大葉相思花粉采集、貯藏以及離體培養(yǎng)活力檢測技術(shù)的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種大葉相思花粉采集、貯藏以及離體培養(yǎng)活力檢測技術(shù)，包括如下步驟：早晨采集當(dāng)天開新鮮的大葉相思花序裝入硫酸紙袋中，放入25℃～30℃室內(nèi)陰干；待第二天早晨10點以后花藥大量爆裂時收集花粉，用篩子過篩；將收集好的花粉置于小玻璃瓶中，加入干燥變色硅膠，抽真空，蠟封；將封好的花粉置于25℃～-25℃下貯藏；花粉萌發(fā)：將貯藏的花粉置于液體培養(yǎng)基中，25℃～35℃下萌發(fā)。本發(fā)明方法解決了大葉相思花粉的收集、貯藏和萌發(fā)等技術(shù)難題，可以顯著提高大葉相思花粉的萌發(fā)率，-20℃下貯藏1年的大葉相思花粉仍然有48%的萌發(fā)率，對相思的人工雜交授粉以及種子園人工授粉提高種子產(chǎn)量和質(zhì)量具有非常重要的意義。
【專利說明】大葉相思花粉采集、貯藏以及離體培養(yǎng)活力檢測技術(shù)

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于植物雜交育種領(lǐng)域，具體涉及一種提高大葉相思花粉萌發(fā)率的方法。

【背景技術(shù)】
[0002]大葉相思(Jcaciaauriculiformis)系含羞草科(Mimosaceae)金合歡屬(AcaciaMill.)的植物。天然分布在南瑋5°?17。，原產(chǎn)于澳大利亞昆士蘭、巴布亞新幾內(nèi)亞南部和西部、伊里安島、印度尼西亞基島。大葉相思生物量大，材質(zhì)優(yōu)良，可用作紙漿材、建筑材、家具用材等；具固氮作用，可用于改良土壤、荒山綠化等。然而，金合歡屬樹種普遍存在著結(jié)實率低的現(xiàn)象，大葉相思也不例外，這是制約其種植業(yè)進一步發(fā)展的關(guān)鍵問題之一。大葉相思結(jié)實低，且花期極易受臺風(fēng)、寒害等不良氣候影響，造成產(chǎn)量低而不穩(wěn)，從而限制了大葉相思的發(fā)展?；ㄆ谌斯ぽo助授粉促進座果率，提高種子產(chǎn)量，是較為有效的解決措施?；ǚ鄄杉①A藏、活力測定技術(shù)，是實現(xiàn)該措施必須的技術(shù)環(huán)節(jié)。因此，開展相思樹植物的生殖生物學(xué)領(lǐng)域的研宄具有重要意義。
[0003]花粉是種子植物的雄配子體，在有性繁殖中發(fā)揮著重要的作用?；ǚ鄣拿劝l(fā)、花粉管生長是植物有性生殖的重要環(huán)節(jié)，包含許多復(fù)雜的生理過程?；ǚ垡曰ǚ酃転橥ǖ垒斔途油瓿墒芫^程，花粉的萌發(fā)和花粉管生長是實現(xiàn)受精作用的關(guān)鍵。
[0004]金合歡屬(Acacia)樹種普遍存在著結(jié)實率低的現(xiàn)象，大葉相思(Acaciaauri culi formi s A.Cunn.ex Benth.)也不例外，這是制約其種植業(yè)進一步發(fā)展的關(guān)鍵問題之一。大葉相思結(jié)實低，且花期極易受雨水、臺風(fēng)等不良氣候影響，造成產(chǎn)量低而不穩(wěn)，從而限制了大葉相思的發(fā)展?；ㄆ谌斯ぽo助授粉促進座果率，提高種子產(chǎn)量，是較為有效的解決措施。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于提供大葉相思花粉采集、貯藏以及離體培養(yǎng)活力檢測技術(shù)。
[0006]本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是:
大葉相思花粉采集、貯藏以及離體培養(yǎng)活力檢測技術(shù)，包括如下步驟:
(1)花粉采集:早晨采集當(dāng)天開新鮮的大葉相思花序裝入硫酸紙袋中，放入25°c?30°C室內(nèi)陰干，待第二天早晨10點以后花藥大量爆裂時收集花粉，用花粉篩過篩；
(2)花粉貯藏:將收集好的花粉置于小玻璃瓶中，加入干燥變色硅膠，抽真空，蠟封，將封好的花粉置于25°C?一 25°C下貯藏；
(3)花粉萌發(fā):將貯藏的花粉置于液體培養(yǎng)基中，25°C?35°C下萌發(fā)。
[0007]作為優(yōu)選的:步驟(1)是在早晨露水未干前采集當(dāng)天開的新鮮花序。
[0008]作為優(yōu)選的:步驟(1)將收集的花序置于28°C恒溫室中，平鋪在硫酸紙上陰干。
[0009]作為優(yōu)選的:步驟(1)中，花粉用200目的篩子過篩。
[0010]作為優(yōu)選的:步驟(2)將花粉置于5°C或一 20°C下貯藏。
[0011]步驟(3)所述的液體培養(yǎng)基由蔗糖、硼酸和水配置而成。
[0012]作為優(yōu)選的:步驟(3)所述的液體培養(yǎng)基的組成為:100?200g/L蔗糖，100?300mg/L硼酸，余量為水。
[0013]進一步優(yōu)選的:所述液體培養(yǎng)基的組成為:200g/L蔗糖，300 mg/L硼酸，余量為水。
[0014]作為優(yōu)選的:步驟(3)中，花粉于30°C恒溫下萌發(fā)。
[0015]本發(fā)明的有益效果是:
1、本發(fā)明大葉相思花粉采集方法，在恒溫室陰干時控制時間掌握，觀察到花藥完全爆裂時再進行刷粉過篩，解決了大葉相思花粉細小不易收集這一難題。
[0016]2、本發(fā)明大葉相思花粉貯藏方法，分別放置在不同的環(huán)境中貯藏，通過花粉活力檢測，檢測出隨著貯藏時間不斷增長，在_20°C的環(huán)境下貯藏的花粉活力最強，解決了大葉相思花粉貯藏這一難題。
[0017]3、本方法采用的液體培養(yǎng)基中含有20%蔗糖、300ppm的硼酸配制而成，液體穩(wěn)定可靠，特別適合大葉相思花粉離休培養(yǎng)。
[0018]4、在載玻片凹槽上滴1-2滴液體培養(yǎng)基，將收集好的大葉相思花粉撣置液體培養(yǎng)基上，花粉可以與氧氣直接接觸，且花粉分布均勻，從而大葉相思樹花粉能夠正常萌發(fā)。這一操作要點解決了相思樹花粉離體培養(yǎng)發(fā)芽關(guān)鍵技術(shù)。
[0019]5、本方法對大葉相思樹花粉采集、貯藏、離休培養(yǎng)和活力檢測，方法簡單、迅速且可操作性強等特點，數(shù)據(jù)科學(xué)可靠，并可完全定量，對于提高大葉相思樹育種效率具有較高的實際應(yīng)用價值，可有效解決現(xiàn)有相思樹種子園自然結(jié)莢率低的問題，提高種子園的產(chǎn)量和質(zhì)量，使種子園能夠有效地發(fā)揮其應(yīng)有的功能，極大地發(fā)揮相思樹樹種的經(jīng)濟效益、社會效益和生態(tài)效益。
[0020]

【專利附圖】

【附圖說明】
[0021]圖1:用于花粉收集的大葉相思花序；
圖2:收集的大葉相思花粉；
圖3:收集當(dāng)天的大葉相思花粉培養(yǎng)24小時檢測結(jié)果；
圖4:-20°C貯藏1月的大葉相思花粉培養(yǎng)24小時檢測結(jié)果；
圖5:-20°C貯藏1年的大葉相思花粉培養(yǎng)24小時檢測結(jié)果。

【具體實施方式】
[0022]下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步的說明，但并不局限于此。
[0023]實施例1
在8月上旬大葉相思樹花開時節(jié)，于8點前采集新鮮的花序置于硫酸紙袋中，在28°C恒溫室中平鋪陰干，待觀察到花藥完全爆裂后，第二天上午10點之后刷粉過篩備用，在載玻片的凹槽上滴加適宜的液體培養(yǎng)基(200g/L蔗糖+300 mg/L硼酸)1-2滴，將收集好的花粉分別撣在液體培養(yǎng)基上，將載玻片放入培養(yǎng)皿中培養(yǎng)，培養(yǎng)皿中放入兩張濕潤濾紙，保持培養(yǎng)溫度30°C。培養(yǎng)3，6，9，12，24后，用光學(xué)顯微鏡觀察花粉的萌發(fā)數(shù)，花粉管長度以及花粉管條數(shù)。當(dāng)天收集的大葉相思花粉，在培養(yǎng)24小時后可觀察到花粉萌發(fā)率為94%，花粉管長度最長可達到花粉直徑的6倍，一?；ǚ圩疃嗫梢悦劝l(fā)出6條花粉管。收集的大葉相思的花粉純凈度很高，幾乎沒有其他雜質(zhì)。圖1為用于花粉收集的大葉相思花序。圖2為光學(xué)顯微鏡下的收集的大葉相思的花粉。圖3為收集當(dāng)天的大葉相思花粉離體培養(yǎng)活力檢測結(jié)果Ο
[0024]實施例2
大葉相思花粉離體萌發(fā)過程中，在載玻片的凹槽上滴加適宜的液體培養(yǎng)基(200g/L蔗糖+300 mg/L硼酸)1-2滴，將收集好以及在室溫中、5°C、_20°C環(huán)境中貯藏了 1月的花粉反別撣在液體培養(yǎng)基上，將載玻片放入培養(yǎng)皿中培養(yǎng)，培養(yǎng)皿中放入兩張濕潤濾紙，保持培養(yǎng)溫度30°C。培養(yǎng)3，6，9，12，24后，用光學(xué)顯微鏡觀察花粉的萌發(fā)數(shù)，花粉管長度以及花粉管條數(shù)。保存1月的大葉相思花粉，在室溫下貯藏、5°C貯藏、_20°C貯藏之后培養(yǎng)24小時后的花粉萌發(fā)率依次為28%、42%、63%，花粉管長度最長可達到花粉直徑的3倍，一粒花粉最多可以萌發(fā)出3條花粉管。圖4為-20°C貯藏1月的大葉相思花粉離體培養(yǎng)活力檢測結(jié)果。
[0025]實施例3
大葉相思花粉離體萌發(fā)過程中，在載玻片的凹槽上滴加適宜的液體培養(yǎng)基(200g/L蔗糖+300 mg/L硼酸)1-2滴，將收集好以及在室溫中、5°C、_20°C環(huán)境中貯藏了 1周、1月、1年的花粉反別撣在液體培養(yǎng)基上，將載玻片放入培養(yǎng)皿中培養(yǎng)，培養(yǎng)皿中放入兩張濕潤濾紙，保持培養(yǎng)溫度30°C。培養(yǎng)3，6，9，12，24后，用光學(xué)顯微鏡觀察花粉的萌發(fā)數(shù)，花粉管長度以及花粉管條數(shù)。保存1年的大葉相思花粉，在室溫下貯藏、5°C貯藏、_20°C貯藏之后培養(yǎng)24小時后的花粉萌發(fā)率依次為13%、28%、48%，花粉管長度最長可達到花粉直徑的2倍，一?；ǚ圩疃嗫梢悦劝l(fā)出2條花粉管。圖5為-20°C貯藏1年的大葉相思花粉離體培養(yǎng)活力檢測結(jié)果。
【權(quán)利要求】
1.大葉相思花粉采集、貯藏以及離體培養(yǎng)活力檢測技術(shù)，包括如下步驟: (1)花粉采集:早晨采集當(dāng)天開新鮮的大葉相思花序裝入硫酸紙袋中，放入25°c?30°C室內(nèi)陰干，待第二天早晨10點以后花藥大量爆裂時收集花粉，用篩子過篩； (2)花粉貯藏:將收集好的花粉置于小玻璃瓶中，加入干燥變色硅膠，抽真空，蠟封，將封好的花粉置于25°C?一 25°C下貯藏； (3)花粉萌發(fā):將貯藏的花粉置于液體培養(yǎng)基中，25°C?35°C下萌發(fā)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大葉相思花粉采集、貯藏以及離體培養(yǎng)活力檢測技術(shù)，其特征在于:步驟(I)是在早晨露水未干前采集當(dāng)天開的新鮮花序。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大葉相思花粉采集、貯藏以及離體培養(yǎng)活力檢測技術(shù)，其特征在于:步驟(I)將收集的花序置于28°C恒溫室中，平鋪在硫酸紙上陰干。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大葉相思花粉采集、貯藏以及離體培養(yǎng)活力檢測技術(shù)，其特征在于:步驟(I)中，花粉用200目的篩子過篩。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大葉相思花粉采集、貯藏以及離體培養(yǎng)活力檢測技術(shù)，其特征在于:步驟(2)將花粉置于5°C或一 20°C下貯藏。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大葉相思花粉采集、貯藏以及離體培養(yǎng)活力檢測技術(shù)，其特征在于:步驟(3)所述的液體培養(yǎng)基由蔗糖、硼酸和水配置而成。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的大葉相思花粉采集、貯藏以及離體培養(yǎng)活力檢測技術(shù)，其特征在于:步驟(3)所述的液體培養(yǎng)基的組成為:100?200g/L蔗糖，100?300 mg/L硼酸，余量為水。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的大葉相思花粉采集、貯藏以及離體培養(yǎng)活力檢測技術(shù)，其特征在于:所述液體培養(yǎng)基的組成為:200g/L蔗糖，300 mg/L硼酸，余量為水。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大葉相思花粉采集、貯藏以及離體培養(yǎng)活力檢測技術(shù)，其特征在于:步驟(3)中，花粉于30°C恒溫下萌發(fā)。
【文檔編號】C12Q1/02GK104498426SQ201410778864
【公開日】2015年4月8日 申請日期:2014年12月15日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月15日
【發(fā)明者】詹妮, 黃烈健 申請人:中國林業(yè)科學(xué)研究院熱帶林業(yè)研究所