一種用于分辨3種水產(chǎn)源氣單胞菌復(fù)合群的檢測(cè)試劑盒的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種用于分辨3種水產(chǎn)源氣單胞菌復(fù)合群的檢測(cè)試劑盒，旨在提供一種同時(shí)篩選嗜水氣單胞菌復(fù)合群、溫和氣單胞菌復(fù)合群、豚鼠氣單胞菌復(fù)合群3種常見水產(chǎn)源氣單胞菌復(fù)合群，且成本低，檢測(cè)準(zhǔn)確率高的試劑盒；其技術(shù)方案是這樣的：該用于分辨3種水產(chǎn)源氣單胞菌復(fù)合群的檢測(cè)試劑盒，所述的試劑盒由下列鑒定材料組成：1)試劑A-無菌水；2)鑒定瓶1-無鹽堿性蛋白胨水；3)鑒定瓶2-含氨芐西林的RS培養(yǎng)基；4)鑒定瓶3-胰蛋白胨大豆培養(yǎng)基；5)鑒定瓶4-阿拉伯糖培養(yǎng)基；6)鑒定瓶5-七葉苷培養(yǎng)基；7)鑒定瓶6-葡萄糖產(chǎn)氣培養(yǎng)基；8)鑒定瓶7-氧化酶試紙；屬于檢測(cè)【技術(shù)領(lǐng)域】。
【專利說明】—種用于分辨3種水產(chǎn)源氣單胞菌復(fù)合群的檢測(cè)試劑盒

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種檢測(cè)試劑盒，更具體的說是一種用于分辨嗜水氣單胞菌復(fù)合群、溫和氣單胞菌復(fù)合群、豚鼠氣單胞菌復(fù)合群3種常見水產(chǎn)源氣單胞菌復(fù)合群的檢測(cè)試劑盒。

【背景技術(shù)】
[0002]氣單胞菌屬于氣單胞菌科，廣泛分布在水環(huán)境，也常在人體、水產(chǎn)動(dòng)物和食物中檢出。水產(chǎn)動(dòng)物源氣單胞菌分成3個(gè)復(fù)合群，包括嗜水氣單胞菌復(fù)合群、溫和氣單胞菌復(fù)合群、豚鼠氣單胞菌復(fù)合群，主要有嗜水氣單胞菌、溫和氣單胞菌、維氏氣單胞菌、豚鼠氣單胞菌等，同時(shí)也是常見的人魚共患病原菌，能引起人的食物中毒、腹瀉、敗血癥等。氣單胞菌具有廣泛的致病性，在高溫季節(jié)，容易單獨(dú)或者混合感染包括魚蝦類、貝類、爬行兩棲類等多種水產(chǎn)動(dòng)物，是水產(chǎn)養(yǎng)殖中一種危害性較高的病原菌，容易引起水生動(dòng)物多種細(xì)菌病的暴發(fā)，且危害程度高于其它細(xì)菌性疾病，成為我國淡水水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的主要威脅(唐江芳，氣單胞菌及其在水產(chǎn)中的危害，2007)。而臨床上的盲目用藥，使病原菌在大范圍藥物選擇壓力下，漸漸保留了氣單胞菌耐藥菌株，甚至是多重耐藥菌株，致使抗生素療效下降(蔡麗娟，等，水產(chǎn)致病性嗜水氣單胞菌耐藥性比較與分析，水產(chǎn)科學(xué)，2011)。這不僅導(dǎo)致藥物對(duì)水生動(dòng)物疾病的防控能力大大減弱，同時(shí)也嚴(yán)重影響水產(chǎn)動(dòng)物源食品的質(zhì)量安全，還存在將耐藥性傳播給人類致病菌的潛在風(fēng)險(xiǎn)。因此，監(jiān)測(cè)養(yǎng)殖動(dòng)物和養(yǎng)殖水體中不同氣單胞菌復(fù)合群的存在及其耐藥性是防治相關(guān)水產(chǎn)動(dòng)物疾病和保證食品安全的重要措施，而如何高效簡便的分辨出水產(chǎn)源氣單胞菌復(fù)合群是目前最需解決的問題。
[0003]目前分辨出水產(chǎn)源氣單胞菌復(fù)合群的技術(shù)有:1、通過普通培養(yǎng)基培養(yǎng)純化單菌落后利用細(xì)菌快速自動(dòng)鑒定系統(tǒng)進(jìn)行鑒定分辨，該法需要昂貴的儀器設(shè)備和技術(shù)熟練的操作人員；2、通過普通培養(yǎng)基培養(yǎng)純化單菌落后利用核酸的檢測(cè)技術(shù)，包括DNA和PCR技術(shù)(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù))，雖然具有快速、簡潔和靈敏的特點(diǎn)，但該法需要昂貴的儀器設(shè)備和技術(shù)熟練的操作人員；3、經(jīng)典的生理生化鑒定方法，該法不僅繁瑣、耗時(shí)、且要求操作人員有良好的專業(yè)素質(zhì)；4、目前也有些商品化的氣單胞菌培養(yǎng)基，如RS培養(yǎng)基、AHM培養(yǎng)基和APM培養(yǎng)基等，但分離率和準(zhǔn)確率不高(凌紅麗，等，嗜水氣單胞菌選擇性培養(yǎng)基鑒別效果的比較，1998)。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]針對(duì)上述不足，本發(fā)明的目的是提供了一種同時(shí)篩選嗜水氣單胞菌復(fù)合群、溫和氣單胞菌復(fù)合群、豚鼠氣單胞菌復(fù)合群3種常見水產(chǎn)源氣單胞菌復(fù)合群且成本低，準(zhǔn)確率高的試劑盒。
[0005]為此，本發(fā)明提供的技術(shù)方案是這樣的:該用于分辨3種水產(chǎn)源氣單胞菌復(fù)合群的檢測(cè)試劑盒，所述的試劑盒由下述鑒定瓶和試劑組成:1)試劑A-無菌水；2)鑒定瓶1-無鹽堿性蛋白胨水；3)鑒定瓶2-含氨芐西林的RS培養(yǎng)基；4)鑒定瓶3-胰蛋白胨大豆培養(yǎng)基；5)鑒定瓶4-阿拉伯糖培養(yǎng)基；6)鑒定瓶5-七葉苷培養(yǎng)基；7)鑒定瓶6-葡萄糖產(chǎn)氣培養(yǎng)基；8)鑒定瓶7-氧化酶試紙。
[0006]上述的用于分辨3種水產(chǎn)源氣單胞菌復(fù)合群的檢測(cè)試劑盒，所述的水產(chǎn)源氣單胞菌復(fù)合群為嗜水氣單胞菌復(fù)合群、溫和氣單胞菌復(fù)合群和豚鼠氣單胞菌復(fù)合群。
[0007]進(jìn)一步的，上述的用于分辨3種水產(chǎn)源氣單胞菌復(fù)合群的檢測(cè)試劑盒，所述的無鹽堿性蛋白胨水由下述質(zhì)量百分比的組分構(gòu)成:蛋白胨1.9-2.1 %，硝酸鉀0.0095-0.015%，結(jié)晶碳酸鈉 0.015-0.025%，余量為水；pH8.2-8.5。
[0008]進(jìn)一步的，上述的用于分辨3種水產(chǎn)源氣單胞菌復(fù)合群的檢測(cè)試劑盒，所述的含氨芐西林的RS培養(yǎng)基由下述質(zhì)量百分比的組分制成:L-鹽酸鳥氨酸0.60-0.70%，L-鹽酸賴氨酸0.4-0.6%, L-鹽酸半胱氨酸0.02-0.04%，麥芽糖0.30-0.40%，硫代硫酸鈉
0.60-0.75 %，枸櫞酸鐵胺 0.07-0.09 %，脫氧膽酸鈉 0.09-0.11%,酵母膏 0.25-0.35 %，氯化鈉0.4-0.6%,溴麝香草酚藍(lán)0.002-0.004 %,新生霉素0.0004-0.0006 %,瓊脂
1.2-1.8%，氨芐西林 0.0001%，余量為水；pH6.8-7.2。
[0009]進(jìn)一步的，上述的用于分辨3種水產(chǎn)源氣單胞菌復(fù)合群的檢測(cè)試劑盒，所述的胰蛋白胨大豆培養(yǎng)基由下述質(zhì)量百分比的組分構(gòu)成:胰蛋白胨1.3-1.7%，大豆蛋白胨0.4-0.6%，氯化鈉 0.4-0.6%，瓊脂 1.2-1.7%，余量為水；pH7.2-7.6。
[0010]進(jìn)一步的，上述的用于分辨3種水產(chǎn)源氣單胞菌復(fù)合群的檢測(cè)試劑盒，所述的阿拉伯糖培養(yǎng)基由下述質(zhì)量百分比的組分構(gòu)成:牛肉膏粉0.4-0.6 %，蛋白胨0.8-1.2 %，氯化鈉0.2-0.4 %，磷酸氫二鉀0.15-0.25 %，阿拉伯糖0.8-1.2 %，溴百里酚藍(lán)0.002-0.004%，余量為水；pH7.2-7.6。
[0011]進(jìn)一步的，上述的用于分辨3種水產(chǎn)源氣單胞菌復(fù)合群的檢測(cè)試劑盒，所述的七葉苷培養(yǎng)基由下述質(zhì)量百分比的組分構(gòu)成:蛋白胨0.4-0.6%，牛肉浸膏0.2-0.4%，七葉苷 0.09-0.11%，枸櫞酸鐵 0.04-0.06%，瓊脂 1.2-1.8%，余量為水；pH7.2-7.6。
[0012]進(jìn)一步的，上述的用于分辨3種水產(chǎn)源氣單胞菌復(fù)合群的檢測(cè)試劑盒，所述的葡萄糖產(chǎn)氣培養(yǎng)基由下述質(zhì)量百分比的組分構(gòu)成:多價(jià)胨1.5-2.5%，酵母膏0.4-0.6%，氯化鈉0.4-0.6 %，葡萄糖2.5-3.5 %，吐溫-804-6 %，溴百里酚藍(lán)0.002-0.004 %，余量為水；pH6.8-7.2ο
[0013]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明提供的技術(shù)方案具有如下技術(shù)優(yōu)點(diǎn):
[0014]本發(fā)明提供的技術(shù)方案是在研究分析現(xiàn)有選擇性培養(yǎng)基特性和氣單胞菌不同生理生化特性的基礎(chǔ)上建立的。通過用3種培養(yǎng)基篩選分離和4個(gè)生化反應(yīng)結(jié)果進(jìn)行歸納判斷，能簡便分離嗜水氣單胞菌復(fù)合群、溫和氣單胞菌復(fù)合群、豚鼠氣單胞菌復(fù)合群3種常見水產(chǎn)源氣單胞菌復(fù)合群。
[0015]本發(fā)明的試劑盒試劑構(gòu)成、配制方法、使用方法簡單，成本低，與細(xì)菌自動(dòng)或半自動(dòng)快速鑒定系統(tǒng)和基于核酸的檢測(cè)技術(shù)相比，不需要昂貴的儀器設(shè)備和技術(shù)熟練的操作人員，為篩選分離水產(chǎn)源氣單胞菌復(fù)合群提供了極大的方便。

【具體實(shí)施方式】
[0016]為了更好的理解、實(shí)施本發(fā)明的權(quán)利要求，下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的權(quán)利要求做進(jìn)一步的詳細(xì)說明，但本發(fā)明并不限于下述實(shí)施例，而是以權(quán)利要求為限。
[0017]實(shí)施例1
[0018]本發(fā)明提供的一種用于分辨嗜水氣單胞菌復(fù)合群、溫和氣單胞菌復(fù)合群、豚鼠氣單胞菌復(fù)合群3種常見水產(chǎn)源氣單胞菌復(fù)合群的檢測(cè)試劑盒，具體由下列鑒定瓶和試劑組成:
[0019]I)用于稀釋池塘底泥試劑A-無菌水；
[0020]2)用于除去需鹽并在酸性和中性環(huán)境中均能生長的細(xì)菌，特別是弧菌科細(xì)菌的鑒定瓶1-無鹽堿性蛋白胨水，該鑒定瓶所含組分按質(zhì)量分?jǐn)?shù)100%計(jì)為:蛋白胨2%，硝酸鉀0.01%,結(jié)晶碳酸鈉0.02%,余量為水，ρΗ8.4 ；
[0021]3)用于篩選對(duì)氨芐西林不敏感的疑似氣單胞菌的鑒定瓶2-含氨芐西林RS培養(yǎng)基，該鑒定瓶所含組分按質(zhì)量分?jǐn)?shù)100 %計(jì)為:L-鹽酸鳥氨酸0.65 %，L-鹽酸賴氨酸0.5%,L-鹽酸半胱氨酸0.03%，麥芽糖0.35%，硫代硫酸鈉0.68%，枸櫞酸鐵胺0.08%，脫氧膽酸鈉0.1%，酵母膏0.3%，氯化鈉0.5%，溴麝香草酚藍(lán)0.003 %，新生霉素0.0005 %，瓊脂1.5%，氨芐西林0.0001%,余量為水，pH7.0 ；
[0022]需要說明的是，本培養(yǎng)基現(xiàn)配現(xiàn)用，首先把RS培養(yǎng)基煮沸溶解1-2分鐘，待培養(yǎng)基冷卻至40-50°C后把氨芐西林加入培養(yǎng)基搖均勻，然后倒制瓊脂平板。
[0023]4)用于細(xì)菌的培養(yǎng)的鑒定瓶3-胰蛋白胨大豆培養(yǎng)基，該鑒定瓶所含組分按質(zhì)量分?jǐn)?shù)100%計(jì)為:胰蛋白胨1.5%，大豆蛋白胨0.5%，氯化鈉0.5%，瓊脂1.5%，余量為水，ρΗ7.4 ；
[0024]5)用于檢查細(xì)菌對(duì)阿拉伯糖類發(fā)酵的特性，觀察被檢細(xì)菌的產(chǎn)酸能力的鑒定瓶4-阿拉伯糖培養(yǎng)基，該鑒定瓶所含組分按質(zhì)量分?jǐn)?shù)100 %計(jì)為:牛肉膏粉0.5 %，蛋白胨1%，氯化鈉0.3%，磷酸氫二鉀0.2%，阿拉伯糖1%，溴百里酚藍(lán)0.003%，余量為水，ρΗ7.4 ；
[0025]6)用于檢測(cè)細(xì)菌對(duì)七葉苷的水解能力的鑒定瓶5-七葉苷培養(yǎng)基，該鑒定瓶所含組分按質(zhì)量分?jǐn)?shù)100%計(jì)為:含蛋白胨0.5%，牛肉浸膏0.3%，七葉苷0.1%，枸櫞酸鐵
0.05%,瓊脂1.5%,余量為水，ρΗ7.4 ；
[0026]7)用于檢測(cè)細(xì)菌產(chǎn)酸產(chǎn)氣的能力的鑒定瓶6-葡萄糖產(chǎn)氣培養(yǎng)基，該鑒定瓶所含組分按質(zhì)量分?jǐn)?shù)100 %計(jì)為:多價(jià)胨2 %，酵母膏0.5 %，氯化鈉0.5 %，葡萄糖3 %，吐溫-805%，溴百里酚藍(lán)0.003%，余量為水，將所有組分倒置放入直徑2-3毫米發(fā)酵小管；ρΗ7.0。
[0027]8)用于檢查細(xì)菌中是否含有細(xì)胞色素氧化酶鑒定瓶7-氧化酶試紙。
[0028]上述各個(gè)鑒定瓶中的培養(yǎng)基以及試劑A中試劑組份都可以從現(xiàn)有產(chǎn)品中購買到，并可按照公知常規(guī)的方法進(jìn)行配制。
[0029]實(shí)施例2
[0030]本發(fā)明提供的一種用于分辨嗜水氣單胞菌復(fù)合群、溫和氣單胞菌復(fù)合群、豚鼠氣單胞菌復(fù)合群3種常見水產(chǎn)源氣單胞菌復(fù)合群的檢測(cè)試劑盒，具體由下列鑒定瓶和試劑組成:
[0031]I)用于稀釋池塘底泥試劑A-無菌水；
[0032]2)用于除去需鹽并在酸性和中性環(huán)境中均能生長的細(xì)菌，特別是弧菌科細(xì)菌的鑒定瓶1-無鹽堿性蛋白胨水，該鑒定瓶所含組分按質(zhì)量分?jǐn)?shù)100%計(jì)為:蛋白胨2.1%，硝酸鉀0.015%，結(jié)晶碳酸鈉0.015%，余量為水；pH8.2 ;
[0033]3)用于篩選對(duì)氨芐西林不敏感的疑似氣單胞菌的鑒定瓶2-含氨芐西林RS培養(yǎng)基，該鑒定瓶所含組分按質(zhì)量分?jǐn)?shù)100 %計(jì)為:L-鹽酸鳥氨酸0.60 %，L-鹽酸賴氨酸0.6%, L-鹽酸半胱氨酸0.02%，麥芽糖0.40%，硫代硫酸鈉0.60%，枸櫞酸鐵胺0.09%，脫氧膽酸鈉0.09%，酵母膏0.35%,氯化鈉0.4%，溴麝香草酚藍(lán)0.004%，新生霉素
0.0004%，瓊脂1.8%，氨芐西林0.0001%，余量為水；pH7.2。
[0034]需要說明的是:本培養(yǎng)基現(xiàn)配現(xiàn)用，首先把RS培養(yǎng)基煮沸溶解1-2分鐘，待培養(yǎng)基冷卻至40-50°C后把氨芐西林加入培養(yǎng)基搖均勻，然后倒制瓊脂平板。
[0035]4)用于細(xì)菌的培養(yǎng)的鑒定瓶3-胰蛋白胨大豆培養(yǎng)基，該鑒定瓶所含組分按質(zhì)量分?jǐn)?shù)100%計(jì)為:胰蛋白胨1.3%，大豆蛋白胨0.6%，氯化鈉0.4%，瓊脂1.7%，余量為水；ρΗ7.2。
[0036]5)用于檢查細(xì)菌對(duì)阿拉伯糖類發(fā)酵的特性，觀察被檢細(xì)菌的產(chǎn)酸能力的鑒定瓶4-阿拉伯糖培養(yǎng)基，該鑒定瓶所含組分按質(zhì)量分?jǐn)?shù)100%計(jì)為:牛肉膏粉0.4%，蛋白胨
1.2%,氯化鈉0.2%，磷酸氫二鉀0.25%，阿拉伯糖0.8%，溴百里酚藍(lán)0.004%，余量為水；ρΗ7.2。
[0037]6)用于檢測(cè)細(xì)菌對(duì)七葉苷的水解能力的鑒定瓶5-七葉苷培養(yǎng)基:按質(zhì)量分?jǐn)?shù)100%計(jì)，蛋白胨0.6%，牛肉浸膏0.4%，七葉苷0.09%，枸櫞酸鐵0.06%，瓊脂1.2%，余量為水；ρΗ7.6。
[0038]7)用于檢測(cè)細(xì)菌產(chǎn)酸產(chǎn)氣的能力的鑒定瓶6-葡萄糖產(chǎn)氣培養(yǎng)基，該鑒定瓶所含組分按質(zhì)量分?jǐn)?shù)100%計(jì)為:多價(jià)胨2.5%，酵母膏0.4%，氯化鈉0.6%，葡萄糖2.5%，吐溫-806 %，溴百里酚藍(lán)0.002 %，余量為水；ρΗ7.2。
[0039]8)用于檢查細(xì)菌中是否含有細(xì)胞色素氧化酶鑒定瓶7-氧化酶試紙。
[0040]上述各個(gè)鑒定瓶中的培養(yǎng)基以及試劑A中試劑組份都可以從現(xiàn)有產(chǎn)品中購買到，并可按照公知常規(guī)的方法進(jìn)行配制。
[0041]實(shí)施例3
[0042]本發(fā)明提供的一種用于分辨嗜水氣單胞菌復(fù)合群、溫和氣單胞菌復(fù)合群、豚鼠氣單胞菌復(fù)合群3種常見水產(chǎn)源氣單胞菌復(fù)合群的檢測(cè)試劑盒，具體由下列鑒定瓶和試劑組成:
[0043]I)用于稀釋池塘底泥試劑A-無菌水；
[0044]2)用于除去需鹽并在酸性和中性環(huán)境中均能生長的細(xì)菌，特別是弧菌科細(xì)菌的鑒定瓶1-無鹽堿性蛋白胨水，該鑒定瓶所含組分按質(zhì)量分?jǐn)?shù)100%計(jì)為:蛋白胨1.9%，硝酸鉀0.015%，結(jié)晶碳酸鈉0.015%，余量為水；ρΗ8.5 ;
[0045]3)用于篩選對(duì)氨芐西林不敏感的疑似氣單胞菌的鑒定瓶2-含氨芐西林RS培養(yǎng)基，該鑒定瓶所含組分按質(zhì)量分?jǐn)?shù)100 %計(jì)為:L-鹽酸鳥氨酸0.70 %，L-鹽酸賴氨酸0.4%, L-鹽酸半胱氨酸0.04%，麥芽糖0.30%，硫代硫酸鈉0.75%，枸櫞酸鐵胺0.07%，脫氧膽酸鈉0.11 %，酵母膏0.25%，氯化鈉0.6%，溴麝香草酚藍(lán)0.002 %，新生霉素
0.0006%，瓊脂1.2%，氨芐西林0.0001%，余量為水;pH6.8。
[0046]需要說明的是，本培養(yǎng)基現(xiàn)配現(xiàn)用，首先把RS培養(yǎng)基煮沸溶解1-2分鐘，待培養(yǎng)基冷卻至40_50°C后把氨芐西林加入培養(yǎng)基搖均勻，然后倒制瓊脂平板。
[0047]4)用于細(xì)菌的培養(yǎng)的鑒定瓶3-胰蛋白胨大豆培養(yǎng)基，該鑒定瓶所含組分按質(zhì)量分?jǐn)?shù)100%計(jì)為:胰蛋白胨1.7%，大豆蛋白胨0.4%，氯化鈉0.6%，瓊脂1.2%，余量為水；ρΗ7.6 ；
[0048]5)用于檢查細(xì)菌對(duì)阿拉伯糖類發(fā)酵的特性，觀察被檢細(xì)菌的產(chǎn)酸能力的鑒定瓶4-阿拉伯糖培養(yǎng)基，該鑒定瓶所含組分按質(zhì)量分?jǐn)?shù)100%計(jì)為:牛肉膏粉0.6%，蛋白胨
0.8%,氯化鈉0.4%,磷酸氫二鉀0.15 %，阿拉伯糖1.2 %，溴百里酚藍(lán)0.002 %，余量為水；ρΗ7.6 ；
[0049]6)用于檢測(cè)細(xì)菌對(duì)七葉苷的水解能力的鑒定瓶5-七葉苷培養(yǎng)基:按質(zhì)量分?jǐn)?shù)100%計(jì)，蛋白胨0.4%，牛肉浸膏0.4%，七葉苷0.09%，枸櫞酸鐵0.06%，瓊脂1.2%，余量為水；ρΗ7.6。
[0050]7)用于檢測(cè)細(xì)菌產(chǎn)酸產(chǎn)氣的能力的鑒定瓶6-葡萄糖產(chǎn)氣培養(yǎng)基，該鑒定瓶所含組分按質(zhì)量分?jǐn)?shù)100%計(jì)為:多價(jià)胨1.5%，酵母膏0.6%，氯化鈉0.4%，葡萄糖3.5%，吐溫-804 %，溴百里酚藍(lán)0.004 %，余量為水；ρΗ6.8。
[0051]8)用于檢查細(xì)菌中是否含有細(xì)胞色素氧化酶鑒定瓶7-氧化酶試紙。
[0052]上述各個(gè)鑒定瓶中的培養(yǎng)基以及試劑A中試劑組份都可以從現(xiàn)有產(chǎn)品中購買到，并可按照公知常規(guī)的方法進(jìn)行配制。
[0053]具體檢測(cè)方法為:
[0054](I)樣品采集
[0055]①樣品要求:
[0056]A:底泥取約3g加入2mL無菌水混勻并靜止1min后取100 μ L上層液體；
[0057]B:環(huán)境水樣(池塘表面下20_30cm) 100 μ L ；
[0058]C:用鑷子或剪子取綠豆大小的動(dòng)物組織樣品(鰓、肝臟、病灶);
[0059]②樣品處理:
[0060]將以上三類樣品分別接種于3ml無鹽堿性蛋白胨水中增菌，28°C振蕩培養(yǎng)18-20h。剩余樣品置4°C保存?zhèn)溆谩?br> [0061]③樣品編號(hào)。
[0062](2) 3種常見水產(chǎn)源氣單胞菌復(fù)合群分離與鑒定(在無菌條件下進(jìn)行操作)
[0063]①篩選培養(yǎng):
[0064]用接種環(huán)蘸取各個(gè)樣品增菌液，分別接種于含氨芐西林RS平板，28°C靜置培養(yǎng)18-20h。若菌落在含氨芐西林RS平板上呈黃色且光滑，則初步判斷為氣單胞菌疑似菌；
[0065]②分離純化:
[0066]每個(gè)平板挑取同I個(gè)優(yōu)勢(shì)黃色單菌落，分別接種于含氨芐西林RS平板和胰蛋白胨大豆培養(yǎng)基平板進(jìn)行純化，28°C靜置培養(yǎng)18_20h ；
[0067]③用接種環(huán)取在胰蛋白胨大豆培養(yǎng)基平板上純化培養(yǎng)的疑似菌，劃于氧化酶試紙條，Imin內(nèi)觀察，若劃線處呈紫色或者紫紅色，為氧化酶陽性；同時(shí)挑取適量氧化酶陽性的菌落分別接種于阿拉伯糖培養(yǎng)基、七葉苷培養(yǎng)基、葡萄糖產(chǎn)氣培養(yǎng)基，35°C靜置培養(yǎng)18-24h，觀察培養(yǎng)基顏色的變化和葡萄糖產(chǎn)氣培養(yǎng)基小管氣體的產(chǎn)生。
[0068](3)結(jié)果判定
[0069]若菌株在無鹽堿性蛋白胨水生長良好，記為“ + ”，不生長記為菌落在含氨芐西林RS平板上呈黃色且光滑記為“+”，不生長或菌落為綠色或綠黃色記為菌落在胰蛋白胨大豆培養(yǎng)基上生長良好、呈米白色且光滑記為“+”，不生長或菌落為其他顏色記為阿拉伯糖培養(yǎng)基呈黃色記為“+”，紫色記為;七葉苷培養(yǎng)基呈黃色記為“+”，紫色記為；葡萄糖產(chǎn)氣培養(yǎng)基中的發(fā)酵管有氣泡記為“+”，無氣泡記為氧化酶實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽性記為“+”，陰性記為。把待檢菌各反應(yīng)結(jié)果與細(xì)菌鑒定表(表1)對(duì)照，如果與鑒定表中的細(xì)菌結(jié)果一致，則可判斷待測(cè)菌為相應(yīng)的復(fù)合群菌，因此可確定待檢菌的分類位置。
[0070]表1細(xì)菌鑒定表
[0071]

【權(quán)利要求】
1.一種用于分辨3種水產(chǎn)源氣單胞菌復(fù)合群的檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒由下述鑒定瓶和試劑組成:1)試劑A-無菌水；2)鑒定瓶1-無鹽堿性蛋白胨水；3)鑒定瓶2-含氨芐西林的RS培養(yǎng)基；4)鑒定瓶3-胰蛋白胨大豆培養(yǎng)基；5)鑒定瓶4-阿拉伯糖培養(yǎng)基；6)鑒定瓶5-七葉苷培養(yǎng)基；7)鑒定瓶6-葡萄糖產(chǎn)氣培養(yǎng)基；8)鑒定瓶7-氧化酶試紙。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于分辨3種水產(chǎn)源氣單胞菌復(fù)合群的檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述的水產(chǎn)源氣單胞菌復(fù)合群為嗜水氣單胞菌復(fù)合群、溫和氣單胞菌復(fù)合群和豚鼠氣單胞菌復(fù)合群。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于分辨3種水產(chǎn)源氣單胞菌復(fù)合群的檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述的無鹽堿性蛋白胨水由下述質(zhì)量百分比的組分構(gòu)成:蛋白胨1.9-2.1%，硝酸鉀.0.0095-0.015%，結(jié)晶碳酸鈉 0.015-0.025%，余量為水；pH8.2-8.5。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于分辨3種水產(chǎn)源氣單胞菌復(fù)合群的檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述的含氨芐西林的RS培養(yǎng)基由下述質(zhì)量百分比的組分制成:L-鹽酸鳥氨酸0.60-0.70 %，L-鹽酸賴氨酸0.4-0.6 %，L-鹽酸半胱氨酸0.02-0.04 %，麥芽糖0.30-0.40 %，硫代硫酸鈉0.60-0.75 %，枸櫞酸鐵胺0.07-0.09 %，脫氧膽酸鈉.0.09-0.11%,酵母膏 0.25-0.35%，氯化鈉 0.4-0.6%，溴麝香草酚藍(lán) 0.002-0.004%，新生霉素 0.0004-0.0006%，瓊脂 1.2-1.8%，氨芐西林 0.0001%，余量為水；pH6.8-7.2。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于分辨3種水產(chǎn)源氣單胞菌復(fù)合群的檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述的胰蛋 白胨大豆培養(yǎng)基由下述質(zhì)量百分比的組分構(gòu)成:胰蛋白胨1.3-1.7%，大豆蛋白胨0.4-0.6%，氯化鈉0.4-0.6%，瓊脂1.2-1.7%,余量為水；pH7.2-7.6。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于分辨3種水產(chǎn)源氣單胞菌復(fù)合群的檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述的阿拉伯糖培養(yǎng)基由下述質(zhì)量百分比的組分構(gòu)成:牛肉膏粉0.4-0.6%，蛋白胨.0.8-1.2%，氯化鈉0.2-0.4%，磷酸氫二鉀0.15-0.25%，阿拉伯糖0.8-1.2%，溴百里酚藍(lán).0.002-0.004%，余量為水；pH7.2-7.6。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于分辨3種水產(chǎn)源氣單胞菌復(fù)合群的檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述的七葉苷培養(yǎng)基由下述質(zhì)量百分比的組分構(gòu)成:蛋白胨0.4-0.6%，牛肉浸膏0.2-0.4 %，七葉苷0.09-0.11%，枸櫞酸鐵0.04-0.06%，瓊脂1.2-1.8 %，余量為水；ρΗ7.2-7.6。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于分辨3種水產(chǎn)源氣單胞菌復(fù)合群的檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述的葡萄糖產(chǎn)氣培養(yǎng)基由下述質(zhì)量百分比的組分構(gòu)成:多價(jià)胨1.5-2.5%,酵母膏0.4-0.6 %，氯化鈉0.4-0.6%,葡萄糖2.5-3.5%,吐溫-804-6 %，溴百里酚藍(lán).0.002-0.004%，余量為水；ρΗ6.8-7.2。
【文檔編號(hào)】C12R1/01GK104178416SQ201410436513
【公開日】2014年12月3日 申請(qǐng)日期:2014年8月29日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月29日
【發(fā)明者】譚愛萍, 吳雅麗, 姜蘭, 鄧玉婷, 羅理, 王偉利, 梁愛玲 申請(qǐng)人:中國水產(chǎn)科學(xué)研究院珠江水產(chǎn)研究所