一種組合物及其應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及醫(yī)學檢測領(lǐng)域，具體公開了一種組合物及其應用。本發(fā)明所述應用包括過氧化物酶、指示劑、抗干擾化合物，所述抗干擾化合物為釕元素化合物、銠元素化合物和鈀元素化合物中的一種或兩種以上。本發(fā)明選擇過氧化物酶、指示劑和第5周期VIIIB族元素化合物為組合物，應用到以過氧化物酶為指示系統(tǒng)的檢測方法中，可有效降低各種干擾物質(zhì)在檢測時的影響，應用范圍廣泛。
【專利說明】一種組合物及其應用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及醫(yī)學檢測領(lǐng)域，具體涉及一種組合物及其應用。

【背景技術(shù)】
[0002] 干擾物是臨床檢測結(jié)果誤差的主要來源。這種誤差對病人的診斷非常不利，有時 會導致非常嚴重的后果。
[0003] 利用過氧化物酶作為指示系統(tǒng)已廣泛用于葡萄糖、肌酐、尿酸、膽固醇、甘油三脂、 高密度脂蛋白膽固醇、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶等項目的測定。該方法的主要缺點是容易受 到維生素C (抗壞血酸）、尿酸、膽紅素、谷胱甘肽、水楊酸、對乙酰氨基酚等還原性物質(zhì)的干 擾，嚴重時測定結(jié)果會出現(xiàn)假性負值。
[0004] 提高檢測方法的特異性是人們不斷追求的目標，文獻中也報道了一些去除干擾的 方法。例如：美國專利US5156947A公開的采用一些氧化酶去除還原性試劑的干擾。比如： 膽紅素氧化酶、尿酸氧化酶、抗壞血酸氧化酶。但是，樣本還有很多其他的干擾物質(zhì)沒有合 適的氧化酶，比如：水楊酸、對乙酰氨基酚等。另外，氧化酶氧化干擾物后往往產(chǎn)生雙氧水 (即過氧化氫），對隨后分析物產(chǎn)生的雙氧水的檢測也會帶來不利的影響。
[0005] 歐洲專利EP0449812B1和美國專利US4743559公開了采用氧化性物質(zhì)去除上述還 原性物質(zhì)干擾的方法，其公開的氧化性物質(zhì)為次氯酸鹽、高碘酸等。此方法中的氧化性物質(zhì) 能夠氧化樣本中的還原性干擾物質(zhì)，但是常常同時氧化指示劑，造成結(jié)果的假性升高。
[0006] 美國專利US4954451公開了采用鈰的化合物去除抗壞血酸的干擾，例如： [(N03)3Ce]3H2I0 6、[(N03)3Ce]3Cr04。但是此系列試劑的水溶性不佳，限制了其在診斷試劑中 的應用。
[0007]美國專利US4310626公開了采用Co (III)化合物去除干擾的方法。但是鈷的化合 物帶有顏色，常常會引入新的干擾。
[0008]美國專利US4587220公開了采用Fe(III)的螯合物去除抗壞血酸的干擾。例如：Fe-HEDTA。此方法在去除抗壞血酸干擾的時候有一定的作用，但是在對膽紅素等其他干擾 時沒有效果。另外，隨著此化合物的引入，顯色劑的穩(wěn)定性也顯著地下降。
[0009] 另外，對于膽紅素的干擾美國專利US4291121公開了采用亞鐵氰化鉀去除此干擾 的方法。但是作為還原性試劑的亞鐵氰化鉀，常常會競爭顯色劑與雙氧水反應，使檢測結(jié)果 偏低。
[0010] 目前，尚未有一種應用廣泛的試劑能夠同時有效降低抗壞血酸、尿酸、膽紅素、谷 胱甘肽、水楊酸、對乙酰氨基酚等還原性物質(zhì)的干擾。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0011] 有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種組合物及其應用，使得所述組合物能夠有 效降低抗壞血酸、尿酸、膽紅素、谷胱甘肽、水楊酸、對乙酰氨基酚對檢測的干擾。
[0012] 為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：
[0013] 一種組合物，包括過氧化物酶、指示劑、抗干擾化合物，所述抗干擾化合物為釕元 素化合物、銠元素化合物和鈀元素化合物中的一種或兩種以上。
[0014] 本發(fā)明針對現(xiàn)有以過氧化物酶為指示系統(tǒng)的檢測方法易出現(xiàn)受干擾物質(zhì)干擾的 問題，選擇包括抗干擾物質(zhì)、過氧化物酶和指示劑在內(nèi)組合物加入其中，有效的改善了干擾 現(xiàn)象，提高了檢測準確度。
[0015] 本發(fā)明選擇元素周期表第5周期VIIIB族釕元素、銠元素和鈀元素的化合物為抗 干擾物質(zhì)，其去干擾的機理可能為所述釕元素的化合物中空d軌道（銠、鈀為空s軌道）與 過氧化物酶中活性中心鐵卟啉輔基中的n鍵電子產(chǎn)生了某種吸引合，同時與雙氧水分子 中氧原子的孤對SP3雜化軌道電子形成了某種配位鍵合，起到了提高過氧化物酶特異性的 作用，從而改善了其抗干擾能力。
[0016] 其中，作為優(yōu)選，所述釕元素化合物為正二價釕元素化合物、正三價釕元素化合 物、正四價釕元素化合物和正七價釕元素化合物中的一種或兩種以上；更優(yōu)選地，所述釕元 素化合物為氯化苯釕（II)、順-雙（2, 2' -二吡啶基）二氯化釕（II)、二（2-甲基烯丙基） (1，5-環(huán)辛二烯）釕（II)、羰基氯氫三（三苯基膦）釕（II)、羰酰二氫三（三苯基膦）釕 (II)、氯（1，5_環(huán)辛二烯）（五甲基環(huán)戊二烯基）釕（II)、氯（環(huán)戊二烯基）雙（三苯基膦） 釕（II)、氯（五甲基環(huán)戊二烯基）雙（三苯基膦）釕（II)、三（三苯基膦）二氯化釕（II)、 三（三苯基膦）二氯化釕（II)、氯化六氨合亞釕（II)、六氰基釕（II)酸鉀、三羰基二氯代 釕（II)、三（4, 7-聯(lián)苯-1，10-鄰菲啰啉）二氯化釕（II)、氧化釕（IV)、硫化釕（IV)、四正 丙基過釕（VII)酸銨、六氯釕（III)酸鉀、五氯釕（III)酸鉀、溴化釕（III)、氯化釕（III)、 碘化釕（III)、亞硝酰乙酸釕（III)、亞硝酰氯化釕（III)、亞硝酰硫酸釕（III)、二氯化五氨 合氯釕（III)、氯化六氨合釕（III)中的一種或兩種以上。括號中的阿拉伯數(shù)字在化學領(lǐng)域 為表述某元素化合價。
[0017] 作為優(yōu)選，所述銠元素化合物為正一價銠元素化合物和正三價銠元素化合物中 的一種或兩種以上；更優(yōu)選地，所述銠元素化合物為二羰基乙酰丙酮銠（I)、羰基乙酰丙酮 (三苯基磷基）銠（I)、五氯銠（III)酸鉀、溴化銠（III)、氯化銠（III)、碘化銠（III)、硝酸 銠（III)、六溴代銠（III)酸鈉、三（乙二胺）三氯化銠（III)、乙酰丙酮銠（III)中的一種 或兩種以上。
[0018] 作為優(yōu)選，所述鈀元素化合物為正二價鈀元素化合物和正四價鈀元素化合物中 的一種或兩種以上；更優(yōu)選地，所述鈀元素化合物為六氯鈀（IV)酸銨、雙（乙腈）二氯鈀 (II)、乙二胺氯化鈀（II)、溴化鈀（II)、氯化鈀（II)、氰化鈀（II)、硝酸鈀（II)、硫酸鈀 (II)中的一種或兩種以上。
[0019] 作為優(yōu)選，所述釕元素化合物、銠元素化合物、鈀元素化合物中任意一種化合物的 工作濃度均為1 U mol/L?10mmol/L ;更優(yōu)選地，工作濃度均為20 ii mol/L?500 ii mol/L。
[0020] 作為優(yōu)選，所述過氧化物酶的工作濃度為1KU/L?1000KU/L。
[0021] 作為優(yōu)選，所述指示劑為苯胺類指示劑、酚類指示劑、Trinder指示劑、聯(lián)氮類指 示劑中的一種或兩種以上；更優(yōu)選地，所述指示劑為：TMB (3, 3'，5, 5' -四甲基聯(lián)苯胺）、 DHBS (3, 5-二氯-2-羥基苯磺酸鈉）、4AA (4-氨基安替比林）、T00S [N-乙基-N- (2-羥 基-3-磺丙基）-3-甲基苯胺鈉鹽]、ABTS[ (2, 2'-偶氮-雙（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺 酸）二銨鹽）]中的一種或兩種以上
[0022] 作為優(yōu)選，所述指示劑中任意一種指示劑的工作濃度為10ym〇l/L?10mm 〇l/L。
[0023] 采用本發(fā)明所述組合物替代現(xiàn)有的過氧化物酶、指示劑，以添加抗壞血酸、尿酸、 膽紅素、谷胱甘肽、水楊酸、對乙酰氨基酚等干擾物質(zhì)的樣本為試驗對象檢測對應項目的 濃度，結(jié)果顯示，相比未加入本發(fā)明所述組合物的方案，本發(fā)明能夠有效降低干擾物質(zhì)的影 響，使各項目檢測結(jié)果更加趨近于空白對照組的結(jié)果。
[0024] 基于此，本發(fā)明還提供了所述組合物在檢測葡萄糖、肌酐、尿酸、膽固醇、甘油三 酯、谷丙轉(zhuǎn)氨酶或谷草轉(zhuǎn)氨酶濃度和在制備檢測葡萄糖、肌酐、尿酸、膽固醇、甘油三酯、谷 丙轉(zhuǎn)氨酶或谷草轉(zhuǎn)氨酶濃度試劑中的應用。
[0025] 按照上述技術(shù)思路，本發(fā)明根據(jù)應用領(lǐng)域，提供了一種檢測葡萄糖、肌酐、尿酸、膽 固醇、甘油三酯、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、或谷草轉(zhuǎn)氨酶的濃度的試劑，包括本發(fā)明前述各種方案下的 任意一種組合物。
[0026] 作為優(yōu)選，本發(fā)明所述試劑還包括緩沖劑、穩(wěn)定劑、表面活性劑以及使葡萄糖、肌 酐、尿酸、膽固醇、甘油三酯、谷丙轉(zhuǎn)氨酶或谷草轉(zhuǎn)氨酶產(chǎn)生雙氧水的對應酶。
[0027] 對于上述穩(wěn)定劑、表面活性劑、緩沖劑以及對應酶在以過氧化物酶為指示系統(tǒng)的 檢測方法中屬于常用的組分，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以知曉選擇適合的組分，但是作為優(yōu)選，本 發(fā)明給出了以下選擇，這些選擇均可以單一的使用，也可以組合使用：
[0028] 對應酶，葡萄糖的對應酶為葡萄糖氧化酶；肌酐的對應酶為肌酐水解酶、肌氨酸酶 和肌氨酸氧化酶；尿酸的對應酶為尿酸氧化酶、膽固醇的對應酶為膽固醇酯酶和膽固醇氧 化酶；甘油三酯的對應酶為脂肪酶、甘油酯酶和甘油磷酸氧化酶；高密度脂蛋白膽固醇的 對應酶為膽固醇酯酶和膽固醇氧化酶；谷丙轉(zhuǎn)氨酶的對應酶為丙酮酸氧化酶；谷草轉(zhuǎn)氨酶 的對應酶為丙酮酸氧化酶；任意一種對應酶的工作濃度均為1KU/L?1000KU/L ;
[0029] 穩(wěn)定劑，選自糖類或蛋白類中的一種，如葡萄糖、果糖、麥芽糖、蔗糖、海藻糖、葡聚 糖、山梨醇、甘露醇、BSA、HSA、酪蛋白、明膠、蛋白胨，濃度為0.1%?10% (質(zhì)量百分比）；
[0030] 緩沖劑，選自檸檬酸緩沖劑、磷酸鹽緩沖劑、醋酸緩沖劑或Good' s緩沖劑（如MOPS 和 HEPES)，濃度為 10mmol/L ?500mmol/L ;
[0031] 表面活性劑，選自Tween系列、Triton系列、Bri j系列或Pluronic系列，濃度為 0? 01% ?10%。
[0032] 此外，本發(fā)明的檢測試劑也可以應用于干化學檢測，將本發(fā)明的組合物固定在固 相載體上，如濾紙等載體，然后干燥。測試時將樣本加在固相載體上，進行反應，其在檢測葡 萄糖、肌酐、尿酸、膽固醇、甘油三酯、谷丙轉(zhuǎn)氨酶或谷草轉(zhuǎn)氨酶濃度時，同樣可以獲得良好 的抗干擾性能。
[0033] 由以上技術(shù)方案可知，本發(fā)明選擇過氧化物酶、指示劑和第5周期VIIIB族元素化 合物為組合物，應用到以過氧化物酶為指示系統(tǒng)的檢測方法中，可有效降低各種干擾物質(zhì) 在檢測時的影響，應用范圍廣泛。

【具體實施方式】
[0034]本發(fā)明公開了一種組合物及其應用，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以借鑒本文內(nèi)容，適當改 進工藝參數(shù)實現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯 而易見的，它們都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明所述產(chǎn)品已經(jīng)通過較佳實施例進行了描述， 相關(guān)人員明顯能在不脫離本
【發(fā)明內(nèi)容】
、精神和范圍內(nèi)對本文所述的的組合物和應用進行改 動或適當變更與組合，來實現(xiàn)和應用本發(fā)明技術(shù)。
[0035] 依照本發(fā)明的技術(shù)方案，在一些【具體實施方式】中，本發(fā)明所述抗干擾化合物為六 氰基釕（II)酸鉀、硫化釕（IV)、二氯化五氨合氯釕（III)、氯化六氨合釕（III)、五氯銠 (III) 酸鉀、二羰基乙酰丙酮銠（I)、硝酸銠（III)、三（乙二胺）三氯化銠（III)、六氯鈀 (IV) 酸銨、乙二胺氯化鈀（II)或氯化鈀（II)、
[0036] 或者，氯化苯釕（II)和雙（乙腈）二氯鈀（II);
[0037] 或者，三羰基二氯代釕（II)和羰基乙酰丙酮（三苯基磷基）銠（I);
[0038]或者，三（4, 7-聯(lián)苯-1，10-鄰菲啰啉）二氯化釕（II)、五氯釕（III)酸鉀和六溴 代銠（III)酸鈉；
[0039]或者，羰基乙酰丙酮（三苯基磷基）銠（I)和雙（乙腈）二氯鈀（II);
[0040]或者，三（三苯基膦）二氯化釕（II)和氰化鈀（II);
[0041] 或者，氯（五甲基環(huán)戊二烯基）雙（三苯基膦）釕（II)和氯（1，5-環(huán)辛二烯）（五 甲基環(huán)戊二烯基）釕（II);
[0042] 或者，氯（五甲基環(huán)戊二烯基）雙（三苯基膦）釕（II)和二（2-甲基烯丙基） (1，5-環(huán)辛二烯）釕（II);
[0043] 或者，氯化六氨合亞釕（II)、氯（1，5_環(huán)辛二烯）（五甲基環(huán)戊二烯基）釕（II)和 氯化銠（III);
[0044]或者，氯化六氨合釕（III)和五氯銠（III)酸鉀；
[0045]或者，三（三苯基膦）二氯化釕（II)和五氯銠（III)酸鉀；
[0046] 或者，五氯銠（III)酸鉀和氯化鈀（II)。
[0047] 下面結(jié)合實施例，進一步闡述本發(fā)明。
[0048] 實施例1 :
[0049] 檢測項目：尿酸濃度；
[0050] 按照表1配制所示組合物進行：
[0051]表1
[0052]

【權(quán)利要求】
1. 一種組合物，其特征在于，包括過氧化物酶、指示劑、抗干擾化合物，所述抗干擾化合 物為釕元素化合物、銠元素化合物和鈀元素化合物中的一種或兩種以上。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述組合物，其特征在于，所述釕元素化合物為正二價釕元素化合 物、正三價釕元素化合物、正四價釕元素化合物和正七價釕元素化合物中的一種或兩種以 上。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述組合物，其特征在于，所述釕元素化合物為氯化苯釕（II)、 順-雙（2, 2' -二吡啶基）二氯化釕（II)、二（2-甲基烯丙基）（1，5-環(huán)辛二烯）釕（II)、 羰基氯氫三（三苯基膦）釕（II)、羰酰二氫三（三苯基膦）釕（II)、氯（1，5-環(huán)辛二烯） (五甲基環(huán)戊二烯基）釕（II)、氯（環(huán)戊二烯基）雙（三苯基膦）釕（II)、氯（五甲基環(huán) 戊二烯基）雙（三苯基膦）釕（II)、三（三苯基膦）二氯化釕（II)、三（三苯基膦）二氯 化釕（II)、氯化六氨合亞釕（II)、六氰基釕（II)酸鉀、三羰基二氯代釕（II)、三（4, 7-聯(lián) 苯-1，10-鄰菲啰啉）二氯化釕（II)、氧化釕（IV)、硫化釕（IV)、四正丙基過釕（VII)酸銨、 六氯釕（III)酸鉀、五氯釕（III)酸鉀、溴化釕（III)、氯化釕（III)、碘化釕（III)、亞硝酰 乙酸釕（III)、亞硝酰氯化釕（III)、亞硝酰硫酸釕（III)、二氯化五氨合氯釕（III)、氯化六 氨合釕（III)中的一種或兩種以上。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述組合物，其特征在于，所述銠元素化合物為正一價銠元素化合 物和正三價銠元素化合物中的一種或兩種以上。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述組合物，其特征在于，所述銠元素化合物為二羰基乙酰丙酮銠 (I)、羰基乙酰丙酮（三苯基磷基）銠（I)、五氯銠（III)酸鉀、溴化銠（III)、氯化銠（III)、 碘化銠（III)、硝酸銠（III)、六溴代銠（III)酸鈉、三（乙二胺）三氯化銠（III)、乙酰丙酮 銠（III)中的一種或兩種以上。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述組合物，其特征在于，所述鈀元素化合物為正二價鈀元素化合 物和正四價鈀元素化合物中的一種或兩種以上。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述組合物，其特征在于，所述鈀元素化合物為六氯鈀（IV)酸銨、 雙（乙腈）二氯鈀（II)、乙二胺氯化鈀（II)、溴化鈀（II)、氯化鈀（II)、氰化鈀（II)、硝酸 鈀（II)、硫酸鈀（II)中的一種或兩種以上。
8. 權(quán)利要求1-7任意一項權(quán)利要求所述組合物在檢測葡萄糖、肌酐、尿酸、膽固醇、甘 油三酯、谷丙轉(zhuǎn)氨酶或谷草轉(zhuǎn)氨酶濃度和在制備檢測葡萄糖、肌酐、尿酸、膽固醇、甘油三 酯、谷丙轉(zhuǎn)氨酶或谷草轉(zhuǎn)氨酶濃度試劑中的應用。
9. 一種檢測葡萄糖、肌酐、尿酸、膽固醇、甘油三酯、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、或谷草轉(zhuǎn)氨酶的濃度 的試劑，其特征在于，包括權(quán)利要求1-7任意一項所述組合物。
10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述試劑，其特征在于，還包括緩沖劑、穩(wěn)定劑、表面活性劑以及使 葡萄糖、肌酐、尿酸、膽固醇、甘油三酯、谷丙轉(zhuǎn)氨酶或谷草轉(zhuǎn)氨酶產(chǎn)生雙氧水的對應酶。
【文檔編號】C12Q1/28GK104450864SQ201410789949
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年12月18日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月18日
【發(fā)明者】吉翔, 蔡曉華 申請人:三諾生物傳感股份有限公司