利用dna吸附柱快速提取植物dna的試劑盒及方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種利用DNA吸附柱快速提取植物DNA的試劑盒及方法，屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】。所述試劑盒的組成包括裂解液、抽提液、沉淀劑、去蛋白液、漂洗液、洗脫液和DNA吸附柱。方法包括植物組織樣品的前處理、DNA的游離與雜蛋白的抽除、DNA吸附柱吸附DNA以及雜質(zhì)的去除、DNA洗脫。利用該試劑盒能夠快速提取植物基因組DNA，所得到的基因組DNA具有較高的純度。
【專利說明】利用DNA吸附柱快速提取植物DNA的試劑盒及方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種利用DNA吸附柱快速提取植物DNA的試劑盒及方法，屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】。

【背景技術(shù)】
[0002]DNA提取是植物分子生物學(xué)研究的基礎(chǔ)技術(shù)。DNA提取技術(shù)的不斷發(fā)展，為全基因組測序等多項應(yīng)用創(chuàng)造了有利條件。隨著現(xiàn)代分子生物學(xué)的發(fā)展，DNA分離技術(shù)也層出不窮.DNA已經(jīng)可以從諸如化石、木乃伊等極端材料中分離出來，也可以從痕量材料獲得DNA。目前，已經(jīng)發(fā)展了多種方法，成功地從植物葉片、愈傷組織、組培苗、果實、韌皮部等組織器官中提取出DNA。
[0003]傳統(tǒng)的DNA提取與純化，如CTAB法、SDS法是在裂解細(xì)胞的基礎(chǔ)上，多次苯酚氯仿等有機溶劑抽提使蛋白質(zhì)變性沉淀于有機相，而核酸保留在水相，達(dá)到分離核酸的目的；加入RNA酶除去核酸中的RNA ;然后加入異丙醇、乙醇等沉淀DNA ;用70%乙醇漂洗沉淀，除去分離過程中殘留的有機溶劑和鹽離子，以免影響核酸溶解和抑制后續(xù)步驟的酶促反應(yīng)，最后用TE溶解DNA備用。傳統(tǒng)的植物組織DNA提取過程耗時長，容易造成DNA損失和降解，
因此需要研制一種適用于植物基因組DNA提取的方便、快捷、實用的方法，解決使用常規(guī)方法所獲得的DNA樣品存在完整性不好、易降解等缺點。
[0004]此外，有效的提取植物基因組DNA，能夠為進(jìn)行基因分析與基因克隆提供重要保證，從而豐富基因組學(xué)的研究內(nèi)容。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明提供一種利用DNA吸附柱快速提取植物DNA的試劑盒及方法，利用該試劑盒能夠快速提取植物基因組DNA，所得到的的基因組DNA具有較高的純度。
[0006]本發(fā)明首先提供了一種利用DNA吸附柱快速提取植物DNA的試劑盒，所述試劑盒的組成包括:
(1)裂解液:0.1M Tris-HCl pH 8.0,0.025M EDTA pH 8.0，8_9% 重量比 NaCl，3% 重量比CTAB，2%重量比巰基乙醇；
(2)抽提液:氣仿；
(3)沉淀劑:70%重量比乙醇；
(4)去蛋白液:5M鹽酸胍，20mM Tris-HCI pH6.6，使用前加入乙醇，使乙醇濃度為38% ；
(5)漂洗液:20mMNaCL, 2mM Tris-HCI ρΗ7.5 ；
(6)洗脫液:10mMTris-HCI pH 8.5 ；
(7)DNA吸附柱。
[0007]本發(fā)明還提供了一種利用所述試劑盒快速提取植物DNA的方法，依次包括以下步驟:(1)植物組織樣品的前處理:稱取0.5g植物組織樣品，用液氮研磨成粉末；
(2)DNA的游離與雜蛋白的抽除:將樣品粉末裝入2ml的離心管中，加入800 μ I裂解液破碎細(xì)胞，振蕩器震蕩30秒后，在65° C水浴鍋中溫育30分鐘，每5分鐘震蕩一次，溫育結(jié)束后加入800 μ I抽提液去除大部分雜蛋白，震蕩30秒后，12000rpm/min離心10分鐘，將上清移至新的離心管中；
(3)DNA吸附柱吸附DNA以及雜質(zhì)的去除:在含有上清的離心管中加入等體積的沉淀劑，混勻后加入到DNA吸附柱中，12000rpm/min離心I分鐘，棄廢液，加入500 μ I去蛋白液除去剩余的蛋白，12000rpm/min離心I分鐘,棄廢液,加入500 μ I漂洗液洗去其他雜質(zhì)，12000rpm/min離心I分鐘，棄廢液，再次加入500 μ I漂洗液，12000rpm/min離心I分鐘，棄廢液，然后12000rpm/min離心2分鐘，靜置吹干；
(4)DNA洗脫:往DNA吸附柱中加入30 μ I洗脫液，12000rpm/min離心2分鐘，收集液體。
[0008] 其中所述DNA吸附柱為硅膠膜DNA離心吸附柱，購自北京天恩澤公司。
[0009]本發(fā)明的顯著優(yōu)點:
1.能夠快速提取植物組織DNA。
[0010]2.所得的DNA完整性好、純度高。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0011]圖1為利用本方法提取的植物的基因組DNA電泳檢測圖，泳道I是利用本方法提取水稻DNA的結(jié)果圖，泳道2是利用本方法提取甘蔗DNA的結(jié)果圖，泳道3是利用本方法提取花生DNA的結(jié)果圖，泳道4是利用本方法提取玉米DNA的結(jié)果圖，泳道5是利用本方法提取小麥DNA的結(jié)果圖，泳道6是DNA mark。

【具體實施方式】
[0012]一種利用DNA吸附柱快速提取植物DNA的試劑盒及方法，具體步驟如下:
(O原料:分別稱取水稻、甘蔗、玉米、花生、小麥五種植物樣本各lg。
[0013](2)植物組織樣品的前處理:將稱取的水稻、甘蔗、玉米、花生、小麥組織用液氮研磨成粉末。
[0014](3)DNA的游離與雜蛋白的抽除:將樣品粉末裝入2ml的離心管中，加入800 μ I裂解液，振蕩器震蕩30秒后，在65° C水浴鍋中溫育30分鐘，每5分鐘震蕩一次。溫育結(jié)束后加入800 μ I抽提液，震蕩30秒后，12000rpm/min離心10分鐘。將上清移至新的離心管中。
[0015](4)DNA吸附柱吸附DNA以及雜質(zhì)的去除:在含有上清的離心管中加入等體積的沉淀劑，混勻后加入DNA吸附柱，12000rpm/min離心I分鐘，棄廢液，加入500 μ I去蛋白液，12000rpm/min離心I分鐘，棄廢液，加入500 μ I漂洗液，12000rpm/min離心I分鐘，棄廢液，加入500 μ I漂洗液，12000rpm/min離心I分鐘，棄廢液，12000rpm/min離心2分鐘，靜置吹干。
[0016](5) DNA洗脫:往吸附柱中加入30 μ I洗脫液，12000rpm/min離心2分鐘，所得液體為植物基因組DNA。取5μ1 DNA水溶液，于1%瓊脂糖凝膠中電泳檢測。如圖1所示，利用該試劑盒能快速地獲得到植物的基因組DNA。
[0017](6)將獲得的基因組DNA樣品通過紫外分光光度計測定0D(260:280)比值，通過測定結(jié)果顯示通過此方法獲得的基因組DNA具有較高的純度。
[0018]表1:不同植物樣本基因組DNA的OD (260:280)比值

【權(quán)利要求】
1.一種利用DNA吸附柱快速提取植物DNA的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒的組成包括:
(1)裂解液:0.1M Tris-HCl pH 8.0,0.025M EDTA pH 8.0，8_9% 重量比 NaCl，3% 重量比CTAB，2%重量比巰基乙醇； (2)抽提液:氣仿； (3)沉淀劑:70%重量比乙醇； (4)去蛋白液:5M鹽酸胍，20mM Tris-HCI pH6.6，使用前加入乙醇，使乙醇濃度為38% ；
(5)漂洗液:20mMNaCL, 2mM Tris-HCI ρΗ7.5 ； (6)洗脫液:10mMTris-HCI pH 8.5 ； (7)DNA吸附柱。
2.一種利用權(quán)利要求1所述試劑盒快速提取植物DNA的方法，其特征在于:依次包括以下步驟: (1)植物組織樣品的 前處理:稱取0.5g植物組織樣品，用液氮研磨成粉末； (2)DNA的游離與雜蛋白的抽除:將樣品粉末裝入2ml的離心管中，加入800 μ I裂解液，振蕩器震蕩30秒后，在65° C水浴鍋中溫育30分鐘，每5分鐘震蕩一次，溫育結(jié)束后加Λ 800 μ I抽提液，震蕩30秒后，12000rpm/min離心10分鐘，將上清移至新的離心管中； (3)DNA吸附柱吸附DNA以及雜質(zhì)的去除:在含有上清的離心管中加入等體積的沉淀劑，混勻后加入到DNA吸附柱中，12000rpm/min離心I分鐘，棄廢液，加入500 μ I去蛋白液，12000rpm/min離心I分鐘，棄廢液，加入500 μ I漂洗液，12000rpm/min離心I分鐘，棄廢液，再次加入500 μ I漂洗液,12000rpm/min離心I分鐘，棄廢液，然后12000rpm/min離心2分鐘，靜置吹干； (4)DNA洗脫:往DNA吸附柱中加入30 μ I洗脫液，12000rpm/min離心2分鐘，收集液體。
【文檔編號】C12N15/10GK104178480SQ201410449599
【公開日】2014年12月3日 申請日期:2014年9月5日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月5日
【發(fā)明者】王清水, 余彥 申請人:福建師范大學(xué)