一種用于檢測金黃色葡萄球菌的熒光顯色培養(yǎng)基的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公布了一種用于檢測金黃色葡萄球菌的熒光顯色培養(yǎng)基，含有氮源、碳源、氯化鈉、雜菌生長抑制劑，還包括金黃色葡萄球菌顯色底物4-甲基傘型酮-對硝基β-D-葡萄糖苷、β-D-葡萄糖苷，非金黃色葡萄球菌顯色底物對硝基酚-α-D-吡喃半乳糖，非金黃色葡萄球菌顯色底物對硝基苯酚β-D-葡萄糖醛酸苷。本發(fā)明公布的熒光顯色培養(yǎng)基在助顯色劑不存在的情況下，為區(qū)分金黃色葡萄球菌和其他葡萄球菌的提供更簡便的顯色方案，能有效區(qū)分黃色葡萄球菌與部分非金黃色葡萄球菌及其他雜菌，對黃色葡萄球菌具有較好的選擇性。
【專利說明】-種用于檢測金黃色葡萄球菌的熒光顯色培養(yǎng)基

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種微生物檢測的培養(yǎng)基，尤其涉及一種用于檢測金黃色葡萄球菌的 突光顯色培養(yǎng)基。

【背景技術(shù)】
[0002] 金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus)為條件致病菌，是人類化膿感染中最 常見的病原菌，也是人類的一種重要病原菌，隸屬于葡萄球菌屬（Staphylococcus)，有"嗜 肉菌"的別稱，是革蘭氏陽性菌的代表，可引起許多局部化膿感染，也可引起肺炎、偽膜性 腸炎、心包炎等，甚至引起敗血癥、膿毒癥等全身感染。當金黃色葡萄球菌污染了含淀粉及 水分較多的食品，如牛奶盒奶制品、肉、蛋等，在溫度條件適宜時，經(jīng)8-10小時即可產(chǎn)生相 當數(shù)量的腸毒素，從而引發(fā)不同程度的急性胃腸炎癥狀。
[0003] 金黃色葡萄球菌主要通過Barid-Parker瓊脂選擇性培養(yǎng)基顯色培養(yǎng)。在該培養(yǎng) 基上金黃色葡萄球菌呈現(xiàn)黑色菌落，周圍有透明圈。但是研究發(fā)現(xiàn)，一些非金黃色葡萄球菌 比如腐生葡萄球菌、緩慢葡萄球菌及賽氏葡萄球菌同樣表現(xiàn)出上述特征，造成假陽性。發(fā)明 專利CN201310603799. 9公布了一種用于區(qū)分金黃色葡萄球菌和其他葡萄球菌的顯色培養(yǎng) 基，同時為了達到更好的選色效果，選用特定助顯色劑幫助顯色。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種檢測金黃色葡萄球菌的熒光顯色培養(yǎng)基，在助顯色劑 不存在的情況下，為區(qū)分金黃色葡萄球菌和其他葡萄球菌的提供更簡便的顯色方案。
[0005] 本發(fā)明的所采用的技術(shù)方案為：
[0006] 一種用于檢測金黃色葡萄球菌的顯色培養(yǎng)基，含有氮源、碳源、氯化鈉、雜菌生長 抑制劑，還包括金黃色葡萄球菌顯色底物4-甲基傘型酮-對硝基β -D-葡萄糖苷、β -D-葡 萄糖苷，非金黃色葡萄球菌顯色底物對硝基酚-a -D-吡喃半乳糖，非金黃色葡萄球菌顯色 底物對硝基苯酚β-D-葡萄糖醛酸苷。
[0007] 優(yōu)選的，所述4-甲基傘型酮-β -D-葡萄糖苷為0. 5-5g/L。
[0008] 優(yōu)選的，所述4-甲基傘型酮-β -D-葡萄糖苷為l_2g/L。
[0009] 優(yōu)選的，所述對硝基β -D-葡萄糖苷為l-6g/L。
[0010] 優(yōu)選的，所述對硝基β -D-葡萄糖苷為3g/L。
[0011] 優(yōu)選的，所述硝基酚-D-吡喃半乳糖的含量為2_5g/L。
[0012] 優(yōu)選的，所述硝基苯酚β -D-葡萄糖醛酸苷為0. 6-1. 5g/L。
[0013] 優(yōu)選的，上述顯色培養(yǎng)基，每IOOOmL培養(yǎng)基含有牛肉膏3-10g，蛋白胨5-15g，瓊脂 10-30g，氯化鈉10-20g，牛膽鹽l-5g、頭孢克肟0. 01-0. 06mg，丙酮酸鈉5-15g。
[0014] 優(yōu)選的，所述培養(yǎng)基還含有金黃色葡萄球菌生長促進劑丙酮酸鈉。
[0015] 牛肉膏、蛋白胨、瓊脂、氯化鈉為葡萄球菌生長提供適宜的生長環(huán)境，利于其快速 增長。高鹽條件可以促進金黃色葡萄球菌生長，同時抑制雜菌生長。
[0016] 丙酮酸鈉是金黃色葡萄球菌的生長促進劑。
[0017] 頭孢克肟可以抑制大部分革蘭氏陰性菌的生長，牛膽鹽可以抑制大部分革蘭氏陽 性菌的生長。
[0018] 硝基酚-a -D-吡喃半乳糖為a -D-半乳糖苷酶的顯色底物，可以被非金黃色葡萄 球菌降解，產(chǎn)生對硝基酚。
[0019] 硝基苯酚β -D-葡萄糖醛酸為β -D-葡萄糖醛酸酶的顯色底物，可以被非金黃色 葡萄球菌降解，產(chǎn)生對硝基苯酚。
[0020] 金黃色葡萄球菌和其他葡萄球菌可以作用于4-甲基傘型酮-β-D-葡萄糖苷，生 成具有強烈熒光的4-甲基傘型酮，產(chǎn)生熒光顯微鏡下可見菌落。金黃色葡萄球菌和其他葡 萄球菌產(chǎn)生的堿性磷酸酶作用于對硝基β-D-葡萄糖苷，生成對硝基苯，產(chǎn)生黃色菌落。但 是金黃色葡萄球菌不能分解硝基酚-a-D-吡喃半乳糖、硝基苯酚β-D-葡萄糖醛酸。而其 他葡萄球菌可以分解硝基酚-a -D-吡喃半乳糖或硝基苯酚β -D-葡萄糖醛酸，產(chǎn)生黃色產(chǎn) 物，從而產(chǎn)生與金黃色葡萄球菌一樣的表觀菌落顏色。
[0021] 因此本發(fā)明公布的熒光顯色培養(yǎng)基中，非葡萄球菌顯菌落本身的顏色，葡萄球菌 顯示黃色菌落顏色，金黃色葡萄球菌顯示黃色菌落顏色并在熒光顯微鏡下可見。
[0022] 本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明的顯色培養(yǎng)基為金黃色葡萄球菌的檢測提供了一種 熒光顯色方案，在助顯色劑不存在的情況下亦能有效的區(qū)分部分葡萄球菌與非葡萄球菌、 金黃色葡萄球菌與非金黃色葡萄球菌，簡化細菌顯色培養(yǎng)過程。

【具體實施方式】
[0023] 一種用于檢測金黃色葡萄球菌的顯色培養(yǎng)基，含有氮源、碳源、氯化鈉、雜菌生長 抑制劑，還包括金黃色葡萄球菌顯色底物4-甲基傘型酮-對硝基β -D-葡萄糖苷、β -D-葡 萄糖苷，非金黃色葡萄球菌顯色底物對硝基酚-a -D-吡喃半乳糖，非金黃色葡萄球菌顯色 底物對硝基苯酚β-D-葡萄糖醛酸苷。
[0024] 4-甲基傘型酮-β -D-葡萄糖的可選含量范圍為0. 5_5g/L。
[0025] 對硝基β -D-葡萄糖苷的可選含量范圍為l_6g/L。
[0026] 硝基酚-a -D-吡喃半乳糖的含量的可選含量范圍為2_5g/L。
[0027] 上述顯色培養(yǎng)基，每IOOOmL培養(yǎng)基含有牛肉膏3-10g，蛋白胨5-15g，瓊脂10-30g， 氯化鈉10-20g，牛膽鹽l-5g、頭孢克肟0. 01-0. 06mg，丙酮酸鈉5-15g。
[0028] 上述培養(yǎng)基還含有金黃色葡萄球菌生長促進劑丙酮酸鈉。
[0029] 本發(fā)明的顯色培養(yǎng)基用于檢測金黃色葡萄球菌的方法，包括如下步驟：
[0030] (1)制備顯色平板：每IOOOmL去離子水中加入上述顯色培養(yǎng)基除硝基 酚-a -D-批喃半乳糖、硝基苯酚β -D-葡萄糖醒酸苷、頭孢克廂外的原料，攪拌，加熱煮沸 至完全溶解，待冷至約50°C，加入過濾除菌的硝基酚-a -D-批喃半乳糖、硝基苯酚β -D-葡 萄糖醛酸苷、頭孢克肟，混勻，倒平板，備用；
[0031] (2)接種培養(yǎng)：將樣品或含樣品的增菌液接種到顯色平板上，37°C培養(yǎng)過夜培養(yǎng)；
[0032] (3)可能的顯色結(jié)果：黃色熒光顯微鏡下不顯色，黃色且熒光顯微鏡下顯色，菌落 本身顏色。
[0033] 上述三種顏色結(jié)果對比鮮明，易區(qū)分。
[0034] 下面結(jié)合具體的實施例對本發(fā)明作進一步的說明，但并不局限如此。
[0035] 實施例一
[0036] -種用于檢測金黃色葡萄球菌的突光顯色培養(yǎng)基，每IOOOmL培養(yǎng)基含有牛肉 膏3g，蛋白胨IOg,瓊脂15g，氯化鈉 IOg,牛膽鹽I. 5g、頭孢克月虧0. 04mg，4-甲基傘型 酮-β -D-葡萄糖苷2g/L，對硝基β -D-葡萄糖苷3g/L，硝基酚-a -D-吡喃半乳糖的含量 為3. 5g/L，硝基苯酚β -D-葡萄糖醒酸苷為lg/L，丙酮酸鈉10g。
[0037] 實施例二
[0038] -種用于檢測金黃色葡萄球菌的突光顯色培養(yǎng)基，每IOOOmL培養(yǎng)基含有牛肉 膏3g，蛋白胨IOg,瓊脂15g，氯化鈉 IOg,牛膽鹽I. 5g、頭孢克月虧0. 04mg，4-甲基傘型 酮-β -D-葡萄糖苷3g/L，對硝基β -D-葡萄糖苷2g/L，硝基酚-a -D-吡喃半乳糖的含量 為2g/L，硝基苯酚β -D-葡萄糖醒酸苷為I. 5g/L，丙酮酸鈉 8g。
[0039] 實施例三
[0040] -種用于檢測金黃色葡萄球菌的突光顯色培養(yǎng)基，每IOOOmL培養(yǎng)基含有牛肉 膏3g，蛋白胨IOg,瓊脂15g，氯化鈉 15g，牛膽鹽I. 5g、頭孢克月虧0. 04mg，，4-甲基傘型 酮-β -D-葡萄糖苷5g/L，對硝基β -D-葡萄糖苷6g/L，硝基酚-a -D-吡喃半乳糖的含量 為5g/L，硝基苯酚β -D-葡萄糖醒酸苷為0. 6g/L，丙酮酸鈉 5g。
[0041] 將表1所列7種標準菌株分別制成適當濃度的標準菌懸液（濃度為107?108cfu/ mL)，分別劃線接種到用實施例1熒光顯色培養(yǎng)基制成的平板上，37°C過夜培養(yǎng)。特異性實 驗結(jié)果見表1。表1中菌落生長情況用生長幾區(qū)來表示，4區(qū)表示生長良好，菌落大小正常， 1-3區(qū)表示生長受抑制，菌落偏小或生長少于4區(qū)。
[0042] 表1金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基的特異性顯色試驗結(jié)果

【權(quán)利要求】
1. 一種用于檢測金黃色葡萄球菌的突光顯色培養(yǎng)基，含有氮源、碳源、氯化鈉、雜菌生 長抑制劑，其特征在于，還包括金黃色葡萄球菌顯色底物4-甲基傘型酮-對硝基3-D-葡 萄糖苷、3 -D-葡萄糖苷，非金黃色葡萄球菌顯色底物對硝基酚-a -D-吡喃半乳糖，非金黃 色葡萄球菌顯色底物對硝基苯酚3-D-葡萄糖醛酸苷。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的熒光顯色培養(yǎng)基，其特征在于，所述4-甲基傘型酮-0 -D-葡 萄糖苷為〇. 5-5g/L。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的熒光顯色培養(yǎng)基，其特征在于，所述4-甲基傘型酮-0 -D-葡 萄糖苷為l_2g/L。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的熒光顯色培養(yǎng)基，其特征在于，所述對硝基3-D-葡萄糖苷為 卜6g/L〇
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的熒光顯色培養(yǎng)基，其特征在于，所述對硝基3-D-葡萄糖苷為 3g/L。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的熒光顯色培養(yǎng)基，其特征在于，所述硝基酚_ a -D-吡喃半乳 糖的含量為2_5g/L。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的熒光顯色培養(yǎng)基，其特征在于，所述硝基苯酚3-D-葡萄糖醛 酸苷為 0? 6-L 5g/L。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1-7所述的熒光顯色培養(yǎng)基，其特征在于，每1000mL培養(yǎng)基含有牛肉 膏3-10g，蛋白胨5-15g，瓊脂10-30g，氯化鈉10-20g，牛膽鹽l-5g、頭孢克肟0? 01-0. 06mg， 丙酮酸鈉5-15g。
9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的熒光顯色培養(yǎng)基，其特征在于，還含有金黃色葡萄球菌生長 促進劑丙酮酸鈉。
【文檔編號】C12Q1/14GK104388529SQ201410708100
【公開日】2015年3月4日 申請日期:2014年11月27日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月27日
【發(fā)明者】金京勛 申請人:蘇州嘉禧蘿生物科技有限公司