一種卵形鯧鲹硫氧還蛋白基因的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種卵形鯧鲹硫氧還蛋白基因的cDNA，它的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本發(fā)明還公開了含有上述卵形鯧鲹硫氧還蛋白基因的表達載體和利用該載體轉(zhuǎn)化的重組微生物，還公開了利用上述微生物制備卵形鯧鲹硫氧還蛋白基因的方法。
【專利說明】一種卵形鯧鯪硫氧還蛋白基因

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于基因工程【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及的是一種卵形鯧鰺硫氧還蛋白基因及含 有該基因的載體和重組菌株，以及利用重組菌株制備卵形鯧鰺硫氧還蛋白。

【背景技術(shù)】
[0002] 硫氧還蛋白（Thioredoxin，Trx)又稱白細胞介素-1樣細胞因子，是生物體內(nèi)普遍 存在的小分子還原蛋白，分子量在12kD左右，具有共同的特征：①所有Trx中均有一個外露 的又兩個Cys殘基組成、高度保守的活性中心（CXXC);②二級結(jié)構(gòu)包括4個α螺旋和5個 β折疊，β折疊被α螺旋包圍構(gòu)成緊密球形；③活性中心位于α螺旋起始端和β折疊尾 部之間；④氧化態(tài)Trx活性中心有一個由Cys殘基組成的二硫鍵（S-S)。Trx最開始是作為 大腸桿菌（Escherichia coli)核糖核酸還原酶的電子供體。此后，由于發(fā)現(xiàn)其發(fā)揮多種中 藥生物學(xué)功能而受到人們重視，發(fā)現(xiàn)其廣泛存在于原核生物和真核生物體內(nèi)。植物的細胞 質(zhì)、葉綠素、線粒體和細胞核中都含有Trx。根據(jù)表達部位的不同，可把硫氧還蛋白為3類： (I) Trxl，主要存在于細胞質(zhì)，在細胞核及胞外也有發(fā)現(xiàn)。Prxl缺少信號肽，但是以一種類似 白介素1β的分泌方式釋放胞外；(2) Trx2, N-端具有線粒體引導(dǎo)序列，是一種線粒體特異 性蛋白，具有Trx保守型酶催化位點，缺少保守型的結(jié)構(gòu)Cys殘基，在清除活性氧（ROS)及 線粒體凋亡信號通路調(diào)節(jié)中起重要作用；（3)Sptrx，是Trx家族中睪丸/精子細胞特異性表 達的蛋白，無氧化還原酶活性；
[0003] 卵形娼鰺（Trachinotus ovatus)隸屬脊索動物門（Chordata)，硬骨魚綱 (Osteichthyes)，隹盧形目（Perciformes)，隹盧亞目（Percoidei)，錄科（Carangidae)，為名貴 食用魚類，在我國南方海域已有相當(dāng)?shù)娜斯ゐB(yǎng)殖規(guī)模。然而，近年來卵形鯧鰺病害頻發(fā)，弓丨 起了較高的死亡率，成為制約卵形鯧鰺養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)可持續(xù)發(fā)展的技術(shù)瓶頸之一。目前還未有 人進行卵形鯧鰺硫氧還蛋白基因方面的研宄。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的第一個目的在于提供一種卵形鯧鰺硫氧還蛋白基因的CDNA和由此推斷 的氨基酸序列。
[0005] 本發(fā)明的第二個目的在于提供含上述卵形鯧鰺硫氧還蛋白基因的表達載體和利 用該載體轉(zhuǎn)化的重組微生物。
[0006] 本發(fā)明的第三個目的在于提供一種從所述的微生物制備重組卵形鯧鰺硫氧還蛋 白基因的過程。
[0007] 本發(fā)明的第一個目的是通過如下技術(shù)方案來實現(xiàn)的：一種卵形鯧鰺硫氧還蛋白基 因的cDNA，它的核苷酸序列如SEQ ID NO. 1所示。
[0008] 本發(fā)明中的卵形鯧鰺硫氧還蛋白基因，其氨基酸序列如SEQ ID :2所示。
[0009] 本發(fā)明的硫氧還蛋白全長基因是以轉(zhuǎn)錄組測序得到卵形鯧鰺硫氧還蛋白基因部 分序列，以卵形鯧鰺肝臟總RNA反轉(zhuǎn)錄得到的cDNA為模板，然后經(jīng)Smart-RACE方法擴增得 到末端序列，最后經(jīng)序列拼接獲得卵形娼錄硫氧還蛋白cDNA基因全長序列。
[0010] 本發(fā)明用于表達卵形鯧鰺硫氧還蛋白重組蛋白的成熟肽基因序列是以卵形鯧鰺 硫氧還蛋白基因雙鏈DNA為模板，經(jīng)PCR方法擴增而得到的，它來源于卵形鯧鰺硫氧還蛋白 基因的成熟肽區(qū)域所對應(yīng)的基因片段。
[0011] 按照上述的卵形鯧鰺硫氧還蛋白重組蛋白的成熟肽基因序列，它正好是卵形鯧鰺 硫氧還蛋白基因117 bp至440 bp (相當(dāng)于第39至第147位氨基酸）的片段，其核苷酸序 列及其所編碼的氨基酸序列如下所示。
[0012] 卵形鯧鰺硫氧還蛋白基因的cDNA，它的核苷酸序列如下所示：
[0013]

【權(quán)利要求】
1. 一種卵形鯧鰺硫氧還蛋白基因的cDNA，它的核苷酸序列如SEQ ID NO. 1所示。
2. 一種卵形娼錄硫氧還蛋白基因，它的氣基酸序列如SEQ ID NO. 2所不。
3. 包括權(quán)利要求1的cDNA的表達載體。
4. 包括權(quán)利要求1的cDNA的表達載體pRSET-Trx。
5. 重組卵形鯧鰺硫氧還蛋白基因的制備方法，其特征是：包括用權(quán)利要求3所述的表 達載體轉(zhuǎn)化寄主細胞，培養(yǎng)轉(zhuǎn)化體，獲得重組的卵形鯧鰺硫氧還蛋白基因。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征是：所述的寄主細胞是大腸桿菌。
7. -種重組卵形鯧鰺硫氧還蛋白基因，包括用權(quán)利要求3所述的表達載體轉(zhuǎn)化的寄主 細胞，培養(yǎng)轉(zhuǎn)化體，從培養(yǎng)物獲得重組的卵形鯧鰺硫氧還蛋白的步驟的方法制備。
【文檔編號】C12N9/02GK104480125SQ201410735301
【公開日】2015年4月1日 申請日期:2014年12月5日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月5日
【發(fā)明者】張殿昌, 王龍, 郭華陽, 馬振華, 張楠, 江世貴 申請人:中國水產(chǎn)科學(xué)研究院南海水產(chǎn)研究所