冠心病相關(guān)基因即cyp17a1基因及其體外檢測的試劑、制劑或試劑盒、應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于生物工程中冠心病相關(guān)基因相關(guān)【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種冠心病相關(guān)基因即CYP17A1基因及其體外檢測的試劑、制劑或試劑盒、應(yīng)用，該基因的核苷酸序列具有SEQ ID NO: 1所示的序列。本發(fā)明對冠心病相關(guān)基因及其體外檢測的試劑、制劑或試劑盒和應(yīng)用做了詳細(xì)介紹，該體外檢測冠心病相關(guān)基因的試劑盒除了可以用于體外檢測冠心病相關(guān)基因的多態(tài)性外，還可以用于檢測、預(yù)防、診斷或治療冠心病，從而降低冠心病的發(fā)生率，對預(yù)防和治療冠心病具有重大的意義。 <b/>
【專利說明】冠心病相關(guān)基因即CYP17A1基因及其體外檢測的試劑、制 劑或試劑盒、應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物工程中冠也病相關(guān)基因相關(guān)【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種冠也病相關(guān)基因 即CYP17A1基因及其體外檢測的試劑、制劑或試劑盒、應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 流行病學(xué)與臨床研究表明，冠狀動脈粥樣硬化性也臟?。╟oronary artery disease)是發(fā)達(dá)國家和大多數(shù)發(fā)展中國家成年人發(fā)病和死亡的主要原因。許多發(fā)展中國 家（包括中國），隨著人均壽命的延長、物質(zhì)條件的富裕和生活方式的西方化，冠也病患病 率和死亡率呈逐年增高的趨勢已引起全球性關(guān)注。預(yù)計到本世紀(jì)20年代冠也病可能成為 全球排名第一名的疾病。雖然近年來冠也病的診斷和治療有了很大發(fā)展，冠也病2級預(yù)防 藥物和介入治療等大大改善了冠也病患者的預(yù)后，但其病因?qū)W與發(fā)病機(jī)制的研究仍然進(jìn)展 緩慢。自上世紀(jì)60年代Frmainghma的研究結(jié)果公布W來，人們對冠也病的認(rèn)識也有了很 大的提高，已經(jīng)認(rèn)識到冠也病不只是一種單因素疾病，而是由多種內(nèi)源性及外源性因素共 同決定的復(fù)雜性疾病，除了傳統(tǒng)的危險因素，如高血壓，糖尿病，吸煙，代謝綜合征等環(huán)境因 素外，遺傳因素在冠也病發(fā)生發(fā)展過程中的作用也得到了更進(jìn)一步的認(rèn)識及得到了一定程 度的重視，在冠也病發(fā)生發(fā)展中遺傳因素約占40%至60%。
[0003] 冠也病的患病率及病死率與性別明顯相關(guān)，男性明顯高于女性，因此，性別和性激 素與冠也病的關(guān)系深受人們的關(guān)注。新的研究證實，睪麗（testosterone, T)與冠也病多 種危險因素密切相關(guān)，如血脂代謝奈亂、高血壓、膜島素抵抗與糖尿病、凝血纖溶系統(tǒng)等。但 睪麗影響冠也病的發(fā)生、發(fā)展的機(jī)制目前尚未完全闡明。近年來研究發(fā)現(xiàn)，睪麗具有抗動脈 粥樣硬化（atherosclerosis, A巧的作用，生理劑量的睪麗可W抑制AS的反應(yīng)，而睪麗水 平低下則是AS及冠也病的高危險因子，We化等對睪麗水平低下的老年男性補(bǔ)充少劑量睪 麗制劑后可增加血管內(nèi)皮功能，舒張冠狀動脈，緩解老年男性也絞痛癥狀，改善也肌缺血。 Morris等也研究發(fā)現(xiàn)經(jīng)冠狀動脈造影證實為冠也病患者較對照組睪麗水平明顯降低。
[0004] 大量研究證實血管內(nèi)皮功能奈亂是冠也病發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵機(jī)制，生理量睪麗可直 接作用血管內(nèi)皮細(xì)胞促進(jìn)一氧化氮釋放，改善內(nèi)皮功能，而低睪麗水平可降低血管內(nèi)皮功 能而促進(jìn)冠也病的發(fā)生。脂質(zhì)代謝奈亂也是冠也病的主要發(fā)病機(jī)制之一，低密度脂蛋白膽 固醇（LDkC)、總膽固醇（TC)升高是AS和冠也病發(fā)生的主要危險因子，高密度脂蛋白膽固 醇（皿kC)則與AS和冠也病的發(fā)病呈負(fù)相關(guān)，研究表明睪麗水平與高密度脂蛋白膽固醇呈 顯著正相關(guān)，與總膽固醇、H醜甘油（TG)、極低密度脂蛋白（VLDL)均呈顯著負(fù)相關(guān)，Ma化in 等也證實低水平睪麗引起血脂奈亂，而補(bǔ)充睪麗可W糾正血脂奈亂。膜島素抵抗和糖尿病 是冠也病重要的獨立危險因素，游離睪麗水平降低與糖尿病有一定的關(guān)系，Selvin等研究 證實2型糖尿病發(fā)病與低游離或低生物活性的睪麗水平密切相關(guān)。凝血與纖溶障礙是冠也 病發(fā)生的重要機(jī)制，生理水平的睪麗可改善血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能，促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞組織因子 通道抑制劑及組織纖維蛋白溶酶原激活劑的表達(dá)，抑制纖溶酶原激活物抑制劑的分泌，睪 麗水平低下時增加凝血因子VIII相關(guān)蛋白，致血管內(nèi)皮功能異常及血管炎性反應(yīng)，可促進(jìn) 血小板黏附于受損血管壁，增加冠也病的發(fā)生率。
[0005] 雌激素是一種主要參與女性生殖的激素，但是在其他許多的生理和病理過程中都 起著十分重要的作用，如調(diào)解血管收縮、血管內(nèi)皮修復(fù)和脂質(zhì)代謝，參與葡萄糖代謝和膜島 素血管通路等，該些都會直接或間接地影響到也血管系統(tǒng)的功能。目前認(rèn)為雌激素通過該 些不同的途徑對也血管系統(tǒng)起著保護(hù)作用，雌激素缺乏可能對也血管系統(tǒng)產(chǎn)生不利的影 響。綜上，性激素及其比例關(guān)系在也血管疾病尤其是冠也病的發(fā)病中有著十分重要的作用。
[0006] CYP17A1基因位于10q24. 3,有8個外顯子及7個內(nèi)含子，主要在腎上腺及性腺表 達(dá)。CYP17A1基因編碼P450C17蛋白，該酶屬于細(xì)胞色素P450超家族酶之一，催化許多反應(yīng)， 包括藥物代謝及膽固醇、類固醇和其他脂類的合成，它含有17 a-輕化酶和17, 20-碳鏈裂 解酶兩種酶活性，是腎上腺及性腺類固醇激素（包括性激素）合成的關(guān)鍵酶之一。CYP17A1 基因的多態(tài)性可導(dǎo)致17 a -輕化酶和/或17, 20-碳鏈裂解酶的缺乏，影響性激素的前體物 質(zhì)脫氨表睪麗和雄帰二麗的合成，從而引起一系列影響冠也病發(fā)生發(fā)展的病理生理變化。
[0007] CYP17A1基因是近期在一項有關(guān)冠也病的全基因組關(guān)聯(lián)研究（GWAS)中發(fā)現(xiàn)的新 基因，認(rèn)為遺傳多態(tài)性與冠也病之間存在關(guān)聯(lián)。近年來對于CYP17A1基因多態(tài)性及編碼蛋 白質(zhì)在也血管系統(tǒng)發(fā)生發(fā)展過程中的作用逐漸引起了人們關(guān)注。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明提供了一種冠也病相關(guān)基因即CYP17A1基因及其體外檢測的試劑、制劑或 試劑盒、應(yīng)用，能夠檢測，預(yù)防，診斷或治療冠也病。
[0009] 本發(fā)明的技術(shù)方案之一是通過W下措施來實現(xiàn)的：一種冠也病相關(guān)基因即 CYP17A1基因，該基因的核巧酸序列具有SEQ ID NO: 1所示的序列。
[0010] 本發(fā)明的技術(shù)方案之二是通過W下措施來實現(xiàn)的；一種體外檢測根據(jù)權(quán)利要求1 所述的冠也病相關(guān)基因的試劑，該試劑用于檢測CYP17A1基因rs4919687位點的多態(tài)性，該 試劑包括如下引物： 上游引物；5'CCACTCTTGCCCTTACAC 3' 下游引物；5'GCAGTCCTCAGCCTCTAC 3' 下面是對上述發(fā)明技術(shù)方案之二的進(jìn)一步優(yōu)化或/和改進(jìn)： 上述試劑可為用于聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)與限制性片段長度多態(tài)性分析相結(jié)合的試劑或用 于聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)與直接測序法相結(jié)合的試劑。
[0011] 本發(fā)明的技術(shù)方案之H是通過W下措施來實現(xiàn)的：一種有體外檢測冠也病相關(guān)基 因的試劑的制劑或試劑盒，該試劑盒包含PCR擴(kuò)增酶及相應(yīng)緩沖液。
[0012] 本發(fā)明的技術(shù)方案之四是通過W下措施來實現(xiàn)的：一種體外檢測冠也病相關(guān)基因 的試劑在制備用于體外檢測冠也病相關(guān)基因的制劑或試劑盒中的應(yīng)用。
[0013] 下面是對上述發(fā)明技術(shù)方案之四的進(jìn)一步優(yōu)化或/和改進(jìn)： 上述試劑盒中可包含PCR擴(kuò)增酶及相應(yīng)緩沖液。
[0014] 本發(fā)明對冠也病相關(guān)基因及其體外檢測的試劑、制劑或試劑盒和應(yīng)用做了詳細(xì)介 紹，該體外檢測冠也病相關(guān)基因的試劑盒除了可W用于體外檢測冠也病相關(guān)基因的多態(tài)性 夕F，還可W用于檢測、預(yù)防、診斷或治療冠也病，從而降低冠也病的發(fā)生率，對預(yù)防和治療冠 也病具有重大的意義。

【專利附圖】

【附圖說明】
[001引圖1為本發(fā)明的rs4919687多態(tài)性位點的酶切圖譜。其中如泳道1，2, 3, 5, 6和7 顯示待測個體rs4919687位點的基因型為G/G純合子；泳道4顯示待測個體的rs4919687 位點為A/G雜合子；泳道8顯示待測個體的rs4919687位點為A/A純合子。

【具體實施方式】
[0016] 為了更清楚地理解本發(fā)明，現(xiàn)參照下列實施例及附圖進(jìn)一步描述本發(fā)明，實施例 僅用于解釋而不W任何方式限制本發(fā)明。除非特別說明，本發(fā)明中的％均為質(zhì)量百分?jǐn)?shù)；除 非特別說明，制備過程在常溫、常壓狀態(tài)下進(jìn)行；除非特別說明，本發(fā)明中采用的試劑、方法 和設(shè)備為本【技術(shù)領(lǐng)域】常規(guī)試劑、方法和設(shè)備；除非特別說明，本發(fā)明中采用的試驗條件為本

【技術(shù)領(lǐng)域】常規(guī)試驗條件；除非特別說明，本發(fā)明中所用試劑均為市購；除非特別說明，本發(fā) 明中的水為去離子水；除非特別說明，本發(fā)明中的溶液均為溶劑為水的水溶液，例如，若未 做特別說明，鹽酸溶液為鹽酸水溶液。實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī) 條件進(jìn)行：如Sambrook等人所著的《分子克??；實驗手冊》(New fork: Cold化ring Harbor L油oratory Press, 1989)中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。
[0017] 實施例1，一種冠也病相關(guān)基因即CYP17A1基因，該基因的核巧酸序列具有SEQ ID NO: 1所示的序列。含有CYP17A1的基因的待測樣品可W從來自試驗者的細(xì)胞獲得，如來自 血液、尿、唾液、胃液、頭發(fā)、活組織檢查和尸體解剖材料的細(xì)胞，優(yōu)選來自血液。
[0018] 實施例2,一種體外檢測冠也病相關(guān)基因的試劑，該試劑用于檢測CTP17A1基因 rs4919687位點的多態(tài)性，該試劑包括如下引物： 上游引物；5'CCACTCTTGCCCTTACAC 3' 下游引物；5'GCAGTCCTCAGCCTCTAC 3' 所謂"基因多態(tài)性"指的是在人群中，各個體基因的核巧酸序列存在的差異。本領(lǐng)域 普通技術(shù)人員已知，本發(fā)明所述的多態(tài)性位點為單核巧酸多態(tài)性（SNP)位點，即基因組序列 中單核巧酸發(fā)生改變；核巧酸酸序列的差異可W體現(xiàn)在DNA水平上或者RNA水平上，所W， 本發(fā)明的冠也病相關(guān)基因可W體現(xiàn)在DNA水平，RNA水平上，優(yōu)選DNA水平，更優(yōu)選基因組 DNA。
[0019] 目前關(guān)于復(fù)雜性狀疾病的研究有兩種策略，連鎖分析的方法和病例-對照研究。 由于冠也病是一種多因素疾病，是由遺傳和環(huán)境因素共同作用的結(jié)果，因而采用連鎖分析 較為困難。從遺傳的角度分析，冠也病/也肌梗死屬于復(fù)雜遺傳性狀疾病。對該疾病的發(fā) 生起作用的因素中，除環(huán)境因素外，起作用的基因總數(shù)估計多達(dá)上百條，各個基因之間又存 在著相互作用，基因又和環(huán)境之間存在相互作用。冠也病/也肌梗死的發(fā)生具有一定的家 族聚集性，但更多的是一些散發(fā)病例。所W本發(fā)明采用病例對照研究。所述病例對照研究 就是在采用隨機(jī)挑選的兩組人群中（病例和對照）比較某等位基因的頻率。
[0020] 本發(fā)明在新疆維吾爾族人群中通過統(tǒng)計分析（189例冠也病患者和180例對 照），經(jīng)過大量的實驗，最后W確鑿的證據(jù)證明了具有本發(fā)明的rs4919687多態(tài)性位點的 CYP17A1基因為冠也病相關(guān)基因，A等位基因的攜帶者患冠也病的危險性較G等位基因攜帶 者增加了 2. 3倍 實施例3,作為上述實施例的優(yōu)選，該試劑為用于聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)與限制性片段長度多 態(tài)性分析相結(jié)合的試劑或用于聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)與直接測序法相結(jié)合的試劑。試劑盒中檢測 rs4919687位點的試劑根據(jù)檢測方法的不同而不同，例如，采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)與限制性片 段長度多態(tài)性分析相結(jié)合方法來檢測rs4919687多態(tài)性位點時，試劑盒中可W含有限制性 內(nèi)切酶和相應(yīng)的酶切圖譜，例如kpnl限制性內(nèi)切酶和相應(yīng)的酶切圖譜。
[0021] 實施例4,一種有體外檢測冠也病相關(guān)基因的試劑的制劑或試劑盒，其特征在于該 試劑盒包含PCR擴(kuò)增酶及相應(yīng)緩沖液。本發(fā)明檢測rs4919687位點多態(tài)性的冠也病相關(guān)基 因的試劑盒可W用于體外檢測冠也病相關(guān)基因的多態(tài)性；rs4919687位點突變的冠也病相 關(guān)基因的試劑盒可W用于檢測、預(yù)防、診斷或治療冠也?。惑w外檢測冠也病相關(guān)基因的方法 可W用于檢測、預(yù)防、診斷或治療冠也病。
[0022] 實施例5, 一種體外檢測冠也病相關(guān)基因的試劑在制備用于體外檢測冠也病相關(guān) 基因的制劑或試劑盒中的應(yīng)用。本發(fā)明檢測rs4919687位點多態(tài)性的冠也病相關(guān)基因的試 劑盒可W用于體外檢測冠也病相關(guān)基因的多態(tài)性；rs4919687位點突變的冠也病相關(guān)基因 的試劑盒可W用于檢測、預(yù)防、診斷或治療冠也?。惑w外檢測冠也病相關(guān)基因的方法可W用 于檢測、預(yù)防、診斷或治療冠也病。
[0023] 實施例6,與上述實施例的不同之處在于，試劑盒還包含PCR擴(kuò)增酶及相應(yīng)緩沖 液。
[0024] 實施例7，研究對象的選取 冠也病組（CAD組)189例，選自2006年1月?2011年7月在新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī) 院也臟中也住院患者，符合世界衛(wèi)生組織（WHO)關(guān)于缺血性也臟病的命名和診斷標(biāo)準(zhǔn)。對 照組180例，選擇2006年至2011年新疆地區(qū)人群慢性病調(diào)查中無任何也臟疾病者。兩組 均為維吾爾族人群，年齡和性別構(gòu)成比均匹配，具有均衡性。
[00巧]納入標(biāo)準(zhǔn)；CAD組；按照我院經(jīng)皮冠狀動脈造影證實至少有一支冠狀動脈血管狹 窄> 50%且無其他方面的也臟病疾患。對照組；選擇2006年至2011年新疆地區(qū)人群慢性 病調(diào)查中無任何也臟疾病者.兩組在納入研究前簽署知情同意書。
[0026] 剔除標(biāo)準(zhǔn)；CAD組：臨床資料不全者及同時合并W下疾病之一者予W剔除。巧口； 主動脈夾層、風(fēng)濕性也臟病、先天性也臟病者、多臟器功能衰竭W及具有精神障礙不能配合 者)。對照組；1、2006年至2010年新疆地區(qū)人群慢性病調(diào)查中證實患有任何也臟疾病者2、 有也血管病家族史者3、吸毒者4、精神障礙者，予W剔除。
[0027] 實施例8,采用PCR-RFLP方法檢測本發(fā)明的冠也病相關(guān)基因rs4919687位點的多 態(tài)性 方法；PCR反應(yīng)體系巧0 yl);基因組模板DNA 5化g(來自血液標(biāo)本，按照常規(guī)方法將 白細(xì)胞內(nèi)的DNA用苯酷-氛仿法或者用鹽析法提取出來即可）、2*powder Taq PCR master mix 25ul, 21ul of去離子水，上，下引物各lul，在96孔PCR自動循環(huán)儀上進(jìn)行PCR反應(yīng)， PCR循環(huán)參數(shù)；96°C預(yù)變性5分鐘；經(jīng)94C 30砂，61. (TC 30砂，72C 1分鐘；循環(huán)35周后 于72C延伸10分鐘。引物如下： 上游引物；5'CCACTCTTGCCCTTACAC 3' 下游引物；5'GCAGTCCTCAGCCTCTAC 3' 擴(kuò)增產(chǎn)物長度為369堿基，選用化nl限制性內(nèi)切酶（立陶宛MBI公司）進(jìn)行酶切。酶 切條件參見生產(chǎn)廠家的操作手冊。然后在3%的瓊脂糖膠上電泳后用紫外透射儀觀察長度。
[0028] 結(jié)果；如圖1所示，當(dāng)369堿基長的PCR產(chǎn)物切割后產(chǎn)生了 310和59堿基兩種長 度的片段時，說明rs4919687位點的等位基因為G，當(dāng)只有369-種片段時說明rs4919687 位點的等位基因為A，當(dāng)有369、310和59H種片段時說明待測個體rs919687位點的基因型 為A/G雜合子，由于待測樣品為來自待測個體的DNA，且100 W下的堿基片段在瓊脂糖膠上 顯示不清，所W基因型為G/G的純合子或A/G的雜合子個體經(jīng)酶切后產(chǎn)生的59片段顯示不 清，如泳道1，2, 3, 5, 6和7所示，顯示只有310片段時，則該待測個體rs4919687位點的基 因型為G/G純合子，攜帶G等位基因；如泳道4顯示，顯示有369和310兩種片段時，則該待 測個體的rs4919687位點為A/G雜合子，攜帶A，G等位基因；如泳道8所示，顯示只有369 一種片段時，待測個體的rs4919687位點為A/A純合子，攜帶A等位基因。
[0029] 實施例9,多態(tài)位點與冠也病的關(guān)聯(lián)研究 為進(jìn)一步從遺傳的角度探討CYP17A1基因和冠也病發(fā)病之間的關(guān)系，并為國內(nèi)外已有 的同類研究提供遺傳流行病學(xué)的證據(jù)，運用PCR-RFLP的國際通行的基因分型方法，在收集 到的189例冠也病患者和相應(yīng)的180例對照中，體外檢測來自待測個體的樣品中rs4919687 位點的多態(tài)性，從而分析rs4919687位點在冠也病患者和正常對照人群的分布差異。 首先運用Hardy-Weinberg平衡檢驗。Hardy-Weinberg平衡是一種群體遺傳學(xué)的概念： 主要是指一民族生活在某一地區(qū)、能相互隨機(jī)雜交的一群人體，該個群體所具有的全部遺 傳信息稱為該群體的基因庫，它直接反映本地區(qū)，本民族的遺傳特征。該些遺傳信息的表達(dá) 形式基因頻率和基因型頻率，在沒有突變、遷移和遺傳漂變的條件下，群體中基因頻率和基 因型頻率遵守保持不變即為Hardy-Weinberg平衡。該樣既有遺傳多態(tài)性，又具備遺傳的穩(wěn) 定性。
[0030] 對基因分型結(jié)果分析發(fā)現(xiàn)，基因分型結(jié)果符合Hardy-Weinberg平衡，因此可W排 除實驗誤差，該基因分型結(jié)果比較可靠，分析結(jié)果見表2。
[0031] 結(jié)論；單因素分析發(fā)現(xiàn)，多態(tài)位點rs4919687的H種基因型個體在病例組和對照 組中的分布有明顯差異（P<〇. 05)，A/G顯隱性遺傳模式進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，A等位基因的攜帶 者相對G等位基因的攜帶者在病例組和對照組中有顯著差別（P<0. 05)，其中A等位基因的 攜帶者患冠也病的危險性是G等位基因的攜帶者患冠也病的危險性的2. 3倍。
[0032] 結(jié)論；單因素分析發(fā)現(xiàn)，多態(tài)位點rs4919687的H種基因型個體在病例組和對照 組中的分布有明顯差異（P<〇. 05)，A/G顯隱性遺傳模式進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，A等位基因及AA 基因型的分布在冠也病組里明顯高于對照組(等位基因A的分布：病例組為0. 405,對照組 為0. 222;AA基因型的分布頻率；冠也病組為19. 0,對照組為5. 6)，并且具有統(tǒng)計學(xué)意義（P 值均小于0.001)。W上研究結(jié)果表明，攜帶A等位基因者患冠也病的風(fēng)險性高于攜帶等位 基因G者。
[0033] 干擾病例-對照研究最嚴(yán)重的因素包括人群在遺傳基礎(chǔ)上的混雜、病例入選時因 為標(biāo)準(zhǔn)不嚴(yán)格產(chǎn)生的疾病混雜等，在排除了 W上幾個混雜因素的基礎(chǔ)上，發(fā)明人挑選了 189 個研究樣本和相應(yīng)的對照，為了進(jìn)一步分析rs4919687位點對冠也病危險度的貢獻(xiàn)，在調(diào) 整了年齡、性別、高血壓、糖尿病，吸煙、甘油H醋、膽固醇、高密度脂蛋白，低密度脂蛋白等 冠也病其它危險因素的影響后，進(jìn)行多變量logistic回歸模型分析。logistic回歸模型分 析是統(tǒng)計學(xué)上的一種普通的分析方法，它主要用于二分變量的分析，可w用來調(diào)整對整個 分析造成混雜的因素。結(jié)果見表3。
[0034] 結(jié)果；如表3所示，多變量logistics回歸模型分析表明，調(diào)整了年齡、性另U、高血 壓、糖尿病、吸煙、甘油H醋、膽固醇、高密度脂蛋白，低密度脂蛋白等冠也病其它危險因素 的影響后發(fā)現(xiàn)rs4919687位點仍然保持為冠也病的危險因素[AA基因型與GG基因型相比， 患冠也病的風(fēng)險性明顯增加，OR值=2. 339, 95%CI為（1. 453至3. 767)]，并且具有統(tǒng)計學(xué) 意義（P< 0.001)。
[00巧]結(jié)論；說明多態(tài)位點rs4919687突變的CYP17A1基因為冠也病相關(guān)基因，攜帶A等 位基因個體患冠也病的危險性比攜帶G等位基因的個體患冠也病的危險性顯著升高，因此 rs4919687位點突變的冠也病相關(guān)基因的試劑盒在臨床上可W用于檢測，預(yù)防，診斷或治療 冠也病。
[0036] 實施例10,體外檢測冠也病相關(guān)基因即CYP17A1基因的試劑盒 一種體外檢測冠也病相關(guān)基因的試劑盒，該試劑盒包含： 1) 擴(kuò)增rs4919687位點的引物： 上游引物；5'CCACTCTTGCCCTTACAC 3' 下游引物；5'GCAGTCCTCAGCCTCTAC 3' 2) PCR擴(kuò)增酶及相應(yīng)緩沖液。
[0037] 3)化11 I限制性內(nèi)切酶和相應(yīng)的酶切圖譜。

【權(quán)利要求】
1. 一種冠心病相關(guān)基因即CYP17A1基因，其特征在于該基因的核苷酸序列具有SEQID NO: 1所示的序列。
2. -種體外檢測根據(jù)權(quán)利要求1所述的冠心病相關(guān)基因的試劑，其特征在于該試劑用 于檢測CYP17A1基因rs4919687位點的多態(tài)性，該試劑包括如下引物： 上游引物：5'CCACTCTTGCCCTTACAC3' 下游引物：5'GCAGTCCTCAGCCTCTAC3'。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的體外檢測冠心病相關(guān)基因的試劑，其特征在于該試劑為用于 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)與限制性片段長度多態(tài)性分析相結(jié)合的試劑或用于聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)與直 接測序法相結(jié)合的試劑。
4. 一種有根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的體外檢測冠心病相關(guān)基因的試劑的制劑或試劑 盒，其特征在于該試劑盒包含PCR擴(kuò)增酶及相應(yīng)緩沖液。
5. -種根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的體外檢測冠心病相關(guān)基因的試劑在制備用于體外檢 測冠狀動脈粥樣硬化性心臟病相關(guān)基因的制劑或試劑盒中的應(yīng)用。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于試劑盒中包含PCR擴(kuò)增酶及相應(yīng)緩沖液。
【文檔編號】C12Q1/68GK104513828SQ201410684978
【公開日】2015年4月15日 申請日期:2014年11月25日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月25日
【發(fā)明者】馬依彤, 謝翔 申請人:新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院