一種雞γ干擾素蛋白的生產(chǎn)方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明首先提供一種雞γ干擾素蛋白的基因，該基因經(jīng)過(guò)核苷酸突變后，能在大腸桿菌中高效的表達(dá)可溶性雞γ干擾素蛋白，該基因的序列為SEQ ID NO:1。本發(fā)明通過(guò)對(duì)雞γ干擾素基因序列的改變，實(shí)現(xiàn)了雞γ干擾素蛋白在大腸桿菌中的可溶性表達(dá)。該表達(dá)產(chǎn)物為胞液中可溶性蛋白，具有天然雞γ干擾素蛋白的生物活性，同時(shí)本發(fā)明也提供了一種工程菌誘導(dǎo)表達(dá)工藝。通過(guò)細(xì)胞病變抑制試驗(yàn)、雞胚病毒抑制試驗(yàn)、免疫增強(qiáng)試驗(yàn)、動(dòng)物攻毒保護(hù)試驗(yàn)，證明表達(dá)的雞γ干擾素蛋白具有良好的抗病毒和免疫增強(qiáng)活性。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種雞Y干擾素蛋白的生產(chǎn)方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于重組蛋白表達(dá)【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種可溶性雞y干擾素蛋白的生 產(chǎn)方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 干擾素是一類(lèi)由T淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞產(chǎn)生的低分子可溶性多功能糖蛋白，能增強(qiáng) 細(xì)胞毒性T細(xì)胞功能，促進(jìn)B細(xì)胞分化和活化，誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞產(chǎn)生多種抗病毒、抗腫瘤活性 的細(xì)胞因子，具有良好的免疫調(diào)節(jié)作用（HOU Y_D. Molecular virology. Beijing:Xueyuan Press, 1990.) 〇
[0003] 雞y干擾素最早由Issaacs等于1957年利用雞胚絨毛尿囊膜研宄流感病毒干 擾現(xiàn)象時(shí)發(fā)現(xiàn)的，之后得益于生物技術(shù)的飛速發(fā)展，雞Y干擾素的生物學(xué)研宄進(jìn)入到一個(gè) 更為深入廣泛的研宄階段。近幾年，Digby等國(guó)內(nèi)外學(xué)者相繼報(bào)道了雞Y干擾素基因序 列，在基因克隆、序列分析等方面進(jìn)行了大量的研宄。已有的研宄表明，雞y干擾素開(kāi)放 性閱讀框有495個(gè)堿基，編碼19個(gè)氨基酸的信號(hào)肽和145個(gè)氨基酸的成熟蛋白。雞Y干 擾素對(duì)某些病毒（腺病毒，流感病毒，水皰性口炎病毒等）的生長(zhǎng)及繁殖有較強(qiáng)的抑制作 用，可作為一種活化機(jī)體細(xì)胞的抗病毒生物制劑，同時(shí)也可作為免疫佐劑提高疫苗的保護(hù) 效力（Kaiser P, Wain H M, Rothwell L. Structure of the chicken interferon- y gene and comparison to mammalian homologues.Gene, 1998, 207 (1):25-32 ；Digby M R, Lowenthal J ff. Cloning and expression of the chicken interferon-gamma gene. J IFN Cyto Res, 1995, 15:939-945 ；ffeining K C,Schultz U,Munster U, et al. Biological properties of recombinant chicken interferon-gamma.Eur J Immunol. 1996, 26:2440-2447 ；Michalski ff P,Shiell B J, ONeil TE, et al. Recombinant chicken IFN-gamma expressed in E. coli:analysis of C-terminal truncation and effect on biologic activity. J IFN Cyto Res, 1999, 19:383-392 ；Yeh H Y, Winslow B J, Junker D E, et al. In vitro effects of recombinant chicken interferon-gamma on immune cells. J IFN Cyto Res, 1999, 19:687-691)〇
[0004] 為了更廣泛的利用雞y-干擾素蛋白，研宄者將雞y-干擾素基因克隆到大 腸桿菌中進(jìn)行表達(dá)。但雞Y-干擾素在原核細(xì)胞中表達(dá)主要是以不可溶的包涵體形 式存在，這就需要經(jīng)過(guò)復(fù)雜的變性、復(fù)性過(guò)程才能使用。（戴建華，秦愛(ài)建，許金俊 等.雞y-干擾素基因的克隆及其在原核和真核系統(tǒng)中的表達(dá)[J].中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué) 報(bào)，2003, 25(4) :249-253;鮑鳴，仲大蓮等.雞y-干擾素基因的克隆及原核表達(dá)[J]. 安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2004, 31(1): 92-95;蔡梅紅，曹瑞兵，周斌等.雞y-干擾素成熟 蛋白基因的表達(dá)及其產(chǎn)物抗病毒活性測(cè)定，中國(guó)病毒學(xué)[J]，2004, 19(1) :32-35 ;史耀 旭，關(guān)貴全，高金亮黨志勝等.雞Y-干擾素基因的克隆及原核表達(dá)[J].中國(guó)獸藥雜 志，2006, 40 (7): 12-16 ;吳樹(shù)華宮鵬濤等.雞Y-干擾素基因在大腸桿菌中的表達(dá)[J].青 島農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2009, 26(1) : 8-11.)。而包涵體蛋白沒(méi)有生物活性，后續(xù)純化非常復(fù)雜，而 且在復(fù)性過(guò)程中很難做到完全復(fù)性，很難達(dá)到50%的復(fù)性。因此，為了滿(mǎn)足對(duì)雞Y干擾素 的需有，有必要提供一種雞y干擾素的可溶性表達(dá)方法。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種可溶性雞y干擾素蛋白的生產(chǎn)方法，從而可以高效的 表達(dá)可溶性雞y干擾素蛋白。
[0006] 本發(fā)明首先提供一種雞Y干擾素蛋白的基因，該基因經(jīng)過(guò)核苷酸突變后，能在大 腸桿菌中高效的表達(dá)可溶性雞Y干擾素蛋白，該基因的序列為SEQ ID NO: 1。

【權(quán)利要求】
1. 一種雞Y干擾素蛋白的基因，其特征在于，所述的基因的核苷酸序列為SEQ ID NO:1〇
2. 用于擴(kuò)增權(quán)利要求1所述的基因的引物對(duì)，其特征在于，所述的引物對(duì)的核苷酸序 列為 SEQ ID N0:2 和 SEQ ID N0:3。
3. -種重組表達(dá)載體，其特征在于，所述的重組表達(dá)載體為攜帶有權(quán)利要求1所述的 基因的原核表達(dá)載體。
4. 如權(quán)利要求3所述的重組表達(dá)載體，其特征在于，所述的原核表達(dá)載體為28a-CHIF。
5. -種重組大腸桿菌，其特征在于，所述的重組大腸桿菌攜帶有權(quán)利要求3所述的重 組表達(dá)載體。
6. -種可溶性雞Y干擾素蛋白的生產(chǎn)方法，其特征在于，所述的方法是用權(quán)利要求5 所述的重組大腸桿菌來(lái)表達(dá)雞Y干擾素蛋白。
【文檔編號(hào)】C12N15/11GK104450731SQ201410771866
【公開(kāi)日】2015年3月25日 申請(qǐng)日期:2014年12月11日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月11日
【發(fā)明者】劉新文, 胡瀟, 鄒敏, 郭偉偉, 宮曉 申請(qǐng)人:青島易邦生物工程有限公司