一種利用章魚下腳料獲得抗氧化活性物質(zhì)和復合氨基酸的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種利用章魚下腳料獲得抗氧化活性物質(zhì)和復合氨基酸的方法，包括如下步驟：(1)將章魚下腳料去除雜質(zhì)、洗凈后，進行組織搗碎勻漿，得勻漿液；(2)在勻漿液中添加蛋白酶進行酶解后，進行固液分離，得第一清液；(3)用超濾膜對第一清液進行分離處理，得第二清液和超濾濃液；(4)用納濾膜對第二清液進行分離處理得第三清液和納濾濃液，再對超濾濃液和納濾濃液進行凝膠柱層析純化后，合并得總濃液；(5)分別將總濃液和第三清液經(jīng)層析純化后進行冷凍干燥，即分別得到抗氧化活性物質(zhì)和復合氨基酸。本發(fā)明的方法用原來被丟棄的章魚下腳料，提取出抗氧化活性物質(zhì)和復合氨基酸，充分利用了資源，避免了浪費，減少了對環(huán)境的污染。
【專利說明】一種利用章魚下腳料獲得抗氧化活性物質(zhì)和復合氨基酸的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明具體涉及一種利用章魚下腳料獲得抗氧化活性物質(zhì)和復合氨基酸的方法。

【背景技術(shù)】
[0002]章魚是一種營養(yǎng)價值豐富的海產(chǎn)品，且能夠加工成多種類型食品，深受廣大人民群眾的喜愛，但在上述食品的制備過程中，會產(chǎn)生大量的含有豐富粗蛋白的下腳料，由于沒有合適的處理方法，常常只能丟棄了事，十分浪費。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)缺陷，提供一種利用章魚下腳料獲得抗氧化活性物質(zhì)和復合氨基酸的方法。
[0004]本發(fā)明的具體技術(shù)方案如下:
[0005]一種利用章魚下腳料獲得抗氧化活性物質(zhì)和復合氨基酸的方法，包括如下步驟:
[0006](1)將章魚下腳料去除雜質(zhì)、洗凈后，進行組織搗碎勻漿，得固液比為1:2.5?25的勻漿液；
[0007](2)在勻漿液中添加堿性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶或動物蛋白酶進行酶解后，通過抽濾、紗布過濾或離心進行固液分離，得第一清液，上述酶解的溫度為30?70°C，酶解pH值為4.5?10，酶解時間為(λ 25?6h;
[0008](3)用截留分子量1?lOkDa的超濾膜對第一清液進行分離處理，得第二清液和含有混合多肽活性物質(zhì)的超濾濃液，上述超濾膜的操作壓力為0.1?0.4MPa，液料流速為
2.5 ?12.5L/h ；
[0009](4)用截留分子量300?500Da納濾膜對第二清液進行分離處理得第三清液和納濾濃液，第三清液為復合氨基酸水解液，再對超濾濃液和納濾濃液進行凝膠柱層析純化后，合并得含有抗氧化活性物質(zhì)的總濃液，上述納濾膜的操作壓力為0.5?0.7MPa，凝膠柱層析純化所用的填料為DEAE-75、G75、G50或G25 ；
[0010](5)分別將總濃液和第三清液經(jīng)層析純化后進行-50°c冷凍干燥，即分別得到所述抗氧化活性物質(zhì)和所述復合氨基酸。
[0011]在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，酶解所用酶為堿性蛋白酶，酶解溫度為30?70°C，酶解pH為5?9，勻漿液固液比為1:5?25，酶添加量為0.05?0.4% ;酶解時間為1 ?3h0
[0012]在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，酶解所用酶為中性蛋白酶，酶解溫度為45?65°C，酶解pH為6?10，勻漿液固液比為1:10?20，酶添加量為0.1?0.4% ;酶解時間為 1.2 ?3.5h。
[0013]在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，酶解所用酶為木瓜蛋白酶，酶解溫度為40?65 V，酶解pH為4.5?8.5，勻漿液固液比為1:2.5?25，酶添加量為0.005?0.08% ;酶解時間為0.25?2h。
[0014]在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，酶解所用酶為動物蛋白酶，酶解溫度為40?65°C，酶解pH為5?9，勻漿液固液比為1:5?25，酶添加量為0.05?0.25% ;酶解時間為2?6h。
[0015]在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，所述步驟(2)離心的速度為4500r/min，時間為15min。
[0016]在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，所述步驟(2)的紗布過濾為8層紗布過濾。
[0017]在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，所述納濾膜為截留分子量300Da的芳香酰胺卷式納濾膜，操作壓力為0.6MPa。
[0018]在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，所述超濾膜為聚醚砜卷式超濾膜，其操作壓力為 0.25MPa。
[0019]在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，所述步驟(5)的層析純化所用的層析柱為DEAE-75、G75、G50或G25，洗脫液為去離子水，檢測波長220nm。
[0020]本發(fā)明的有益效果是:
[0021]1、本發(fā)明的方法用原來被丟棄的章魚下腳料，提取出抗氧化活性物質(zhì)和復合氨基酸，充分利用了資源，避免了浪費，減少了對環(huán)境的污染。
[0022]2、本發(fā)明的方法工藝過程簡單，設(shè)備要求低，適合工業(yè)化生產(chǎn)。

【具體實施方式】
[0023]以下通過【具體實施方式】本發(fā)明的技術(shù)方案進行進一步的說明和描述。
[0024]實施例1
[0025](1)將章魚內(nèi)臟去除雜質(zhì)、洗凈后，進行組織搗碎勻漿，得固液比為1:15的勻漿液；
[0026](2)在勻漿液中添加堿性蛋白酶進行酶解后，通過布氏漏斗抽濾(真空抽濾，1層中速定性濾紙)、8層紗布過濾(醫(yī)用脫脂紗布，90cm，規(guī)格:紗支2ΓΧ2Γ，密度30X28，過濾壓力0.3MPa,過濾流速llL/m2.h,過濾時間lOmin)或離心(4500r/min, 15min)進行固液分離，得第一清液，上述酶解溫度為50°C，酶解pH為8，酶添加量為0.4% ;酶解時間為
2.5h ；
[0027](3)用截留分子量1?lOkDa的聚醚砜卷式超濾膜對第一清液進行分離處理，得第二清液和含有混合多肽活性物質(zhì)的超濾濃液，上述超濾膜的操作壓力為0.25MPa，液料流速為 2.5 ?12.5L/h ；
[0028](4)用截留分子量300Da納濾膜對第二清液進行分離處理得第三清液和納濾濃液，第三清液為復合氨基酸水解液，再對超濾濃液和納濾濃液進行凝膠柱層析純化后，合并得含有抗氧化活性物質(zhì)的總濃液，該復合氨基酸水解液中氨基態(tài)氮含量為4.13g/100g，水解度為30.96%，富含17種氨基酸，氨基酸總含量達18.41g/100g，其中必需氨基酸含量為8.99g/100g，占總氨基酸含量的48.83%，上述納濾膜的操作壓力為0.6MPa，凝膠柱層析純化(柱尺寸80 X 60cm)所用的填料為DEAE-75、G75、G50或G25 ；
[0029](5)分別將總濃液和第三清液經(jīng)層析純化后進行-50°C冷凍干燥，即分別得到所述抗氧化活性物質(zhì)和所述復合氨基酸，該步驟層析純化所用的層析柱為DEAE-75、G75、G50或G25,洗脫液為去離子水,檢測波長220nm,柱體積80cmX 60cm,泵速9rpm,該抗氧化活性物質(zhì)的羥自由基(.0H)的清除率最高達78%左右。
[0030]實施例2
[0031](1)將章魚內(nèi)臟去除雜質(zhì)、洗凈后，進行組織搗碎勻漿，得固液比為1:20的勻漿液；
[0032](2)在勻漿液中添加中性蛋白酶進行酶解后，通過布氏漏斗抽濾(真空抽濾，1層中速定性濾紙)、8層紗布過濾(醫(yī)用脫脂紗布，90cm，規(guī)格:紗支2ΓΧ2Γ，密度30X28，過濾壓力0.3MPa,過濾流速llL/m2.h,過濾時間lOmin)或離心(4500r/min, 15min)進行固液分離，得第一清液，上述酶解溫度為50°C，酶解pH為7.5，酶添加量為0.3% ;酶解時間為
2.5h ；
[0033](3)用截留分子量1?lOkDa的聚醚砜卷式超濾膜對第一清液進行分離處理，得第二清液和含有混合多肽活性物質(zhì)的超濾濃液，上述超濾膜的操作壓力為0.25MPa，液料流速為 2.5 ?12.5L/h ；
[0034](4)用截留分子量300Da納濾膜對第二清液進行分離處理得第三清液和納濾濃液，第三清液為復合氨基酸水解液，再對超濾濃液和納濾濃液進行凝膠柱層析純化后，合并得含有抗氧化活性物質(zhì)的總濃液，該復合氨基酸水解液中氨基態(tài)氮含量為4.06g/100g，水解度為32.96%，氨基酸含量為17.54g/100g，必需氨基酸含量為8.39g/100g,占總氨基酸含量的47.83%，上述納濾膜的操作壓力為0.6MPa，凝膠柱層析純化(柱尺寸80X60cm)所用的填料為 DEAE-75、G75、G50 或 G25 ；
[0035](5)分別將總濃液和第三清液經(jīng)層析純化后進行-50°C冷凍干燥，即分別得到所述抗氧化活性物質(zhì)和所述復合氨基酸，該步驟層析純化所用的層析柱為DEAE-75、G75、G50或G25,洗脫液為去離子水，檢測波長220nm,柱體積80cmX 60cm,泵速9rpm,該抗氧化活性物質(zhì)的羥自由基(.0H)的清除率最高達86%左右。
[0036]實施例3
[0037](1)將章魚內(nèi)臟去除雜質(zhì)、洗凈后，進行組織搗碎勻漿，得固液比為1:20的勻漿液；
[0038](2)在勻漿液中添加木瓜蛋白酶進行酶解后，通過布氏漏斗抽濾(真空抽濾，1層中速定性濾紙)、8層紗布過濾(醫(yī)用脫脂紗布，90cm，規(guī)格:紗支2ΓΧ2Γ，密度30X28，過濾壓力0.3MPa,過濾流速llL/m2.h,過濾時間lOmin)或離心(4500r/min, 15min)進行固液分離，得第一清液，上述酶解溫度為60°C，酶解pH為7.5，酶添加量為0.03% ;酶解時間為 1.5h ;
[0039](3)用截留分子量1?lOkDa的聚醚砜卷式超濾膜對第一清液進行分離處理，得第二清液和含有混合多肽活性物質(zhì)的超濾濃液，上述超濾膜的操作壓力為0.25MPa，液料流速為 2.5 ?12.5L/h ；
[0040](4)用截留分子量300Da納濾膜對第二清液進行分離處理得第三清液和納濾濃液，第三清液為復合氨基酸水解液，再對超濾濃液和納濾濃液進行凝膠柱層析純化后，合并得含有抗氧化活性物質(zhì)的總濃液，該復合氨基酸水解液中氨基態(tài)氮含量為3.54g/100 go水解度為28.73%，氨基酸含量為17.19g/100g，必需氨基酸含量為8.73g/100g,占總氨基酸含量的50.79%，上述納濾膜的操作壓力為0.6MPa，凝膠柱層析純化(柱尺寸80X60cm)所用的填料為DEAE-75、G75、G50或G25, 220nm吸光度；；
[0041](6)分別將總濃液和第三清液經(jīng)層析純化后進行-50°C冷凍干燥，即分別得到所述抗氧化活性物質(zhì)和所述復合氨基酸，該步驟層析純化所用的層析柱為DEAE-75、G75、G50或G25,洗脫液為去離子水,檢測波長220nm,柱體積80cmX60cm,泵速9rpm,該抗氧化活性物質(zhì)的羥自由基(.0H)的清除率最高達80%左右。
[0042]實施例4
[0043](1)將章魚內(nèi)臟去除雜質(zhì)、洗凈后，進行組織搗碎勻漿，得固液比為1:3的勻漿液；
[0044](2)在勻漿液中添加動物蛋白酶進行酶解后，通過布氏漏斗抽濾(真空抽濾，1層中速定性濾紙)、8層紗布過濾(醫(yī)用脫脂紗布，90cm，規(guī)格:紗支2ΓΧ2Γ，密度30X28，過濾壓力0.3MPa,過濾流速llL/m2.h,過濾時間lOmin)或離心(4500r/min, 15min)進行固液分離，得第一清液，上述酶解溫度為50°C，酶解pH為6.0，酶添加量為0.2% ;酶解時間為2h ；
[0045](3)用截留分子量1?lOkDa的聚醚砜卷式超濾膜對第一清液進行分離處理，得第二清液和含有混合多肽活性物質(zhì)的超濾濃液，上述超濾膜的操作壓力為0.25MPa，液料流速為 2.5 ?12.5L/h ；
[0046](4)用截留分子量300Da納濾膜對第二清液進行分離處理得第三清液和納濾濃液，第三清液為復合氨基酸水解液，再對超濾濃液和納濾濃液進行凝膠柱層析純化后，合并得含有抗氧化活性物質(zhì)的總濃液，該復合氨基酸水解液中氨基態(tài)氮含量為5.53g/100g,水解度為72.39%，氨基酸含量為19.85g/100g，必需氨基酸含量為10.lg/100g,占總氨基酸含量的50.88%，上述納濾膜的操作壓力為0.6MPa，凝膠柱層析純化所用的填料為DEAE-75、G75、G50 或G25 ；
[0047](6)分別將總濃液和第三清液經(jīng)層析純化后進行-50°C冷凍干燥，即分別得到所述抗氧化活性物質(zhì)和所述復合氨基酸，該步驟層析純化所用的層析柱為DEAE-75、G75、G50或G25,洗脫液為去離子水,檢測波長220nm,柱體積80cmX60cm,泵速9rpm,該抗氧化活性物質(zhì)的羥自由基(.0H)的清除率最高達86%左右。
[0048]實施例5
[0049](1)將章魚下腳料去除雜質(zhì)、洗凈后，進行組織搗碎勻漿，得固液比為1:2.5?25的勻漿液；
[0050](2)在勻漿液中添加堿性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶或動物蛋白酶進行酶解后，通過布氏漏斗抽濾(真空抽濾，1層中速定性濾紙)、8層紗布過濾(醫(yī)用脫脂紗布，90cm，規(guī)格:紗支2ΓΧ2Γ，密度30X28，過濾壓力0.3MPa，過濾流速llL/m2.h，過濾時間lOmin)或離心(4500r/min, 15min)進行固液分離，得第一清液，上述酶解的溫度為30?70°C，酶解pH值為4.5?10，酶解時間為0.25?6h，其中:堿性蛋白酶的酶解溫度為30?70°C，酶解pH為5?9，勻漿液固液比為1:5?25，酶添加量為0.05?0.4% ;酶解時間為1?3h沖性蛋白酶的酶解溫度為45?65°C，酶解pH為6?10，勻漿液固液比為1:10?20，酶添加量為0.1?0.4%;酶解時間為1.2?3.5h ;木瓜蛋白酶的酶解溫度為40?65°C，酶解pH為4.5?8.5，勻漿液固液比為1:2.5?25，酶添加量為0.005?0.08% ;動物蛋白酶的酶解時間為0.25?2h ;動物蛋白酶，酶解溫度為40?65°C，酶解pH為5?9，勻漿液固液比為1:5?25，酶添加量為0.05?0.25% ;酶解時間為2?6h ;
[0051](3)用截留分子量1?lOkDa的聚醚砜卷式超濾膜對第一清液進行分離處理，得第二清液和含有混合多肽活性物質(zhì)的超濾濃液，上述超濾膜的操作壓力為0.1?0.4MPa，液料流速為2.5?12.5L/h ；
[0052](4)用截留分子量300?500Da納濾膜對第二清液進行分離處理得第三清液和納濾濃液，第三清液為復合氨基酸水解液，再對超濾濃液和納濾濃液進行凝膠柱層析純化后，合并得含有抗氧化活性物質(zhì)的總濃液，上述納濾膜的操作壓力為0.5?0.7MPa，凝膠柱層析純化(柱尺寸80 X 60cm)所用的填料為DEAE-75、G75、G50或G25 ；
[0053](5)分別將總濃液和第三清液經(jīng)層析純化后進行-50°C冷凍干燥，該步驟層析純化所用的層析柱為DEAE-75、G75、G50或G25，洗脫液為去離子水，檢測波長220nm，柱體積80cmX60cm,泵速9rpm,即分別得到所述抗氧化活性物質(zhì)和所述復合氨基酸。
[0054]以上所述，僅為本發(fā)明的較佳實施例而已，故不能依此限定本發(fā)明實施的范圍，SP依本發(fā)明專利范圍及說明書內(nèi)容所作的等效變化與修飾，皆應仍屬本發(fā)明涵蓋的范圍內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種利用章魚下腳料獲得抗氧化活性物質(zhì)和復合氨基酸的方法，其特征在于:包括如下步驟: (1)將章魚下腳料去除雜質(zhì)、洗凈后，進行組織搗碎勻漿，得固液比為1:2.5?25的勻漿液； (2)在勻漿液中添加堿性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶或動物蛋白酶進行酶解后，通過抽濾、紗布過濾或離心進行固液分離，得第一清液，上述酶解的溫度為30?70°C，酶解pH值為4.5?10，酶解時間為0.25?6h ; (3)用截留分子量1?lOkDa的超濾膜對第一清液進行分離處理，得第二清液和含有混合多肽活性物質(zhì)的超濾濃液，上述超濾膜的操作壓力為0.1?0.4MPa，液料流速為2.5?12.5L/h ； (4)用截留分子量300?500Da納濾膜對第二清液進行分離處理得第三清液和納濾濃液，第三清液為復合氨基酸水解液，再對超濾濃液和納濾濃液進行凝膠柱層析純化后，合并得含有抗氧化活性物質(zhì)的總濃液，上述納濾膜的操作壓力為0.5?0.7MPa，凝膠柱層析純化所用的填料為DEAE-75、G75、G50或G25 ； (5)分別將總濃液和第三清液經(jīng)層析純化后進行-50°C冷凍干燥，即分別得到所述抗氧化活性物質(zhì)和所述復合氨基酸。
2.如權(quán)利要求1所述的一種利用章魚下腳料獲得抗氧化活性物質(zhì)和復合氨基酸的方法，其特征在于:酶解所用酶為堿性蛋白酶，酶解溫度為30?70°C，酶解pH為5?9，勻漿液固液比為1:5?25，酶添加量為0.05?0.4% ;酶解時間為1?3h。
3.如權(quán)利要求1所述的一種利用章魚下腳料獲得抗氧化活性物質(zhì)和復合氨基酸的方法，其特征在于:酶解所用酶為中性蛋白酶，酶解溫度為45?65°C，酶解pH為6?10，勻漿液固液比為1:10?20，酶添加量為0.1?0.4% ;酶解時間為1.2?3.5h。
4.如權(quán)利要求1所述的一種利用章魚下腳料獲得抗氧化活性物質(zhì)和復合氨基酸的方法，其特征在于:酶解所用酶為木瓜蛋白酶，酶解溫度為40?65°C，酶解pH為4.5?8.5，勻漿液固液比為1:2.5?25，酶添加量為0.005?0.08% ;酶解時間為0.25?2h。
5.如權(quán)利要求1所述的一種利用章魚下腳料獲得抗氧化活性物質(zhì)和復合氨基酸的方法，其特征在于:酶解所用酶為動物蛋白酶，酶解溫度為40?65°C，酶解pH為5?9，勻漿液固液比為1:5?25，酶添加量為0.05?0.25% ;酶解時間為2?6h。
6.如權(quán)利要求1所述的一種利用章魚下腳料獲得抗氧化活性物質(zhì)和復合氨基酸的方法，其特征在于:所述步驟(2)離心的速度為4500r/min,時間為15min。
7.如權(quán)利要求1所述的一種利用章魚下腳料獲得抗氧化活性物質(zhì)和復合氨基酸的方法，其特征在于:所述步驟(2)的紗布過濾為8層紗布過濾。
8.如權(quán)利要求1所述的一種利用章魚下腳料獲得抗氧化活性物質(zhì)和復合氨基酸的方法，其特征在于:所述納濾膜為截留分子量300Da的芳香酰胺卷式納濾膜，操作壓力為0.6MPa。
9.如權(quán)利要求1所述的一種利用章魚下腳料獲得抗氧化活性物質(zhì)和復合氨基酸的方法，其特征在于:所述超濾膜為聚醚砜卷式超濾膜，其操作壓力為0.25MPa。
10.如權(quán)利要求1所述的一種利用章魚下腳料獲得抗氧化活性物質(zhì)和復合氨基酸的方法，其特征在于:所述步驟(5)的層析純化所用的層析柱為DEAE-75、G75、G50或G25，洗脫液為去離子水，檢測波長220nm。
【文檔編號】C12P21/06GK104372056SQ201410640894
【公開日】2015年2月25日 申請日期:2014年11月13日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月13日
【發(fā)明者】黃惠莉, 張爽, 張育榮, 張鷺鷹, 王開明 申請人:華僑大學, 廈門東海洋水產(chǎn)品有限公司