聲諾維聯(lián)合聲動力學(xué)療法協(xié)同殺傷ct26細(xì)胞的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種聲諾維聯(lián)合聲動力學(xué)療法協(xié)同殺傷CT26細(xì)胞的方法，采用聲敏劑華卟啉鈉結(jié)合超聲微泡造影劑聲諾維，在超聲刺激下殺傷小鼠結(jié)直腸癌CT26細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)發(fā)明證明，超聲與華卟啉鈉結(jié)合聲諾維后表現(xiàn)出很好的協(xié)同作用，能顯著降低華卟啉鈉及超聲強(qiáng)度的作用閾值，提高華卟啉鈉介導(dǎo)的聲動力學(xué)療法對CT26細(xì)胞的殺傷效果。
【專利說明】聲諾維聯(lián)合聲動力學(xué)療法協(xié)同殺傷CT26細(xì)胞的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種聲敏劑華卟啉鈉介導(dǎo)的聲動力學(xué)療 法結(jié)合超聲微泡造影劑聲諾維殺傷小鼠結(jié)直腸癌CT26細(xì)胞的方法。 技術(shù)背景
[0002] 惡性腫瘤是威脅人類健康的主要疾病之一，目前治療惡性腫瘤的方法有很多，但 主要方法依然為傳統(tǒng)的放療、化療及手術(shù)治療。傳統(tǒng)方法治療惡性腫瘤的效果毋庸置疑，但 在其保證治療效果的同時(shí)，也存在很大的缺陷。化療及放療嚴(yán)重的毒副作用及外科手術(shù)對 患者形體上的創(chuàng)傷都顯示出了傳統(tǒng)療法的缺陷，因此尋找一種安全靶向的新型腫瘤治療手 段一直是當(dāng)代醫(yī)學(xué)研究的熱點(diǎn)。目前光動力學(xué)療法、放化療與其他療法及藥物的聯(lián)合作用 及中藥療法已經(jīng)作為腫瘤治療的新手段開始了大量研究。光動力學(xué)療法因其靶向性高、毒 副作用小等優(yōu)點(diǎn)在Dougherty課題組首次報(bào)道之后，受到眾多學(xué)者的關(guān)注，并已批準(zhǔn)應(yīng)用 于臨床治療，目前已在皮膚等淺表腫瘤的治療中取得了良好的治療效果。但光動力學(xué)療法 由于激光的穿透力較弱，無法對深層腫瘤達(dá)到一定的治療效果。
[0003]為解決光動力學(xué)療法的缺陷，研究者利用超聲代替激光來激活腫瘤組織中的光敏 劑達(dá)到靶向殺傷腫瘤細(xì)胞的效果，并將這種新型腫瘤治療手段命名為聲動力學(xué)療法。超聲 作為一種機(jī)械波對生物組織有較強(qiáng)的穿透力，并且聚焦超聲能無創(chuàng)傷的聚焦于深層組織。 目前大部分光敏劑被發(fā)現(xiàn)同時(shí)可以被超聲激活，產(chǎn)生活性氧等化學(xué)物質(zhì)，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋 亡、壞死，有效抑制腫瘤組織的生長。聲動力學(xué)療法作為一種新型的腫瘤治療手段，具有安 全、靶向、微創(chuàng)、應(yīng)用范圍廣等諸多優(yōu)點(diǎn)，聲動力學(xué)療法自問世以來，研究者對其進(jìn)行了大量 的研究并取得了一定的成就，也顯示出了聲動力學(xué)療法較好的應(yīng)用前景。
[0004] 隨著聲動力學(xué)療法研究的深入開展，已有學(xué)者開始使用納米級聲敏劑或?qū)⒙晞恿?學(xué)療法與其他療法相結(jié)合從而拓寬聲動力學(xué)療法的使用范圍及增加聲動力學(xué)療法的抗癌 效果。2013年阮等初步探索了聲敏劑聯(lián)合聲諾維對人乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞的殺傷效果， 實(shí)驗(yàn)采用20iig/mL血卟啉結(jié)合1. 5W/cm2超聲輻照處理MDA-MB-231細(xì)胞，超聲聯(lián)合血卟啉 及聲諾維處理組細(xì)胞存活率明顯降低至31. 47%，說明聲動力學(xué)療法聯(lián)合超聲微泡造影劑 作為一種新的殺傷腫瘤細(xì)胞的嘗試能夠顯著降低超聲及聲敏劑的有效協(xié)同作用閾值。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種聲敏劑華卟啉鈉介導(dǎo)聲動力學(xué)療法與超 聲微泡聲諾維聯(lián)合使用殺傷小鼠結(jié)直腸癌CT26細(xì)胞的方法。
[0006] 解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是：將小鼠結(jié)直腸癌CT26細(xì)胞在含10% 胎牛血清、1%青霉素、1%鏈霉素、1%谷氨酰胺的RPIM1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)，待細(xì)胞貼壁 生長狀態(tài)良好后，在含〇. 5?4yg/mL華卟啉鈉、1 %青霉素、1 %鏈霉素、1 %谷氨酰胺的 RPM1640培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)3?5小時(shí)，加入聲諾維，聲諾維數(shù)量與小鼠結(jié)直腸癌CT26細(xì) 胞數(shù)量比值為5?10:1，在頻率為1. 0MHz、輸出聲強(qiáng)為0. 36?0. 54W/cm2條件下超聲處理 30 ?60s。
[0007] 本發(fā)明優(yōu)選將細(xì)胞貼壁生長狀態(tài)良好的小鼠結(jié)直腸癌CT26細(xì)胞在含1?g/mL 華卟啉鈉、1 %青霉素、1 %鏈霉素、1 %谷氨酰胺的RPM1640培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)，加入 聲諾維，聲諾維數(shù)量與小鼠結(jié)直腸癌CT26細(xì)胞數(shù)量比值優(yōu)選5:1，在頻率為1.0MHz、輸出聲 強(qiáng)為〇. 36?0. 54W/cm2條件下超聲處理30?60s。
[0008] 上述的小鼠結(jié)直腸癌CT26細(xì)胞在RPM1640培養(yǎng)基中的接種密度優(yōu)選為2X105? 4X105 個(gè)/mL。
[0009] 上述的聲敏劑華卩卜啉鈉是從光敏劑PhotofrinII中分離純化出來的，是一種以醚 鍵連接的卟啉二聚體鈉鹽，結(jié)構(gòu)式如下：
[0010]

【權(quán)利要求】
1. 一種聲諾維聯(lián)合聲動力學(xué)療法協(xié)同殺傷CT26細(xì)胞的方法，其特征在于：將小鼠結(jié)直 腸癌CT26細(xì)胞在含10 %胎牛血清、1 %青霉素、1 %鏈霉素、1 %谷氨酰胺的RPM 1640培養(yǎng) 基中培養(yǎng)，待細(xì)胞貼壁生長狀態(tài)良好后，在含〇. 5?4 y g/mL華卟啉鈉、1 %青霉素、1 %鏈霉 素、1 %谷氨酰胺的RPIM 1640培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)3?5小時(shí)，加入聲諾維，聲諾維數(shù)量與小 鼠結(jié)直腸癌CT26細(xì)胞數(shù)量比值為5?10:1，在頻率為1. 0MHz、輸出聲強(qiáng)為0. 36?0. 54W/ cm2條件下超聲處理30?60s。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的聲諾維聯(lián)合聲動力學(xué)療法協(xié)同殺傷CT26細(xì)胞的方法，其特征 在于：將小鼠結(jié)直腸癌CT26細(xì)胞在含10%胎牛血清、1%青霉素、1%鏈霉素、1%谷氣醜胺 的RPIM 1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)，待細(xì)胞貼壁生長狀態(tài)良好后，在含1?2 y g/mL華卩卜啉鈉、1 % 青霉素、1 %鏈霉素、1 %谷氨酰胺的RPIM 1640培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)，加入聲諾維，聲諾 維數(shù)量與小鼠結(jié)直腸癌CT26細(xì)胞數(shù)量比值為5:1，在頻率為1. 0MHz、輸出聲強(qiáng)為0. 36? 0. 54W/cm2條件下超聲處理30?60s。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的聲諾維聯(lián)合聲動力學(xué)療法協(xié)同殺傷CT26細(xì)胞的方法，其 特征在于：所述的小鼠結(jié)直腸癌CT26細(xì)胞在RPIM 1640培養(yǎng)基中的接種密度為2X 105? 4X105 個(gè)/mL。
【文檔編號】C12Q1/02GK104328160SQ201410538596
【公開日】2015年2月4日 申請日期:2014年10月13日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月13日
【發(fā)明者】劉全宏, 王海萍, 王筱冰, 王攀 申請人:陜西師范大學(xué)