淡紫擬青霉微菌核的發(fā)酵方法及其應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種淡紫擬青霉微菌核的發(fā)酵方法及其應用，發(fā)酵方法包括：制備淡紫擬青霉孢子懸浮液；將淡紫擬青霉孢子懸浮液加入誘導培養(yǎng)液中，振蕩培養(yǎng)；將發(fā)酵液過濾，得到微菌核沉淀。產(chǎn)生的微菌核能夠適應高溫、干旱、強紫外等外界不良環(huán)境，具有抗逆耐儲、貨架期長和持續(xù)控害的特點；微菌核發(fā)酵周期短，生產(chǎn)成本低、工藝可控性強，所用原料易于獲取。微菌核可以用作制備新型殺蟲真菌制劑的活性成分。
【專利說明】淡紫擬青霉微菌核的發(fā)酵方法及其應用

【技術領域】
[0001]本發(fā)明屬于生物制劑領域，具體涉及淡紫擬青霉微菌核的發(fā)酵方法及其應用。

【背景技術】
[0002]南方根結線蟲、北方根結線蟲及花生根結線蟲等植物寄生性線蟲，寄生范圍廣泛，常為害瓜類、茄果類、豆類及蘿卜、胡蘿卜、萵苣、白菜等30多種蔬菜，還能傳播一些真菌和細菌性病害，是我國蔬菜安全生產(chǎn)的重大威脅，造成蔬菜作物大量減產(chǎn)和質(zhì)量下降。目前線蟲病害的防控主要依靠化學防治，化學農(nóng)藥的大量施用導致線蟲病害土壤環(huán)境污染、農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留嚴重超標、影響蔬菜農(nóng)產(chǎn)品安全、威脅人民身體健康；還大量殺傷線蟲病害天敵，破壞生態(tài)平衡。近年來，以綠僵菌、白僵菌為代表的真菌生物農(nóng)藥是國際上微生物農(nóng)藥研究的熱點之一，具有使用安全、不污染環(huán)境、可擴散流行和線蟲病害不易產(chǎn)生抗藥性等優(yōu)點。淡紫擬青霉屬于絲狀真菌之一，是一種世界性廣泛分布的線蟲寄生真菌，可以寄生多種線蟲，包括根結線蟲、胞囊線蟲等。但與目前大量使用的綠僵菌、白僵菌制劑相比，淡紫擬青霉傳統(tǒng)的孢子菌劑液固兩相生產(chǎn)周期長達3周以上、導致生產(chǎn)成本偏高；對環(huán)境高溫抗逆能力差、貨架期短，貯運不便，，田間防效不穩(wěn)，影響了淡紫擬青霉的產(chǎn)業(yè)化與實際應用。而液體發(fā)酵產(chǎn)生的芽生孢子因不耐儲存，致病力低等缺陷，也不能用于植物寄生性線蟲病害的實際防控。
[0003]寄生真菌主要類群為絲狀真菌，通常產(chǎn)生菌絲體和分生孢子，少數(shù)種類也可產(chǎn)生厚垣孢子。真菌微菌核是絲狀真菌度過高溫、低溫或干旱等不良環(huán)境的休眠繁殖體，是菌絲體互相糾結，菌絲變異分化產(chǎn)生的外層致密堅硬、有色素沉淀，內(nèi)層髓質(zhì)化的組織體，能夠在一定的濕度和溫度條件下，重新萌發(fā)進行產(chǎn)孢。有的植物病原真菌如棉花黃萎病菌、油菜核盤菌等的生活史晚期往往在寄主組織內(nèi)由菌絲體糾集形成菌核或微菌核。而寄生真菌的菌核或微菌核的誘導形成僅在白僵菌、綠僵菌和野村菌有報導，而淡紫擬青霉微菌核誘導形成未見報導。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是針對上述問題，提供一種可大規(guī)模生產(chǎn)的淡紫擬青霉微菌核的液體發(fā)酵培養(yǎng)方法及其應用，開發(fā)生產(chǎn)成本低、侵染活力高、抗逆性強的淡紫擬青霉新侵染結構體，提供一種防治線蟲病害的生防制劑，為殺蟲真菌制劑的創(chuàng)制提供高質(zhì)量的母藥，解決淡紫擬青霉菌傳統(tǒng)孢子菌劑抗逆能力差、貨架期短，貯運不便的共性技術難題。
[0005]本發(fā)明的目的是這樣實現(xiàn)的:
[0006]一種淡紫擬青霉微菌核的發(fā)酵方法，包括以下步驟:
[0007]I)制備淡紫擬青霉孢子懸浮液；
[0008]2)微菌核誘導培養(yǎng):將步驟I中制備的淡紫擬青霉孢子懸浮液加入誘導培養(yǎng)液中，25?28°C，200?250rpm振蕩培養(yǎng)6?8天；
[0009]所述誘導培養(yǎng)液單位體積內(nèi)所含有的各種原料干物質(zhì)重量如下:
[0010]KH2PO4:3.0 ?5.0g/L、CaCl2.2Η20:0.6 ?1.0g/L、MgSO4.7Η20:0.4 ?0.8g/L、CoCl2.6Η20:34 ?40mg/L,MnSO4.Η20:14 ?20mg/L、ZnS04.7Η20:12 ?16mg/L ；FeS04.7Η200.1?0.4g/L ;葡萄糖:8?12g/L ;酵母膏:4?6g/L ;蛋白胨:2.0?3.0g/L ；
[0011]3)將步驟2振蕩培養(yǎng)得到的發(fā)酵液過濾，棄去上清液，得到沉淀微菌核和菌體，干燥，保存。
[0012]所述步驟I中制備淡紫擬青霉孢子懸浮液的方法為:將活化的淡紫擬青霉的孢子或菌絲體接種于PDA平板培養(yǎng)基上，在25°C下培養(yǎng)8?10天，用0.1?0.5% Tween-80將平板上的分生孢子洗下，制備成孢子懸浮液。
[0013]步驟2中所述誘導培養(yǎng)液單位體積內(nèi)所含有的各種原料干物質(zhì)重量如下:
[0014]KH2PO4:3.5 ?4.5g/L、CaCl2.2Η20:0.7 ?0.9g/L、MgSO4.7Η20:0.5 ?0.7g/L、CoCl2.6Η20:36 ?38mg/L、MnS04.Η20:15 ?17mg/L、ZnS04.7Η20:13 ?15mg/L ；FeS04.7Η200.1?0.3g/L ;葡萄糖:9?llg/L ;酵母膏:4?6g/L ;蛋白胨:2.0?3.0g/L。
[0015]用上述培養(yǎng)方法獲得的真菌微菌核在制備防治線蟲病害的生防制劑中的應用，所述活性真菌為淡紫擬青霉，所述線蟲病害病原物為根結線蟲或胞囊線蟲。應用方式為:將上述培養(yǎng)方法獲得的淡紫擬青霉微菌核35°C干燥24-48小時后與硅藻土或高嶺土以及助劑混合后成為微菌核細粒劑，用于防治根結線蟲或胞囊線蟲。所述助劑為蔗糖酯或黃原膠。
[0016]本發(fā)明的有益效果是:本發(fā)明首次用液體發(fā)酵法能穩(wěn)定大量產(chǎn)生淡紫擬青霉微菌核，產(chǎn)生的微菌核能夠適應高溫、干旱、強紫外等外界不良環(huán)境，具有良好的殺蟲活性、抗逆耐儲、發(fā)酵周期短，生產(chǎn)成本低、貨架期長的特點；微菌核作為生物制劑的有效成分，可用于規(guī)模化生產(chǎn)新型真菌農(nóng)藥，可以替代分生孢子作為絲狀真菌制劑加工的有效成分。該生產(chǎn)過程周期短(5-6d)，成本低廉，生產(chǎn)過程中無污染性廢料產(chǎn)生，十分環(huán)保。本發(fā)明所用的培養(yǎng)液的配制和液體發(fā)酵工序可操作性強，重復性好，所用原料易于獲取。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0017]圖1為振蕩培養(yǎng)7天后得到的淡紫擬青霉微菌核顯微鏡下100倍圖。
[0018]圖2為干燥后的淡紫擬青霉微菌核在水瓊脂上24h時萌發(fā)顯微400倍圖。
[0019]圖3為淡紫擬青霉微菌核在水瓊脂上7d的萌發(fā)情況圖。
[0020]圖4為淡紫擬青霉微菌核在水瓊脂上14d的產(chǎn)孢情況圖。

【具體實施方式】
[0021]本發(fā)明所用的真菌菌株和蟲源，如淡紫擬青霉和根結線蟲，均屬于公知公用的實驗材料，可通過常規(guī)的途徑獲得，如土壤分離或商業(yè)途徑購買等。
[0022]實施例一淡紫擬青霉微菌核誘導培養(yǎng)液配方優(yōu)化和誘導過程
[0023]1、淡紫擬青霉接種體懸浮液制備:
[0024]將淡紫擬青霉菌株(來源于重慶市殺蟲真菌農(nóng)藥工程技術研究中心)的分生孢子接種到PDA平板上，在25 °C條件下培養(yǎng)12天，用0.1?0.5% Tween-80滅菌液體將平板上的成熟分生孢子洗下，調(diào)節(jié)分生孢子的濃度，制備成1.0X 18孢子/毫升的孢子懸浮液。
[0025]2、誘導培養(yǎng)液配方篩選
[0026]I)無機鹽離子濃度:
[0027]以添加 KH2PO4:4.0g/L、CaCl2.2Η20:0.8g/L、MgSO4.7Η20:0.6g/L、CoCl2.6H20:37mg/L、MnSO4.H20:16mg/L、ZnSO4.7H20:14mg/L 作為培養(yǎng)微菌核的無機鹽離子。
[0028]2)碳、氮源的選擇
[0029]選擇濃度為10g/L的葡萄糖作為碳源，5g/L酵母膏和2.5g/L蛋白胨作為培養(yǎng)基中的氮源。
[0030]3)鐵離子濃度的選擇
[0031]以FeSO4.7H20作為最佳的誘導劑，以0.1g/L,0.2g/L,0.3g/L,0.4g/L四個濃度梯度進行鐵離子濃度的確定。
[0032]4)誘導培養(yǎng)液的配方:
[0033]配制誘導培養(yǎng)液，均含如下成分:KH2P04:4.0g/L、CaCl2.2H20:0.8g/L、MgS04.7H20:0.6g/L、CoCl2.6H20:37mg/L、MnSO4.H20:16mg/L、ZnSO4.7H20:14mg/L ;葡萄糖:10g/L;酵母膏:5g/L;蛋白胨:2.5g/L。除了上述成分，還加入不同濃度的鐵離子。將含上述無機鹽離子、碳、氮源的培養(yǎng)液組合成4種不同的液體培養(yǎng)基，分別含有FeSO4.7H200.lg/L，0.2g/L，0.3g/L，0.4g/L，將含有這四個濃度FeSO4.7H20的培養(yǎng)基分別命名為SDA 1、SDA u、SDA m、SDAw。將這4種液體培養(yǎng)基分別以10mL的量分裝到250mL三角瓶中，pH值為5.4-6.5，進行121 °C高溫高壓滅菌30分鐘。
[0034]3、培養(yǎng)條件的選擇
[0035]將前述配制的淡紫擬青霉孢子懸浮液按照5%的接種量接種到前述4種不同的培養(yǎng)基中。在23?28°C，200?250rpm條件下進行搖床培養(yǎng)。在6天時進行顯微觀察液體培養(yǎng)基中的產(chǎn)微菌核狀況。
[0036]由于各個培養(yǎng)基中鐵離子含量的的不同，淡紫擬青霉菌株能夠產(chǎn)生微菌核的數(shù)量不同。其中SDA1產(chǎn)微菌核量為0.92X 105個/ml，SDA11產(chǎn)微菌核量為1.21 X 15個/ml, SDAm產(chǎn)微菌核量為L 09X 105個/ml，SDAw產(chǎn)微菌核量為0.95X 15個/ml?？梢奡DA11液體培養(yǎng)基產(chǎn)生較多的微菌核，故選擇SDA1Jt為淡紫擬青霉菌株產(chǎn)微菌核的最佳誘導培養(yǎng)液配方，配方即IL培養(yǎng)液中含有:葡萄糖10.0g、酵母膏5.0g、蛋白胨2.5g、KH2PO4:4.0g、CaCl2.2Η20:0.8g、MgSO4.7Η20:0.6g、CoCl2.6H20:37mg、MnSO4.H20:16mg、ZnSO4.7H20:14mg。培養(yǎng)條件為溫度23?28°C，搖床轉速為200?250rpm。
[0037]實施例二淡紫擬青霉微菌核的形態(tài)與結構觀察
[0038]將淡紫擬青霉菌株用SDA π液體培養(yǎng)基，25?28°C，200?250rpm進行搖床培養(yǎng)，顯微觀察液體培養(yǎng)基中的產(chǎn)微菌核狀況:接種后振蕩培養(yǎng)1-2天時，分生孢子萌發(fā)形成菌絲，菌液顏色未見變化，而培養(yǎng)液粘度及菌體生物量逐漸增加；培養(yǎng)3天后菌液顏色開始變褐色，此時菌懸液中的菌量繼續(xù)增加，部分菌絲體前端開始膨大，明顯加粗；在光學顯微鏡下觀察，發(fā)現(xiàn)菌絲開始聚集。培養(yǎng)4天后，發(fā)酵菌液褐色繼續(xù)加深，取樣在顯微鏡下觀察，可見由數(shù)十個細胞的微菌核休眠結構。微菌核呈深褐色，邊緣光滑，中間緊密。培養(yǎng)5-6天時，菌液變得更加粘稠，顏色呈深褐色，微菌核數(shù)量劇烈增加，有少量的微菌核周圍開始萌發(fā)出大量菌絲。7天后微菌核數(shù)量不再明顯增加，部分微菌核四周形成細長的菌絲(如圖1所示)O
[0039]實施例三淡紫擬青霉微菌核的產(chǎn)孢能力分析
[0040]將淡紫擬青霉菌株分別用SDA I 'SDApSDAupSDAjv液體培養(yǎng)基，23?28°C，200?2 50rpm進行搖床培養(yǎng)，6天后在發(fā)酵得到的培養(yǎng)液中分別加入5 %的硅藻土，3 5 °C干燥24-48小時后，進行粉碎處理。之后將混合物分別進行過60目標準篩處理，使微菌核與硅藻土分離，分別將微菌核室溫密封保存。
[0041]取四種培養(yǎng)基培養(yǎng)得到的微菌核各1mg均勻接種在水瓊脂平板上，在25°C條件下培養(yǎng)14天后，用0.5% Tween-80滅菌水將平板上的成熟分生孢子洗下，血球計數(shù)板計數(shù)，發(fā)現(xiàn)SDA I組合培養(yǎng)的微菌核每毫克能夠產(chǎn)生3.7 X 15個孢子、SDA π組合培養(yǎng)的微菌核每毫克能夠產(chǎn)生3.8 X 15個孢子、SDAm組合培養(yǎng)的微菌核每毫克能夠產(chǎn)生4.7 X 15個孢子、SDAw組合培養(yǎng)的微菌核每毫克能夠產(chǎn)生5.4X 15個孢子。
[0042]實施例四淡紫擬青霉微菌核耐熱性測定
[0043]收集實施例三中過篩處理的新鮮SDA π組合培養(yǎng)的微菌核，稱取9份微菌核，每份0.1克，分別放入裝有50毫升滅菌水的試管中，共9管。從中隨機取3管分別放入35°C、45°C、55°C的水浴鍋中，每隔10分鐘從試管中取出10毫升的均勻微菌核懸溶液，均勻涂布在水瓊脂平板上，共取4次。同時以淡紫擬青霉分生孢子作為對照實驗。在25°C條件下恒溫培養(yǎng)，在24小時時顯微鏡下計數(shù)300個微菌核，測定每個處理的微菌核的萌發(fā)率。
[0044]結果發(fā)現(xiàn)微菌核和分生孢子在35°C處理的萌發(fā)率與未進行熱處理的萌發(fā)率無顯著差異，均在93%以上。而微菌核在45°C處理的后期(即45°C水浴20分鐘)萌發(fā)率顯著下降，為73.42%,40分鐘處理后的微菌核萌發(fā)率在52.56%，而分生孢子則在10分鐘處理時表現(xiàn)出萌發(fā)率下降，為82.54%,40分鐘處理的分生孢子萌發(fā)率為23.56%。55°C條件下處理的微菌核的萌發(fā)率顯著下降，10分鐘的為78.56%，而40分鐘后的萌發(fā)率僅為32.15%,分生孢子下降更為嚴重，10分鐘處理的為56.42%,40分鐘處理的僅為12.05%。說明微菌核的耐熱性明顯好于分生孢子。
[0045]實施例五淡紫擬青霉微菌核抗紫外能力分析
[0046]收集實施例三中過篩處理的新鮮SDA π組合培養(yǎng)的微菌核，稱取0.5克微菌核，放入裝有100毫升滅菌水的試管中，從中取出10毫升微菌核懸浮液均勻的涂布在水瓊脂平板上，在UV-B紫外燈下，照射0，1，2，3小時。取出紫外照射的平板于25°C培養(yǎng)箱中避光培養(yǎng)24小時，然后用刀片劃取一塊培養(yǎng)基，于顯微鏡下計數(shù)300個微菌核，統(tǒng)計萌發(fā)率，實驗重復3次，并以淡紫擬青霉的分生孢子作為對照。結果顯示隨著照射時間的增加，分生孢子和微菌核的萌發(fā)率均降低，但微菌核的萌發(fā)率下降幅度比分生孢子緩慢，O小時時，分生孢子與微菌核的萌發(fā)率均大于90%。紫外燈I小時照射，分生孢子的萌發(fā)率為75.42%，而微菌核的萌發(fā)率為83.26% ；2h照射后，分生孢子的萌發(fā)率減為55.24%，而微菌核的萌發(fā)率為73.28% ；3h照射后，分生孢子的萌發(fā)率減為32.35%，而微菌核的萌發(fā)率為64.56%。由此可見，淡紫擬青霉微菌核抗紫外能力分析明顯好于分生孢子。
[0047]實施例六淡紫擬青霉微菌核貯存能力分析
[0048]將實施例三中過篩處理的新鮮SDA1Ji合培養(yǎng)的微菌核密封放置在室溫條件下，每隔三個月從中取部分微菌核，平鋪在水瓊脂平板上，在25°C條件下恒溫培養(yǎng)，分別在24小時和48小時時取樣在光學顯微鏡下測定萌發(fā)率，結果顯示6個月的微菌核仍保持90%以上的萌發(fā)率，而放置I年的微菌核在48小時時仍保持82.78%的萌發(fā)率，可見淡紫擬青霉微菌核具有良好的耐貯存能力。
[0049]實施例七淡紫擬青霉微菌核防治番茄根結線蟲
[0050]以南方根結線蟲Meloidogyne incognita作為試蟲測定淡紫擬青霉的毒力:取重慶大學蔬菜實驗地感染南方根結線蟲的番茄病根，洗凈后剪切取為2-4cm根段，然后放入裝有I升I %次氯酸鈉的溶液中進行高速勻漿攪拌3min，將碎片分別在75 μ m和26 μ m網(wǎng)篩上過濾，并用無菌水沖洗多次，收集26 μ m篩網(wǎng)的物質(zhì),并用無菌水定容至lOOmL。取0.5mL卵懸浮液，無菌水稀釋I倍，于立體解剖鏡下計數(shù)卵的數(shù)目，重復3次，計算每毫升卵懸浮液所含卵數(shù)目，將制備好的卵懸液放于4°C冰箱備用。
[0051]取田間土壤，過2mm目篩后與沙子按照1:1比例混合，在121°C下高溫滅菌20分鐘。冷卻后，將實施例三中過篩處理的新鮮SDA u組合培養(yǎng)的微菌核以5%、10%、15%的比例(質(zhì)量比)與土壤混勻，置入直徑12cm的花盆中，花盆中移植3-4葉期的長勢一致的根結線蟲感病品種番茄，每盆一株，按照2000個卵/10cm3的土壤比，均勻接種制備好的根結線蟲卵液，以清水作為陰性對照。植株在25-28°C下生長，每周向各花盆噴一次等量植物營養(yǎng)液，每個處理重復6次。2個月后，以測定每個處理的根結指數(shù)，來判定防治效果，并且計數(shù)根上卵囊數(shù)。數(shù)據(jù)結果顯示，與陰性對照相比，三個濃度處理的微菌核毒土均能有效的減少根上的卵囊數(shù)，防治效果均達90%以上。
[0052]實施例八制備淡紫擬青霉微菌核細粒劑
[0053]將實施例三中過篩處理的新鮮SDA u組合培養(yǎng)的微菌核，35°C干燥24_48小時后與硅藻土或高嶺土以及少量蔗糖酯或黃原膠混合后即為微菌核細粒劑，可用于防治根結線蟲，混合比例按重量比為微菌核:硅藻土或高嶺土:蔗糖酯或黃原膠=8-10: 85-88:2-5。該制劑具有抗逆性強、耐儲存的優(yōu)點，又由于其主要殺蟲活性成分為菌絲體糾結形成的厚壁休眠結構，生產(chǎn)成本降低，生產(chǎn)周期縮短，本發(fā)明對于需光好氧、產(chǎn)孢難的絲狀真菌的規(guī)?；a(chǎn)具有重要的創(chuàng)新意義。
[0054]實施例九淡紫擬青霉微菌核活力觀察
[0055]將實施例八制備的微菌核細粒劑，涂布在水瓊脂培養(yǎng)基平板上進行再水化，放置于25°C培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)，24小時微菌核開始長有細長菌絲(如圖2所示)，在接種7天時萌發(fā)后的微菌核開始產(chǎn)孢(如圖3所示)，接種14天時微菌核大量產(chǎn)孢(如圖4所示)，說明微菌核細粒劑具有良好的活力。
【權利要求】
1.一種淡紫擬青霉微菌核的發(fā)酵方法，其特征在于:包括以下步驟: 1)制備淡紫擬青霉孢子懸浮液； 2)微菌核誘導培養(yǎng):將步驟I中制備的淡紫擬青霉孢子懸浮液加入誘導培養(yǎng)液中，25?28°C，200?250 rpm振蕩培養(yǎng)6?8天； 所述誘導培養(yǎng)液單位體積內(nèi)所含有的各種原料干物質(zhì)重量如下:
KH2PO4:3.0 ?5.0 g/L、CaCl2.2Η20:0.6 ?1.0g/L、MgSO4.7Η20:0.4 ?0.8g/L、CoCl2.6Η20:34 ?40mg/L,MnSO4.Η20:14 ?20mg/L、ZnS04.7Η20:12 ?16mg/L ；FeS04.7Η200.1?0.4g/L ;葡萄糖:8?12g/L ;酵母膏:4?6g/L ;蛋白胨:2.0?3.0g/L ； 3)將步驟2振蕩培養(yǎng)得到的發(fā)酵液過濾，棄去上清液，得到沉淀微菌核和菌體，干燥，保存。
2.根據(jù)權利要求1所述的淡紫擬青霉微菌核的發(fā)酵方法，其特征在于:步驟I中所述制備淡紫擬青霉孢子懸浮液的方法為:將活化的淡紫擬青霉的孢子或菌絲體接種于PDA平板培養(yǎng)基上，在25°C下培養(yǎng)8?10天，用0.1?0.5% Tween-80將平板上的分生孢子洗下，制備成孢子懸浮液。
3.根據(jù)權利要求1所述的淡紫擬青霉微菌核的發(fā)酵方法，其特征在于:步驟2中所述誘導培養(yǎng)液單位體積內(nèi)所含有的各種原料干物質(zhì)重量如下:
KH2PO4:3.5 ?4.5g/L、CaCl2.2Η20:0.7 ?0.9g/L、MgSO4.7Η20:0.5 ?0.7g/L、CoCl2.6Η20:36 ?38mg/L、MnS04.Η20:15 ?17mg/L、ZnS04.7Η20:13 ?15mg/L ；FeS04.7Η200.1?0.3g/L ;葡萄糖:9?llg/L ;酵母膏:4?6g/L ;蛋白胨:2.0?3.0g/L。
4.用上述權利要求1-3之一所述培養(yǎng)方法獲得的淡紫擬青霉微菌核在防治線蟲病害中的應用。
5.用上述權利要求1-3之一所述培養(yǎng)方法獲得的真菌微菌核在制備防治線蟲病害的生防制劑中的應用，其特征在于:所述活性真菌為淡紫擬青霉，所述線蟲病害病原物為根結線蟲或胞囊線蟲。
6.根據(jù)權利要求5所述的微菌核在制備防治線蟲病害的生防制劑中的應用，其特征在于:應用方式為:將權利要求1-3之一所述培養(yǎng)方法獲得的淡紫擬青霉微菌核干燥后與硅藻土或高嶺土以及助劑按重量比為微菌核；硅藻土或高嶺土:助劑=8-10: 85-88: 2-5混合后成為微菌核細粒劑，用于防治根結線蟲或胞囊線蟲。
7.根據(jù)權利要求5所述的微菌核在制備防治線蟲病害的生防制劑中的應用，其特征在于:所述助劑為蔗糖酯或黃原膠。
8.一種防治線蟲病害的生防制劑，其特征在于:包含通過上述權利要求1-3之一所述培養(yǎng)方法獲得的淡紫擬青霉微菌核和輔料。
【文檔編號】C12R1/79GK104357338SQ201410676430
【公開日】2015年2月18日 申請日期:2014年11月21日 優(yōu)先權日:2014年11月21日
【發(fā)明者】王中康, 宋章永, 殷幼平 申請人:重慶大學