一株植物乳桿菌及其在苜蓿青貯中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一株植物乳桿菌及其在苜蓿青貯中的應(yīng)用。本發(fā)明提供了植物乳桿菌Lactobacillus plantarum ZZU 208 CGMCC NO.8990或其發(fā)酵產(chǎn)物或其菌懸液或其培養(yǎng)液在作為苜蓿青貯添加劑或制備苜蓿青貯添加劑中的應(yīng)用。本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)證明了，從玉米青貯飼料中分離純化到的乳酸菌ZZU 208能夠在較低可溶性糖的環(huán)境下生長(zhǎng)并產(chǎn)酸，對(duì)致病菌具有較好的抑菌活性。在苜蓿青貯中能夠有效降低pH，降低纖維含量，提高粗脂肪和粗蛋白含量，在作為青貯添加劑方面具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。CGMCC NO.89902014.04.02
【專利說明】一株植物乳桿菌及其在苜蓿青貯中的應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物【技術(shù)領(lǐng)域】，尤其涉及一株植物乳桿菌及其在苜蓿青貯中的應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 苜猜（Medicago sativa)屬于多年生豆科牧草，蛋白含量高，營(yíng)養(yǎng)成分全面，富含 維生素和微量元素，抗寒耐旱，是一種優(yōu)質(zhì)、高產(chǎn)、適應(yīng)性強(qiáng)、適合大面積種植的經(jīng)濟(jì)飼草。 在苜蓿生產(chǎn)實(shí)踐中，傳統(tǒng)的干草制備法在濕熱的雨季受到極大限制，而青貯則是解決此問 題的好方法。青貯是通過乳酸菌以可溶性糖為主要基質(zhì)發(fā)酵產(chǎn)生乳酸等有機(jī)酸，降低青貯 飼料的pH值，抑制其它有害微生物（如酪酸菌）的活性。與燕麥、青貯稻與青貯玉米等 材料相比，苜蓿的可溶性糖含量低，僅為3. 07 %?4. 56 %，而緩沖能值高達(dá)414?580mE/ kgDM(每千克干物質(zhì)中毫克當(dāng)量數(shù)），致使自然青貯發(fā)酵進(jìn)程慢，穩(wěn)定性差，并伴有過多的 呼吸、發(fā)熱和滲液等情況，因而青貯難度較大，自然青貯十分困難。為促進(jìn)苜蓿青貯發(fā)酵，添 加糖蜜、酸類、纖維素酶及乳酸菌等青貯添加劑是當(dāng)前廣泛使用的一些方法。在苜蓿青貯中 乳酸菌通常與糖蜜或纖維素酶等聯(lián)合添加才能達(dá)到理想的青貯效果，這無(wú)疑增加了青貯的 成本和操作的復(fù)雜性，因此篩選適合苜蓿材料和青貯特點(diǎn)的苜蓿青貯專用優(yōu)良乳酸菌尤為 重要。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的是提供植物乳桿菌Lactobacillus plantarum ZZU 208CGMCC NO. 8990或其發(fā)酵產(chǎn)物或其菌懸液或其培養(yǎng)液在作為苜蓿青貯添加劑或制備苜蓿青貯添加 劑中的應(yīng)用。
[0004]上述植物乳桿菌 Lactobacillus plantarum ZZU 208CGMCC NO. 8990 或其發(fā)酵產(chǎn) 物或其菌懸液或其培養(yǎng)液在制備苜蓿青貯飼料中的應(yīng)用也是本發(fā)明保護(hù)的范圍。
[0005]上述植物乳桿菌 Lactobacillus plantarum ZZU 208CGMCC NO. 8990 或其發(fā)酵產(chǎn) 物或其菌懸液或其培養(yǎng)液在降低苜蓿青貯飼料PH值、降低苜蓿青貯飼料纖維含量、提高苜 蓿青貯飼料粗脂肪和/或提高苜蓿青貯飼料粗蛋白含量中的應(yīng)用也是本發(fā)明保護(hù)的范圍。
[0006] 上述應(yīng)用中，所述苜蓿為苜蓿WL343或苜蓿標(biāo)桿。
[0007] 所述纖維含量為中性洗滌纖維和酸性洗滌纖維總量或中性洗滌纖維含量。
[0008] 本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種制備苜蓿青貯的方法，包括如下步驟：將植物乳 桿菌 Lactobacillus plantarum ZZU 208CGMCC NO. 8990 添加到苜猜中，青C%得到苜猜青 貯飼料。
[0009] 上述方法中，所述植物乳桿菌和所述苜蓿的配比為107-108cfu/100g。
[0010] 上述方法中，所述植物乳桿菌是以植物乳桿菌培養(yǎng)液或菌懸液加入。
[0011] 上述方法中，所述青貯的條件為青貯袋抽真空厭氧25°c;
[0012]所述植物乳桿菌菌懸液為將植物乳桿菌培養(yǎng)液收集菌體懸浮水中得到的菌懸液； 所述植物乳桿菌培養(yǎng)液的培養(yǎng)條件為30°C培養(yǎng)48h，培養(yǎng)采用的培養(yǎng)基為MRS液體培養(yǎng)基。
[0013] 本發(fā)明另一個(gè)目的是提供一株植物乳桿菌Lactobacillus plantarum ZZU 208。
[0014] 本發(fā)明提供的植物乳桿菌Lactobacillus plantarum ZZU 208,其保藏號(hào)為CGMCC NO. 8990。
[0015] 乳酸菌ZZU 208于2014年4月2日，保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通 微生物中心（簡(jiǎn)稱CGMCC，地址為：北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)），保藏編號(hào)為CGMCC NO. 8990,分類命名為植物乳桿菌（Lactobacillus plantarum)。
[0016] 本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)證明了，從玉米青貯飼料中分離純化到的乳酸菌ZZU 208能夠在較 低可溶性糖的環(huán)境下生長(zhǎng)并產(chǎn)酸，對(duì)致病菌具有較好的抑菌活性。在苜蓿青貯中能夠有效 降低PH，降低纖維含量（中性洗滌纖維和酸性洗滌纖維總量），提高粗脂肪和粗蛋白含量， 在作為苜蓿青貯添加劑方面具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0017] 圖1為recA基因的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳圖。

【具體實(shí)施方式】
[0018] 下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無(wú)特殊說明，均為常規(guī)方法。
[0019] 下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無(wú)特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。
[0020] 實(shí)施例1、植物乳桿菌的獲得
[0021] 1、分離純化
[0022] 從玉米（品種：鄭超甜2號(hào)）青貯飼料中分離純化到乳酸菌ZZU 208,為同型發(fā)酵 乳酸菌，具體如下：
[0023] 稱取IOg玉米青貯產(chǎn)物樣品加入滅菌的90ml蒸餾水中，利用漩渦振蕩器震蕩30s， 10倍梯度稀釋，然后分別取10'KT 3和KT5倍樣品稀釋液涂布在MRS固體培養(yǎng)基上，放置于 厭氧培養(yǎng)箱培養(yǎng)48h，然后將其取出，依據(jù)菌落的大小、形態(tài)和顏色，挑取MRS上生長(zhǎng)的單菌 落，進(jìn)行過氧化氫酶實(shí)驗(yàn)及革蘭氏染色。將過氧化氫酶陰性及革蘭氏染色陽(yáng)性者暫定為乳 酸菌，于MRS固體培養(yǎng)基上繼續(xù)劃線純化2次。-80°C保存于10%二甲基亞砜的Nutrient 肉湯培養(yǎng)基中，該菌株命名為ZZU 208,為同型發(fā)酵乳酸菌。
[0024] 2、生理生化檢測(cè)
[0025] 乳酸菌ZZU 208在10°C _45°C條件下及pH3. 5-9. 0條件生長(zhǎng)良好，能夠耐受3.0% 的鹽濃度，部分理化特性如表1所示。
[0026] 表1菌株ZZU 208的生理生化特性
[0027]

【權(quán)利要求】
1.植物乳桿菌Lactobacillus plantarum ZZU 208 CGMCC NO. 8990或其發(fā)酵產(chǎn)物或其 菌懸液或其培養(yǎng)液在作為苜蓿青貯添加劑或制備苜蓿青貯添加劑中的應(yīng)用。 2?植物乳桿菌Lactobacillus plantarum ZZU 208 CGMCC NO. 8990或其發(fā)酵產(chǎn)物或其 菌懸液或其培養(yǎng)液在制備苜蓿青貯飼料中的應(yīng)用。 3?植物乳桿菌Lactobacillus plantarum ZZU 208 CGMCC NO. 8990或其發(fā)酵產(chǎn)物或其 菌懸液或其培養(yǎng)液在降低苜蓿青貯飼料pH值、降低苜蓿青貯飼料纖維含量、提高苜蓿青貯 飼料粗脂肪和/或提高苜蓿青貯飼料粗蛋白含量中的應(yīng)用。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一所述的應(yīng)用，其特征在于： 所述苜蓿為苜蓿WL343或苜蓿標(biāo)桿。 所述纖維含量為中性洗滌纖維和酸性洗滌纖維總量或中性洗滌纖維含量。
5. 一種苜猜青|&的方法，包括如下步驟：將植物乳桿菌Lactobacillus plantarum ZZU 208 CGMCC NO. 8990添加到苜蓿中，青貯，得到苜蓿青貯飼料。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于： 所述植物乳桿菌和所述苜蓿的配比為107-108cfu/100g。
7. 根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的方法，其特征在于：所述植物乳桿菌是以植物乳桿菌培 養(yǎng)液或菌懸液加入。
8. 根據(jù)權(quán)利要求5-7中任一所述的方法，其特征在于： 所述青貯的條件為青貯袋抽真空厭氧25°C。 9?一株植物乳桿菌 Lactobacillus plantarum ZZU 208,其保藏號(hào) CGMCC NO. 8990。
【文檔編號(hào)】C12R1/25GK104336416SQ201410610004
【公開日】2015年2月11日 申請(qǐng)日期:2014年11月3日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月3日
【發(fā)明者】王雁萍, 楊富裕, 李東霞, 焦湞 申請(qǐng)人:鄭州大學(xué), 中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)