一種從糞便樣本中收集結(jié)腸脫落細(xì)胞的裝置制造方法
【專利摘要】本實(shí)用新型屬于生物檢測(cè)裝置【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種從糞便樣本中收集結(jié)腸脫落細(xì)胞的裝置，包括一個(gè)座板和一根上下開口呈中空結(jié)構(gòu)的管子，所述座板中央開設(shè)有一個(gè)孔，所述管子的上端部設(shè)有凸出邊緣，所述管子通過所述凸出邊緣固定在所述座板上，所述管子的頂部和底部均設(shè)有可拆卸的蓋子，所述管子內(nèi)壁嵌有一漏斗狀濾網(wǎng)。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本實(shí)用新型具有以下優(yōu)點(diǎn)：1.它可有效從全部糞便樣本中收集脫落細(xì)胞；2.它的細(xì)胞搜集率比目前的收集方法高大約1000倍；3.它可消除糞便樣本的難聞氣味并且杜絕傳染性腸道細(xì)菌播散的風(fēng)險(xiǎn)；4.它使用方便，糞便脫落細(xì)胞可以輕而易舉地由患者本人方便時(shí)在家中收集，收集的細(xì)胞可以固定并可被安全運(yùn)送。
【專利說(shuō)明】一種從糞便樣本中收集結(jié)腸脫落細(xì)胞的裝置

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實(shí)用新型屬于生物檢測(cè)裝置【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種從糞便樣本中收集結(jié)腸脫落細(xì)胞的裝置。

【背景技術(shù)】
[0002]在所有被推薦的結(jié)直腸癌的篩選方法中，如可屈性乙狀結(jié)腸鏡檢查、結(jié)腸鏡檢查、螺旋CT結(jié)腸成像術(shù)、雙重對(duì)比鋇灌腸及糞便細(xì)胞檢測(cè)等，其中糞便隱血試驗(yàn)、糞便免疫生化試驗(yàn)或糞便DNA測(cè)試是最為簡(jiǎn)便和便宜的方法，每項(xiàng)試驗(yàn)費(fèi)用大約為五美元。然而，糞便細(xì)胞檢查只能檢測(cè)出30 - 40%的結(jié)直腸癌及10%的良性腫瘤。結(jié)腸鏡檢查(CS)是目前結(jié)直腸癌診斷的金標(biāo)準(zhǔn)并且可以檢測(cè)出超過90%的結(jié)直腸癌和大約80%的巨大良性腫瘤。但是，檢查結(jié)腸平均需要耗時(shí)大約一小時(shí)，花費(fèi)約兩百五十美元，而檢查到需要切除的腫瘤或息肉則需要幾小時(shí)并且花費(fèi)五千美元以上。五千名訓(xùn)練有素的醫(yī)生每天二十四小時(shí)不間斷地在五千臺(tái)結(jié)腸鏡前工作，為整個(gè)美國(guó)范圍內(nèi)的結(jié)直腸癌合格人群做篩查工作大概需要耗時(shí)三年。因此，結(jié)腸鏡作為一種初級(jí)篩查方法使用時(shí)很耗時(shí)，也很昂貴，是醫(yī)療資源的一個(gè)負(fù)擔(dān)。長(zhǎng)遠(yuǎn)看來(lái)，結(jié)腸鏡檢查對(duì)超過80%的沒有罹患良惡性腫瘤的合格人群沒有直接效益。
[0003]更重要的是，結(jié)腸鏡檢查伴有結(jié)腸穿孔(約1000例中發(fā)生I例)、脾損傷和死亡(約5000例中發(fā)生I例)的風(fēng)險(xiǎn)，全世界一般人群中使用結(jié)腸鏡檢查進(jìn)行結(jié)直腸癌篩查的依從率僅約5%。甚至對(duì)于罹患結(jié)直腸癌的高風(fēng)險(xiǎn)個(gè)體，其中根據(jù)準(zhǔn)則通過結(jié)腸鏡檢查進(jìn)行篩查的僅有49%，其余18%則時(shí)常不按照準(zhǔn)則進(jìn)行篩查，33%甚至從未進(jìn)行過篩查。對(duì)于其他被推薦的適合個(gè)體或集體篩查方法，由于它們本身的局限性、代價(jià)高、或者在結(jié)腸鏡檢查下有高輻射暴露的風(fēng)險(xiǎn)等因素，所預(yù)期獲得的滿意結(jié)果則更少。
[0004]基于以上事實(shí)，很顯然，增強(qiáng)糞便細(xì)胞試驗(yàn)的敏感度來(lái)篩查結(jié)腸鏡檢查提示罹患結(jié)直腸癌高風(fēng)險(xiǎn)患者，可以顯著提高目前篩查結(jié)直腸癌方法的效率。然而，增強(qiáng)糞便細(xì)胞試驗(yàn)的敏感度存在技術(shù)挑戰(zhàn)性，原因有三:首先，盡管每天有成千上萬(wàn)的表層上皮細(xì)胞脫落至腸道中，但是它們與占糞便容量的99%以上的食物殘?jiān)?、?xì)菌、細(xì)胞碎屑及其他胃腸道器官的分泌產(chǎn)物混合在一起；其次，雖然據(jù)報(bào)道脫落細(xì)胞較多存在于糞便表面的粘液中，但這些粘液存在于糞便的任何片段中，如果有可能的話也很難收集到脫落細(xì)胞；再次，糞便的粘稠度、容量和內(nèi)容物個(gè)體差異大。
[0005]盡管大量的方法已被試驗(yàn)室應(yīng)用，包括采用密度梯度離心分離法從糞便表面獲得均質(zhì)樣本或采用免疫磁珠分離技術(shù)獲得樣本，但上述的技術(shù)挑戰(zhàn)性使得開發(fā)一種收集結(jié)腸脫落細(xì)胞的全球性的有效方法變得很困難。目前，臨床最常見的糞便細(xì)胞收集方法是使用一根小棉簽蘸取患者提供的糞便樣本的粘液處蘸取一點(diǎn)糞便。這種方法存在三個(gè)缺點(diǎn):其一，收集的樣本一般占所有糞便表面區(qū)域的0.1%不到，因此，這不太可能精確地反映患者的實(shí)際情況；其二，對(duì)于高通量基礎(chǔ)試驗(yàn)而言細(xì)胞數(shù)量不足，比如全DNA或RNA系列分析，或蛋白組學(xué)等；其三，未被加工的糞便樣本伴有難聞氣味而且存在播散傳染性結(jié)腸細(xì)菌的風(fēng)險(xiǎn)。更重要的是，糞便樣本需要及時(shí)送檢及處理以防變質(zhì)，否則會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果O
[0006]因此，急需一種新的裝置用于從糞便樣本中收集結(jié)腸脫落細(xì)胞。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，本實(shí)用新型提供一種從糞便樣本中收集結(jié)腸脫落細(xì)胞的裝置，在管子內(nèi)設(shè)有一個(gè)濾網(wǎng)，增加了與糞便的大面積接觸，通過擠壓、上下?lián)u晃以及緩沖液沖洗等步驟，它可有效從全部糞便樣本中收集脫落細(xì)胞，細(xì)胞搜集率比目前的收集方法高大約1000倍，且結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，使用方便，可在研究和臨床中廣泛使用。
[0008]本實(shí)用新型提供一種從糞便樣本中收集結(jié)腸脫落細(xì)胞的裝置，是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的:
[0009]一種從糞便樣本中收集結(jié)腸脫落細(xì)胞的裝置，包括一個(gè)座板和一根上下開口呈中空結(jié)構(gòu)的管子，所述座板中央開設(shè)有一個(gè)孔，所述管子的上端部設(shè)有凸出邊緣，所述管子通過所述凸出邊緣固定在所述座板中央的孔上，所述管子的頂部和底部均設(shè)有可拆卸的蓋子，所述管子內(nèi)壁嵌有一漏斗狀濾網(wǎng)。
[0010]所述濾網(wǎng)呈V字型放置。
[0011]所述過濾網(wǎng)的孔徑介于300目-1000目，所述過濾網(wǎng)優(yōu)選為金屬材質(zhì)。
[0012]所述濾網(wǎng)的底部開設(shè)有多個(gè)過濾孔。
[0013]所述濾網(wǎng)的外周圍繞有彈性件來(lái)調(diào)節(jié)漏網(wǎng)底部開口的大小，彈性件可以是橡皮筋或者彈性拉繩。
[0014]所述管子與所述座板為活動(dòng)連接。
[0015]所述管子上端部的凸出邊緣與所述座板結(jié)合處還設(shè)有固定拉繩。
[0016]所述座板由紙質(zhì)或者塑料制作而成。
[0017]所述管子的長(zhǎng)度為10_30cm，直徑為5-lOcm。
[0018]所述管子由透明塑料制作而成。
[0019]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本實(shí)用新型提供一種從糞便樣本中收集結(jié)腸脫落細(xì)胞的裝置，具有以下優(yōu)點(diǎn):
[0020]1.它可有效從全部糞便樣本中收集脫落細(xì)胞；
[0021]2.它的細(xì)胞搜集率比目前的收集方法高大約1000倍；
[0022]3.它可消除糞便樣本的難聞氣味并且杜絕傳染性腸道細(xì)菌播散的風(fēng)險(xiǎn)；
[0023]4.它使用方便，糞便脫落細(xì)胞可以輕而易舉地由患者本人方便時(shí)在家中收集，收集的細(xì)胞可以固定并可被安全運(yùn)送，對(duì)延遲處理不敏感；
[0024]5.結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單實(shí)用，可大大提高取樣效率。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0025]圖1為本實(shí)用新型的結(jié)構(gòu)示意圖；
[0026]圖2為本實(shí)用新型中的濾網(wǎng)的俯視圖；
[0027]圖3為本實(shí)用新型中的濾網(wǎng)的立體圖；
[0028]圖4為本實(shí)用新型的濾網(wǎng)置于管子內(nèi)的結(jié)構(gòu)示意圖；
[0029]其中:I座板，2管子，3蓋子，4蓋子，5濾網(wǎng)，6彈性件。

【具體實(shí)施方式】
[0030]下面結(jié)合【具體實(shí)施方式】對(duì)實(shí)用新型作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明，以助于本領(lǐng)域技術(shù)人員理解本實(shí)用新型。
[0031]實(shí)施例1
[0032]圖1為本實(shí)用新型的結(jié)構(gòu)示意圖，如圖1所示，一種從糞便樣本中收集結(jié)腸脫落細(xì)胞的裝置，包括一個(gè)座板I和一根上下開口呈中空結(jié)構(gòu)的管子2，座板I的中央開設(shè)有一個(gè)孔，管子2的上端部設(shè)有凸出邊緣，管子2通過凸出邊緣固定在座板I中央的孔上，管子2的頂部和底部均設(shè)有可拆卸的蓋子3、4;圖4為本實(shí)用新型濾網(wǎng)置于管子內(nèi)的結(jié)構(gòu)示意圖，如圖4所示，管子2內(nèi)壁嵌有一漏斗狀濾網(wǎng)5。座板I可以是紙質(zhì)的或者是塑料的，或者其他硬質(zhì)材料制作而成的，座板I的大小以能卡置在坐便器上為宜。管子2由透明塑料制作而成，加上蓋子3、4長(zhǎng)度為16cm,直徑為8cm。為了更好的將管子2固定在座板I上,管子2上端部的凸出邊緣與座板I結(jié)合處還設(shè)有四條固定拉繩，將管子2綁定在座板I上。當(dāng)然，管子2的直徑和長(zhǎng)度，可以根據(jù)實(shí)際需要常規(guī)選擇，如直徑可以設(shè)置為5cm、7cm或10cm，長(zhǎng)度對(duì)應(yīng)設(shè)置成10cm、20cm或30cm。
[0033]圖2和圖3分別為本實(shí)用新型中濾網(wǎng)的俯視圖和立體圖，濾網(wǎng)5是為金屬紗網(wǎng)，優(yōu)選金屬材質(zhì)，上面布滿了細(xì)密的小孔，孔徑可以是300目、500母或者1000目，可以根據(jù)需要選擇，可以由普通的五金店中的細(xì)孔金屬窗紗做成；如圖2-圖4所示，濾網(wǎng)5可以使用膠水粘結(jié)在管子2的內(nèi)壁上，或者直接嵌入管子2內(nèi)。濾網(wǎng)5的外周圍繞有彈性件6來(lái)調(diào)節(jié)漏網(wǎng)5底部開口的大小，彈性件6可以是橡皮筋或者彈性拉繩。濾網(wǎng)5的底部開口在彈性件6的作用下張開或者收攏。
[0034]使用時(shí)，打開管子I頂部的蓋子3和底部的蓋子4，把座板I放在坐便器上，使用者可直接將糞便排入管子2內(nèi)放置的一個(gè)呈V字形的濾網(wǎng)5中，當(dāng)糞便通過濾網(wǎng)5時(shí)，調(diào)節(jié)濾網(wǎng)5外周圍纏繞的彈性件6收縮濾網(wǎng)5，使糞便所有表面區(qū)域都會(huì)與過濾網(wǎng)5的粗糙的表面相接觸。管子2與座板I為活動(dòng)連接，當(dāng)大便結(jié)束后，將管子2從座板上取下。然后蓋上底部的蓋子3，將管子2倒置上下顛倒后，管子I內(nèi)滯留的糞便表面將進(jìn)一步被迫通過濾網(wǎng)5的粗糙表面。濾網(wǎng)5的表面積很大，滯留在表面的粘液將被擠出濾網(wǎng)5之外進(jìn)入管子2。
[0035]然后蓋上底部的蓋子4，從頂部的開口處往過濾網(wǎng)5內(nèi)加入PBS溶液(磷酸鹽緩沖溶液，PH為7左右)，蓋上頂部的蓋子3，用力搖晃管子2，將滯留在濾網(wǎng)5上的粘液連通結(jié)腸脫落細(xì)胞一起從濾網(wǎng)5上沖刷下來(lái)。沖洗過管子2后，將管子2及頂部的蓋子3與底部的蓋子分開，沖刷出來(lái)的溶液都聚集在底部的蓋子4上。
[0036]將底部的蓋子4里的溶液室溫中下放置10-20分鐘，棄去上清液，再將底部蓋子里的盤狀物混合PBS或10%的甲醛溶液，然后將其轉(zhuǎn)移至一支15ml的密封管中。
[0037]用本實(shí)用新型裝置收集的大量脫落細(xì)胞允許我們制作世界首塊SDS凝膠，該凝膠源自從糞便收集的脫落細(xì)胞的完整蛋白。大部分蛋白保存很好，并且不同樣本中蛋白的頻率和規(guī)格很一致。實(shí)驗(yàn)步驟如下，樣本準(zhǔn)備:壓平組織，用PBS緩沖液洗滌3次；然后用等量RIPA裂解液使之重新懸浮，冰上離心30分鐘；旋轉(zhuǎn)減速，上層清液40ul持續(xù)減少為SDS-PAGE。
[0038]從糞便樣本收集的大量脫落細(xì)胞同樣允許我們制作世界首塊石蠟包埋塊以行形態(tài)學(xué)的及免疫組化評(píng)估。脫落細(xì)胞的形態(tài)保存得很好，并且大部分脫落細(xì)胞表達(dá)了高水平的角蛋白-19 (CK-19)。脫落細(xì)胞常規(guī)分布為不同規(guī)格的叢簇。大面積的細(xì)胞叢簇(>100個(gè)獨(dú)立細(xì)胞)中，細(xì)胞間的連接維持得很好。每個(gè)樣本的石蠟塊中預(yù)計(jì)有100-300萬(wàn)個(gè)脫落細(xì)胞。破碎的糞便細(xì)胞以10%甲醛固定并包埋在石蠟中。5~7 μ m厚的組織切片放置在帶正電的載玻片上。把這些切片去石蠟處理及CK-19免疫染色。
[0039]本實(shí)用新型的裝置應(yīng)用在研究和臨床中有如下優(yōu)點(diǎn):
[0040]1.它將允許收集腸腔表面大量的脫落細(xì)胞，不論正常的或是惡性的，這將顯著有M于基礎(chǔ)科學(xué)研究和臨床診斷。
[0041]2.它將允許收集充足的腸腔表面脫落細(xì)胞以供評(píng)估，使用高通量基礎(chǔ)試驗(yàn)如全DNA及RNA序列分析或蛋白組學(xué)等。這些鑒定試驗(yàn)在闡明脫落細(xì)胞的全部分子、生化資料方面及將正常細(xì)胞區(qū)分于腫瘤細(xì)胞方面遠(yuǎn)遠(yuǎn)有效于傳統(tǒng)方法。
[0042]3.它將顯著有益于收集和識(shí)別傳染性結(jié)腸細(xì)菌和毒素，并且有助于結(jié)腸微生物的分析。
[0043]4.它可應(yīng)用于早期結(jié)直腸癌切除后的脫落細(xì)胞收集，來(lái)監(jiān)測(cè)治療反饋及早期復(fù)發(fā)。
[0044]上述實(shí)施例，只是本實(shí)用新型的較佳實(shí)施例，并非用來(lái)限制本實(shí)用新型的實(shí)施范圍，故凡以本實(shí)用新型權(quán)利要求所述的特征及原理所做的等效變化或修飾，均應(yīng)包括在本實(shí)用新型權(quán)利要求范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種從糞便樣本中收集結(jié)腸脫落細(xì)胞的裝置，其特征在于:包括一個(gè)座板和一根上下開口呈中空結(jié)構(gòu)的管子，所述座板中央開設(shè)有一個(gè)孔，所述管子的上端部設(shè)有凸出邊緣，所述管子通過所述凸出邊緣固定在所述座板中央的孔上，所述管子的頂部和底部均設(shè)有可拆卸的蓋子，所述管子內(nèi)壁嵌有一漏斗狀濾網(wǎng)。
2.如權(quán)利要求1所述的一種從糞便樣本中收集結(jié)腸脫落細(xì)胞的裝置，其特征在于:所述濾網(wǎng)呈V字型放置。
3.如權(quán)利要求1所述的一種從糞便樣本中收集結(jié)腸脫落細(xì)胞的裝置，其特征在于:所述過濾網(wǎng)的孔徑介于300目-1000目，所述過濾網(wǎng)為金屬材質(zhì)。
4.如權(quán)利要求3所述的一種從糞便樣本中收集結(jié)腸脫落細(xì)胞的裝置，其特征在于:所述濾網(wǎng)的底部開設(shè)有多個(gè)過濾孔。
5.如權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的一種從糞便樣本中收集結(jié)腸脫落細(xì)胞的裝置，其特征在于:所述濾網(wǎng)的外周圍繞有彈性件來(lái)調(diào)節(jié)漏網(wǎng)底部開口的大小。
6.如權(quán)利要求1所述的一種從糞便樣本中收集結(jié)腸脫落細(xì)胞的裝置，其特征在于:所述管子與所述座板為活動(dòng)連接。
7.如權(quán)利要求1所述的一種從糞便樣本中收集結(jié)腸脫落細(xì)胞的裝置，其特征在于:所述管子上端部的凸出邊緣與所述座板結(jié)合處還設(shè)有固定拉繩。
8.如權(quán)利要求1所述的一種從糞便樣本中收集結(jié)腸脫落細(xì)胞的裝置，其特征在于:所述座板由紙質(zhì)或者塑料制作而成。
9.如權(quán)利要求1所述的一種從糞便樣本中收集結(jié)腸脫落細(xì)胞的裝置，其特征在于:所述管子的長(zhǎng)度介于10-30cm,直徑介于5-10cm。
10.如權(quán)利要求1或9所述的一種從糞便樣本中收集結(jié)腸脫落細(xì)胞的裝置，其特征在于:所述管子由透明塑料制作而成。
【文檔編號(hào)】C12M1/12GK203976793SQ201420261421
【公開日】2014年12月3日 申請(qǐng)日期:2014年5月21日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月21日
【發(fā)明者】滿延高, 江濱, 程俊欽, 汪琳達(dá) 申請(qǐng)人:南京高峰特草生物科技有限公司