家蠶鈉鉀atp酶及其基因和應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種家蠶鈉鉀ATP酶及其基因和應(yīng)用，家蠶鈉鉀ATP酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示或SEQ ID NO.8所示氨基酸序列經(jīng)取代、缺失或添加至少一個氨基酸且來源于家蠶的具有鈉鉀ATP酶功能的酶，該酶具有四個鈉、鉀離子及ATP結(jié)合的保守的氨基酸位點(diǎn)，屬于典型的P-type鈉鉀ATP酶，編碼該酶的基因在家蠶五齡第3天的各個組織中均有表達(dá)，但鈉鉀ATP酶只在家蠶五齡三天的頭部和表皮中有表達(dá)，經(jīng)體外真核表達(dá)后發(fā)現(xiàn)鈉鉀ATP酶具有水解ATP酶活性，由于家蠶絲腺腔內(nèi)金屬離子交換是影響家蠶絲蛋白構(gòu)象轉(zhuǎn)換的重要影響因素，因此家蠶鈉鉀ATP酶功能研究對今后改良家蠶絲纖維具有重要的意義。
【專利說明】家蠶鈉鉀ATP酶及其基因和應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及家蠶鈉鉀ATP酶，還涉及編碼家蠶鈉鉀ATP酶 的基因和應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 鈉鉀ATP酶（NKA)又叫鈉鉀泵，是由丹麥科學(xué)家J. C. Skou在1957年首次發(fā)現(xiàn)的 P-type ATP酶，它存在于大多數(shù)真核生物細(xì)胞中。細(xì)胞內(nèi)外的鈉離子濃度梯度可以維持細(xì) 胞的體積，而且可以通過Na+/H+和Na+/Ca 2+交換體維持細(xì)胞內(nèi)的氫和鈣離子濃度。此外，細(xì) 胞內(nèi)鈉離子梯度產(chǎn)生的靜電勢是很多細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)過程（例如葡萄糖，氨基酸和其他營養(yǎng)物 質(zhì)向細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)運(yùn)）的驅(qū)動力，而NKA的主要功能就是維持細(xì)胞內(nèi)的高鉀和低鈉的離子濃 度梯度。
[0003] 迄今為止，在脊椎動物細(xì)胞中共發(fā)現(xiàn)四個NKA的同位體，除了具有離子轉(zhuǎn)運(yùn)的功 能外，脊椎動物的NKA的a 1亞單位可與Src相互作用形成內(nèi)源激素哇巴因（ouabain)的 受體，進(jìn)而介導(dǎo)細(xì)胞下游信號通路來調(diào)控細(xì)胞的生長速度，特別是在胚胎發(fā)育，神經(jīng)導(dǎo)向， 中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育等生理學(xué)過程中，發(fā)揮了重要作用。近年來許多非脊椎動物如果蠅、暗 蚊、線蟲和水蛭等的鈉鉀ATP酶基因相繼被克隆出來，經(jīng)過同源比對發(fā)現(xiàn)它們與脊椎動物 的NKA同源性非常高，但對非脊椎動物NKA是否也可以與Src相互作用形成受體復(fù)合物的 研究未見報道。作為鱗翅目昆蟲模式生物，家蠶的神經(jīng)組織中存在NKA，但NKA基因在家蠶 體內(nèi)是以何種形式存在及該基因表達(dá)酶的活性包括對家蠶生長發(fā)育等過程的影響均未被 研究，因此，對家蠶鈉鉀ATP酶（BmNKA)的全長基因進(jìn)行克隆、表達(dá)和相關(guān)功能的研究將有 利于闡明NKA在參與無脊椎動物發(fā)育、信號傳導(dǎo)等過程中所起的具體功能。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 有鑒于此，本發(fā)明的目的之一在于提供家蠶鈉鉀ATP酶，本發(fā)明的目的之二在于 提供編碼家香納鐘ATP酶的基因，本發(fā)明的目的之二在于提供含有上述基因的表達(dá)載體； 本發(fā)明的目的之四在于提供家蠶鈉鉀ATP酶的應(yīng)用。
[0005] 為實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：
[0006] 1、家蠶鈉鉀ATP酶，所述家蠶鈉鉀ATP酶的氨基酸序列如SEQ ID NO. 8所示或SEQ ID NO. 8所示氨基酸序列經(jīng)取代、缺失或添加至少一個氨基酸且來源于家蠶的具有鈉鉀ATP 酶功能的酶。
[0007] 2、編碼權(quán)利要求1所述家蠶鈉鉀ATP酶的基因，其特征在于：所述基因的核苷酸序 列如SEQ ID NO. 7第172-3021位所示或SEQ ID NO. 7第172-3021位經(jīng)取代、缺失或添加 至少一個堿基且來源于家蠶的編碼具有鈉鉀ATP酶功能的核苷酸序列。
[0008] 優(yōu)選的，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO. 7所示。
[0009] 3、含有所述基因的表達(dá)載體。
[0010] 優(yōu)選的，所述表達(dá)載體由SEQ ID NO. 7第172-3201位所示核苷酸序列連入 pEYFP-Cl載體的BspEI和BamHI酶切位點(diǎn)處。
[0011] 4、權(quán)利要求1所述家蠶鈉鉀ATP酶在改良蠶絲纖維性能中的應(yīng)用。
[0012] 本發(fā)明的有益效果在于：本發(fā)明公開了家蠶鈉鉀ATP酶和編碼家蠶鈉鉀ATP酶 的基因，家蠶鈉鉀ATP酶具有四個鈉、鉀離子及ATP結(jié)合的保守的氨基酸位點(diǎn)，屬于典型的 P-type鈉鉀ATP酶，組織表達(dá)譜分析發(fā)現(xiàn)家蠶鈉鉀ATP酶基因在五齡第3天的各個組織中 均有表達(dá)，而在蛋白水平鈉鉀ATP酶只在家蠶五齡三天的頭部和表皮中有表達(dá)，將編碼家 蠶鈉鉀ATP酶的基因構(gòu)建重組表達(dá)載體在體外真核表達(dá)后具有水解ATP酶活性，建立單克 隆細(xì)胞系是后續(xù)鈉鉀ATP酶在信號傳導(dǎo)功能研究良好的細(xì)胞模型，這為闡明家蠶鈉鉀ATP 酶參與家蠶發(fā)育、信號傳導(dǎo)等過程具有重要意義，也為獲得一種絲纖維性能改良的新型家 蠶品種具有重要意義。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0013] 為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和有益效果更加清楚，本發(fā)明提供如下附圖：
[0014] 圖1為BmNKA基因的結(jié)構(gòu)注釋圖。
[0015] 圖2為BmNKA基因和BmNKA蛋白在5齡第3天家蠶雌雄幼蟲中的組織表達(dá)特征 (A :BmNKA基因組織表達(dá)譜；B :BmNKA蛋白Western檢測結(jié)果）。
[0016] 圖3為建立的表達(dá)YFP-rata 1和YFP-Silkworma兩個單克隆細(xì)胞系中外源大鼠 與家蠶鈉鉀ATP酶和內(nèi)源鈉鉀ATP酶的Western定量檢測結(jié)果（A和C表示外源鈉鉀ATP 酶表達(dá)結(jié)果；B和D表示內(nèi)源鈉鉀ATP酶表達(dá)結(jié)果）。
[0017] 圖4為穩(wěn)定表達(dá)YFP-ratNKAa 1和YFP-SilkwormNKAa的兩個單克隆細(xì)胞系中外 源鈉鉀ATP酶的細(xì)胞定位檢測結(jié)果（A :穩(wěn)定表達(dá)YFP-ratNKAa 1的單克隆細(xì)胞系；B :穩(wěn)定 表達(dá)YFP-SilkwormNKA a的單克隆細(xì)胞系）。
[0018] 圖5為家蠶和大鼠的鈉鉀ATP酶分別在PY17細(xì)胞系中瞬時轉(zhuǎn)染表達(dá)后的酶活性 測定及Western定量檢測。
[0019] 圖6為轉(zhuǎn)基因家蠶獲得的結(jié)果圖（A為構(gòu)建過表達(dá)BmNKA基因的轉(zhuǎn)基因載體示意 圖，B為綠色波長的激發(fā)光下篩選轉(zhuǎn)基因陽性個體，轉(zhuǎn)基因陽性個體的蛹和蛾的眼分別在下 發(fā)出綠色熒光；C為以EGFP為探針的Southern blot雜交結(jié)果，泳道1是轉(zhuǎn)家蠶鈉鉀ATP酶 基因的實(shí)驗組，泳道2與3分別為陽性與陰性對照）。
[0020] 圖7為利用紅外光譜儀對轉(zhuǎn)基因蠶與非轉(zhuǎn)基因蠶的再生絲蛋白溶液蛋白二級結(jié) 構(gòu)觀察結(jié)果。

【具體實(shí)施方式】
[0021] 下面將結(jié)合附圖，對本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例進(jìn)行詳細(xì)的描述。實(shí)施例中未注明具體 條件的實(shí)驗方法，通常按照常規(guī)條件，例如分子克隆實(shí)驗指南（第三版，J.薩姆布魯克等 著）中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。
[0022] 以下實(shí)施例中使用的家蠶品種為大造，由中國西南大學(xué)家蠶基因資源庫提供。
[0023] 實(shí)施例1、家蠶鈉鉀ATP酶基因（BmNKA)mRNA全長序列的克隆
[0024] 從NCBI中（http://www. ncbi. nlm. nih. gov/)下載果蠅典型的鈉鉀ATP酶全長氨 基酸序列，將該序列在家蠶9倍基因組預(yù)測的蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫（http://silkworm. swu. edu. cn/silksoft/blast2_simple· html)中進(jìn)行同源比對，發(fā)現(xiàn)基因編號為BGIBMGA005058的 基因與果蠅的鈉鉀ATP酶具有最高的同源性，由于家蠶的鈉鉀ATP酶（BGIBMGA005058)基 因具有8條EST序列，利用軟件DNAStar Lasergene對這8條EST序列進(jìn)行拼接得到該基因 的部分正確的mRNA序列后，設(shè)計合成5'RACE的基因特異引物和巢氏基因特異引物。5'RACE 引物序列如下：
[0025] 5058-pl :5'-ttcgataatacggatgtcggcggga-3'（SEQ ID NO. 1);
[0026] 5058_p2 :5,-gaagataccagtaacgatcacgacg-3，（SEQ ID NO. 2);
[0027] 5058_p3 :5'-acggatgacggtggcgaattggggg-3'（SEQ ID NO. 3)。
[0028] 然后按照GeneRacerTM試劑盒（Invitrogen公司）說明書，擴(kuò)增得到該基因 5'端 的非翻譯區(qū)序列（SEQ ID NO. 4)，根據(jù)獲得的5'端的非翻譯區(qū)序列與拼接的EST序列設(shè)計 BmNKA基因的全長序列擴(kuò)增引物，具體引物如下：上游引物序列為：（5' -cgtccggaatgggcga gacgcgcagaaaacctcccgc_3，）（SEQ ID N0.5);下游引物序列為：（5，_gcggatccttaataataag tctcttgttcgagcc-3'）（SEQ ID NO. 6)。
[0029] 以家蠶（大造）五齡3天的頭部cDNA為模板，利用SEQ ID NO. 5和SEQ ID NO. 6 所示的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，PCR產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，利用凝膠回收試劑盒（上海華 舜生物技術(shù)有限公司）切膠回收純化目的片段，再將所得目的片段克隆到載體PEasy-Tl simple (Transgen公司），并委托上海生工生物工程有限公司進(jìn)行測序，結(jié)果SEQ ID NO. 7 所示。結(jié)果顯示，BmNKA基因 mRNA全長共計3030個核苷酸，開放閱讀框（ORF)為3030個 核苷酸，編碼長為1009個氨基酸的BmNKA蛋白（SEQ ID NO. 8)，經(jīng)信號肽預(yù)測發(fā)現(xiàn)在BmNKA 蛋白N端包含一個由22個氨基酸組成的信號肽序列，將獲得的全長序列同家蠶基因組數(shù)據(jù) 庫比對分析，發(fā)現(xiàn)BmNKA基因含15個外顯子和14個內(nèi)含子，如圖1所示。
[0030] 將BmNKA基因開放閱讀框（ORF)序列及預(yù)測的氨基酸序列在NCBI上進(jìn)行BLAST 比對，根據(jù)比對結(jié)果分析BmNKA基因進(jìn)化樹。結(jié)果顯示昆蟲、鳥類和哺乳動物等典型的NKA 蛋白序列均具有很高的同源性，而且不同物種的鈉鉀ATP酶亞單位的α 1，α 2, α 3, α 4分 別聚為一支。但作為NKA酶家族進(jìn)化的早期形式的昆蟲和蟲類的鈉鉀ATP酶僅具有一種亞 單位形式。然后根據(jù)比對BmNKA，果蠅NKA α，線蟲NKA α，人NKA α 1，鼠 NKA α 1，鼠 NKA α 2 和鼠 NKA α 3的氨基酸序列。結(jié)果顯示，BmNKA基因含有NKA基因的典型結(jié)構(gòu)，表明BmNKA基 因?qū)儆诘湫偷腜-type鈉鉀ATP酶。
[0031] 實(shí)施例2、BmNKA基因組織表達(dá)譜
[0032] 根據(jù)BmNKA基因全長序列設(shè)計特異引物，具體如下：上游引物序 列（FP) :5' -gacaggaatggacctaccg-3'（SEQ ID N0·9);下游引物序列（RP): 5'-gcctgatctcgtcgtagat_3'（SEQ ID N0.10)。同時設(shè)計內(nèi)參基因家蠶肌動蛋白基因 Actin3 的特異引物，具體如下：上游引物為（A3-F:5'-aacaccccgtcctgctcactg_3'）（SEQ ID N0·ll)，下游引物為：（A3-R:5'-gggcgagacgtgtgatttcct-3'）（SEQIDN0·12)。分別取家 蠶5齡第3天雌雄幼蟲的各組織（1.生殖腺；2.頭；3.表皮；4.中腸；5.脂肪體；6.馬氏 管；7.血細(xì)胞；8.前部絲腺；9.中部絲腺；10.后部絲腺；11.陰性對照）材料，取一部分 組織材料分別采用TRIzol試劑（Invitrogen公司）提取總RNA，利用M-MLV反轉(zhuǎn)錄試劑盒 (Invitrogen 公司）合成 cDNA 第一鏈，再用 SEQ ID NO. 8 和 SEQ ID NO. 9, SEQ ID NO. 10 和 SEQ ID NO. 11所示的引物對進(jìn)行PCR，PCR擴(kuò)增條件為：95°C預(yù)變性10分鐘，95°C變性40 秒、55°C退火30秒、72°C延伸90秒，共25個循環(huán)，最后72°C終延伸10分鐘，將PCR產(chǎn)物用 瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行檢測，結(jié)果如圖2 (A)所示。結(jié)果顯示，在mRNA水平，5齡第3天的家蠶 各個組織都有BmNKA基因的表達(dá)。然后將各組織的剩余材料用于Western雜交以在蛋白水 平檢測BmNKA酶在各組織的表達(dá)情況（與家蠶鈉鉀ATP酶雜交的LEAVE抗體由美國德克薩 斯大學(xué)醫(yī)學(xué)院生理學(xué)與細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗室饋贈），結(jié)果如圖2 (B)所示。結(jié)果顯示，在蛋白水 平BmNKA酶只在家蠶五齡三天的頭部和表皮中有表達(dá)。
[0033] 實(shí)施例3、單克隆細(xì)胞系的建立過程如下
[0034] 根據(jù)BmNKA基因 mRNA全長序列設(shè)計擴(kuò)增BmNKA基因開放閱讀框（ORF)的引物， 具體如下：上游引物序列（FW) ：5' -cgtcc￡gaatgggcgagacgcgcagaaaacctcccgc-3' (SEQ ID NO. 13)，下劃線為 BspEI 酶切位點(diǎn)；下游引物序列（RW) :5' -gcggatccttaataataagtctcttg ttcgagcc-3'（SEQ ID NO. 14)，下劃線為BamHI酶切位點(diǎn)；然后以家蠶五齡3天的頭部cDNA 為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，經(jīng)BspEI和BamHI酶切后連入pEYFP-Cl載體的（pEYFP-Cl載體同樣 也經(jīng)過BspEI和BamHI進(jìn)行雙酶切），獲得重組表達(dá)質(zhì)粒，命名為BmNKA-pEYFP。
[0035] 同時克隆大鼠的鈉鉀ATP酶基因（基因編號GI :55771)，將其連接入pEYFP-Cl載 體，獲得含有大鼠鈉鉀ATP酶的pEYFP-Cl載體RatNKA-pEYFP，作為陽性對照。
[0036] 將LLC-PKl (豬腎表皮細(xì)胞系）細(xì)胞在6孔板進(jìn)行培養(yǎng)，待細(xì)胞生長到80%左右分 別用重組表達(dá)質(zhì)粒BmNKA-pEYFP和RatNKA-pEYFP轉(zhuǎn)染，細(xì)胞轉(zhuǎn)染過程參照invitrogen公 司的Lipofectamine2000轉(zhuǎn)染試劑盒說明；之后給細(xì)胞換成不含F(xiàn)BS和抗生素的培養(yǎng)基，24 小時后換成含F(xiàn)BS和抗生素 G418 (500 μ g/mL)的培養(yǎng)基培養(yǎng)5天，篩選僅表達(dá)家蠶和大鼠 NKA酶的細(xì)胞群落，繼續(xù)在含有抗生素 G418 (500 μ g/mL)的培養(yǎng)基中擴(kuò)大培養(yǎng)3-5天，再將 擴(kuò)大培養(yǎng)的混合的細(xì)胞群落用胰酶消化下來后轉(zhuǎn)移到含有新的培養(yǎng)基的24孔板繼續(xù)擴(kuò)大 培養(yǎng)一周，最后把這些細(xì)胞消化下來后移種入96孔板，確保每個孔內(nèi)僅含有一個細(xì)胞，擴(kuò) 大培養(yǎng)后篩選兩個單克隆細(xì)胞系（YFP-rat a 1和YFP-Silkworma )進(jìn)行Western雜交分別 檢測家蠶和大鼠 NKA蛋白（一抗購自FISHER公司，CAT#05369MI)在單克隆細(xì)胞系表達(dá)的 正確性。利用YFP抗體檢測外源大鼠與家蠶鈉鉀ATP酶基因在豬腎表皮細(xì)胞系（LLC-PKl) 中的表達(dá)，Western雜交結(jié)果如圖3 (A與C)所示。結(jié)果顯示，兩個外源鈉鉀ATP酶基因 BmNKA-pEYFP和RatNKA-pEYFP質(zhì)粒都能夠在LLC-PKl細(xì)胞中特異表達(dá)，但大鼠比家蠶的鈉 鉀ATP酶基因表達(dá)量要高的多。同時以轉(zhuǎn)染E-YFP質(zhì)粒的LLC-PKl細(xì)胞系為陰性對照，利 用YFP抗體未檢測到外源大鼠和家蠶鈉鉀ATP酶基因在轉(zhuǎn)染E-YFP質(zhì)粒在LLC-PKl細(xì)胞系 中表達(dá)量。
[0037] 為檢測新建立的YFP-rat a 1和YFP-Silkworma兩個單克隆細(xì)胞系中內(nèi)源性豬鈉 鉀ATP酶（GI: 164381)的表達(dá)量，利用通用的商品化哺乳動物的鈉鉀ATP酶抗體a 6F與兩 個單克隆細(xì)胞系進(jìn)行雜交，Western雜交結(jié)果如圖3的B與D所示。結(jié)果顯示，在YFP-rat a 1 單克隆細(xì)胞系中大鼠與豬的鈉鉀ATP酶基因均可以在大鼠的單克隆細(xì)胞系中表達(dá)，而在 YFP-Silkworma單克隆細(xì)胞系中內(nèi)源性piga 1表達(dá)量比YFP-rat a 1細(xì)胞系中ATP酶表達(dá) 量要高得多。
[0038] 四.BmNKA的細(xì)胞定位與酶活性測定
[0039] I、BmNKA細(xì)胞定位流程
[0040] 將滅菌后的玻璃切片輕放于6孔板，將YFP-rat a 1和YFP-Silkworma兩個細(xì)胞 系分別培養(yǎng)于玻璃切片上，待貼壁生長至細(xì)胞密度達(dá)到80%左右后直接利用熒光共聚焦顯 微鏡觀察，如圖4所示。結(jié)果顯示，連接有YFP標(biāo)簽的大鼠鈉鉀ATP酶α?亞單位基本都定 位在細(xì)胞膜上，而家蠶鈉鉀ATP酶大部分都在細(xì)胞質(zhì)中，但仍有少部分定位在細(xì)胞的膜上。
[0041] 2、BmNKA酶活測定步驟
[0042] (1)制備ΡΥ17細(xì)胞系：ΡΥ17細(xì)胞系是通過瞬時轉(zhuǎn)染A4siRNA表達(dá)載體 (?5即?^ 8〇1^4以1?嫩）到豬腎表皮細(xì)胞系（1^(：-?1(1)24小時后利用濃度11^/1^嘌呤霉 素（puromycin)進(jìn)行篩選，其中內(nèi)源性的豬鈉鉀ATP酶基因被設(shè)計的SiRNA靶標(biāo)序列干涉 掉，最后獲得了僅含有維持細(xì)胞生命必需的7. 5 %左右內(nèi)源性豬鈉鉀ATP酶的PY17細(xì)胞 系，PY17細(xì)胞系可作為下一步測量鈉鉀ATP酶活性的生物模型（具體方法參見：Man Liang et al. Functional Characterization of Src-interacting Na/K-ATPase Using RNA Interference Assay. JBC. 2006. 281(28)。
[0043] PY17細(xì)胞系培養(yǎng)至細(xì)胞密度達(dá)到80-90 %后，瞬時轉(zhuǎn)染YFP-rat a I與 YFP-silkworma兩個質(zhì)粒到PY17細(xì)胞系，每類細(xì)胞傳代三盤到IOcm的盤中，生長到90% 左右后用 buffer A(BufferA 為 pH7. 4 終濃度為 30mM 組氨酸，250mM 蔗糖，lmMEDTANa2*2H20 的混合溶液）溶液收集；勻楽攪拌15次后超聲處理；800g離心IOmin后收集沉淀；再 在4°C，45000g高速離心45min獲得細(xì)胞膜沉淀；接著在IOOg速度條件下離心IOmin,用 buffer A溶解后測定蛋白濃度，并用buffer A稀釋到蛋白濃度為1?2mg/mL，得待測樣品； 每個樣品準(zhǔn)備6個管子，其中3個管子加入哇巴因至終濃度為ImM，另3個管子加入等體積 的水，每管加入含5?10μ g蛋白的待測樣品；然后加入丙甲菌素（alamethicin)，加入量 按每10 μ g蛋白加入1 μ L丙甲菌素，然后于室溫下靜置10min。
[0044] 準(zhǔn)備如表1所示的反應(yīng)混合體系：
[0045] 表1、反應(yīng)混合體系
[0046]

【權(quán)利要求】
1. 家蠶鈉鉀ATP酶，其特征在于：所述家蠶鈉鉀ATP酶的氨基酸序列如SEQ ID NO. 8所 示或SEQ ID NO. 8所示氨基酸序列經(jīng)取代、缺失或添加至少一個氨基酸且來源于家蠶的具 有鈉鉀ATP酶功能的酶。
2. 編碼權(quán)利要求1所述家蠶鈉鉀ATP酶的基因，其特征在于：所述基因的核苷酸序列 如SEQ ID NO. 7第172-3201位所示或SEQ ID NO. 7第172-3201位經(jīng)取代、缺失或添加至 少一個堿基且來源于家蠶的編碼具有鈉鉀ATP酶功能的核苷酸序列。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的基因，其特征在于：所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO. 7所 /Jn〇
4. 含有權(quán)利要求2或3所述基因的表達(dá)載體。
5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的表達(dá)載體，其特征在于：所述表達(dá)載體由SEQ ID NO. 7第 172-3201位所示核苷酸序列連入pEYFP-Cl載體的BspEI和BamHI酶切位點(diǎn)處。
6. 權(quán)利要求1所述家蠶鈉鉀ATP酶在改良蠶絲纖維性能中的應(yīng)用。
【文檔編號】C12N15/85GK104312993SQ201410555339
【公開日】2015年1月28日 申請日期:2014年10月16日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月16日
【發(fā)明者】趙萍, 衣啟營, 王鑫, 夏慶友, 宋倩茹 申請人:西南大學(xué)