假單胞菌及其用途
【專利摘要】本發(fā)明涉及微生物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體公開一種假單胞菌及其用途。本發(fā)明的假單胞菌已于2014年9月9日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏名稱為：Pseudonomonas sp.SY-HP-11，保藏編號：CCTCC No:M2014400。本發(fā)明的假單胞菌能夠用于降解各種不同的酚類化合物，尤其是對苯二酚，以及用于處理含酚的工業(yè)廢水。CCTCC M20144002014.09.09
【專利說明】假單胞菌及其用途

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及微生物【技術(shù)領(lǐng)域】，特別涉及一種假單胞菌及其用途。

【背景技術(shù)】
[0002] 對苯二酷是一種常見的水溶性有機污染物，可W應(yīng)用于照相的顯影劑、橡膠和汽 油的抗氧劑、染料及醫(yī)藥的原料。含酷的工業(yè)廢水來源于石油、化工、煤氣、焦化、鋼鐵及酷 類生產(chǎn)廠排放的廢水，排放量大、具有明顯的毒性和致癌、致突變作用，對水體污染嚴重。
[0003] 目前國內(nèi)外處理含對酷工業(yè)廢水的方法主要有物理法、化學(xué)法、生物法等。物理 法適用于處理酷濃度較低的廢水，對高濃度酷廢水的處理效果較差；化學(xué)法具有降解效率 高，反應(yīng)速率快的特點，但化學(xué)法操作復(fù)雜、成本高，反應(yīng)中間產(chǎn)物往往仍然具有毒性。生物 法利用微生物代謝活動去除廢水中的有毒物質(zhì)，具有環(huán)境友好、無二次污染、經(jīng)濟安全等優(yōu) 點，是最有前途的處理方法。
[0004] 已報道的通過篩選獲得的降解對苯二酷菌株有假單胞菌（Pseudonomonas SP.)、 紅球菌巧hodococcus)等，目前所分離的酷類降解菌株中，大多數(shù)W某種單一酷類化合物 作為底物，能夠廣譜降解多種酷類化合物的微生物相對較少；并且，所分離的酷類降解菌株 一般對高濃度含酷廢水的耐受能力較低，使得生化法處理含酷廢水周期較長，在處理實際 廢水時經(jīng)濟性低。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明旨在克服現(xiàn)有生物法只能降解某種單一酷類化合物的技術(shù)缺陷，提供一種 新型假單胞菌，能夠廣譜降解多種酷類化合物，尤其能夠高效降解對苯二酷，同時，能夠解 決生物處理含高酷實際廢水時酷降解率低的問題。
[0006] 為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用W下技術(shù)方案：
[0007] 一方面，本發(fā)明提供一種假單胞菌，保藏名稱為；Pseudonomonas sp. SY-HP-11，保 藏單位：中國典型培養(yǎng)物保藏中也，保藏地址；中國武漢武漢大學(xué)；保藏日期：2014年9月9 日，保藏號；CCTCC No:M2014400。
[0008] 另一方面，本發(fā)明提供上述假單胞菌的用途，用于降解酷類化合物，W及用于處理 含有酷的工業(yè)廢水，尤其是用于降解對苯二酷?？犷惢衔锇▽Ρ蕉?、鄰苯二酷、間苯 二酷、4-甲氧基酷和2, 6-二甲基苯酷中的一種或幾種。
[0009] 本發(fā)明的有益效果在于；本發(fā)明的假單胞菌能夠廣譜降解多種酷類化合物，尤其 能夠高效降解對苯二酷，并且，能夠耐受2000mg/L對苯二酷，同時，能夠解決生物處理含高 酷實際廢水時酷降解率低的問題。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0010] 圖1為SY-HP-Il菌株對對苯二酷的降解率及菌株濃度曲線圖；
[0011] 圖2為SY-HP-Il菌株對濃度為2000mg/L的對苯二酷的降解曲線圖。

【具體實施方式】
[0012] 為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點更加清楚明白，W下結(jié)合附圖及具體實施 例，對本發(fā)明進行進一步詳細說明。應(yīng)當理解，此處所描述的具體實施例僅用W解釋本發(fā) 明，而不構(gòu)成對本發(fā)明的限制。
[0013] 本發(fā)明提供一種假單胞菌（Pseudomonas sp.)，保藏名稱為；假單胞菌SY-HP-11， Pseudonomonas sp. SY-HP-11，保藏單位；中國典型培養(yǎng)物保藏中也，保藏地址；中國武漢武 漢大學(xué)；保藏日期：2014年9月9日，保藏號；CCTCC No:M2014400。
[0014] 該假單胞菌屬于革蘭氏陰性菌類，簡稱SY-HP-Il菌株。SY-HP-Il菌株的形態(tài)特征 為：生長緩慢，菌落較小，菌落呈淡黃色，圓形，邊緣齊整。SY-HP-Il菌株在生長過程中能耐 受2000mg/L的對苯二酷，SY-HP-Il菌株的最適生長條件為；pH7. 0,溫度3(TC。
[0015] SY-HP-Il菌株分離自迂寧某石化廠生化好氧池活性污泥，經(jīng)人工富集馴化培養(yǎng)并 分離純化得到。
[001引對苯二酷無機鹽分離培養(yǎng)基成分為（g/L) ;0. 9KH2PO4,6. 5化2冊04 ? 12&0， 0. 4(NH4)2S04,0. 2M拆04 ? 7&0 ;每IL培養(yǎng)基加入1血微量元素溶液（微量元素溶液配制： Ig FeS04 ? 7&0, Ig MnS04 ?&0,0. 25g Na2Mo04 ? 2&0,0. Ig &804,0. 25g CuCla ? 2&0,0. 25g ZnCl2,0. Ig 畑4 ? V03,0. 25g Co(N03)2 ? 6&0,0. Ig NiS04 ? 6馬0,溶解于 900血蒸觸水中，力口 SmL濃H2SO4,補蒸觸水至IOOOmL);待無機鹽培養(yǎng)基高壓滅菌后加入對苯二酷水溶液，使得 對苯二酷濃度為 lOOmg/L 500mg/L lOOOmg/L, 2000mg/L 3000mL。
[0017] SY-HP-II菌株可W高效降解對苯二酷，在W對苯二酷為碳源（2000mg/L)、 (NH4)2S04為氮源（400mg/L)的無機鹽培養(yǎng)液體培養(yǎng)基中接種SY-HP-Il菌株后，3(TC，抑為 6. 5 -9. 5范圍內(nèi)可高效降解對苯二酷，7化內(nèi)對苯二酷降解率達到99% W上。
[0018] 獲取SY-HP-Il菌株的方法具體包括如下步驟：
[0019] USY-HP-Il菌株的分離和純化
[0020] 用250mL立角瓶，裝IOOmL對苯二酷無機鹽培養(yǎng)基（g/L) :0. 9皿2口〇4， 6. 5化2冊〇4 ? 12&0,0. 4 (畑4) 2S0" 0. 2M拆〇4 .yHaO,每IL培養(yǎng)基加入1血微量元素溶液，待無 機鹽培養(yǎng)基高壓滅菌后加入對苯二酷水溶液。微量元素溶液配方（g/L) ;lg FeS〇4*7H2〇， Ig MnS〇4*H2〇,0. 25g Na2Mo〇4*2H2〇,0. Ig &8〇4,0. 25g CuCl2*2H2〇,0. 25g ZnCla'O. Ig 畑4 .VOsiO. 25g Co(N〇3)2 .eHaOiO. Ig NiS〇4 .eHaO,溶解于 900血蒸觸水中，力日 5血濃 H2SO" 補蒸觸水至lOOOmL。向培養(yǎng)基中接入5mL從迂寧省某石化廠采集的生化好氧池活性污泥， 于30°C、轉(zhuǎn)速為15化/min的搖床中振蕩培養(yǎng)2d，得到菌液。取5血菌液接種到100血新 培養(yǎng)基中，重復(fù)轉(zhuǎn)接7次。對苯二酷起始濃度為500mg/L，W后每次轉(zhuǎn)接對苯二酷濃度增加 500mg/L,直到 3000mg/L 為止。
[0021] 馴化培養(yǎng)好的菌液按10氣1(T4、10人ICT6和1(T稀釋，取0. ImL ICT5稀釋液涂在含 有2000mg/L對苯二酷的無機鹽培養(yǎng)基平板上，3(TC倒置培養(yǎng)2?3d，挑取單菌落，進行3次 劃線分離純化，得到純化的菌株SY-HP-11。
[0022] 2、SY-HP-Il 菌株的鑒定
[0023] 采用16S rRNA基因測序法對SY-HP-Il菌株進行分類鑒定，具體步驟如下：
[0024] (1)細菌總DNA的制備；用天根公司基因組提取試劑盒提取SY-HP-Il菌株的基因 組DM,作為PCR反應(yīng)的模板。
[00幼 似16S rRNA基因的PCR擴增；擴增引物如下：
[0026] 27F ;5，一AgAgTTTgATCMTggCTCAg-3, [M = C，A]
[0027] 1492R ;5，一Cg巧TACCTTgTTACgACTT-3, [Y = T, C]
[0028] 中間引物；533F ;5, 一gTgCCAgCMgCCgCggTAA -3，
[002引 PCR反應(yīng)體系：
[0030]

【權(quán)利要求】
1. 一種假單胞菌，其特征在于，保藏名稱為：Pseudonomonas sp. SY-HP-11，保藏單位： 中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏地址：中國武漢武漢大學(xué)；保藏日期：2014年9月9日，保藏 號：CCTCC N〇:M2014400。
2. 如權(quán)利要求1所述的假單胞菌的用途，其特征在于，用于降解酚類化合物。
3. 如權(quán)利要求1所述的假單胞菌的用途，其特征在于，用于處理含有酚類化合物的工 業(yè)廢水。
4. 如權(quán)利要求2或3所述的假單胞菌的用途，其特征在于，所述酚類化合物包括對苯二 酚、鄰苯二酚、間苯二酚、4-甲氧基酚和2, 6-二甲基苯酚中的一種或多種。
5. 如權(quán)利要求1所述的假單胞菌的用途，其特征在于，用于降解對苯二酚。
【文檔編號】C12R1/38GK104357366SQ201410665101
【公開日】2015年2月18日 申請日期:2014年11月19日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月19日
【發(fā)明者】朱希坤, 彭湃, 李小明, 楊德玉, 戴速航, 李旭 申請人:沈陽化工研究院有限公司