一種檢測(cè)冠心病的血清學(xué)生物標(biāo)志物miR-19a及其用途
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種檢測(cè)冠心病的血清學(xué)生物標(biāo)志物miR-19a及其用途，屬于檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、生物技術(shù)、生物化學(xué)及分子生物學(xué)領(lǐng)域；該miRNA序列為：miR-19a:UGUGCAAAUCUAUGCAAAACUGA。本發(fā)明還同時(shí)公開(kāi)了miR-19a的用途：制備用于篩查冠心病或輔助冠心病病理鑒定、生化檢驗(yàn)和臨床診斷的試劑產(chǎn)品。試劑產(chǎn)品包括引物系統(tǒng)和引物探針系統(tǒng)，其中引物系統(tǒng)由miR-19a的cDNA擴(kuò)增引物組成，引物探針系統(tǒng)由miR-19a的cDNA擴(kuò)增引物和探針組成；生物標(biāo)志物miR-19a分子與冠心病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，利用miR-19a分子作為預(yù)測(cè)冠心病發(fā)生和判斷冠心病發(fā)展程度的生物標(biāo)志物，與目前常規(guī)的病理分型診斷冠心病發(fā)病和預(yù)后相比，可以更加個(gè)體化、準(zhǔn)確地預(yù)測(cè)冠心病的早期發(fā)病情況和惡性程度。
【專利說(shuō)明】-種檢測(cè)冠心病的血清學(xué)生物標(biāo)志物miR-19a及其用途

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種檢測(cè)冠心病的血清學(xué)生物標(biāo)志物miR-19a及其用途，具體涉及一 種冠心病的生物標(biāo)志物-血清miR_19a分子及其在冠心病篩查與臨床診斷中的應(yīng)用，屬 于檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、生物技術(shù)、生物化學(xué)及分子生物學(xué)領(lǐng)域。

【背景技術(shù)】
[0002] 冠心?。–AD)在全世界范圍內(nèi)尤其是在一些發(fā)展中國(guó)家擁有較高的發(fā)病率和死亡 率。據(jù)WHO預(yù)測(cè)，直至2030年，每年將會(huì)有23, 600, 000人死于心血管疾病。冠心病病理 學(xué)過(guò)程復(fù)雜，通常被認(rèn)為是遺傳和環(huán)境因子共同作用的結(jié)果。在過(guò)去幾十年中，很多因素， 如吸煙、高血壓、糖尿?。―M)、動(dòng)脈硬化、肥胖和節(jié)食等被證實(shí)與冠心病有關(guān)，但冠心病的具 體發(fā)病機(jī)理仍不清楚。越來(lái)越多的證據(jù)說(shuō)明炎癥在冠心病的發(fā)病過(guò)程中扮演著重要作用， 其發(fā)病具有明顯的家族聚集性，大量的遺傳易感基因在疾病的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起著重要作 用，所涉及的條件十分復(fù)雜，該疾病確切的發(fā)病機(jī)制至今仍不清楚，從而限制了冠心病診治 有效易感基因的發(fā)掘。miRNA廣泛介導(dǎo)基因的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控，被證實(shí)在心血管疾病中充當(dāng)多種 多樣的角色，或可反映心臟和血管對(duì)損傷的易感性，及對(duì)持久心血管功能的依賴性等，而目 前的主要研究則集中于miRNA與心律失常、心肌肥厚、血管新生和心肌細(xì)胞凋亡等的關(guān)系， 對(duì)冠心病的系統(tǒng)作用機(jī)制還少見(jiàn)報(bào)道。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的是提供一種檢測(cè)冠心病的血清學(xué)生物標(biāo)志物miR_19a，其miRNA序 列為： miR-19a:UGUGCAAAUCUAUGCAAAACUGA； 本發(fā)明的另一個(gè)目的是上述冠心病檢測(cè)的血清學(xué)生物標(biāo)志物miR-19a的用途：作為 判斷冠心病發(fā)生的生物標(biāo)志物試劑的應(yīng)用，包括制備用于篩查冠心病或輔助冠心病病理鑒 定、臨床診斷和生化檢驗(yàn)的試劑盒；所述試劑盒包括引物系統(tǒng)/引物探針系統(tǒng)： 所述引物系統(tǒng)由miR-19a的cDNA擴(kuò)增引物和錨定引物組成； 所述引物探針系統(tǒng)有miR-19a的cDNA擴(kuò)增引物和探針組成； 檢測(cè)該標(biāo)志物的技術(shù)為反轉(zhuǎn)錄-熒光定量PCR技術(shù)，所述熒光定量PCR為DNA染料法 或TaqMan探針?lè)ǎ籱iR_19a的cDNA擴(kuò)增引物為： AGUUUUGCAUAGUUGCACUACA； mR-19a的探針由以下核苷酸序列組成： (6-FAM)AGUUUUGCAUAGUUGCACUACA(MGB)； 在熒光定量PCR檢測(cè)方法中，使用保守性miRNA的miR-19a作為內(nèi)參照基因，其cDNA擴(kuò)增引物和探針為： 引物:AGUUUUGCAUAGUUGCACUACA 探針：（6-FAM)A⑶UUUGCAUA⑶UGCACUACA(MGB)。
[0004] 本發(fā)明涉及生物標(biāo)志物miR-19a分子與冠心病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，利用 miR-19a分子作為預(yù)測(cè)冠心病發(fā)生和判斷冠心病發(fā)展程度的生物標(biāo)志物，與目前常規(guī)的病 理分型診斷冠心病發(fā)病和預(yù)后相比，可以更加個(gè)體化、準(zhǔn)確地預(yù)測(cè)冠心病的早期發(fā)病情況 和惡性程度。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0005] 圖1 :冠心病組與對(duì)照組（Non-CAD)血清miR-19a水平比較（#妒〈0· 0001); 圖2 :血清miR-19a的ROC曲線。

【具體實(shí)施方式】
[0006] 下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明 而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條 件，例如《分子克隆》（NewYork:ColdSpringHarborLaboratoryPress, 1989)中所述 的條件，或按照制造廠商所建議的條件。 實(shí)施例1 受試群體 受試對(duì)象來(lái)自醫(yī)院診治的患者。冠心病患者入選標(biāo)準(zhǔn)：既往有心肌梗死病史，或者冠狀 動(dòng)脈造影檢查至少有一支冠狀動(dòng)脈狹窄> 50% ;年齡大于18歲且小于80歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：靜 息時(shí)有心絞痛；合并嚴(yán)重心力衰竭患者（EF〈 35%);合并嚴(yán)重瓣膜疾病或心肌病患者。一 共選取冠心病組180例，非冠心病組169例，所有受試對(duì)象均簽署知情同意書。
[0007] 表1病例基本信息表

【權(quán)利要求】
1. 一種檢測(cè)冠心病的血清學(xué)生物標(biāo)志物miR-19a，其特征在于：其RNA序列為： miR-19a: UGUGCAAAUCUAUGCAAAACUGA 〇
2. 權(quán)利要求1所述的檢測(cè)冠心病的血清學(xué)生物標(biāo)志物miR-19a的用途，其特征在于： 作為判斷冠心病發(fā)生的生物標(biāo)志物試劑的應(yīng)用，包括制備用于篩查冠心病或輔助冠心病病 理鑒定、臨床診斷和生化檢驗(yàn)的試劑盒。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的檢測(cè)冠心病的血清學(xué)生物標(biāo)志物的用途，其特征在于：所述 試劑盒包括引物系統(tǒng)、引物探針系統(tǒng)； 所述引物系統(tǒng)由miR-19a的cDNA擴(kuò)增引物和錨定引物組成； 所述引物探針系統(tǒng)由miR-19a的cDNA擴(kuò)增引物和探針組成。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的檢測(cè)冠心病的血清學(xué)生物標(biāo)志物的用途，其特征在于：所述 試劑盒檢測(cè)該標(biāo)志物的技術(shù)為反轉(zhuǎn)錄-熒光定量PCR技術(shù)。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的檢測(cè)冠心病的血清學(xué)生物標(biāo)志物的用途，其特征在于：所述 熒光定量PCR為DNA染料法或TaqMan探針?lè)ā?br> 6. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的檢測(cè)冠心病的血清學(xué)生物標(biāo)志物的用途，其特征在于： miR-19a的cDNA擴(kuò)增引物為： AGUUUUGCAUAGUUGCACUACA 〇
7. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的檢測(cè)冠心病的血清學(xué)生物標(biāo)志物的用途，其特征在于： miR-19a的探針由以下核苷酸序列組成： (6-FAM) AGUUUUGCAUAGUUGCACUACA(MGB)〇
8. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的血清學(xué)生物標(biāo)志物的用途，其特征在于：在熒光定量PCR檢 測(cè)方法中，使用保守性miRNA的miR-19a作為內(nèi)參照基因，其cDNA擴(kuò)增引物和探針為： 引物:AGUUUUGCAUAGUUGCACUACA 探針：（6-FAM) A⑶UUUGCAUA⑶UGCACUACA (MGB)。
【文檔編號(hào)】C12N15/113GK104278105SQ201410622200
【公開(kāi)日】2015年1月14日 申請(qǐng)日期:2014年11月7日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月7日
【發(fā)明者】雷桅, 陳燦, 稅曉容 申請(qǐng)人:雷桅