本發(fā)明涉及一種飼料添加菌劑及其制備方法，尤指一種可利用解淀粉芽孢桿菌(bacillusamyloliquefaciens)、枯草桿菌(bacillussubtilis)、短小芽孢桿菌(bacilluspumilus)或其組合添加碳酸鈣粉末后所制成的飼料添加菌劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
：畜牧農(nóng)業(yè)的發(fā)展已伴隨著人類社會數(shù)百年的歷史，近年來，用于禽畜類的飼料，為了其功能性而參入許多種類的飼料添加劑。而一般常見的飼料添加劑功能包括增加動物攝食量、提高動物生產(chǎn)力、提高健康水平、改善飼料質(zhì)量、調(diào)節(jié)動物生理過程、提高動物相關(guān)產(chǎn)品質(zhì)量以及改善環(huán)境狀況等。其中，也有幫助動物吸收飼料營養(yǎng)的飼料添加劑，一般這類飼料添加劑屬于微生物制劑的一種。以往微生物制劑大多以乳酸菌類為主，但若使用單一菌種或僅使用純?nèi)樗峋?，往往可獲得的效果十分有限。近年來人們遂開始尋找其他較為合適的菌株作為研發(fā)目標(biāo)，其中，安全性與有效性皆佳的產(chǎn)孢型非腸道菌類逐漸被人們發(fā)現(xiàn)其功效，除了前述的優(yōu)點外，更可使飼料發(fā)揮的效果更加多元化。然而，該類菌株的運用方式中，尚未找到具有多重功效的優(yōu)良復(fù)合制劑。技術(shù)實現(xiàn)要素：為解決現(xiàn)有技術(shù)中所提及的問題，本發(fā)明提供了一種飼料添加菌劑，包含一菌粉以及一填充物。其中該菌粉包含多個菌株，包含一枯草桿菌(bacillussubtilis)、一短小芽孢桿菌(bacilluspumilus)或其組合。上述該多個菌株的總菌數(shù)為每公克至少1x109菌落形成單位(cfu/g)，且該多個菌株中每一菌株占該飼料添加菌劑的重量百分比相等，而該碳酸鈣粉末與該菌粉均勻混合。本飼料添加菌劑所述該枯草桿菌(bacillussubtilis)的保藏號碼為nitebp-02169，而該短小芽孢桿菌(bacilluspumilus)的保藏號碼為nitebp-02170。此外，本發(fā)明更提供了一種飼料添加菌劑的制備方法，首先執(zhí)行步驟(a)，挑選一菌株接入一第一種瓶中活化，該菌株為一枯草桿菌(bacillussubtilis)、或一短小芽孢桿菌(bacilluspumilus)。接著執(zhí)行步驟(b)，再將該第一種瓶中該菌株的菌落接入一第二種瓶中放大，該第二種瓶的容量大于該第一種瓶，其后執(zhí)行步驟(c)，通過一接種箱再將該菌株接入一發(fā)酵槽同時活化放大，直至該菌株進入對數(shù)生長期。再執(zhí)行步驟(d)，將該菌株打入一發(fā)酵罐直至該菌株孢子化，并制備為一菌粉，之后執(zhí)行步驟(e)，重復(fù)步驟(a)～(d)直至該枯草桿菌(bacillussubtilis)及該短小芽孢桿菌(bacilluspumilus)皆制備為該菌粉并均勻混和，且該枯草桿菌(bacillussubtilis)及該短小芽孢桿菌(bacilluspumilus)占該菌粉的重量百分比相等，最后，執(zhí)行步驟(f)，將該菌粉與一填充物均勻混合。本飼料添加菌劑的制備方法所述該枯草桿菌(bacillussubtilis)的保藏號碼為nitebp-02169，而該短小芽孢桿菌(bacilluspumilus)的保藏號碼為nitebp-02170。本發(fā)明更提供了一種一種菌株篩選方法，包含步驟(甲)，選取一土壤作為樣本，接著執(zhí)行步驟(乙)，取一重量之該樣本加入無菌水中，依序于一第一條件及一第二條件中培養(yǎng)，再執(zhí)行步驟(丙)，將該樣本序列稀釋為104～107倍，得到一樣本稀釋液。接著執(zhí)行步驟(丁)，將該樣本稀釋液涂抹于對應(yīng)的篩選培養(yǎng)基，以一第三條件培養(yǎng)，獲得如請求項1所述之復(fù)數(shù)個菌株，最后依序執(zhí)行步驟(戊)對該復(fù)數(shù)個菌株鑒定其16srdna序列及淀粉、纖維、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、鈣磷、鐵磷、鋁磷分解能力是否符合標(biāo)準(zhǔn)，以及步驟(己)將符合標(biāo)準(zhǔn)的該復(fù)數(shù)個菌株保存。附圖說明圖1是本發(fā)明飼料添加菌劑的菌株篩選方法流程圖。圖2是本發(fā)明飼料添加菌劑的制備方法流程圖。具體實施方式為能了解本發(fā)明的技術(shù)特征及實用功效，并可依照說明書的內(nèi)容來實施，茲進一步以如圖式所示的較佳實施例，詳細(xì)說明如后：本實施例所述的飼料添加菌劑包含菌粉及填充物，其中該填充物可為碳酸鈣粉末或麥芽糊精，且該填充物占該飼料添加菌劑的重量百分比為98％，且該飼料添加菌劑含水量的重量百分比為10％以下。其中該菌粉包含多個菌株，包含一枯草桿菌(bacillussubtilis)、一短小芽孢桿菌(bacilluspumilus)或其組合。又，在其他實施例中，該復(fù)數(shù)個菌株更可包含一解淀粉芽孢桿菌(bacillusamyloliquefaciens)。而上述的菌株是通過如下方式篩出：請參照圖1，圖1是本發(fā)明飼料添加菌劑的菌株篩選方法流程圖。所述的多個菌株是通過土壤篩選而得，首先執(zhí)行步驟(甲)，選取一土壤作為樣本。該土壤的質(zhì)地為砂壤土(sandsilt)，更精確地來說，是為中國臺灣屏東縣長治鄉(xiāng)聯(lián)發(fā)生物科技股份有限公司場內(nèi)的土壤。接著，執(zhí)行步驟(乙)，取一重量的該樣本加入無菌水中，依次在一第一條件及一第二條件中培養(yǎng)。在本實施例中，首先會取1公克的樣本加入50毫升的無菌水中，接著以第一條件，也就是在室溫28℃下培養(yǎng)24小時，接著再以第二條件28℃的條件下培養(yǎng)16小時。再執(zhí)行步驟(丙)，將該樣本序列稀釋為104～107倍，得到一樣本稀釋液。本實施例中所述的序列稀釋是以序列稀釋涂盤的方式進行，取1毫升的樣本液體加9毫升的無菌水，依照技術(shù)人員的需求稀釋為104～107倍。接著執(zhí)行步驟(丁)，將該樣本稀釋液涂抹于對應(yīng)的篩選培養(yǎng)基，以一第三條件培養(yǎng)，獲得如前述的多個菌株。本實施例是將前述的每1毫升的樣本稀釋液涂于相對應(yīng)篩選培養(yǎng)基上，培養(yǎng)基可選自營養(yǎng)洋菜培養(yǎng)基(nutrientagar,na)或馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(potatodextroseagar,pda)，再以第三條件28℃培養(yǎng)24小時后，觀察其菌相及菌數(shù)。接著執(zhí)行步驟(戊)，對該多個菌株鑒定其16srdna序列及淀粉、纖維、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、鈣磷、鐵磷、鋁磷分解能力是否符合標(biāo)準(zhǔn)。本實施例中，該多個菌株對于淀粉、纖維、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、鈣磷、鐵磷、鋁磷的分解能力是通過在培養(yǎng)基中參雜該些物質(zhì)并觀察其代謝反應(yīng)或檢測其產(chǎn)物而得；而16srdna的序列可以透過次世代定序(nextgenerationsequencing,ngs)等方式判斷，本發(fā)明不以此為限。最后，執(zhí)行步驟(己)，將符合標(biāo)準(zhǔn)的該多個菌株保存。本實施例是將該多個菌種純化后再以甘油(glycerol)制作為凍管保存于-80℃的冷凍裝置中。本實施例所篩選出解淀粉芽孢桿菌(bacillusamyloliquefaciens)的品系編號為agb-f002，該枯草桿菌(bacillussubtilis)、解淀粉芽孢桿菌(bacillusamyloliquefaciens)agb-f002及短小芽孢桿菌(bacilluspumilus)其16srdna基因序列的特征依序如序列表seqidno.1、seqidno.2及seqidno.3所示。上述該多個菌株的總菌數(shù)為每公克至少1x109菌落形成單位(cfu/g)，且每一該多個菌株占該飼料添加菌劑的重量百分比相等，而該碳酸鈣粉末與該菌粉均勻混合。在本實施例中，將舉以實際用于農(nóng)畜動物身上的實例以及實驗數(shù)據(jù)，證明本發(fā)明族具有優(yōu)異的功效及進步性。實施例1請參照表1-1～1-2，表1-1是以「雞」做為喂養(yǎng)動物的實驗條件；表1-2為本實施例所獲得增肉率的相關(guān)結(jié)果。實施條件：(1)選用白肉雞(gallusgallus)的雛雞12只，并分為兩組，空白組僅喂養(yǎng)一般飼料；實驗組的飼料添加有本實施例所述的飼料添加菌劑。(2)進行三重復(fù)的試驗。(3)喂養(yǎng)間期：五周。(4)早晚各供應(yīng)一次50公克的雞飼料。表1-1：雞只喂養(yǎng)試驗條件表接著請參照表1-2的實驗結(jié)果，本實施例是以飼料增肉率(feedconversionrate,fcr)作為計算標(biāo)準(zhǔn)，飼料增肉率是指每增重一個單位體重所需的飼料量，若fcr為3，則代表需要使用3單位的飼料來增加一單位喂養(yǎng)生物的重量。表1-2：雞只喂養(yǎng)試驗結(jié)果表組別空白組實驗組飼料增肉率1.961.82因此，本實施例顯示加入飼料添加菌劑后，對于喂養(yǎng)雞只而言，可提升飼料利用率、促進雞只生長與吸收，進而使飼料增肉率(feedconversionrate,fcr)下降。接著，請參照表1-3，表1-3是針對利用本飼料添加菌劑于雞只后，對雞蛋質(zhì)量影響的結(jié)果。在雞蛋質(zhì)量的實驗中，所有條件均與表1-1極其實施條件相同，僅喂養(yǎng)間期拉長至3個月，而測定的方式采用諾德斯卡格和范斯沃夫法(nordskogandfamsworth)檢定，其中檢定項目包含：i.雞只均日產(chǎn)蛋率：計算每日蛋數(shù)并除以當(dāng)日活雞數(shù)取百分比(％)，將試驗期間的數(shù)值平均即得。ii.雞只均日產(chǎn)蛋重：計算每日蛋重并除以當(dāng)日活雞數(shù)，將試驗期間的數(shù)值(公克)平均即得。iii.蛋殼強度：使用電動式拉力機進行測定，測定時將雞蛋正放(尖端朝上)，速度設(shè)定為50毫米/分鐘，而其測定單位為公斤。iv.蛋殼厚度：將雞蛋上中下部分(尖端、中端、鈍端)各取一片蛋殼，精測其厚度(毫米)后取平均值，此為蛋殼的厚度。因此，本實驗的結(jié)果如下表1-3所示。表1-3：飼料添加菌對雞蛋的質(zhì)量影響結(jié)果表檢測項目空白組實驗組i.雞只均日產(chǎn)蛋率(％)2550ii.雞只均日產(chǎn)蛋重(g)69.873.66iii.蛋殼強度(kg)1.331.45iv.蛋殼厚度(mm)1.251.3在實施例1中，該飼料添加菌劑隨著飼料被雞攝入其腸胃道中，除可以穩(wěn)定雞體內(nèi)的腸道菌群外，更改善了雞只對于飼料養(yǎng)分的吸收，因此本實施例的飼料添加菌劑可以在不用增加飼料消耗量的狀況下，增加雞只的增重率，使其消化較為完整，并降低有毒氮氣的排放，進而改善雞舍中的臭味問題；此外，微生物更能夠改善雞只對于蛋白質(zhì)、鈣質(zhì)與微量元素的消化與吸收。此外，在喂養(yǎng)雞只的期間，實施例1更研究了選用本實施例的飼料添加菌劑造成的環(huán)境相關(guān)影響。首先，在實施的雞舍里，其空氣中硫化氫、氨氣及其它臭味顯著減少，而水源的部分，水中的有機質(zhì)分解較完全，生化需氧量(biochemicaloxygendemand,bod)下降，此外，該飼料添加菌劑中的微生物隨著雞只的排泄物排放至土壤中，重建土壤菌相，使有機質(zhì)分解快速、完全，增加土壤肥力。此外，根據(jù)糞便軟硬程度，實際上可看出家禽的健康狀況，對于雞只而言，下痢是病變的原因之一，有礙生長及降低飼料效率，過份的硬便也是消化不良的現(xiàn)象，會造成對生長有不良影響；而糞便松軟則表示其消化吸收良好。因本實施例的飼料添加菌劑可使腸內(nèi)菌族群改變，進而促進其分泌出豐富的消化酵素，分解飼料營養(yǎng)物質(zhì)使飼料的消化吸收更快速更完全，排泄物在大腸停留時間較短，被吸收的水份也減少，所以糞便松軟。至于對雞只內(nèi)分泌的影響，本實施例中的枯草桿菌在小腸中進行酦酵時能產(chǎn)生促進腦下垂體分泌正常，而促使家禽發(fā)育良好，改善雞群整齊度，使出產(chǎn)的家禽良率較高，此外，更可增強雞只的抵抗力。此外，表1-3中更證明了，本飼料添加菌劑對于雞蛋質(zhì)量也有相當(dāng)正面的影響，添加本實施例飼料添加菌劑之后，雞只其均日產(chǎn)蛋率較空白組高25％，且該組的蛋重、蛋殼強度與厚度均較空白組高。可見添加本實施例飼料添加菌劑對于雞只所產(chǎn)的雞蛋質(zhì)量有顯著提升。綜上所述，在實施例1中，將本實施例所述的飼料添加菌劑用于雞只的飼養(yǎng)時，所產(chǎn)出的雞肉彈性較佳，質(zhì)量提高，此外也提高了整體雞群的良率；除此之外更具有節(jié)省成本的額外優(yōu)點，縮短飼養(yǎng)時間、提高飼料效率，而雞只發(fā)育良好，在抵抗力較佳的情況下，雞只不易發(fā)生疾病，間接省去綜合維他命及抗生素的使用。實施例2請參照表2-1～2-2，表2-1系是以「豬」做為喂養(yǎng)動物的實驗條件；表2-2為本實施例所獲得平均成長率即飼料轉(zhuǎn)換率的相關(guān)結(jié)果。實施條件：(1)選用體重80公斤左右的大豬(susscrofadomestica)18只，并分為兩組，空白組僅喂養(yǎng)一般飼料；實驗組的飼料添加有本實施例所述的飼料添加菌劑。(2)喂養(yǎng)間期：49天。表2-1：豬只喂養(yǎng)試驗條件表接著請參照表2-2，表2-2是本實施例喂養(yǎng)試驗的結(jié)果。表2-2：豬只喂養(yǎng)試驗結(jié)果表項目實驗組空白組平均總增重41.28公斤23.28公斤平均日增重0.842公斤0.475公斤總喂食飼料量1350公斤1320公斤總實驗天數(shù)49天49天平均成長率50.1％27.5％飼料轉(zhuǎn)換率3.275.7以添加有該飼料添加菌劑的飼料喂食豬只后，可增加其腸道環(huán)境中的有益菌含量，提升豬只對于飼料和養(yǎng)分的吸收，因此，使用本實施例飼料添加菌劑可以在不增加飼料的用量下，增加豬只的平均成長率。此外，腸道中的益生菌被排泄出體外后，亦能在糞便中存活，讓糞便更容易分解，減少處理所需時間。其功效除了如前述實施例1中所述具有提升豬肉質(zhì)量及增加豬只免疫力的功效相當(dāng)之外，利用本實施例的飼料添加菌劑喂養(yǎng)的豬群更具有額外的優(yōu)點，例如豬只的糞便松軟，易于清潔沖洗，除了可節(jié)省水力及人力的費用之外，飼料添加菌劑中的微生物隨排泄物排出在體外后，尚能繼續(xù)繁殖，可進一步的分解排泄物中的有機質(zhì)，在未來制成肥料時，可間接改善土壤菌相，提高排泄物的再利用價值。由于本實施例所述的飼料添加菌劑主要的作用位置是主要位于蓄養(yǎng)動物的消化道，因此其實際上在動物體消化道中的狀態(tài)也顯得相當(dāng)重要。接著，將針對本實施例所述的飼料添加菌劑進行腸胃道模擬耐受性測試。本腸胃道仿真耐受性測試之測試項目主要有兩大項，包含：a.酸堿值與溫度b.鹽度當(dāng)混有本實施例飼料添加菌劑的飼料由動物體的口腔經(jīng)由食道進入胃后，酸堿值(ph)會驟降至1.5～2.5左右，但進入十二指腸后，酸堿值會陡升為9，接著在腸道維持中性偏堿的酸堿值。因此，本實施例的菌株必須具備可以克服劇烈酸堿值變化的特性才得以生存。此外，由于飼料的保存或加工，有時會在高溫下進行造粒，故如本實施例中飼料添加菌劑等微生物制劑的耐熱性也是一大重點。通常以酵素或乳酸菌等生物制劑的熱穩(wěn)定性較差，但本實施例飼料添加菌劑的熱穩(wěn)定性相當(dāng)優(yōu)異，主要是因本實施例飼料添加菌劑于制備完成時，其內(nèi)的菌株皆已形成內(nèi)孢子的型態(tài)。因此，在a.酸堿值與溫度的測試項目中，下表3-1的實驗結(jié)果證明，本實施例飼料添加菌劑所采用的菌株具備順利抵達(dá)動物體腸道的特性。表3-1：菌株型態(tài)與可承受的酸堿度、溫度一覽表：其中，內(nèi)孢子態(tài)時可存活的溫度范圍雖為-20℃～65℃，但實際上本實施例的飼料添加菌劑在特殊情況下最高可耐受維持100℃十分鐘或90℃二十分鐘的環(huán)境，因此可接受飼料在造粒時產(chǎn)生的瞬間高溫。而下表3-2則是本實施例飼料添加菌劑對于b.鹽度的耐受程度試驗結(jié)果，由于被畜養(yǎng)的動物不一定會使用市售的飼料，故須考慮鹽度是否會影響本實施例飼料添加菌劑中菌株的活性。在試驗b.中，將飼料添加菌劑中的菌株分別培養(yǎng)在鹽度0％、1％、3％、5％及10％的培養(yǎng)液中，于48小時后涂在培養(yǎng)皿上，結(jié)果顯示所有種類的菌株皆可于鹽度10％的環(huán)境下存活，表示在正常且常用的畜牧飼料中，本實施例的飼料添加菌劑不會因不同配方產(chǎn)生的不同鹽度，進而引響到其功效。表3-2：飼料添加菌劑對于鹽度的耐受程度表活菌態(tài)內(nèi)孢子態(tài)鹽度耐受度(％)0～10％0～10％因此，根據(jù)上述所有實驗結(jié)果，本實施例飼料添加菌劑可同時發(fā)揮多種功效，包括抑制害菌生存、提高飼料利用率并促進中營養(yǎng)物質(zhì)的消化與吸收以及增加動物的免疫能力，此外，更具有使用便利以及利于各種加工方式的優(yōu)點，足見其進步性。此外，本發(fā)明更提供了一種飼料添加菌劑的制備方法，首先請參照圖2，圖2系本發(fā)明飼料添加菌劑的制備方法流程圖。如圖2所示，首先執(zhí)行步驟(a)，挑選一菌株接入一第一種瓶中活化，該菌株為枯草桿菌(bacillussubtilis)、及短小芽孢桿菌(bacilluspumilus)。當(dāng)然，更可包含前述之解淀粉芽孢桿菌(bacilusamyloliquefaciens)。其中，如前所述，本實施例采用的解淀粉芽孢桿菌(bacillusamyloliquefaciens)是解淀粉芽孢桿菌(bacillusamyloliquefaciens)agb-f002的品系，此外，該菌株會被接入100毫升的第一種瓶活化24小時，待活化完畢之后執(zhí)行步驟(b)。接著執(zhí)行步驟(b)，再將該第一種瓶中該菌株的菌落接入一第二種瓶中放大，該第二種瓶的容量大于該第一種瓶，其后執(zhí)行步驟(c)，通過一接種箱再將該菌株接入一發(fā)酵槽同時活化放大，直至該菌株進入對數(shù)生長期。在步驟(b)中，所述菌株會被接入2公升的種瓶進行第一次的菌種放大，其放大時間約18～24小時，其后便進入步驟(c)，將步驟(b)中已放大的該菌株，利用接種箱接入500公升的發(fā)酵槽中，同時活化以及再次放大，直到測量該菌株的數(shù)量進入對數(shù)生長期(exponentialphase)。步驟(c)中所采用的活化放大條件是以通氣量0.3vvm、轉(zhuǎn)速80r.p.m.以及溫度35℃的條件進行活化放大，本實施例另該菌株生長至對數(shù)生長期所需的時間約莫為12小時。待基礎(chǔ)菌株的數(shù)量足夠后，執(zhí)行步驟(d)，將該菌株打入一發(fā)酵罐直至該菌株孢子化，并制備為一菌粉。步驟(d)中所述的發(fā)酵罐是選用5噸(t)的發(fā)酵罐，待該菌株孢子化后收集該些內(nèi)孢子，形成菌粉。本實施例制作菌粉的方式主要包三步驟，首先執(zhí)行步驟i，將該菌株的發(fā)酵液經(jīng)轉(zhuǎn)速14000rpm處理，并取得一菌泥，接著執(zhí)行步驟ii，將該菌泥添加一保護劑后冷凍干燥，冷凍干燥的條件為：溫度攝氏-50℃～60℃、壓力0毫米汞柱(mmhg)，并維持48小時的時間，完成后可取得干燥菌塊；最后，執(zhí)行步驟iii，將該干燥菌塊粉碎后制得該菌粉。其中，上述步驟ii中的保護劑可為甘油(glycerol)等抗凍劑，本發(fā)明不以此為限。之后執(zhí)行步驟(e)，重復(fù)步驟(a)～(d)直至該枯草桿菌(bacillussubtilis)、該解淀粉芽孢桿菌(bacillusamyloliquefaciens)及該短小芽孢桿菌(bacilluspumilus)皆制備為該菌粉并均勻混和，且該枯草桿菌(bacillussubtilis)、該解淀粉芽孢桿菌(bacillusamyloliquefaciens)或該短小芽孢桿菌(bacilluspumilus)占該菌粉的重量百分比相等。由于本實施例是以最佳實施例作為范例，因此需以三種菌株的菌粉制備后均勻混合而得之，而本實施例中所述干燥菌塊及該菌粉之目數(shù)(mesh)為80～100單位。最后，執(zhí)行步驟(f)，將該菌粉與一填充物均勻混合。其中，所述填充物可為碳酸鈣粉末或麥芽糊精，且該填充物所占制備完成后飼料添加菌劑的重量百分比為98％。待該飼料添加菌劑制備完成后，尚須檢驗該飼料添加菌劑是否符合規(guī)格。首先，針對質(zhì)量檢驗請參照下表4，表4是針對飼料添加菌劑的檢驗項目及其標(biāo)準(zhǔn)表。表4：飼料添加菌劑的檢驗項目及其標(biāo)準(zhǔn)表首先，本實施例對于總菌數(shù)的檢測法是利用平板計數(shù)法(platecountmethod)測得，本實施例所采的平板計數(shù)法是屬于一種密度測定法。先將本實施例所制備的飼料添加菌劑經(jīng)過適當(dāng)?shù)?0倍連續(xù)稀釋后，在無菌操作下，吸取1毫升稀釋水樣至無菌培養(yǎng)皿(petridish)(二重復(fù))，待稀釋水干燥后，倒置在30℃的培養(yǎng)箱內(nèi)24～48小時。而本實施例培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基系選用營養(yǎng)洋菜培養(yǎng)基(nutrientagar,na)。直至菌落生成后，選擇菌落生成數(shù)目在30至300之間者計數(shù)，并反推算原飼料添加菌劑的含菌密度。利用所述的平板計數(shù)法可以測出總好氧、兼氧異營性細(xì)菌密度。本實施例中，酸堿值(ph)值的計算可先將飼料添加菌劑以去離子水(deionizedwater)稀釋至1％之后，再利用酸堿計(phmeter)或其他可測得酸堿值的方法達(dá)成；而針對含水量的計算，本實施例以紅外線水分分析儀測定。將紅外線水分分析儀歸零后放入2.1公克的飼料添加菌劑到測定盤上，開始測定，直至屏幕顯示水分含量后即完成。最后，外觀的部分僅以肉眼進行光學(xué)觀察即可得到，本發(fā)明不以此為限。本實施例中所述的該枯草桿菌(bacillussubtilis)是以保藏號碼nitebp-02169所活藏的菌種據(jù)以實施，而短小芽孢桿菌(bacilluspumilus)則以保藏號碼nitebp-02170所活藏的菌種據(jù)以實施。以下為相關(guān)的保藏信息：枯草桿菌(bacillussubtilis)：保藏國家：日本國保藏機構(gòu)：國家技術(shù)評估學(xué)會專利微生物保藏中心(獨立行政法人製品評価技術(shù)基盤機構(gòu)特許微生物寄託センター,nitepatentmicroorganismsdepositary(npmd))保藏地址：〒292-0818千葉縣木更津市上總鐮足2-5-8122號室(〒292-0818千葉県木更津市かずさ鎌足2-5-8122號室；#122,2-5-8kazusakamatari,kisarazu-shi,chiba292-0818,japan)保藏日期：公元2015年12月3日保藏號碼：nitebp-02169分類命名：bacillussubtillsagb-f003短小芽孢桿菌(bacilluspumilus)：保藏國家：日本國保藏機構(gòu)：國家技術(shù)評估學(xué)會專利微生物保藏中心(獨立行政法人製品評価技術(shù)基盤機構(gòu)特許微生物寄託センター,nitepatentmicroorganismsdepositary(npmd))保藏地址：〒292-0818千葉縣木更津市上總鐮足2-5-8122號室(〒292-0818千葉県木更津市かずさ鎌足2-5-8122號室；#122,2-5-8kazusakamatari,kisarazu-shi,chiba292-0818,japan)保藏日期：公元2015年12月3日保藏號碼：nitebp-02170分類命名：bacilluspumilusagb-f001以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例而已，不能以此限定本發(fā)明實施的范圍，凡依本發(fā)明申請專利范圍及說明內(nèi)容所作的簡單等效變化與修飾，皆仍屬本發(fā)明涵蓋的范圍內(nèi)。當(dāng)前第1頁12