一種黑木耳膠原蛋白的提取方法
【專利摘要】一種黑木耳膠原蛋白的提取方法，主要步驟為： 步驟1.黑木耳的預(yù)處理；步驟2.確定黑木耳膠原蛋白提取的酶制劑；步驟3.黑木耳膠原蛋白的提??；步驟4.黑木耳膠原蛋白的精制。本發(fā)明的 一種黑木耳膠原蛋白的提取方法，采用酶法提取，酶法提取反應(yīng)條件溫和，蛋白質(zhì)多膚鏈可水解為短膚鏈，提高了蛋白質(zhì)的溶解性，同時其反應(yīng)的液固比小，提高了提取液中的固形物含量，降低了用于除去提取液水分的能量消耗，為工業(yè)生產(chǎn)創(chuàng)造了有利條件。
【專利說明】一種黑木耳膠原蛋白的提取方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種提取技術(shù)方法，特別是一種黑木耳膠原蛋白的提取方法。

【背景技術(shù)】
[0002]黑木耳屬于真菌門擔(dān)子菌綱木耳目，是人們所喜愛的食品，其質(zhì)地細嫩、清脆爽滑，子實體除含有豐富的蛋白質(zhì)、維生素、鈣、磷、銅等物質(zhì)外，還含有大量的具有生物活性的多糖，是一種重要的藥食兼用真菌。
[0003]黑木耳不僅具有很高的營養(yǎng)價值，它還有很高的藥用價值。醫(yī)學(xué)研究證明:黑木耳具有益氣強身、滋腎養(yǎng)胃、活血等功能，它能抗血凝、抗血栓、降血脂，降低血黏度，軟化血管，使血液流動順暢，減少心血管病發(fā)生，是一種藥用價值極高的食用菌。
[0004]我國是食用菌生產(chǎn)、出口和消費的大國，黑木耳產(chǎn)量占世界第一位。黑木耳蛋白質(zhì)含量高，脂肪與熱量低，開發(fā)黑木耳蛋白質(zhì)新資源，對提高我國人民營養(yǎng)狀況有積極作用。黑木耳膠原蛋白作為一種新蛋白食品，對于拓寬蛋白食品的新來源，充分利用我國現(xiàn)有資源，改善我國人民的膳食結(jié)構(gòu)，具有非常重要的意義。
[0005]目前提取黑木耳膠原蛋白的方法有熱水法、堿法、酶法等，熱水法提取黑木耳蛋白質(zhì)，比較傳統(tǒng)的水提法得率有所提高，但由于溫度過高，會造成蛋白質(zhì)的不可逆變性；堿法提取技禾屬于化學(xué)提取方法，對黑木耳蛋白質(zhì)的化學(xué)特性及其功能特性造成了一定影響，并且具有一定的污染。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的是提供一種黑木耳膠原蛋白的提取方法。
[0007]本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn):一種黑木耳膠原蛋白的提取方法，其提取方法的主要步驟為:
步驟1.黑木耳的預(yù)處理:
將黑木耳清洗、除雜后，40°C低溫烘干，然后粉碎成1.0mm-1.3_粉末，在25個大氣壓、50°C的條件下進行CO2超臨界萃取2.5h，脫脂后，干燥備用；
步驟2.確定黑木耳膠原蛋白提取的酶制劑:
選用堿性蛋白酶進行黑木耳膠原蛋白的提??；
步驟3.黑木耳膠原蛋白的提取:
稱取2份黑木耳粉末，采用堿性蛋白酶，在提取溫度55°C、pH值8.5的條件下提取時間2_4h，料液比為1:50-1:70，酶用量為3%-5%，酶解，反應(yīng)結(jié)束后離心，取上清液；
步驟4.黑木耳膠原蛋白的精制:
將盛有黑木耳蛋白質(zhì)溶液的燒杯置于裝有冰水的大燒杯內(nèi)，并置于磁力攪拌器上攪拌；邊攪拌，邊緩慢加入硫酸餒至飽和，時間為5-10分鐘內(nèi)；繼續(xù)攪拌10-30分鐘；10000轉(zhuǎn)離心10分鐘或3000轉(zhuǎn)離心30分鐘；棄去上清液，將沉淀懸浮于1-2倍沉淀物體積的緩沖液中，通過離心除去殘留的不溶性物質(zhì)；透析、超濾除去硫酸錢；使用5mol/L的NaCI溶液鹽析，使蛋白質(zhì)溶液最終濃度至0.9mol/L，24h后離心4500轉(zhuǎn)離心25min，沉淀用0.5mol/L乙酸溶解，重復(fù)鹽析和溶解操作I次，然后移入透析袋，蒸餾水透析3d，接下來冷凍干燥2d，得到精制黑木耳膠原蛋白凍干樣。
[0008]本發(fā)明的有益效果:本發(fā)明的一種黑木耳膠原蛋白的提取方法，采用酶法提取，酶法提取反應(yīng)條件溫和，蛋白質(zhì)多膚鏈可水解為短膚鏈，提高了蛋白質(zhì)的溶解性，同時其反應(yīng)的液固比小，提高了提取液中的固形物含量，降低了用于除去提取液水分的能量消耗，為工業(yè)生產(chǎn)創(chuàng)造了有利條件。

【具體實施方式】
[0009]實施例1
1.黑木耳的預(yù)處理:
將黑木耳清洗、除雜后，40°C低溫烘干，然后粉碎成1.0mm-1.3mm,在25個大氣壓、500C >2.5h進行CO2超臨界萃取脫脂后,干燥備用。
[0010]2.確定黑木耳膠原蛋白提取的酶制劑
通過胃蛋白酶、堿性蛋白酶、纖維素酶的實驗數(shù)據(jù)比較分析，發(fā)現(xiàn)堿性蛋白酶提取效果優(yōu)于纖維素酶，纖維素酶優(yōu)于胃蛋白酶，確定選用堿性蛋白酶進行黑木耳膠原蛋白的提取。
[0011]3.黑木耳膠原蛋白的提取:
稱取2g黑木耳粉末，采用堿性蛋白酶，在提取溫度55 °C、pH值8.5下提取時間2_4h，同時料液比為1:50-1:70，酶用量為3%-5%，酶解，反應(yīng)結(jié)束后離心，取上清液。
[0012]4.黑木耳膠原蛋白的精制:
將盛有黑木耳蛋白質(zhì)溶液的燒杯放在另一裝有冰水的大燒杯內(nèi)，并置于磁力攪拌器上攪拌；邊攪拌，邊徐徐加入硫酸餒至飽和，該步驟應(yīng)在5-10分鐘內(nèi)完成；繼續(xù)攪拌10-30分鐘；10000轉(zhuǎn)離心10分鐘或3000轉(zhuǎn)離心30分鐘；棄去上清液，將沉淀懸浮于1_2倍沉淀物體積的緩沖液中，殘留的不溶性物質(zhì)可能是變性蛋白，通過離心除去；硫酸錢能夠通過透析，超濾除去，或者使用5mol/L的NaCI溶液鹽析，使蛋白質(zhì)溶液最終濃度至0.9mol/L,24h后離心4500轉(zhuǎn)離心25min，沉淀用0.5mol/L乙酸溶解，重復(fù)鹽析和溶解操作I次，然后移入透析袋，蒸餾水透析3d，接下來冷凍干燥2d，得到精制黑木耳膠原蛋白凍干樣。
[0013]實施例2
本實施例為實施例1的優(yōu)選方案，
1.黑木耳的預(yù)處理，同實施例1。
[0014]2.確定黑木耳膠原蛋白提取的酶制劑，同實施例1。
[0015]3.黑木耳膠原蛋白的提取:
稱取2g黑木耳粉末，采用堿性蛋白酶，在提取溫度55°C、pH值8.5下提取時間3h，同時料液比為1:70，酶用量為3%酶解，反應(yīng)結(jié)束后離心，取上清液。
[0016]4.黑木耳膠原蛋白的精制，同實施例1。
[0017]以上所述為本發(fā)明的較佳實施例，對本發(fā)明而言僅僅是說明性的，而非限制性的。本專業(yè)技術(shù)人員凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)所作的任何修改、等同替換和改進等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護范圍內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種黑木耳膠原蛋白的提取方法，其特征在于:其提取方法的主要步驟為: 步驟1.黑木耳的預(yù)處理: 將黑木耳清洗、除雜后，40°C低溫烘干，然后粉碎成1.0mm-1.3_粉末，在25個大氣壓、50°C的條件下進行CO2超臨界萃取2.5h，脫脂后，干燥備用； 步驟2.確定黑木耳膠原蛋白提取的酶制劑: 選用堿性蛋白酶進行黑木耳膠原蛋白的提??； 步驟3.黑木耳膠原蛋白的提取: 稱取2份黑木耳粉末，采用堿性蛋白酶，在提取溫度55°C、pH值8.5的條件下提取時間2_4h，料液比為1:50-1:70，酶用量為3%-5%，酶解，反應(yīng)結(jié)束后離心，取上清液； 步驟4.黑木耳膠原蛋白的精制: 將盛有黑木耳蛋白質(zhì)溶液的燒杯置于裝有冰水的大燒杯內(nèi)，并置于磁力攪拌器上攪拌；邊攪拌，邊緩慢加入硫酸餒至飽和，時間為5-10分鐘內(nèi)；繼續(xù)攪拌10-30分鐘；10000轉(zhuǎn)離心10分鐘或3000轉(zhuǎn)離心30分鐘；棄去上清液，將沉淀懸浮于1-2倍沉淀物體積的緩沖液中，通過離心除去殘留的不溶性物質(zhì)；透析、超濾除去硫酸錢；使用5mol/L的NaCI溶液鹽析，使蛋白質(zhì)溶液最終濃度至0.9mol/L，24h后離心4500轉(zhuǎn)離心25min，沉淀用0.5mol/L乙酸溶解，重復(fù)鹽析和溶解操作I次，然后移入透析袋，蒸餾水透析3d，接下來冷凍干燥2d，得到精制黑木耳膠原蛋白凍干樣。
【文檔編號】A23J3/34GK104397320SQ201410732000
【公開日】2015年3月11日 申請日期:2014年12月6日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月6日
【發(fā)明者】陳喜軍 申請人:黑龍江眾生生物工程有限公司