一種海參多肽的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開的海參多肽的制備方法包括以下步驟：原料篩選；原料清洗；低溫酶解；離心分離；第一次濃縮過濾；第二次濃縮過濾去鹽；干燥。本本發(fā)明的整個制備過程中反應條件溫和，可確保海參多肽的活性，本發(fā)明采用40-60℃的低溫酶解，并通過木瓜蛋白酶和膠原蛋白酶對海參蛋白的酶切位點進行選擇性剪切，使海參蛋白的酶解更徹底，將大分子量的海參蛋白分解為多個分子量較小的小分子多肽，滿足人體吸收需要，有利于人體對海參多肽的充分吸收，其吸收率可達80%以上；并且本發(fā)明方法制得的海參多肽中有害重金屬離子含量極低，安全無毒。本發(fā)明方法制備過程廢水排放量低，有利于降低能耗，可最大限度利用海參的價值，具有重要的社會經濟意義。
【專利說明】一種海參多肽的制備方法

【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種多肽的制備方法，具體涉及一種海參多肽的制備方法。

【背景技術】
[0002] 海參早在大約6億年前的寒武紀就開始存在，是現(xiàn)存最早的生物物種之一，被形 象地喻為"海洋活化石"。海參是世界上少有的高蛋白、低脂肪、低糖、無膽固醇的天然營養(yǎng) 食品，是目前藥食同源、陰陽雙補的神奇動物。它的營養(yǎng)成分不僅豐富，而且均衡、合理，人 們將其比作是大海中的營養(yǎng)寶庫。海參中含有許多具有重要生物學活性的物質，包括海參 毒素、海參多糖、海參皂苷、海參多肽、脂肪酸、海參神經節(jié)苷脂等，其中海參多糖和海參皂 苷具有抗癌防癌、抗腫瘤、增強機體免疫力、抗凝血、延緩衰老和抗病毒等功效，也是研究最 多的兩種提取自海參的活性物質。
[0003] 目前關于海參多肽的研究報道較少，其生物學活性往往被忽視。海參多肽是一種 具有抗氧化功能的活性肽，一般存在于海參體壁中，在海參體壁中的含量可高達76. 5%，同 樣具有重要的生物學意義。海參多肽中含有十幾種以上的氨基酸，且其中大多為人體必需 的氨基酸，因此，海參多肽也具有增強人體免疫力、抗腫瘤和抗炎活性，其藥用和保健價值 不可忽視。但是海參多肽大多由數百個氨基酸通過肽鍵連接而成，其分子量較大，采用傳統(tǒng) 方法制備的海參產品，其海參多肽被包圍在大分子鏈的海參體壁中，若采用傳統(tǒng)食用方法， 很難被人體充分吸收，吸收率僅為5-18%。另外，因生長環(huán)境因素的影響，海參體內往往富 集砷、汞、鉛等重有害金屬元素，雖然相關部門對水產品及即食海產品中的重金屬的含量的 限量標準作出過規(guī)定，但由于海域污染等問題造成的海參體內重金屬含量超標的現(xiàn)象屢見 不鮮，傳統(tǒng)的食用方法會迫使人體一并吸收，長期食用會對人體健康造成不利影響。


【發(fā)明內容】

[0004] 本發(fā)明所要解決的技術問題是提供一種海參多肽的制備方法，該方法可最大限度 利用海參的價值，制備得到的海參多肽分子量小，有利于人體的充分吸收。
[0005] 本發(fā)明解決上述技術問題所采用的技術方案為：一種海參多肽的制備方法，包括 以下步驟：
[0006] 1)原料篩選：篩選準備新鮮的海參原料若干；
[0007] 2)原料清洗：將篩選得到的海參原料，先用自來水沖洗，再用電導率為0. 1-20US/ cm的超純水清洗，以洗清海參體內泥沙；
[0008] 3)低溫酶解：在生物酶解罐中放入與海參原料等重量的電導率為0. l-10Us/cm 的超純水，加溫至50-60°C ;再在該生物酶解罐中放入洗凈的海參原料，加溫至40-60°C ; 放入海參原料重量0.3-0.7%的木瓜蛋白酶，在40-601：溫度下酶解處理2-511;放入海參 原料重量0. 3-0. 7%的膠原蛋白酶，在40-60°C溫度下酶解處理5-25h ;放入海參原料重量 0.3-0.8%的活性炭，放置0.5-211;放入海參原料重量0.5-2%的石英砂，放置0.5-211 ;放入 海參原料重量0.05-0.25%的風味酶，放置0.5-211;加溫至70-901：滅酶0.5-211 ;
[0009] 4)離心分離：在45-60°C溫度下，在離心機中以8000-12000轉/小時的離心速度 對滅酶后的低溫酶解產物進行離心分離；
[0010] 5)第一次濃縮過濾：對離心分離后得到的產物用1200-2800道爾頓口徑的超濾膜 進行第一次濃縮過濾，分離提取下清液；
[0011] 6)第二次濃縮過濾：對第一次濃縮過濾得到的下清液用100-500道爾頓口徑的超 濾膜進行第二次濃縮過濾去鹽，分離提取上清液；
[0012] 7)干燥：對第二次濃縮過濾得到的上清液進行冷凍干燥或噴霧干燥，即得到海參 多肽。
[0013] 優(yōu)選地，步驟2)中所述的低溫酶解過程如下：在生物酶解罐中放入與海參原料 等重量的電導率為0. l-8US/cm的超純水，加溫至55-60°C ;再在該生物酶解罐中放入洗 凈的海參原料，加溫至40-55°C ;放入海參原料重量0. 4-0. 6%的木瓜蛋白酶，在40-55 °C 溫度下酶解處理2-4h ;放入海參原料重量0. 4-0. 6%的膠原蛋白酶，在40-45°C溫度下酶 解處理8-23h ;放入海參原料重量0. 4-0. 8 %的活性炭，放置0. 5-1. 5h ;放入海參原料重 量0. 8-1. 6 %的石英砂，放置0. 5-1. 5h ;放入海參原料重量0. 08-0. 2 %的風味酶，放置 0· 5-1. 5h ;加溫至 75-95°C滅酶 0· 5-1. 5h。
[0014] 優(yōu)選地，步驟3)中所述的活性炭的目數為130-200目。130-200目的活性炭的脫 色、除臭及吸附重金屬離子的效果較好。
[0015] 與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的優(yōu)點在于：本發(fā)明將低溫酶解過程控制在40-60°C，可 更好地保留海參多肽的活性；對于酶解處理后的海參蛋白，首先通過木瓜蛋白酶對海參蛋 白的相應酶切位點進行選擇性剪切，再通過膠原蛋白酶對海參蛋白的其他相應酶切位點進 行選擇性剪切，使海參蛋白的酶解更徹底，通過木瓜蛋白酶和膠原蛋白酶的選擇性酶解剪 切，將大分子量的海參蛋白分解為多個分子量較小的多肽和氨基酸，并將不需要的無效氨 基酸過濾掉，最終得到分子量在約1000道爾頓至1200道爾頓之間的小分子海參多肽，滿足 人體吸收需要，有利于人體對海參多肽的充分吸收，其吸收率可達80%以上；整個制備過 程中反應條件溫和，可確保海參多肽的活性；此外，通過活性炭起到脫色、除臭左右，并且活 性炭還可吸附并去除重金屬離子，在活性炭去除重金屬離子的基礎上，通過石英砂可進一 步去除海參多肽中所含的甲基汞、無機砷、鉛等重金屬離子，使最終制備得到的海參多肽產 品安全無毒；本發(fā)明方法制備過程廢水排放量低，有利于降低能耗，可最大限度利用海參的 價值，具有重要的社會經濟意義。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0016] 圖1為海參多肽分子量檢測中的標準品出峰圖；
[0017] 圖2為海參多肽分子量檢測中的樣品出峰圖。

【具體實施方式】
[0018] 以下結合附圖實施例對本發(fā)明作進一步詳細描述。
[0019] 實施例1 :選擇新鮮的遼刺參作為海參原料，進行海參多肽的制備：
[0020] 1)原料篩選：篩選準備新鮮的遼刺參若干；
[0021] 2)原料清洗：將篩選得到的遼刺參，先用自來水沖洗，再用電導率為lOUs/cm的超 純水清洗，以洗清遼刺參體內泥沙；
[0022] 3)低溫酶解：在生物酶解罐中放入與遼刺參等重量的電導率為5Us/cm的超純水， 加溫至60°C ;再在該生物酶解罐中放入洗凈的遼刺參，加溫至50°C ;放入遼刺參重量0. 5% 的木瓜蛋白酶，在50°C溫度下酶解處理3h ;放入遼刺參重量0. 5%的膠原蛋白酶，在50°〇溫 度下酶解處理15h ;放入遼刺參重量0. 5 %的活性炭，放置Ih ;放入遼刺參重量1 %的石英 砂,放置Ih ;放入遼刺參重量0. 1 %的風味酶，放置Ih ;加溫至80°C滅酶Ih ;
[0023] 4)離心分離：在60°C溫度下，在離心機中以10000轉/小時的離心速度對滅酶后 的低溫酶解產物進行離心分離；
[0024] 5)第一次濃縮過濾：對離心分離后得到的產物用2200道爾頓口徑的超濾膜進行 第一次濃縮過濾，分離提取下清液；
[0025] 6)第二次濃縮過濾：對第一次濃縮過濾得到的下清液用350道爾頓口徑的超濾膜 進行第二次濃縮過濾去鹽，分離提取上清液；
[0026] 7)干燥：對第二次濃縮過濾得到的上清液進行冷凍干燥，即得到實施例1的海參 多肽。
[0027] 實施例2 :選擇新鮮的大紅刺參作為海參原料，進行海參多肽的制備：
[0028] 1)原料篩選：篩選準備新鮮的大紅刺參若干；
[0029] 2)原料清洗：將篩選得到的大紅刺參，先用自來水沖洗，再用電導率為15Us/cm的 超純水清洗，以洗清大紅刺參體內泥沙；
[0030] 3)低溫酶解：在生物酶解罐中放入與大紅刺參等重量的電導率為2Us/cm的超純 水，加溫至55°C ;再在該生物酶解罐中放入洗凈的大紅刺參，加溫至48°C ;放入大紅刺參重 量0. 6 %的木瓜蛋白酶，在48°C溫度下酶解處理2. 5h ;放入大紅刺參重量0. 6 %的膠原蛋 白酶,在48°C溫度下酶解處理18h ;放入大紅刺參重量0. 5%的活性炭，放置I. 5h ;放入大 紅刺參重量1. 2 %的石英砂，放置Ih ;放入大紅刺參重量0. 15 %的風味酶，放置Ih ;加溫至 85°C 滅酶 Ih ;
[0031] 4)離心分離：在55°C溫度下，在離心機中以11000轉/小時的離心速度對滅酶后 的低溫酶解產物進行離心分離；
[0032] 5)第一次濃縮過濾：對離心分離后得到的產物用1800道爾頓口徑的超濾膜進行 第一次濃縮過濾，分離提取下清液；
[0033] 6)第二次濃縮過濾：對第一次濃縮過濾得到的下清液用280道爾頓口徑的超濾膜 進行第二次濃縮過濾去鹽，分離提取上清液；
[0034] 7)干燥：對第二次濃縮過濾得到的上清液進行冷凍干燥，即得到實施例2的海參 多肽。
[0035] 實施例3 :選擇新鮮的梅花參作為海參原料，進行海參多肽的制備：
[0036] 1)原料篩選：篩選準備新鮮的梅花參若干；
[0037] 2)原料清洗：將篩選得到的梅花參，先用自來水沖洗，再用電導率為5Us/cm的超 純水清洗，以洗清梅花參體內泥沙；
[0038] 3)低溫酶解：在生物酶解罐中放入與梅花參等重量的電導率為0. lUs/cm的超純 水，加溫至60°C ;再在該生物酶解罐中放入洗凈的梅花參，加溫至52°C ;放入梅花參重量 0. 4%的木瓜蛋白酶，在52 °C溫度下酶解處理4h ;放入梅花參重量0. 5%的膠原蛋白酶，在 52°〇溫度下酶解處理1811;放入梅花參重量().5%的活性炭，放置1.511;放入梅花參重量 I. 5%的石英砂，放置I. 5h ;放入梅花參重量0. 15%的風味酶，放置I. 5h ;加溫至78°C滅酶 I. 5h ；
[0039] 4)離心分離：在58°C溫度下，在離心機中以9000轉/小時的離心速度對滅酶后的 低溫酶解產物進行離心分離；
[0040] 5)第一次濃縮過濾：對離心分離后得到的產物用1200道爾頓口徑的超濾膜進行 第一次濃縮過濾，分離提取下清液；
[0041] 6)第二次濃縮過濾：對第一次濃縮過濾得到的下清液用150道爾頓口徑的超濾膜 進行第二次濃縮過濾去鹽，分離提取上清液；
[0042] 7)干燥：對第二次濃縮過濾得到的上清液進行噴霧干燥，即得到實施例3的海參 多肽。
[0043] 對于上述實施例1?3,分別稱取制備得到的海參多肽成品0. Olg溶解于IOmL去 離子水中，充分溶解后用濾膜過濾去除雜質，得到樣品；上樣針取10 μ L樣品上樣，對海參 多肽成品的分子量進行檢測，檢測設備及條件為：應用SHIMADZULC-10AT的HPLC系統(tǒng)，選用 的色譜柱為：Shim-pack Diol-150 (7. 9mmX 25cm);流動相：磷酸鹽緩沖液（1L體系，Na2SO4 28. 4g，NaH2PO4 · 2H20 0· 66g，Na2HPO4 · 12H20 2. 066g，pH 7. 0);洗脫條件為 Hmin 洗脫； 流速為lml/min，柱溫箱溫度控制在28°C ;檢測波長：210nm。得到的標準品出峰圖見圖1， 樣品出峰圖見圖2。標準品VB12的出峰時間為：t = 8. 870min，分子量為I. 350kDa ;標準 品VBl的出峰時間為：t = 9. 130min，分子量為0. 340kDa ;標準品Trp的出峰時間為：t = 10. 685min，分子量為0. 200kDa。實施例1樣品的出峰時間為：t = 8. 918min，測算得到的 分子量為I. 164kDa;實施例2樣品的出峰時間為：t = 8.928min，測算得到的分子量為： I. 125kDa ;實施例3樣品的出峰時間為：t = 8. 946min，測算得到的分子量為I. 055kDa。實 施例1的海參多肽的分子量為I. 164kDa，實施例2的海參多肽的分子量為I. 125kDa，實施 例3的海參多肽的分子量為I. 055kDa，均滿足人體的充分吸收需要，其吸收率可達80 %以 上。
[0044] 對上述實施例1?3的新鮮海參原料以及制備得到的海參多肽成品中的重金屬離 子含量分別進行檢測，其檢測結果見表1，可見，本發(fā)明方法制備得到的海參多肽，其有害重 金屬兀素含量極低。

【權利要求】
1. 一種海參多肽的制備方法，其特征在于包括以下步驟： 1) 原料篩選：篩選準備新鮮的海參原料若干； 2) 原料清洗：將篩選得到的海參原料，先用自來水沖洗，再用電導率為0. l-20Us/cm的 超純水清洗，以洗清海參體內泥沙； 3) 低溫酶解：在生物酶解罐中放入與海參原料等重量的電導率為0. l-10Us/cm的超 純水，加溫至50-60°C ;再在該生物酶解罐中放入洗凈的海參原料，加溫至40-60°C ;放入海 參原料重量0. 3-0. 7%的木瓜蛋白酶，在40-60°C溫度下酶解處理2-5h ;放入海參原料重量 0. 3-0. 7%的膠原蛋白酶，在40-60°C溫度下酶解處理5-25h ;放入海參原料重量0. 3-0. 8% 的活性炭，放置〇. 5-2h ;放入海參原料重量0. 5-2%的石英砂，放置0. 5-2h ;放入海參原料 重量0. 05-0. 25%的風味酶，放置0. 5-2h ;加溫至70-90°C滅酶0. 5-2h ; 4) 離心分離：在45-60°C溫度下，在離心機中以8000-12000轉/小時的離心速度對滅 酶后的低溫酶解產物進行離心分離； 5) 第一次濃縮過濾：對離心分離后得到的產物用1200-2800道爾頓口徑的超濾膜進行 第一次濃縮過濾，分離提取下清液； 6) 第二次濃縮過濾：對第一次濃縮過濾得到的下清液用100-500道爾頓口徑的超濾膜 進行第二次濃縮過濾去鹽，分離提取上清液； 7) 干燥：對第二次濃縮過濾得到的上清液進行冷凍干燥或噴霧干燥，即得到海參多肽。
2. 根據權利要求1所述的一種海參多肽的制備方法，其特征在于步驟2)中所述的低 溫酶解過程如下：在生物酶解罐中放入與海參原料等重量的電導率為0. l-8Us/cm的超純 水，加溫至55-60°C ;再在該生物酶解罐中放入洗凈的海參原料，加溫至40-55°C ;放入海 參原料重量0. 4-0. 6%的木瓜蛋白酶，在40-55°C溫度下酶解處理2-4h ;放入海參原料重量 0. 4-0. 6%的膠原蛋白酶，在40-45°C溫度下酶解處理8-23h ;放入海參原料重量0. 4-0. 8% 的活性炭，放置〇. 5-1. 5h ;放入海參原料重量0. 8-1. 6%的石英砂，放置0. 5-1. 5h ;放入海 參原料重量0. 08-0. 2%的風味酶，放置0. 5-1. 5h ;加溫至75-95°C滅酶0. 5-1. 5h。
3. 根據權利要求1或2所述的一種海參多肽的制備方法，其特征在于步驟3)中所述的 活性炭的目數為130-200目。
【文檔編號】C12P21/06GK104263788SQ201410496147
【公開日】2015年1月7日 申請日期:2014年9月25日 優(yōu)先權日:2014年9月25日
【發(fā)明者】馮群力 申請人:馮群力