一種HMGA2基因分型的ARMS-qPCR檢測試劑盒的制作方法
【專利摘要】一種HMGA2基因分型的ARMS-qPCR檢測試劑盒，包括盒體和位于盒體上方的盒蓋，盒體具有容置腔，還包括固定座和海綿墊，所述固定座容置在上述容置腔內(nèi)并縱向開設(shè)有6個容置孔和1個容置槽，6個所述容置孔的孔腔內(nèi)分別容置有HMGA2-R引物試劑管、HMGA2-C引物試劑管、HMGA2-F1引物試劑管、HMGA2-F2引物試劑管、HMGA2-Taqman管和陽性對照質(zhì)粒管；所述容置槽的槽腔內(nèi)容置有PCR緩沖液試劑瓶；6個所述容置孔的孔腔的底部、所述容置槽的槽腔的底部分別鋪設(shè)有所述的海綿墊；盒蓋的一側(cè)與盒體的開口處轉(zhuǎn)動連接，另一側(cè)向下彎折形成連接部，所述連接部朝向盒體的側(cè)壁設(shè)有金屬部件，相應(yīng)的，所述盒體的側(cè)壁對應(yīng)金屬部件處設(shè)有磁性部件；盒蓋與盒體之間還設(shè)有密封條。本ARMS-qPCR檢測試劑盒結(jié)構(gòu)簡單、密封性強(qiáng)。
【專利說明】-種HMGA2基因分型的ARMS-qPCR檢測試劑盒

【技術(shù)領(lǐng)域】
[OOOU 本實用新型設(shè)及一種檢測試劑盒，尤其設(shè)及一種HMGA2基因分型的ARMS-qPCR檢 測試劑盒。

【背景技術(shù)】
[0002] 有研究表明：一個被命名為HMGA2的基因影響大腦智力（stein et al. 2012)。 HMGA2基因 rsl0784502位點(diǎn)基因型的不同會顯著地影響大腦的腦容量。rsl0784502C/C基 因型人群的腦容量顯著地大于C/T W及T/T型人群的腦容量。研究發(fā)現(xiàn)，腦容量的大小與 人類智力呈正相關(guān)。因此，HMGA2基因 rsl0784502不同的基因型是一個極好的智力預(yù)測指 標(biāo)，對于我們國家優(yōu)生優(yōu)育W及兒童的培養(yǎng)具有重要的價值。
[000引可用于HMGA2基因 rsl0784502分型的技術(shù)很多，包括如DNA直接測序法、雜交巧 片法、焦磯酸測序法化及變性高效液相色譜法等。其中，DNA測序法為基因分型的金標(biāo)準(zhǔn)， 該方法存在如下缺點(diǎn)：檢測的靈敏度不高，只有大于15%的突變才能檢測到；費(fèi)時，操作復(fù) 雜，對操作人員要求高；非閉管操作，設(shè)及PCR擴(kuò)增后的操作，因此易被污染，造成結(jié)果的不 理想；通量太小，一次最多只能做24個，很難大規(guī)模開展。
[0004] 參考文獻(xiàn)
[0005] Stein et al. 2012Identification of common variants associated with human hippocampal and intracranial volumes. Nature Genetics. 44 ;552-562 實用新型內(nèi)容
[0006] 本實用新型所要解決的技術(shù)問題是針對技術(shù)現(xiàn)狀提供一種密封性良好的HMGA2 基因分型的ARMS-qPCR檢測試劑盒。
[0007] 本實用新型解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案為；一種HMGA2基因分型的 ARMS-qPCR檢測試劑盒，包括盒體和位于盒體上方的盒蓋，所述盒體具有容置腔，還包括固 定座和海綿墊，所述固定座容置在上述容置腔內(nèi)并縱向開設(shè)有6個容置孔和1個容置槽，6 個所述容置孔的孔腔內(nèi)分別容置有HMGA2-R引物試劑管、HMGA2-C引物試劑管、HMGA2-F1引 物試劑管、HMGA2-巧引物試劑管、歷642-化9111311管和陽性對照質(zhì)粒管；所述容置槽的槽腔 內(nèi)容置有PCR緩沖液試劑瓶；6個所述容置孔的孔腔的底部、所述容置槽的槽腔的底部分別 鋪設(shè)有所述的海綿墊；
[000引所述盒蓋的一側(cè)與盒體的開口處轉(zhuǎn)動連接，另一側(cè)向下彎折形成連接部，所述連 接部朝向盒體的側(cè)壁設(shè)有金屬部件，相應(yīng)的，所述盒體的側(cè)壁對應(yīng)金屬部件處設(shè)有磁性部 件；
[0009] 所述盒蓋與盒體之間設(shè)有密封條，所述密封條緊固設(shè)置在盒蓋與盒體開口端相接 觸的端面并與盒體的容置腔的上端面相匹配。
[0010] 作為改進(jìn)，HMGA2基因分型的ARMS-qPCR檢測試劑盒還包括備用容置槽，所述備用 容置槽的槽腔內(nèi)容置有裝有PCR緩沖液備用試劑瓶，所述備用容置槽的槽腔底部鋪設(shè)有海 綿墊，所述備用容置槽與容置槽并列排布在固定座上。
[0011] 優(yōu)選的，6個所述容置孔在固定座上分兩排平行排列。
[0012] 優(yōu)選的，6個所述容置孔分別為能容納1. 5m化P管的孔洞，相應(yīng)的，所述HMGA2-R 引物試劑管、HMGA2-C引物試劑管、HMGA2-F1引物試劑管、HMGA2-F2引物試劑管、 HMGA2-化qman管和陽性對照質(zhì)粒管分別采用1. 5m化P管。
[0013] 優(yōu)選的，所述金屬部件為鐵片，所述磁性部件為磁鐵塊。
[0014] 作為改進(jìn)，所述磁性部件外凸地設(shè)置在盒蓋的側(cè)壁，所述連接部設(shè)置金屬部件處 開設(shè)有凹槽，所述金屬部件設(shè)置在該凹槽的槽底，在所述金屬部件與磁性部件吸附在一起 的狀態(tài)下，所述磁性部件完全容置在該凹槽的容置空間內(nèi)。
[0015] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本實用新型的優(yōu)點(diǎn)在于；本ARMS-qPCR檢測試劑盒在盒蓋和盒 體的連接處設(shè)置了磁性鎖合機(jī)構(gòu)（即金屬部件和磁性部件），可W保證在盒蓋與盒體閉合 時，保持密封狀態(tài)，方便移動和運(yùn)輸；同時，盒蓋與盒體之間設(shè)置了密封條，進(jìn)一步增強(qiáng)了密 封性；另外，本ARMS-qPCR檢測試劑盒在HMGA2rsl0918859位基因分型時具有敏感性高、特 異性強(qiáng)、耗時短等優(yōu)點(diǎn)；此外，容置孔的孔槽與容置槽的槽腔底部都鋪設(shè)有海綿墊，可W避 免試劑管與試劑瓶的底部磕碰破損，保證了各個容器的安全。
[0016] 本ARMS-qPCR檢測試劑盒適用于HMGA2基因分型，其結(jié)構(gòu)簡單、設(shè)計合理、使用方 便、容易制造，且檢測過程不易受污染其即保證了試劑盒密封性、安全性，又方便運(yùn)輸，可W 在給HMGA2基因分型時方便實驗人員操作，提高了工作效率。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0017] 圖1為本實用新型實施例ARMS-qPCR檢測試劑盒的結(jié)構(gòu)示意圖。

【具體實施方式】
[0018] W下結(jié)合附圖實施例對本實用新型作進(jìn)一步詳細(xì)描述。
[0019] 本實施例的HMGA2基因分型的ARMS-qPCR檢測試劑盒，如圖1所示，包括盒體1和 位于盒體1上方的盒蓋2,盒體1為上端開口的中空的立方體盒體1，其具有容置腔。盒蓋 2的一側(cè)邊與盒體1的開口端的一側(cè)壁的頂端轉(zhuǎn)動連接，例如較接或者通過一層膜連接，而 盒蓋2的相對的一側(cè)通過磁性鎖合機(jī)構(gòu)與盒體1連接。盒體1與盒蓋2的具體連接方式為： 盒蓋2的一側(cè)與盒體1的開口處轉(zhuǎn)動連接，另一側(cè)向下彎折形成連接部11，連接部11朝向 盒體1的側(cè)壁設(shè)有金屬部件12-一鐵片，相應(yīng)的，盒體1的側(cè)壁對應(yīng)金屬部件12處設(shè)有磁 性部件13-一磁鐵塊。磁鐵塊的位置應(yīng)使盒蓋2蓋合在盒體1上，且盒蓋2的連接部11貼 合在盒體1的側(cè)壁上，該磁鐵塊正好與連接部11上的鐵片相對應(yīng)并吸合。
[0020] 本實施例的盒蓋2與盒體1的連接方式可W保證在盒蓋2與盒體1閉合時，保持 密封狀態(tài)，W方便移動和運(yùn)輸。
[0021] 為了進(jìn)一步增強(qiáng)本試劑盒的密封性，磁性部件13外凸地設(shè)置在盒蓋2的側(cè)壁，同 時，連接部11上設(shè)置金屬部件12的內(nèi)壁處開設(shè)有凹槽，而金屬部件12固定在該凹槽的槽 底，當(dāng)金屬部件12與磁性部件13吸附在一起時，磁性部件13完全容置在該凹槽的容置空 間內(nèi)。此時，因磁性部件13完成容置在了凹槽內(nèi)，使得盒蓋2和盒體1蓋合時，盒蓋2與盒 體1間無縫隙，增強(qiáng)了密封性。
[0022] 為了更進(jìn)一步增強(qiáng)本實施例檢測試劑盒的密封性，盒蓋2與盒體1之間設(shè)有密封 條14,密封條14緊固設(shè)置在盒蓋2與盒體1開口端相接觸的端面并與盒體1的容置腔的上 端面相匹配，即密封條14固定（例如粘貼）在盒蓋2的下端面，當(dāng)盒蓋2與盒體1閉合時， 密封條14恰好位于盒體1容置腔的上端面上，密封條14的形狀為與容置腔相匹配的四邊 形。
[002引本實施例的HMGA2基因分型的ARMS-qPCR檢測試劑盒還包括固定座15和海綿墊， 固定座15容置在盒體1容置腔內(nèi)并縱向開設(shè)有6個容置孔、1個容置槽和1個備用容置槽， 6個容置孔的孔腔內(nèi)分別容置有HMGA2-R引物試劑管4、HMGA2-C引物試劑管3、HMGA2-F1 引物試劑管5、HMGA2-巧引物試劑管6、歷642-化9111311管8和陽性對照質(zhì)粒管7 ;容置槽的 槽腔內(nèi)容置有PCR緩沖液試劑瓶10，備用容置槽的槽腔內(nèi)容置有PCR緩沖液備用試劑瓶9。
[0024] 為了防止在運(yùn)輸過程中，試劑管、試劑瓶與盒體1或固定座15碰撞而破損，6個 容置孔的孔腔的底部、容置槽的槽腔的底部W及備用容置槽的槽腔的底部分別鋪設(shè)有海綿 墊。在本實施例中，容置孔、容置槽和備用容置槽都是具有底部的空腔式結(jié)構(gòu)，每個孔腔、槽 腔底部分別鋪設(shè)有海綿墊，該樣可W防止發(fā)生碰撞，對試劑管、試劑瓶能起到更好的保護(hù)和 緩沖作用，W保證各個容器的安全。
[0025] 當(dāng)然，容置孔、容置槽和備用容置槽可W設(shè)計成沒底的穿孔式結(jié)構(gòu)，此時海綿墊可 W為一整塊，其具體鋪設(shè)在盒體1內(nèi)固定座15下方的容置腔內(nèi)。
[0026] 為了使得本實施例的ARMS-qPCR檢測試劑盒結(jié)構(gòu)更加整齊，6個容置孔在固定座 15上分兩排平行排列，而備用容置槽與容置槽并列排布在固定座15上并位于容置孔的右 偵U，其中容置槽位于上方。位于上排的3個容置孔內(nèi)從左至右分別放置HMGA2-C引物試劑 管3、HMGA2-F2引物試劑管6和陽性對照質(zhì)粒管7,位于下排的3個容置孔內(nèi)從左至右分別 放置HMGA2-R引物試劑管4、HMGA2-F1引物試劑管5和歷642-化9111311管8。該種排布格 局是根據(jù)使用本檢測試劑盒來進(jìn)行HMGA2基因分型時的操作步驟來設(shè)計的，可W使得檢測 時，操作人員能有條理、有規(guī)律地選擇相應(yīng)的試劑。
[0027] 6個容置孔分別為能容納1. 5m化P管（即離屯、管）的孔洞，相應(yīng)的，HMGA2-R引 物試劑管4、HMGA2-C引物試劑管3、HMGA2-F1引物試劑管5、HMGA2-F2引物試劑管6、 HMGA2-化qman管8和陽性對照質(zhì)粒管7分別采用1. 5m化P管。
[002引 6個容置孔中放置的EP管中分別裝有濃度為10 ymol/L的如下引物：
[0029] HMGA2-R ;5' -CATTTTGCAGTCCGTCCCAC-3，
[0030] HMGA2-C ;5> -TCATTAGTTGTGAGAGAAGT-3>
[0031] HMGA2-F1 ;5, -CACATCCACTTGGATGTCTGC-3，
[0032] HMGA2-F2 ;5, -CACATCCACTTGGATGTCTGT-3，
[0033] 另外，PCR緩沖液試劑瓶10、PCR緩沖液備用試劑瓶9中盛裝的PCR反應(yīng)緩沖 酶液混合物包括濃度為 0. 4mmol/L 的 dNTPs，5mmol/L 的 Mg"，2xPCR Buffer, 1U/25 y L Goldstar Best "Tag。歷642-化911腳1管8中裝有通用"Tagman探針，序列為；歷642-化911腳1 ; 5' -FAM-GCATGTATACGGAGCAATTG-3'，陽性對照質(zhì)粒管7中裝有陽性對照質(zhì)粒。
[0034] 使用本實施例的ARMS-qPCR檢測試劑盒進(jìn)行HMGA2基因分型的操作方法如下；
[00對 1)取模板DNA
[0036] 取病人全血1血，常規(guī)提取DNA，取1 y LDNA作為模板。
[0037]。反應(yīng)體系
[003引將各反應(yīng)物質(zhì)按照如下反應(yīng)體系進(jìn)行配比；
[0039] 反應(yīng)體系為20 y 1，包括qPCR混合液10 y 1，參照引物或者ARMS引物各0. 5 y 1 (終 濃度0. 5 y M/L)，模板1 y 1 (10化g)，其余用(1化0補(bǔ)齊。
[0040]

【權(quán)利要求】
1. 一種HMGA2基因分型的ARMS-qPCR檢測試劑盒，包括盒體（1)和位于盒體（1)上方 的盒蓋（2)，所述盒體（1)具有容置腔，其特征在于：還包括固定座（15)和海綿墊，所述固 定座（15)容置在上述容置腔內(nèi)并縱向開設(shè)有6個容置孔和1個容置槽，6個所述容置孔的 孔腔內(nèi)分別容置有HMGA2-R引物試劑管（4)、HMGA2-C引物試劑管（3)、HMGA2-F1引物試劑 管（5)、HMGA2-F2引物試劑管（6)、HMGA2-Taqman管⑶和陽性對照質(zhì)粒管（7);所述容置 槽的槽腔內(nèi)容置有PCR緩沖液試劑瓶（10) ;6個所述容置孔的孔腔的底部、所述容置槽的槽 腔的底部分別鋪設(shè)有所述的海綿墊； 所述盒蓋（2)的一側(cè)與盒體（1)的開口處轉(zhuǎn)動連接，另一側(cè)向下彎折形成連接部（11)， 所述連接部（11)朝向盒體（1)的側(cè)壁設(shè)有金屬部件（12)，相應(yīng)的，所述盒體（1)的側(cè)壁對 應(yīng)金屬部件（12)處設(shè)有磁性部件（13); 所述盒蓋（2)與盒體（1)之間設(shè)有密封條（14)，所述密封條（14)緊固設(shè)置在盒蓋（2) 與盒體（1)開口端相接觸的端面并與盒體（1)的容置腔的上端面相匹配。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的HMGA2基因分型的ARMS-qPCR檢測試劑盒，其特征在于：還 包括備用容置槽，所述備用容置槽的槽腔內(nèi)容置有PCR緩沖液備用試劑瓶（9)，所述備用容 置槽的槽腔底部鋪設(shè)有海綿墊，所述備用容置槽與容置槽并列排布在固定座（15)上。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的HMGA2基因分型的ARMS-qPCR檢測試劑盒，其特征在于：6個 所述容置孔在固定座（15)上分兩排平行排列。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的HMGA2基因分型的ARMS-qPCR檢測試劑盒，其特征在 于：6個所述容置孔分別為能容納1. 5mlEP管的孔洞，相應(yīng)的，所述HMGA2-R引物試劑 管（4)、HMGA2-C引物試劑管（3)、HMGA2-F1引物試劑管（5)、HMGA2-F2引物試劑管（6)、 HMGA2-Taqman管（8)和陽性對照質(zhì)粒管（7)分別采用1.5mlEP管。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的HMGA2基因分型的ARMS-qPCR檢測試劑盒，其特征在于：所 述金屬部件（12)為鐵片，所述磁性部件（13)為磁鐵塊。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的HMGA2基因分型的ARMS-qPCR檢測試劑盒，其特征在于：所 述磁性部件（13)外凸地設(shè)置在盒蓋（2)的側(cè)壁，所述連接部（11)設(shè)置金屬部件（12)處開 設(shè)有凹槽，所述金屬部件（12)設(shè)置在該凹槽的槽底，在所述金屬部件（12)與磁性部件（13) 吸附在一起的狀態(tài)下，所述磁性部件（13)完全容置在該凹槽的容置空間內(nèi)。
【文檔編號】C12M1/34GK204185490SQ201420642727
【公開日】2015年3月4日 申請日期:2014年10月31日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月31日
【發(fā)明者】張道允, 鞏子英, 張恒, 羅堅誠, 賈寧 申請人:江蘇所羅門兄弟醫(yī)學(xué)科技有限公司