類生物堿，其特征在于所述的吲哚-四氫吡咯-2-酮類 生物堿是以青霉屬分枝青霉組YNCA0361)菌株經(jīng)發(fā)酵、提取、層 析、純化后得到，其分子式為C21H24N2O7，結(jié)構(gòu)式為：
該化合物命名為：aspergilline D; 所述青霉屬分枝青霉組YNCA0361)菌株，菌株保藏編號為 CGMCC No. 4824,保藏日期為2011年5月2日。
2. -種權(quán)利要求1所述吲哚-四氫吡咯-2-酮類生物堿的制備方法，其特征在于包括 以下步驟： A、 固體發(fā)酵：將菌株在馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基中于28 °C培養(yǎng)7天，接種到含 KTlOOml馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基的5(T500ml的三角瓶中，于28°C下在轉(zhuǎn)速180rpm旋轉(zhuǎn)震蕩 的條件下震蕩培養(yǎng)5~10天得到含菌營養(yǎng)基，將其接種進行大規(guī)模固體發(fā)酵得到發(fā)酵產(chǎn)物； B、 浸膏提取：將發(fā)酵產(chǎn)物中加入固液體積比1. 5~3倍的有機溶劑冷浸提取2~4次，每 次3(T60min，合并提取液，過濾，減壓濃縮至1/0/2體積時，靜置，濾除沉淀物，濃縮得到 浸膏； C、 硅膠柱層析：浸膏上硅膠柱層析，裝柱硅膠為200~300目，用量為浸膏重量6~8倍量； 用體積比為I: (T6:4的混合有機溶劑梯度洗脫，收集梯度洗脫液、濃縮，經(jīng)TLC監(jiān)測，合并相 同的部分； D、 反相柱層析：將以20:1配比的混合有機溶劑進行洗脫得到的洗脫液上反相柱層析， 反相柱是用反相材料C-18裝柱；用體積濃度為20~100%的甲醇水溶液進行梯度洗脫，收集 各部分洗脫液并濃縮，經(jīng)TLC監(jiān)測，合并相同的部分； E、 高壓液相色譜分離純化：將以體積含量50~70%甲醇水溶液洗脫得到的洗脫液經(jīng) 高效液相色譜分離純化即得目標物吲哚-四氫吡咯-2-酮類生物堿，即生物堿類化合物 aspergilline D0
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于A步驟中所述的大規(guī)模固體發(fā)酵是在 10(Tl000個KKT500毫升的馮巴赫瓶中進行，每個瓶含有KT200克大米和KT200毫升蒸 餾水，每個瓶中接種I. 〇?5. 0毫升的含菌營養(yǎng)基于25°C培養(yǎng)2(T45天。
4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于B步驟中所述的有機溶劑為體積濃度 7(Tl00%的丙酮、乙醇或甲醇。
5. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于C步驟中所述的浸膏在經(jīng)硅膠柱層析 前，還包括將浸膏用重量比1. 5~3倍量的丙酮溶解，然后用浸膏重0. 8~1. 2倍的80~100目 娃膠拌樣。
6. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于C步驟中所述的混合有機溶劑為正己 烷-丙酮、氯仿-丙酮、氯仿-甲醇、石油醚-丙酮或石油醚-乙酸乙酯。
7. 根據(jù)權(quán)利要求2或6所述的制備方法，其特征在于所述的混合有機溶劑體積配比為 1:0、20:1、9:1、8:2、3:2、1:1、1:2 和 0:1。
8. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于D步驟中所述的甲醇水溶液的濃度為 20%、30%、40%、50%、60%、70% 和 100%。
9. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于E步驟中所述的高壓液相色譜分離 純化是以50?70%的甲醇為流動相，流速10?14ml/min，21. 2X 250 mm, 5 um的Zorbax PrepHT GF反相制備柱為固定相，紫外檢測器檢測波長為254 nm，每次進樣45?60 ii L，收集 2(T35min的色譜峰，多次累加后蒸干，即得目標物吲哚-四氫吡咯-2-酮類生物堿，即生物 堿類化合物aspergilline D。
10. -種權(quán)利要求1所述的吲哚-四氫吡咯-2-酮類生物堿的應(yīng)用，其特征在于所述的 吲哚-四氫吡咯-2-酮類生物堿在制備抗癌藥物和抗煙草花葉病毒藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號】C12P17/18GK104357505SQ201410435982
【公開日】2015年2月18日 申請日期:2014年8月30日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月30日
【發(fā)明者】周敏, 高雪梅, 胡秋芬, 杜剛, 楊光宇, 李銀科, 葉艷清, 楊海英 申請人:云南民族大學(xué)