單增李斯特菌選擇性顯色培養(yǎng)基及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種單增李斯特菌選擇性顯色培養(yǎng)基，其中每1000mL培養(yǎng)基含有如下重量的組分：心-腦提取物5-20g、瓊脂2-6g、蛋白胨2-5g、特異性酶顯色底物0.1-1g、二甲基甲酰胺0.05-20g、硫酸鎂0.2-0.5g、氯化鋰0.2-0.5g、除氧劑0.3-0.6g、3-嗎啉代丙烷-1-磺酸0.2-1.0g、雜菌抑制劑6-17g、余量為水；所述特異性酶顯色底物是5-溴-4-氯-3-吲哚-肌醇-1-磷酸鹽。本發(fā)明采用單增李斯特菌特異性顯色底物制成選擇性顯色培養(yǎng)基，以低成本實現了單增利斯特菌特異性選擇和顯色功能，解決單增利斯特均分離培養(yǎng)和鑒別困難的問題。
【專利說明】單增李斯特菌選擇性顯色培養(yǎng)基及其制備方法

【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種適用于單增李斯特菌的選擇性顯色培養(yǎng)基，以及該選擇性顯色培 養(yǎng)基的制備方法。

【背景技術】
[0002] 李斯特菌是1926年在英國首次從家兔和豚鼠體內分離到的，并于1929年證實了 對人的致病性。該菌有6個種，分別為單核細胞增生性李斯特菌（簡稱單增李斯特菌，LM)、 英諾克李斯特菌、西爾李斯特菌、威爾斯李斯特菌、綿羊李斯特菌和格氏李斯特茵。其中單 增李斯特菌是人畜致病菌，綿羊李斯特菌是動物致病菌，其余無致病性。單增李斯特菌廣泛 存在于土壤、動物和水產品中，其中涉及最多的食物有軟質干酪、乳制品、香腸、熏魚、生菜 食物、熟菜店的食物，以及冷凍的即食食品。因其具有獨特的生理特性，能引起人類腦膜炎、 敗血癥等疾患，尤以妊娠期婦女、新生兒以及免疫功能低下的病人更易感染，致死率達30% 以上。近幾年來，因食品污染單增李斯特菌而導致的食物中毒事件日漸增多，已引起不少國 家的廣泛關注，并已被列為20世紀90年代四大食品致病菌之一，成為許多國家食品衛(wèi)生的 必檢項目。在我國，目前該菌也被國家質檢總局列為進出口食品的必檢菌或監(jiān)控病原菌。
[0003] 建立簡便快捷、靈敏度好、特異性高的單增李斯特菌檢測技術成為眾多研究者的 共同期望。目前除傳統的分離培養(yǎng)和鑒定法外，還包括顯色培養(yǎng)基快速鑒定法、微生物分析 法、分子生物學法、免疫學法。理想的病原體檢測方法至少應該具備以下特征：易操作性、靈 敏性、特異性、快速、便宜、自動化，以及能夠檢測活的、具有毒力的微生物的存在。但是，到 目前為止還沒有一種檢測方法能夠滿足以上列出的所有標準。傳統方法費時，工作量大，不 適應當前微生物快速、靈敏檢測的需要。分子生物學檢測方法與傳統方法相比，雖然大大減 少了工作量，但是檢測的陽性樣品要以傳統方法為參照，并且檢測易出現假陰性和假陽性 結果。
[0004] 目前單增李斯特菌分離用的選擇性培養(yǎng)基，包括顯色培養(yǎng)基只能選擇性的培養(yǎng)李 斯特菌群而不能選擇性培養(yǎng)單增李斯特菌，而單增李斯特菌以外的李斯特菌屬無致病性或 只對動物具有致病性，單增李斯特菌的微生物學鑒別需要復雜的生化反應試驗，鑒別所需 時間過長，影響臨床診斷和治療。


【發(fā)明內容】

[0005] 本發(fā)明提供一種單增李斯特菌選擇性顯色培養(yǎng)基，以及該選擇性顯色培養(yǎng)基的制 備方法，以克服現有技術存在的上述缺陷。
[0006] 本發(fā)明首先涉及一種單增李斯特菌選擇性顯色培養(yǎng)基，其中每IOOOmL培養(yǎng)基含 有如下重量的組分：
[0007]

【權利要求】
1. 一種單增李斯特菌選擇性顯色培養(yǎng)基，其特征在于，其中每IOOOrnL培養(yǎng)基含有如下 重量的組分：
所述特異性酶顯色底物是5-溴-4-氯-3-吲哚-肌醇-1-磷酸鹽。
2. 如權利要求1所述的單增李斯特菌選擇性顯色培養(yǎng)基，其特征在于，所述特異性酶 顯色底物是5-溴-4-氯-3-吲哚-肌醇-1-磷酸鉀。
3. 如權利要求1所述的單增李斯特菌選擇性顯色培養(yǎng)基，其特征在于，所述除氧劑選 自丙酮酸鹽、過氧化氫、巰基乙酸鹽、半胱氨酸、硫化鈉或硫化亞鐵。
4. 如權利要求3所述的單增李斯特菌選擇性顯色培養(yǎng)基，其特征在于，所述丙酮酸鹽 是其鈉鹽或鉀鹽。
5. 如權利要求3所述的單增李斯特菌選擇性顯色培養(yǎng)基，其特征在于，所述、巰基乙酸 鹽是其鈉鹽或鉀鹽。
6. 如權利要求1所述的單增李斯特菌選擇性顯色培養(yǎng)基，其特征在于，所述雜菌抑制 劑選自萘啶酸、放線菌酮或鹽酸吖啶黃。
7. 如權利要求6所述的單增李斯特菌選擇性顯色培養(yǎng)基，其特征在于，所述雜菌抑制 劑是萘啶酸、放線菌酮和鹽酸吖啶黃的混合物。
8. 如權利要求7所述的單增李斯特菌選擇性顯色培養(yǎng)基，其特征在于，所述雜菌抑制 劑中各組分的重量配比如下：萘啶酸〇. 01-0. 05份、放線菌酮0. 015-0. 05份、鹽酸吖啶黃 6-15 份。
9. 一種制備如權利要求1-8任一項所述單增李斯特菌選擇性顯色培養(yǎng)基的方法，其特 征在于，包括如下步驟： 1) 將特異性酶顯色底物溶于二甲基甲酰胺中配成混合液； 2) 將心-腦提取物、瓊脂、蛋白胨、硫酸鎂、氯化鋰、除氧劑、3-嗎啉代丙烷-1-磺酸、雜 菌抑制劑按比例混合； 3) 將步驟1)的混合液加入步驟2)混合液中，加水配成一定濃度溶液； 4) 120°C滅菌15min后冷卻，即得到所述單增李斯特菌選擇性顯色培養(yǎng)基。
【文檔編號】C12Q1/04GK104388522SQ201410682559
【公開日】2015年3月4日 申請日期:2014年11月24日 優(yōu)先權日:2014年11月24日
【發(fā)明者】金京勛 申請人:蘇州嘉禧蘿生物科技有限公司