一種保持蠟蚧輪枝菌對(duì)寄主昆蟲(chóng)毒力的方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種保持蠟蚧輪枝菌對(duì)寄主昆蟲(chóng)毒力的方法，即在蠟蚧輪枝菌PDA培養(yǎng)基內(nèi)加入寄主昆蟲(chóng)研磨物的過(guò)濾液，滅菌后接入蠟蚧輪枝菌孢子，然后置于光照培養(yǎng)箱內(nèi)以合適的溫度進(jìn)行培養(yǎng)，待菌絲長(zhǎng)出孢子后，在無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)，以刮刀刮下孢子，用于液體發(fā)酵培養(yǎng)或配成一定濃度懸濁液直接用于害蟲(chóng)防治。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比的優(yōu)點(diǎn)是：本方法可長(zhǎng)久保持蠟蚧輪枝菌對(duì)寄主昆蟲(chóng)的毒力，并且可根據(jù)不同的寄主昆蟲(chóng)進(jìn)行馴化，做某種害蟲(chóng)的專(zhuān)用殺蟲(chóng)劑，以達(dá)到更加有效的防治效果。而且針對(duì)不同寄主昆蟲(chóng)馴化的菌株，可根據(jù)防治害蟲(chóng)的種類(lèi)進(jìn)行混合應(yīng)用，效果更好。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種保持蠟蚧輪枝菌對(duì)寄主昆蟲(chóng)毒力的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種保持蠟蚧輪枝菌對(duì)寄主昆蟲(chóng)毒力的方法。

【背景技術(shù)】
[0002]臘階輪枝菌(Verticillium Iecanii)是一種昆蟲(chóng)病原真菌，屬于半知菌亞綱絲抱菌類(lèi)輪枝菌屬匍匐組，其寄主范圍包括鞘翅目、鱗翅目、半翅目、纓翅目、直翅目、膜翅目、雙翅目、彈尾目、癭螨、線(xiàn)蟲(chóng)，甚至還能寄生植物病菌，遺傳穩(wěn)定性較好，對(duì)人、畜、禽類(lèi)和植物均無(wú)害，是一種廣闊應(yīng)用前景的生防真菌，但應(yīng)用過(guò)程中，在人工培養(yǎng)基上經(jīng)過(guò)幾代連續(xù)接種培養(yǎng)后，其對(duì)害蟲(chóng)的毒力會(huì)顯著下降，甚至喪失，嚴(yán)重制約了蠟蚧輪枝菌資源的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用。因此，亟需建立一種適合連續(xù)培養(yǎng)又能保持蠟蚧輪枝菌對(duì)寄主昆蟲(chóng)毒力的方法。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明是為了解決上述不足，提供了一種保持蠟蚧輪枝菌對(duì)寄主昆蟲(chóng)毒力的方法。
[0004]本發(fā)明的上述目的通過(guò)以下的技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn):一種保持蠟蚧輪枝菌對(duì)寄主昆蟲(chóng)毒力的方法，其特征在于:包括以下步驟:
[0005](I)配制適合臘階輪枝菌生長(zhǎng)的PDA培養(yǎng)基；
[0006](2)收集蠟蚧輪枝菌的寄主昆蟲(chóng)，_70°C冷凍12h后，充分研磨，按100頭寄主昆蟲(chóng)加入50ml無(wú)菌水，過(guò)濾，做成保持毒力添加劑；
[0007](3)按10g培養(yǎng)基中按10-100頭寄主昆蟲(chóng)當(dāng)量的比例加入保持毒力添加劑，滅菌，冷卻后制成蠟蚧輪枝菌保持毒力培養(yǎng)基；
[0008](4)在保持毒力培養(yǎng)基上接種蠟蚧輪枝菌的孢子，置于29°C，光照培養(yǎng)箱(L:D =12:12)內(nèi)培養(yǎng)；
[0009](5)待菌絲長(zhǎng)出孢子后，在無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)，以刮刀刮下孢子和菌絲混合物，用于液體發(fā)酵培養(yǎng)或配成一定濃度懸濁液直接用于害蟲(chóng)防治。
[0010]本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比的優(yōu)點(diǎn)是:本方法可長(zhǎng)久保持蠟蚧輪枝菌對(duì)寄主昆蟲(chóng)的毒力，并且可根據(jù)不同的寄主昆蟲(chóng)進(jìn)行馴化，做某種害蟲(chóng)的專(zhuān)用殺蟲(chóng)劑，以達(dá)到更加有效的防治效果。而且針對(duì)不同寄主昆蟲(chóng)馴化的菌株，可根據(jù)防治害蟲(chóng)的種類(lèi)進(jìn)行混合應(yīng)用，效果更好。

【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0011]圖1在保持毒力培養(yǎng)基和普通培養(yǎng)基上培養(yǎng)不同代數(shù)的蠟蚧輪枝菌對(duì)絲光綠蠅成蟲(chóng)的致死中濃度的示意圖表。
[0012]圖2在保持毒力培養(yǎng)基和普通培養(yǎng)基上培養(yǎng)不同代數(shù)的蠟蚧輪枝菌對(duì)絲光綠蠅成蟲(chóng)的致死中時(shí)間的示意圖表。

【具體實(shí)施方式】
[0013]下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步詳述。
[0014]一種按照10gPDA培養(yǎng)基內(nèi)按100頭蠅蛆當(dāng)量的比例加入保持毒力添加劑做成保持毒力培養(yǎng)基1，按照10gPDA培養(yǎng)基內(nèi)按10頭蠅蛆當(dāng)量的比例加入保持毒力添加劑制成保持毒力培養(yǎng)基2，分別接種蠟蚧輪枝菌，產(chǎn)孢后在相同培養(yǎng)基上連續(xù)接種15代，檢測(cè)每一代孢子對(duì)絲光綠蠅的毒力，以普通PDA培養(yǎng)基上連續(xù)接種的蠟蚧輪枝菌孢子作為對(duì)照。結(jié)果表明，在普通培養(yǎng)基上連續(xù)接種7代后，其對(duì)絲光綠蠅成蟲(chóng)的毒力顯著下降，致死中濃度LC50逐漸增加(圖1)，10代之后，其對(duì)絲光綠蠅成蟲(chóng)的致死中濃度升高為原來(lái)30倍以上，而在本發(fā)明的保持毒力培養(yǎng)基I和2上其致死中濃度基本沒(méi)有變化，說(shuō)明其毒力基本沒(méi)有下降。同時(shí)，在普通培養(yǎng)基上培養(yǎng)10代后，蠟蚧輪枝菌對(duì)絲光綠蠅成蟲(chóng)的致死中時(shí)間延長(zhǎng)為原來(lái)的3倍，15代后延長(zhǎng)為原來(lái)的4倍(圖2)，而在保持毒力培養(yǎng)基上的連續(xù)接種15代后，蠟蚧輪枝菌孢子對(duì)絲光綠蠅成蟲(chóng)的致死中時(shí)間基本無(wú)變化，依然保持對(duì)絲光綠蠅成蟲(chóng)的高致病力。因此，在10g PDA培養(yǎng)基中接10頭和100頭蠅蛆當(dāng)量的保持毒力添加劑，均可達(dá)到保持蠟蚧輪枝菌孢子對(duì)絲光綠蠅成蟲(chóng)的高毒力的目的。說(shuō)明在PDA培養(yǎng)基上加入絲光綠蠅幼蟲(chóng)的磨碎物是一種保持蠟蚧輪枝菌對(duì)絲光綠蠅毒力的可靠方法，其接入比例可按照10g PDA培養(yǎng)基中加入10-100頭3齡蠅蛆當(dāng)量的保持毒力添加劑。
[0015]以上所述僅為本發(fā)明的實(shí)施例，并非因此限制本發(fā)明的專(zhuān)利范圍，凡是利用本發(fā)明說(shuō)明書(shū)及附圖內(nèi)容所作的等效結(jié)構(gòu)或等效流程變換，或直接或間接運(yùn)用在其他相關(guān)的【技術(shù)領(lǐng)域】，均同理包括在本發(fā)明的專(zhuān)利保護(hù)范圍內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種保持蠟蚧輪枝菌對(duì)寄主昆蟲(chóng)毒力的方法，其特征在于:包括以下步驟: (1)配制適合蠟蚧輪枝菌生長(zhǎng)的PDA培養(yǎng)基； (2)收集蠟蚧輪枝菌的寄主昆蟲(chóng)，_70°C冷凍12h后，充分研磨，按100頭寄主昆蟲(chóng)加入50ml無(wú)菌水，過(guò)濾，做成保持毒力添加劑； (3)按100g培養(yǎng)基中按10-100頭寄主昆蟲(chóng)當(dāng)量的比例加入保持毒力添加劑，滅菌，冷卻后制成蠟蚧輪枝菌保持毒力培養(yǎng)基； (4)在保持毒力培養(yǎng)基上接種蠟蚧輪枝菌的孢子，置于29°C，光照培養(yǎng)箱(L:D = 12:12)內(nèi)培養(yǎng)； (5)待菌絲長(zhǎng)出孢子后，在無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)，以刮刀刮下孢子和菌絲混合物，用于液體發(fā)酵培養(yǎng)或配成一定濃度懸濁液直接用于害蟲(chóng)防治。
【文檔編號(hào)】C12R1/645GK104450535SQ201410634686
【公開(kāi)日】2015年3月25日 申請(qǐng)日期:2014年11月12日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月12日
【發(fā)明者】張忠, 劉婧, 陳丹, 張瑞玲, 史衛(wèi)蜂 申請(qǐng)人:泰山醫(yī)學(xué)院