產(chǎn)生清潔味道的酶制劑的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及產(chǎn)生清潔味道的酶制劑。本發(fā)明描述了一種細(xì)胞內(nèi)生產(chǎn)的乳糖酶，其包含相對于每NLU的乳糖酶活性而言少于40個(gè)單位的芳基硫酸酯酶活性。本發(fā)明還提供了包括用酶制劑處理底物的工藝，其中所述酶制劑基本不含芳基硫酸酯酶。
【專利說明】產(chǎn)生清潔味道的酶制劑
[0001] 本發(fā)明是申請日為2006年11月28日、申請?zhí)枮?00680044411. 4、題為"產(chǎn)生清 潔味道的酶制劑"的申請的分案申請。

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0002] 本發(fā)明涉及用酶制劑處理底物的方法、新穎的酶制劑和用于制備酶制劑的過程。 本發(fā)明還涉及乳糖酶。 技術(shù)背景
[0003] 酶改善食品級別產(chǎn)物的化學(xué)性質(zhì)、物理化學(xué)性質(zhì)或感官覺（organoleptic)性質(zhì) 的用途是廣泛的。在對牛奶和其它動物衍生的底物的加工中，酶的使用使最終產(chǎn)物增加了 顯著的價(jià)值。例子是用乳酸酶孵育使得奶能被乳糖不耐受個(gè)體接受，對酪蛋白和乳清蛋白 的蛋白水解來減輕變應(yīng)原性，并促進(jìn)泡沫特性，使用磷脂酶A2修飾卵磷脂來改善烘焙性能 并穩(wěn)定蛋黃醬，對肉和魚制品使用轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶來改善硬度和彈性，以及通過添加葡萄糖 氧化酶從蛋制品或搓碎的乳酪中去除氧。另外，酶處理被用于增強(qiáng)多種動物衍生食品的香 味。例如，蛋白酶被用于加速魚和肉提取物中的香味發(fā)生。另外，在乳酪中加速香味發(fā)生是 公知的目標(biāo)。盡管EMC(經(jīng)酶改良的乳酪）是其中最初使用多種脂酶的成熟制品，但是通過 添加少量的胞外蛋白酶（exoprotease)、脂酶或酯酶來加速乳酪老化中涉及的細(xì)微的味道 改變是更近期的發(fā)展。
[0004] 本發(fā)明還涉及乳糖酶。乳糖酶或0 -半乳糖苷酶（E. C :3. 2. 1. 23)是催化乳糖（一 種二糖）水解為其組分--單糖葡萄糖和半乳糖的酶。乳糖存在于乳制品中，更特別地存 在于奶、脫脂奶、奶油和其它乳制品中。天然存在的乳糖酶對乳糖的降解發(fā)生在人體（和其 它哺乳動物）腸壁中。
[0005] 乳糖在缺乏乳糖酶的大部分種群中引起的營養(yǎng)和功能問題是公知的，并且被描述 過。這類種群的成員不能夠水解乳糖，乳糖在這類情況下進(jìn)入大腸，在那里導(dǎo)致脫水、弱的 鈣吸收、腹瀉、腸胃氣脹、噯氣和痛性痙攣（cramp)，甚至在嚴(yán)重的情況下導(dǎo)致水樣爆炸性腹 瀉（watery explosive diarrhoea)〇
[0006] 乳糖酶的一種重要的工業(yè)應(yīng)用是生產(chǎn)供乳糖不耐受個(gè)體用的、乳糖經(jīng)水解的乳制 品。這類經(jīng)水解的乳制品包括巴氏滅菌奶、UHT-奶和從其所有或部分的最初組分經(jīng)過或不 經(jīng)過中間加工步驟（如蛋白質(zhì)水解）重建的奶。用乳糖酶的處理可以在對奶進(jìn)行熱處理之 前或之后進(jìn)行?？梢酝ㄟ^向奶中添加所述酶進(jìn)行乳糖酶處理。乳糖的可溶性特性使其可導(dǎo) 致結(jié)晶，導(dǎo)致砂質(zhì)（sandy)或砂樣（gritty)結(jié)構(gòu)。這類不期望的結(jié)構(gòu)可存在于一些乳制品 (如煉乳、淡奶、奶粉、冰凍奶、冰激凌）中和具有高乳含量的糖果制品中。乳糖酶對乳糖的 完全或部分水解解決了該問題，提供了具有均一質(zhì)地的制品，且使得消費(fèi)者更能接受。
[0007] 乳糖酶的另一工業(yè)應(yīng)用是提高含乳糖制品如奶或酸奶中的甜味。這類制品中，乳 糖的水解產(chǎn)生了葡萄糖，從而導(dǎo)致甜味提高。乳糖酶的另一工業(yè)應(yīng)用是水解含有乳成分的 乳糖制品如面包。將乳糖添加進(jìn)這類制品中以增加香味、保持水分、提供褐色和改善烘烤特 性。在例如增強(qiáng)外皮顏色發(fā)生、改善香味和風(fēng)味、改變結(jié)構(gòu)、延長保質(zhì)期（shelf life)和增 強(qiáng)面包結(jié)構(gòu)的方面，經(jīng)水解的乳糖糖漿是有希望的。
[0008] 發(fā)酵的乳制品（如酸奶）中，通過乳糖酶進(jìn)行的乳糖水解將增加甜味。然而，當(dāng)在 開始發(fā)酵加工前添加乳糖酶時(shí)，其可能提高酸發(fā)生的速率，從而減少加工時(shí)間。對奶或奶衍 生制品（如乳清）的乳糖酶處理使得這類制品適用于在針對乳糖不耐受動物（如貓）的動 物飼料和寵物飼料中應(yīng)用。乳糖水解允許制造更高濃度的乳清，同時(shí)預(yù)防與前文針對乳糖 缺陷患者所述相似的腸道問題。經(jīng)乳糖酶水解的乳清被濃縮，產(chǎn)生含70-75%固體的糖漿， 其被用作為冰激凌、烘焙制品和糖果制品中的食物成分。
[0009] 乳糖酶已經(jīng)被描述過，其分離自大量生物，包括微生物。乳糖酶通常是微生物 如 Kluyveromyces 和 Bacillus 的細(xì)胞內(nèi)成分。Kluyveromyces 和特別是 K. fragilis 和 K. lactis，和其它酵母如Candida、Torula和Torulopsis屬的酵母是酵母酶乳糖酶的常見 來源，而B. coagulans或B circulans是細(xì)菌乳糖酶的公知來源?？梢垣@得來自這些生物 的若干種商業(yè)乳糖酶制劑，如Maxilact?(來自K. lactis，由DSM，Deflt，荷蘭生產(chǎn)）。所 有這些乳糖酶是所謂的中性乳糖酶，因?yàn)樗鼈兙哂衟H = 6和pH = 8之間的pH最適度。若 干種生物如Aspergillus niger和Aspergilus oryzae能夠生產(chǎn)細(xì)胞外乳糖酶，US專利 5, 736, 374描述了這類乳糖酶的一個(gè)例子，其由Aspergilllus oryzae生產(chǎn)。乳糖酶的特性 如pH和溫度最適度在物種之間變化。然而，通常，被分泌的乳糖酶顯示pH = 3. 5到pH = 5. 0的較低pH最適度；而細(xì)胞內(nèi)乳糖酶通常顯示在pH = 6. 0到pH = 7. 5區(qū)域內(nèi)的較高pH 最適度，但是這些一般規(guī)則有例外發(fā)生。對中性或酸性乳酸酶的選擇取決于應(yīng)用中的pH模 式。在中性pH的應(yīng)用中，中性乳酸酶通常是優(yōu)選的；這類應(yīng)用包括奶、冰激凌、乳清、乳酪、 酸奶、奶粉等。酸性乳酸酶更適合于在酸性范圍內(nèi)應(yīng)用。合適的乳酸酶濃度取決于最初的 乳糖濃度，所需的水解程度、pH、溫度和水解時(shí)間。
[0010] 盡管酶處理的目的在于改善食品的功能性和/或味道模式，但是偶然地，酶處理 可能具有意外的和不希望的副作用。不希望的副作用的一個(gè)例子是酶處理導(dǎo)致的異味的發(fā) 生。
[0011] Mettall et. al,The Australian Journal of Dairy Technology, (1991),46-48 描述了用乳糖酶處理乳時(shí)發(fā)生異味的問題。根據(jù)該出版物，高水平的蛋白酶會導(dǎo)致異味的 快速產(chǎn)生。因此生產(chǎn)操作被最優(yōu)化，以使得蛋白水解副活性最小化，從而降低異味形成的風(fēng) 險(xiǎn)。針對K lactis衍生的乳糖酶的純化操作的一個(gè)例子被描述于W0 02/081673中。
[0012] 人們發(fā)現(xiàn)，甚至具有低蛋白酶活性的乳糖酶制劑仍然能夠引起異味形成。在來自 酵母細(xì)胞質(zhì)的中性乳糖酶的情況下尤其如此。與乳糖酶制劑使用相關(guān)的異味形成對于乳糖 水解的UHT奶來說是特別關(guān)鍵的。用于該情況的乳糖酶是中性乳糖酶，因?yàn)樗鼈兙哂袑δ?來說良好的pH最適度。UHT奶接受高熱處理，以獲得室溫下若干月的保質(zhì)期。冰箱外的長 時(shí)間儲存使得這些制品特別容易形成異味：即使是非常慢的異味形成速率也能夠在幾個(gè)月 的儲存后導(dǎo)致顯著的異味形成，使得產(chǎn)物對消費(fèi)沒有吸引力。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0013] 目前，我們驚奇地發(fā)現(xiàn)，用酶制劑處理底物時(shí)，酶制劑中作為污染副活性存在的芳 基硫酸酯酶（即便是非常低的水平）能夠在產(chǎn)物中導(dǎo)致異味的強(qiáng)烈發(fā)生，而使用沒有芳基 硫酸酯酶活性或有降低的芳基硫酸酯酶活性的酶制劑則導(dǎo)致異味發(fā)生的強(qiáng)烈減少。
[0014] 因此，本發(fā)明提供了一種工藝，在一個(gè)方面，包括用酶制劑處理底物的工藝，其中 所述酶制劑基本不含芳基硫酸酯酶。
[0015] 本發(fā)明其它方面還提供了基本不含芳基硫酸酯酶的酶制劑。
[0016] 本發(fā)明在一個(gè)具體的方法還提供了相對于每NLU乳糖酶活性而言包含少于40個(gè) 單位的芳基硫酸酯酶活性的乳糖酶。
[0017] 根據(jù)本發(fā)明的乳糖酶制劑可有利地用于食品和飼料制品中，以水解乳糖，而不形 成異味化合物。
[0018] 我們驚奇地發(fā)現(xiàn)芳基硫酸酯酶是負(fù)責(zé)異味形成的決定性酶活性。我們通過對UHT 奶添加芳香族硫酸酯酶發(fā)現(xiàn)了確定的證據(jù)，所述添加導(dǎo)致該單種酶能夠模擬通常在乳糖酶 處理的UHT奶中觀察到的異味。
[0019] 雖然不希望受任何科學(xué)理論束縛，但是我們相信芳香族硫酸酯酶對代謝綴合物 (尤其是用硫酸酯基團(tuán)取代的烷基苯酚）的水解是導(dǎo)致異味發(fā)生的機(jī)制。因此，根據(jù)本發(fā)明 的酶制劑特別有利于處理含有用硫酸酯基團(tuán)取代的烷基苯酚的底物。
[0020] 發(fā)明詳沭
[0021] 本發(fā)明的一個(gè)方面提供了相對于每NLU乳糖酶活性而言包含少于40單位芳基硫 酸酯酶活性的乳糖酶。優(yōu)選地，該乳糖酶相對于每NLU乳糖酶活性而言包含少于30個(gè)單位 的芳基硫酸酯酶活性，更優(yōu)選地相對于每NLU乳糖酶活性而言少于20單位的芳基硫酸酯酶 活性，最優(yōu)選地相對于每NLU乳糖酶活性而言少于10單位的芳基硫酸酯酶活性。芳基硫酸 酯酶單位在實(shí)施例2中有定義，并針對以NLU表達(dá)的乳糖酶活性（也在實(shí)施例2中定義） 對其進(jìn)行了標(biāo)準(zhǔn)化。
[0022] 乳糖酶可以是細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞外生產(chǎn)的乳糖酶。在一種優(yōu)選的實(shí)施方案中，乳糖酶 是細(xì)胞內(nèi)生產(chǎn)的乳糖酶。
[0023] 在一種優(yōu)選的實(shí)施方案中，乳糖酶是中性乳糖酶。中性乳糖酶具有pH= 6和pH =8之間的pH最適度。
[0024] 中性乳糖酶制劑通常來自微生物的細(xì)胞質(zhì)。對它們的生產(chǎn)包括微生物的（大規(guī) 模）發(fā)酵，隨后是乳糖酶的分離。后者要求破壞細(xì)胞壁從而將酶從細(xì)胞質(zhì)中釋放。若干種 技術(shù)已經(jīng)被用于獲得細(xì)胞裂解物，包括通過有機(jī)溶劑（如辛醇）、超聲波處理或弗氏細(xì)胞壓 碎器（French Pressing)使細(xì)胞壁可透過。除乳糖酶外的其它酶（包括蛋白酶）同時(shí)從細(xì) 胞質(zhì)中被釋放。
[0025] 在一種優(yōu)選的實(shí)施方案中，乳糖酶具有相對于每NLU乳糖酶活性而言少于 0. 5RFU/分鐘的蛋白酶活性。
[0026] 已經(jīng)針對大量生物（包括微生物）描述了可以根據(jù)本發(fā)明的方法純化的細(xì)胞內(nèi)乳 糖酶，并從所述生物中分離出來。乳糖酶通常是微生物如Kluyveromyces和Bacillus的細(xì) 胞內(nèi)成分。Kluyveromyces和特別是K. lactis、K marxinus和K. fragilis，和其它酵母如 Candida、Torula和Torulopsis屬的酵母是酵母酶乳糖酶的常見來源，而B. coagulans或B circulars是細(xì)菌乳糖酶的公知來源。可以獲得來自這些生物的若干種商業(yè)乳糖酶制劑，如 Maxilact?(來自K. lactis，由DSM生產(chǎn)）。所有這些乳糖酶是所謂的中性乳糖酶，因?yàn)樗?們具有pH= 6和pH= 8之間的pH最適度。
[0027] 已經(jīng)針對多個(gè)物種描述了細(xì)胞內(nèi)乳糖酶，對它們中的若干種而言，它們的氨 基酸序列和/或DNA序列是已知的。序列信息可由公眾在序列數(shù)據(jù)庫中獲得，例如在 GenBank (Bethesda, Maryland USA)、European Molecular Biology Laboratory's European Bioinformatics Institute(EMBL-Bank in Hinxton, UK)、 the DNA Data Bank of Japan(Mishima，日本）和the Swissprot (瑞士）中獲得?？梢愿鶕?jù)基因和/或蛋白質(zhì) 序列中的同源性在基因組中鑒定乳糖酶。細(xì)胞內(nèi)酶的粗制劑的特征在于存在若干種僅存在 于細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中的酶，例如涉及細(xì)胞中心代謝的酶，包括涉及糖酵解的酶。
[0028] 細(xì)胞外乳糖酶也已經(jīng)被描述過。它們通常因?yàn)楹蟹Q作前導(dǎo)序列的肽序列而被認(rèn) 為是細(xì)胞外酶。所述前導(dǎo)序列以某些方式被生產(chǎn)酶的細(xì)胞識別為所述酶應(yīng)當(dāng)被輸送至細(xì)胞 外的信號。在分泌期間，前導(dǎo)序列通常被去除。已經(jīng)針對多種物種描述了細(xì)胞外乳糖酶，例 如Aspergillus oryzae。細(xì)胞外乳糖酶的粗制劑特征在于不存在細(xì)胞內(nèi)酶并且存在典型的 細(xì)胞外酶，如蛋白酶。人們發(fā)現(xiàn)細(xì)胞外酶的種類隨生物而不同，它們對于所述生物來說是典 型的。因?yàn)榘l(fā)酵或加工期間的細(xì)胞裂解，故而這類細(xì)胞外酶制劑中可存在低水平的細(xì)胞內(nèi) 酶。
[0029] 因此，可以根據(jù)乳糖酶與其它已知乳糖酶的氨基酸序列比較為基礎(chǔ)，將其分類為 細(xì)胞外或細(xì)胞內(nèi)的。原則上，細(xì)胞內(nèi)乳糖酶可以與前導(dǎo)序列一起提供。這可能導(dǎo)致乳糖酶 從細(xì)胞中分泌進(jìn)入培養(yǎng)基。在存在典型的細(xì)胞外酶和不存在或以低水平存在典型的細(xì)胞內(nèi) 酶時(shí)，這類酶的粗制劑的特征將在于基于其氨基酸序列被歸類為細(xì)胞內(nèi)的乳糖酶。
[0030] 本發(fā)明使用的優(yōu)選的細(xì)胞內(nèi)乳糖酶為：具有http ://www. ebi. uniprot. org/ entry/BGAL_KLULA所述的氨基酸序列的K. lactis乳糖酶，或具有與K. lactis的氨基酸序 列至少90%、優(yōu)選至少95%相同的氨基酸序列的乳糖酶。具有http ://www. ebi. uniprot. org/entry/Q6QTF4_KLUMA所述氨基酸序列的K. marxianus乳糖酶，或具有與K. lactis的 氨基酸序列至少90%、優(yōu)選至少95%相同的氨基酸序列的乳糖酶。具有http ://www. ebi.

【權(quán)利要求】
1. 乳糖酶，其包含相對每NLU乳糖酶活性而言少于40個(gè)單位芳基硫酸酯酶活性。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1的乳糖酶,其包含相對每NLU乳糖酶活性單位而言少于30個(gè)單位的 芳基硫酸酯酶活性，更優(yōu)選地相對每NLU乳糖酶活性而言少于20個(gè)單位的芳基硫酸酯酶活 性，最優(yōu)選地相對每NLU乳糖酶活性而言少于10個(gè)單位的芳基硫酸酯酶活性。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2的乳糖酶，其為細(xì)胞內(nèi)生產(chǎn)的乳糖酶。
4. 根據(jù)前述權(quán)利要求任何一項(xiàng)的乳糖酶，其為中性乳糖酶，優(yōu)選地為K. lactis乳糖 酶。
5. 根據(jù)前述權(quán)利要求任何一項(xiàng)的乳糖酶，其具有pH = 6和pH = 8之間的pH最適度。
6. 根據(jù)前述權(quán)利要求任何一項(xiàng)的乳糖酶，其具有每NLU乳糖酶活性少于0. 5RFU/分鐘 的蛋白酶活性。
7. 包含權(quán)利要求1到6中任一項(xiàng)的乳糖酶的組合物。
8. 乳制品，其包含權(quán)利要求1到6中任一項(xiàng)的乳糖酶或權(quán)利要求7的組合物。
9. 生產(chǎn)乳制品的工藝，所述工藝包括向包含乳糖的乳制品中添加權(quán)利要求1到6中任 一項(xiàng)的乳糖酶或權(quán)利要求7的組合物。
10. 生產(chǎn)下述乳制品的工藝，所述乳制品沒有芳基硫酸酯酶產(chǎn)生的異味，所述工藝包括 使用權(quán)利要求1到6中任一項(xiàng)的乳糖酶或權(quán)利要求7的組合物。
11. 純化含乳糖酶的酶制劑的工藝，所述工藝包括使用色譜法從乳糖酶中分離芳基硫 酸酯酶。
12. -種工藝，其包括用酶制劑處理底物，其中所述酶制劑基本不含芳基硫酸酯酶。
13. 根據(jù)權(quán)利要求12的工藝，其中所述酶制劑是根據(jù)權(quán)利要求36到43中任一項(xiàng)的酶 制劑。
14. 根據(jù)權(quán)利要求10或13的工藝，其中所述工藝包括通過根據(jù)權(quán)利要求23到25中任 一項(xiàng)或權(quán)利要求34或35的工藝獲得所述酶制劑。
15. 根據(jù)權(quán)利要求10到14中任一項(xiàng)的工藝，其中所述底物是蛋白質(zhì)性質(zhì)的底物。
16. 根據(jù)權(quán)利要求10到15中任一項(xiàng)的工藝，其中所述底物含有用硫酸酯基團(tuán)取代的烷 基苯酚。
17. 根據(jù)權(quán)利要求10到16中任一項(xiàng)的工藝，其中所述底物含有乳蛋白，例如酪蛋白和 /或乳清蛋白。
18. 根據(jù)權(quán)利要求10到17中任一項(xiàng)的工藝，其中所述底物為奶、經(jīng)發(fā)酵的乳制品，例如 酸奶、乳清、水解產(chǎn)物，和/或肉。
19. 根據(jù)權(quán)利要求10到18中任一項(xiàng)的工藝，其中所述處理期間所述底物中芳基硫酸酯 酶水平為每升底物至多500*10E3芳基硫酸酯酶單位，優(yōu)選地每升底物至多250*10E3、優(yōu)選 地至多100*10E3、優(yōu)選地至多50*10E3、優(yōu)選地至多25*10E3芳基硫酸酯酶單位。
20. 根據(jù)權(quán)利要求10到19中任一項(xiàng)的工藝，其中所述酶制劑包含乳糖酶、蛋白酶、脂酶 或酯酶。
21. 根據(jù)權(quán)利要求10到20中任一項(xiàng)的工藝，其為用于制備營養(yǎng)制品（例如乳制品）的 工藝。
22. 可以通過根據(jù)權(quán)利要求10到21中任一項(xiàng)的工藝獲得的制品。
23. 用于制備酶制劑的工藝，所述工藝包括純化粗酶制劑，所述粗酶制劑含有感興趣的 酶和芳基硫酸酯酶，其中芳基硫酸酯酶與所述感興趣的酶分離。
24. 根據(jù)權(quán)利要求23的工藝，其中所述純化導(dǎo)致芳基硫酸酯酶活性降低至少50%、優(yōu) 選地至少80 %、更優(yōu)選地至少90 %、更優(yōu)選地至少95 %、更優(yōu)選地至少99 %。
25. 根據(jù)權(quán)利要求23或24的工藝，其中所述純化通過色譜，優(yōu)選地在單一色譜分離步 驟中進(jìn)行。
26. 生產(chǎn)下述宿主細(xì)胞的工藝，所述宿主細(xì)胞是芳基硫酸酯酶缺陷菌株，所述工藝包括 將生產(chǎn)芳基硫酸酯酶的培養(yǎng)物置于下述條件下，所述條件下，所述培養(yǎng)物的部分被修飾，以 形成芳基硫酸酯酶缺陷的宿主細(xì)胞，并分離所述宿主細(xì)胞。
27. 根據(jù)權(quán)利要求26的工藝，其中使用誘變條件，優(yōu)選地使用隨機(jī)誘變條件，例如物理 或化學(xué)誘變。
28. 根據(jù)權(quán)利要求26的工藝，其中使用重組遺傳操作技術(shù)，優(yōu)選地使用一步基因打斷、 標(biāo)記物插入、定點(diǎn)誘變、缺失、RNA干擾、反義RNA。
29. 通過下述方法生產(chǎn)多肽的工藝，所述方法包括： (a) 在有益于多肽表達(dá)的條件下，在營養(yǎng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)芳基硫酸酯酶缺陷型宿主細(xì)胞 (b) 在所述宿主細(xì)胞中表達(dá)所述多肽，和 (c) 可選地，從所述營養(yǎng)培養(yǎng)基或從所述宿主細(xì)胞中回收所述多肽。
30. 通過下述方法生產(chǎn)多肽的工藝，所述方法包括： (a) 用表達(dá)載體轉(zhuǎn)化芳基硫酸酯酶缺陷型宿主細(xì)胞，其中所述載體表達(dá)所述多肽， (b) 在有益于所述多肽表達(dá)的條件下，在營養(yǎng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)所述宿主細(xì)胞， (c) 在所述宿主細(xì)胞中表達(dá)所述多肽，和 (d) 可選地，從所述營養(yǎng)培養(yǎng)基或從所述宿主細(xì)胞中回收所述多肽。
31. 通過下述方法生產(chǎn)多肽的工藝，所述方法包括： (a) 在禁止芳基硫酸酯酶生產(chǎn)的營養(yǎng)培養(yǎng)基中和在有益于所述多肽表達(dá)的條件下，培 養(yǎng)宿主細(xì)胞 (b) 在所述宿主細(xì)胞中表達(dá)所述多肽，和 (c) 可選地，從所述營養(yǎng)培養(yǎng)基或從所述宿主細(xì)胞中回收多肽。
32. 通過下述方法生產(chǎn)多肽的工藝，所述方法包括： (a) 用表達(dá)載體轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞，其中所述載體表達(dá)所述多肽， (b) 在禁止生產(chǎn)芳基硫酸酯酶的營養(yǎng)培養(yǎng)基中和在有益于所述多肽表達(dá)的條件下，培 養(yǎng)所述宿主細(xì)胞， (c) 在所述宿主細(xì)胞中表達(dá)所述多肽，和 (d) 可選地，從所述營養(yǎng)培養(yǎng)基或從所述宿主細(xì)胞中回收所述多肽。
33. 根據(jù)權(quán)利要求29到32中任一項(xiàng)的工藝，其中所述多肽是酶。
34. 用于制備酶制劑的工藝，所述工藝包括：通過根據(jù)權(quán)利要求33的工藝來制備酶，和 從所述營養(yǎng)培養(yǎng)基或從所述宿主細(xì)胞中回收酶制劑。
35. 根據(jù)權(quán)利要求23到25中任一項(xiàng)或權(quán)利要求33或34的工藝，其中所述酶是乳糖 酶、蛋白酶、脂酶或酯酶。
36. 能夠通過根據(jù)權(quán)利要求23到35中任一項(xiàng)或權(quán)利要求35的工藝獲得的酶制劑。
37. 根據(jù)權(quán)利要求12到36中任一項(xiàng)的酶制劑，其中所述酶制劑包括乳糖酶、蛋白酶、月旨 酶和/或酯酶。
38. 包含羧肽酶的酶制劑，其含有相對于每CPG而言少于10000個(gè)單位的芳基硫酸酯酶 活性。
39. 根據(jù)權(quán)利要求38的酶制劑，其含有相對于每CPG而言少于1000個(gè)單位、優(yōu)選地少 于100個(gè)單位、優(yōu)選地少于50、優(yōu)選地少于10個(gè)單位的芳基硫酸酯酶活性。
40. 包含脯氨酸特異蛋白酶的酶制劑，其含有相對于每而言少于300*10E3個(gè)單位 的芳基硫酸酯酶活性。
41. 根據(jù)權(quán)利要求40的酶制劑，其含有相對于每PPU而言少于100*10E3個(gè)單位的芳基 硫酸酯酶。
42. 包含乳糖酶的酶制劑，所述酶制劑含有相對于每NLU的乳糖酶活性而言少于40個(gè) 單位的芳基硫酸酯酶活性。
43. 根據(jù)權(quán)利要求42的酶制劑，其含有每NLU乳糖酶活性少于30個(gè)單位的芳基硫酸 酯酶活性，更優(yōu)選地每NLU乳糖酶活性少于20個(gè)單位的芳基硫酸酯酶活性，最優(yōu)選地每NLU 乳糖酶活性少于10個(gè)單位的芳基硫酸酯酶活性。
44. 根據(jù)權(quán)利要求36到43中任一項(xiàng)的酶制劑用于制備乳制品的用途。
45. 根據(jù)權(quán)利要求36到43中任一項(xiàng)的酶制劑用于預(yù)防或減少異味發(fā)生的用途。
【文檔編號】C12N9/48GK104450647SQ201410645968
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2006年11月28日 優(yōu)先權(quán)日:2005年11月28日
【發(fā)明者】馬克西米利安·彼得·馬莉亞·斯瓦夫·德, 阿伯圖斯·阿拉德·蒂克·范, 路泊·伊登斯, 彼得呂斯·雅各布斯·西奧多瑞斯·蒂克爾 申請人:帝斯曼知識產(chǎn)權(quán)資產(chǎn)管理有限公司