少棘蜈蚣抑瘤肽scolopept及其cDNA和應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及少棘蜈蚣抗腫瘤多肽scolopept及其cDNA和重組應用，屬于生物基因工程領(lǐng)域。少棘蜈蚣抑瘤肽scolopept具有SEQ ID NO.1的氨基酸序列，其基因序列如SEQ ID NO.2所示。其克隆方法如下：根據(jù)從少棘蜈蚣毒液中分離純化的抑瘤肽scolopept氨基酸序列設(shè)計兼并引物；從少棘蜈蚣毒腺提取總RNA；通過RT-PCR方法，一步擴增出全長cDNA序列，克隆入pMDPmd18-T載體，挑取陽性克隆進行測序。所述少棘蜈蚣抑瘤肽scolopept的cDNA可通過現(xiàn)有基因工程方法，生產(chǎn)重組scolopept，開發(fā)新型抗癌藥物。
【專利說明】少棘暢蟻抑瘤化scolopept及其cDNA和應用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及生物基因工程領(lǐng)域，具體設(shè)及少棘蚊蟻抑腫瘤膚cDNA及其克隆、表達 技術(shù)。

【背景技術(shù)】
[0002] 目前癌癥治療一般采用化學療法和放射療法，可W有效清除殘留腫瘤細胞，防止 腫瘤的復發(fā)與轉(zhuǎn)移，但其本身存在嚴重的毒副作用，在殺傷腫瘤細胞的同時，對人體正常細 胞傷害較大，并且可能使祀細胞產(chǎn)生不敏感性和耐藥性。而一些多膚類作用于腫瘤細胞的 機制不同，可W特異性殺傷腫瘤細胞，對正常細胞無毒副作用或作用較小，而且未發(fā)現(xiàn)耐藥 性。所W尋找作用于腫瘤細胞不同祀點的膚類，開發(fā)新一代抗癌藥物，是目前癌癥治療研究 的熱點。
[0003] 到目前為止，國外已有36種多膚類抗癌藥物上市，我國臨床上利用尿酸多膚治療 乳腺癌，胸腺五膚輔助治療急性白血病、晚期非小細胞肺癌和腎癌等，胸腺膚a 1治療非霍 奇金淋己瘤、晚期非小細胞肺癌和白血病等多種癌癥，但后兩者藥物主要是作為免疫增強 劑使用，并非?？谝种颇[瘤細胞增殖或者促進其調(diào)亡的祀向性藥物。
[0004] 本發(fā)明從少棘蚊蟻毒液中分離純化出一種抑制腫瘤細胞增殖并促進其調(diào)亡的多 膚，命名為抑瘤膚scolop巧t，并測定其氨基酸序列。檢索SWISS-PROT、TrEMBL、PIR、MIPS 和ExPASy等國際蛋白質(zhì)一級序列數(shù)據(jù)庫，均未收錄此膚序列；檢索GenBank、EM化和孤BJ 等S大核酸序列數(shù)據(jù)庫可知，少棘蚊蟻抑瘤膚scolopept的cDNA全長序列未被克隆，關(guān)于 少棘蚊蟻抑制腫瘤膚基因研究在國內(nèi)外尚屬空白。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明提供一種從少棘蚊蟻毒腺提取的抑瘤膚，并提供少棘蚊蟻抑瘤膚 scolopept的cDNA的克隆方法及重組技術(shù)。
[0006] 本發(fā)明從少棘蚊蟻毒液中純化所得抑瘤膚scolopept,它具有SEQ ID NO. 1所示的 氨基酸序列；從少棘蚊蟻毒腺中克隆到scolop巧t cDNA，它具有SEQ ID NO. 2所示的序列。
[0007] 本發(fā)明少棘蚊蟻抑瘤膚scolopept的純化分離方法如下；
[0008] 電刺激蚊蟻獲得毒液粗品，用VIVASPIN 0. 5ml CONCENTRATOR VIVASCIENCE〇3etter life science by design, Sartorius AG，Germany)濃縮并截留 3, 000-5, 000化的多膚及蛋白組分；陰離子交換層析，收集21. 436min峰；凝膠過濾層析，收 集 17. 221min 峰；反相 HPLC，只見一個峰 21. 920min，凍干保存；MALDI-TOF-MS 炬RUKER 公 司，REFLEXTM III)測定分子量為3016D ;E血an降解和串聯(lián)質(zhì)譜結(jié)合測定氨基酸序列（島 津PPSQ-31A蛋白自動測序儀）。
[0009] 本發(fā)明少棘蚊蟻抑瘤膚scolop巧t的cDNA的克隆方法如下；
[0010] (1)根據(jù)純化所得scolopept氨基酸序列設(shè)計引物：
[OCm]正義寡核巧酸兼并引物 pSCOl ;5' -AAA(/G)ATT(/C/A)CTAAAA(/G)CTATTT(/C) CAT(/C)ATGAGAGGTGTT-3'
[0012] 反義寡核巧酸兼并引物 pSC02 ;5' -ATGACCC(/T)CTTAGAGTC(/T)TTAGAC(/T) CTCATCTTCTTAGT-3^
[0013] (2)從少棘蚊蟻毒腺提取總RNA。
[0014] (3)應用上述引物pSCOl和pSC02,進行RT-PCR擴增，擴增產(chǎn)物克隆入pMDlS-T載 體，挑取陽性克隆進行堿基序列測定。
[0015] (4)根據(jù)測序結(jié)果，分析氨基酸序列，序列與scolopept匹配的克隆作為特異性擴 增的模板。
[0016] 妨根據(jù)上述模板的cDNA序列，設(shè)計含有SUMO酶切位點的首尾引物；
[0017] SCI ;5' -TAAGATACTAAAACTATTTCA-3'(斜體部分為 Stu I 酶切位點）
[0018] SC2 ;5' -CCCAAGCTTTCAATGACCTCTT-3'(斜體部分為 Hind III酶切位點）
[0019] PCR擴增SUMO-scolopept cDNA序列，克隆入PMD18-T載體，挑取陽性克隆進行堿 基序列測定。
[0020] 上述SUMO-scolopept cDNA的克隆方法具體操作如下；
[0021] (1)根據(jù)純化所得scolopept氨基酸序列，設(shè)計克隆的正義寡核巧酸兼并引物 pSCOl ;5 ' -AAA (/G) ATT (/C/A) CTAAAA (/G) CTATTT (/〇 CAT (/〇 ATGAGAGGTGTT-3 ' 和反義寡核 巧酸兼并引物 pSC02 ; 5 ' -ATGACCC (/T) CTTAGAGTC (/T) TTAGAC (/T)
[0022] CTCATCTTCTTAGT-3> ;
[002引 似利用RNA抽提試劑TRIzoUinvitrogen公司），按照操作手冊，提取少棘蚊蟻 毒腺總RNA。
[0024] (3)應用RT-PCR方法，應用上述引物pSCOl和PSC02為特異性引物，擴增出cDNA的 序列，克隆入PMD18-T載體，并對其堿基序列進行測定。RT-PCR的反應條件為；W總RNA為 模板，在50 y 1反應體系中，加入5 X RT-PCR反應緩沖液10 y 1、25mM M拆〇42 y 1、lOmMdNTP 混合物lyl、20uM的上下游引物各2. 5yl、AMV逆轉(zhuǎn)錄酶（Takara公司）lyl、TflDNA聚 合酶lyl及RNA模板2yl，補水至50yl。RT-PCR循環(huán)參數(shù)為；50°C 30min反轉(zhuǎn)錄反應， 94°C 2min 變性，30 個 PCR 循環(huán)（94°C變性 30s，53°C退火 30s，72°C延伸 Imin)，最后 72°C解 育lOmin。RT-PCR產(chǎn)物用1.5%的瓊脂糖凝膠電泳分離后，用膠回收試劑盒回收基因片段， 置4°C保存。
[0025] (4)根據(jù)測序結(jié)果，分析氨基酸序列，與從少棘蚊蟻毒液中分離純化的scolopept 氨基酸序列匹配的克隆作為特異性擴增的模板。
[0026] (5)根據(jù)上述模板的cDNA序列，設(shè)計含有SUMO酶切位點的首尾引物；SCI ;
[0027] 5' -TAAGATACTAAAACTATTTCA-3'(斜體部分為 Stu I 酶切位點）和 SC2 ;
[0028] 5' -CCCAAGCTTTCAATGACCTCTT-3'(斜體部分為 Hind III酶切位點），PCR 擴增
[0029] SUMO-scolopept cDNA序列，反應條件為；W上述scolop巧t克隆為模板，在50 反應體系中，加入10XPCR反應緩沖液5yl、25mM MgS〇42yl、10mM dNTP混合物4yl、20yM 的上下游引物各2yl、P化DM聚合酶0. 5yl及模板2yl，補水至50yl。PCR循環(huán)參數(shù) 為；50°C 30min反轉(zhuǎn)錄反應，94°C 5min變性，30個PCR循環(huán)巧4°C變性30s，50°C退火30s， 72°C延伸20s)，最后72°C解育7min?？寺∪隤MD18-T載體，挑取陽性克隆進行堿基序列測 定，并構(gòu)建SUMO-scolopept重組質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化大腸桿菌化21。
[0030] 對該基因的進一步研究表明：該基因的重組融合蛋白具有抑制白血病細胞K562 和肝癌細胞化pG2增殖，促進該些細胞調(diào)亡的高活性功能，并且對于正常組織細胞無毒副 作用。
[0031] 本發(fā)明還公開了少棘蚊蟻抑瘤膚scolopept或其cDNA在制備治療白血病和肝癌 的藥物中的應用。
[0032] 上述少棘蚊蟻抑瘤膚scolop巧t的cDNA的重組應用，通過現(xiàn)有基因工程方法，生 產(chǎn)重組抑瘤膚，可W開發(fā)新型抗癌藥物。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0033] 圖1(a)是少棘蚊蟻抑瘤膚scolop巧t全長cDNA堿基序列，全長cDNA共72bp ;化） 是少棘蚊蟻抑瘤膚scolopept氨基酸序列，共25Aa。
[0034] 圖 2 是 MALDI-TOF-MS 測定抑瘤膚 scolopept 分子量為 3016D。
[0035] 圖3是融合蛋白SUMO-scolopept經(jīng)過誘導表達純化后，使用SUMO特異性蛋白酶 進行切割，Tricine/SDS - PAGE檢測，獲得3邸scolopept和SUMO標簽，經(jīng)Ni柱層析，純化 得到SUMO-scolopept重組蛋白。（a)是SUMO蛋白酶酶切融合蛋白；化）是親和層析獲得重 組目的scolop巧to
[0036] 圖4是使用MIT細胞活性檢測方法對本發(fā)明克隆的基因表達產(chǎn)物對白血病細胞 K562和肝癌細胞化pG2作用結(jié)果。實驗中，scolopept對兩種細胞都表現(xiàn)出濃度依賴抑制 增殖作用，scolopept處理K562細胞，IC50為25 y M ;在HepG2細胞中，IC50為50 y M。
[0037] 圖5是流式檢測scolopept對K562和化pG2細胞調(diào)亡的作用。使用流式細胞儀檢 測J scolopept抑制細胞增殖的方式，通過Annexin V和艦化丙晚（PI)雙染發(fā)現(xiàn)，scolopept 是通過調(diào)亡作用抑制細胞增殖的。40 uM scolopept可W明顯的引起21.4%的K562細胞 調(diào)亡。在化pG2細胞中，存在相似作用。
[003引圖6所示scolop巧t的溶血作用及對肝、腎及血管內(nèi)皮細胞的毒性作用。在實驗 用量范圍內(nèi)，無溶血性，當scolopept濃度加大至遠高于IC50的120 yM時，出現(xiàn)30%溶血。 用scolopept對原代小鼠肝細胞、人胚腎細胞肥K293進行MTT實驗，在120 y M時對原代小 鼠肝細胞僅有20%的殺傷率；對人胚腎細胞肥K293也僅有18%，說明對肝和腎僅有很小 的毒副作用。scolopept具有選擇性殺傷腫瘤細胞的作用，其作用于正常細胞的濃度要遠 小于其作用于惡性腫瘤細胞的濃度。加入scolopept后，人廝靜脈內(nèi)皮細胞（HUVECs)存活 率的變化。scolopept在40 y M時對內(nèi)皮細胞造成74%的殺傷率，與對照相比，有顯著性差 異（P<0. 05)，說明scolop巧t能夠抑制血管生成，并且隨著濃度的增加，抑制效果越明顯， scolopept通過抑制血管內(nèi)皮細胞的增殖，減少對腫瘤細胞的血液供給，從而達到抑瘤的目 的。

【具體實施方式】
[0039] 本發(fā)明中所使用的術(shù)語，除非有另外說明，一般具有本領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常理 解的含義。
[0040] 下面結(jié)合具體的制備實施例和應用實施例，并參照數(shù)據(jù)進一步詳細地描述本發(fā) 明。應理解，該些實施例只是為了舉例說明本發(fā)明，而非W任何方式限制本發(fā)明的范圍。
[0041] 在W下的實施例中，未詳細描述的各種過程和方法是本領(lǐng)域中公知的常規(guī)方法。 所用到的引物，均在首次出現(xiàn)時標明，其后所用相同引物，均W首次標明的內(nèi)容相同。
[0042] 實施例1 ;
[004引 少棘蚊蟻（Scolopen化a subspinipes mutilans)，人工飼養(yǎng)。
[0044] 電刺激蚊蟻獲得毒液粗品，用VIVASPIN 0. 5ml CONCENTRATOR VIVASCIENCE〇3etter life science by design, Sartorius AG，Germany)濃縮并截留 3, 000-5, 000化的多膚及蛋白組分，此組分依次進行柱層析分離：陰離子交換層析，收集 21. 436min峰；凝膠過濾層析，收集17. 221min峰；反相HPLC，獲得一個峰21. 920min，凍干 保存；MALDI-TOF-MS炬RUKER公司，R邸LEXTM III)測定分子量為3016D(圖2) ;E血an降解 和串聯(lián)質(zhì)譜結(jié)合測定氨基酸序列（島津PPSQ-31A蛋白自動測序儀）；該多膚的氨基酸序列 如SEQ ID NO. 1所示，將該多膚命名為抑瘤膚scolop巧t (圖1化)）。
[0045] 實施例2 ;
[0046] 克隆抑瘤膚scolopept的cDNA序列；
[0047] (1)引物設(shè)計；根據(jù)實施例1純化所得scolopept氨基酸序列，設(shè)計克隆的 正義寡核巧酸兼并引物 pSCOl ;5 ' -AAA (/G) ATT (/C/A) CTAAAA (/G) CTATTT (/〇 CAT (/〇 ATGAGAGGTGTT-3'（SEQ ID NO. 3)和反義寡核巧酸兼并引物 pSC02 ;5' -ATGACCC(/T) CTTAGAGTC(/T)TTAGAC(/T)CTCATCTTCTTAGT-3'（SEQ ID NO. 4)。
[0048] 似提取總RNA ;利用RNA抽提試劑TRIzoUinvitrogen公司）按照操作手冊提取 出約少棘蚊蟻毒腺的總RNA，并通過甲醒變性瓊脂糖凝膠電泳鑒定其質(zhì)量和純度，紫外分光 光度計測定其濃度。
[0049] (3)應用RT-PCR方法，W上述pSCOl和PSC02為特異性引物，擴增出少棘蚊蟻抑瘤 膚scolopept cDNA序列，克隆入pMDlS-T載體（Takara公司），并對其堿基序列進行測定。 RT-PCR的反應條件為；W總RNA為模板，在50 y 1反應體系中，加入5 X RT-PCR反應緩沖液 10 y l、25mM MgS〇42 y l、10mM dNTP 混合物 1 y 1、20 y M 的上下游引物各 2. 5 y 1、AMV逆轉(zhuǎn)錄 酶（Takara公司）1 y 1、Tf IDNA聚合酶1 y 1及RNA模板2 y 1，補水至50 y 1。RT-PCR循環(huán) 參數(shù)為；50°C 30min反轉(zhuǎn)錄反應，94°C 2min變性，30個PCR循環(huán)（94°C變性30s，53°C退火 30s，72°C延伸Imin)，最后72°C解育lOmin。RT-PCR產(chǎn)物用1.5%的瓊脂糖凝膠電泳分離 后，用膠回收試劑盒回收基因片段，置4°C保存。
[0化0] (4)根據(jù)挑選不同克隆測序結(jié)果，分析氨基酸序列，與從毒腺中分離純化的天然 scolopept氨基酸相匹配的克隆即為本發(fā)明所得scolop巧t cDNA序列，如SEQ ID NO. 2(圖 1(a)) 〇
[0化1] 實施例3 ;原核表達抑瘤膚scolopept ;
[0化2] (1)可溶性SUMO-scolopept重組載體的構(gòu)建；
[0化3] W上述得到的scolop巧t cDNA作為特異性擴增的模板。根據(jù)上述模板的cDNA序 列，設(shè)計含有 SUMO 酶切位點的首尾引物；SCI ;5' -TAAGATACTAAAACTATTTCA-3' (SEQ ID NO. 5)(斜體部分為 Stu I 酶切位點）和 SC2 ;5' -CCCAAGCTTTCAATGACCTCTT-3' (SEQ ID NO. 6)(斜體部分為化nd III酶切位點）。PCR擴增SUMO-scolopept cDNA序列，反應條件為； W上述scolop巧t克隆為模板，在50 y 1反應體系中，加入10XPCR反應緩沖液5 y l、25mM MgS〇42yl、10mM dNTP混合物4yl、20yM的上下游引物各2yl、Pfu DM聚合酶0.5yl及 模板2y 1，補水至50y 1。PCR循環(huán)參數(shù)為；50°C 30min反轉(zhuǎn)錄反應，94°C 5min變性，30個 PCR循環(huán)（94°C變性30s，50°C退火30s，72°C延伸20s)，最后72°C解育7min?？寺∪雙MDlS-T 載體，挑取陽性克隆進行堿基序列測定。
[0054] 將pSUMO的空質(zhì)粒菌D冊a接種于3mL液體LB中（含卡納霉素終濃度為50ug/ mL)，37°C振蕩，并過夜培養(yǎng)；用AxyGEN質(zhì)粒提取試劑盒，提取并純化pSUMO質(zhì)粒；StuI和 Hindlll分別雙酶切PCR產(chǎn)物和pSUMO ;載體去磯酸化和目的基因磯酸化；反應體系于37°C 水浴30nim之后，70°C水浴lOmin滅活。反應后，1%瓊脂糖膠電泳檢測，確定連接比例；在 16°C水浴條件下連接過夜。
[0化5] (2)在大腸桿菌中的誘導表達：
[0056] 取100 y L感受態(tài)細胞畑5 a、10 y L的上述連接產(chǎn)物混合，在冰上放置30min后， 42°C水浴90s，快速放冰上5min，加入900 y L LB培養(yǎng)基（經(jīng)37°C預熱的），振蕩培養(yǎng)1小 時后，離屯、、濃縮至lOOyL左右，涂布于固體LB平板上（50yg/ml卡那霉素），37°C倒置培 養(yǎng)16小時。將菌落PCR鑒定為陽性克隆的SUMO-scolop巧t/D冊a菌株進行測序。
[0化7] 將測序正確的SUMO-scolopept重組質(zhì)粒0. 5 y 1加入100 y 1的大腸桿菌化21感 受態(tài)細胞，輕輕混勻后，在冰上靜置30min。化21感受態(tài)細胞在42°C熱激90S后，立即于冰 上2min。加入37°C預熱的LB培養(yǎng)基890 y 1，37°C搖比。8000巧m離屯、Imin，吸取800 y 1 的上清液，其他一起混勻。吸取混懸液200 y 1于平板上，均勻涂布，置于37°C培養(yǎng)箱16h。 挑取單菌落，溶于3ml LB，再加入3yl 50mg/ml的卡納抗生素后，37°C培養(yǎng)4-8小時，進行 菌落PCR W確定陽性克隆。
[0化引 （3)重組目的蛋白SUMO-scolopept的Ni+親和純化；
[0化9] 將IPTG誘導含有目的重組蛋白的大腸桿菌培養(yǎng)液。于12000g室溫離屯、lOmin， 棄上清。取沉淀，用20ml平衡液1 (0. 5M化C1，20mM Tris，20mM咪挫）重懸，冰上超聲破 碎（工作10s，暫停10s，共99次）表達菌體，4°C，13,000 Xg，20min離屯、超聲破碎液后，棄 沉淀，收集上清，待過鑲柱。簡要過程是；3體積binding buffer平衡鑲柱，洗脫液1 (0. 5M 化C1，20mM Tris，lOOmM 咪挫）洗脫，接著洗脫液 2 (0. 5M 化C1，20mM Tris，250mM 咪挫）洗 脫。用20mM Tris(p服.0)透析蛋白液，-70°C保存。
[0060] 將上述純化后的SUMO-scolopept蛋白與SUMO蛋白酶W l:l〇〇(v/v)比例加入 1. 5ml的離屯、管，30°C的水浴鍋中水浴1小時；將酶切混合物按照W上純化步驟，再進行一 次Ni柱親和層析，收集流出液；W SDS-PAGE及毛細管電泳分析純度并W紫外分光光度計檢 測蛋白濃度，如圖3所示，純化得到純度達95%的活性目的蛋白。
[0061] (4)對腫瘤細胞增殖的抑制作用和促進調(diào)亡作用實驗
[0062] 在含10%胎牛血清的1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)K562細胞，含10%胎牛DMEM培養(yǎng)基中 培養(yǎng)化pG2細胞；細胞達到80%飽和度時，收集細胞，用1 %血清培養(yǎng)基稀釋到105濃度， 種96孔板，0. 2ml/孔；化后，加入不同濃度的scolop巧t，于37°C培養(yǎng)24小時。每孔加 入20 y LMTT巧mg/ml)，繼續(xù)培養(yǎng)化，1000巧m離屯、lOmin ;小屯、棄掉上清，每孔加入150M1 DMS0,振蕩，直到紫色結(jié)晶充分溶解；用酶聯(lián)免疫檢測儀在490nm下檢測個孔的吸光值。實 驗結(jié)果如圖4所示，scolopept對兩種細胞都表現(xiàn)出濃度依賴抑制增殖作用，scolopept處 理K562細胞，IC50為25 y M ;在化pG2細胞中，IC50為50 y M。
[006引通過Annexin V和艦化丙晚（PI)雙染發(fā)現(xiàn)，scolopept是通過調(diào)亡作用抑制細胞 增殖的。如圖5,40yM scolopept可W明顯的引起21.4%的K562細胞調(diào)亡。在化pG2細 胞中，存在相似作用。
[0064] (5)對人體正常細胞和血管內(nèi)皮細胞增殖的影響
[00化]如圖6所示，在實驗用量范圍內(nèi)，scolopept無溶血性，當濃度加大至遠高于IC50 的120^1時，出現(xiàn)30%溶血。用8(：〇1〇口6口*對原代小鼠肝細胞、人胚腎細胞肥1(293進行 MIT實驗，在120 y M時對原代小鼠肝細胞僅有20 %的殺傷率；對人胚腎細胞肥K293也僅有 18%，說明對肝和腎僅有很小的毒副作用。scolopept在40 y M時對內(nèi)皮細胞造成74%的 殺傷率，與對照相比，有顯著性差異（P<〇. 05)，說明scolopept能夠通過抑制血管內(nèi)皮細胞 的增殖，減少對腫瘤細胞的血液供給，從而達到抑瘤的目的。
[0066] 實施例4 ;
[0067] 將實施例2獲得的蚊蟻抑瘤膚scolopept的cDNA通過現(xiàn)有基因工程方法，生產(chǎn)重 組scolop巧t，作為抗癌藥物開發(fā)利用。
[0068] 按照本發(fā)明的方法可W通過現(xiàn)有基因工程技術(shù)，修飾蚊蟻抑瘤膚scolopept基因 并用于所述研究和生成。
【權(quán)利要求】
1.少棘蜈蟻抑瘤肽scolopept，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO. 1所示。 2?少棘蜈蚣抑瘤肽scolop印t的cDNA，其特征在于，是SEQ ID NO. 1所示的序列。
3.權(quán)利要求1所述的少棘蜈蚣抑瘤肽scolopept在制備治療白血病及肝癌的藥物中的 應用。 4?權(quán)利要求2所述少棘蜈蟻抑瘤肽scolopept的cDNA的重組應用，其特征在于，通過 基因工程方法生產(chǎn)重組少棘蜈蚣抑瘤肽scolop印t，用于制備治療白血病及肝癌的多肽類 藥物。
【文檔編號】C12N15/12GK104447972SQ201410666057
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年11月19日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月19日
【發(fā)明者】任文華, 張雙全 申請人:南京師范大學