本發(fā)明涉及超微粉的制備，具體為一種石斛復(fù)合超微粉及其制備方法。
背景技術(shù)：
鐵皮石斛（Dendrobium officinale Kimura et Migo）是蘭科石斛屬植物，是一種名貴的中藥材，具有悠久的應(yīng)用歷史，被列為九大仙草之首，是藥中黃金?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明：鐵皮石斛中所含有的石斛多糖，生物堿，菲類化合物等具有較高的醫(yī)療保健作用，能夠提高機(jī)體免疫力。
靈芝，又稱靈芝草、神芝，是多孔菌科植物赤芝或紫芝的全株，其中紫靈芝的藥用效果最好。靈芝作為擁有數(shù)千年藥用歷史的中國傳統(tǒng)珍貴藥材，具有較高的藥用價(jià)值，經(jīng)過數(shù)十年的藥理學(xué)研究可知，靈芝具有提高免疫力，調(diào)節(jié)血糖、控制血壓、保肝護(hù)肝、輔助治療腫瘤及改善睡眠等多種功效。
西洋參又稱花旗參或廣東人參，是五加科植物，人參的一種，具有悠久的藥用歷史。醫(yī)學(xué)研究結(jié)果表明，西洋參中的皂甙可調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)，服用西洋參可以保護(hù)心血管系統(tǒng)，提高抗腫瘤活性，促進(jìn)血液循環(huán)及改善血糖等多種功效，是養(yǎng)生佳品。
人參花，又名“神草花”，是人參含苞待放的蓓蕾，自然烘曬而成。人參花長至四年才開始開花，每棵人參花每年僅開一朵小花，每60公斤人參僅能采得一兩參花，彌足珍貴，素有“綠色黃金”之稱。其味苦中帶甜、清爽可口、解渴、解毒、善于生津又不耗氣，其中含有二十種皂甙活性物質(zhì)，十七種氨基酸、十一種微量元素、三種抗癌活性物質(zhì)硒及粗蛋白,在提神、降壓、降糖、降血脂、抗癌、調(diào)理腸胃功能、緩解更年期綜合癥等諸多方面均有功效，被權(quán)威機(jī)構(gòu)認(rèn)定為“免疫標(biāo)間的萬能養(yǎng)生品”。
枸杞是一種傳統(tǒng)的中藥，在中國也有較悠久的藥用歷史，古中醫(yī)用其治療虛勞精虧，內(nèi)熱消渴，血虛萎黃等，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明枸杞具有增強(qiáng)非特異性免疫的作用，具有一定的降血糖作用。
目前有關(guān)石斛與其他具有保健價(jià)值的中藥材復(fù)合保健品有很多，如申請(qǐng)?zhí)枺?01210588767.1將鐵皮石斛、枸杞、西洋參、羅漢果通過浸提的方法將有效成分分別提取，得多提取粉末后將其混合均勻制成制劑，申請(qǐng)?zhí)?01010510089.8將石斛、西洋參、蟲草分別粉碎制成勻漿后濃縮得到浸膏然后按一定的比例混合，最后制成各種片劑、膠囊及沖劑等，這些方法所得保健品，不僅制備工藝繁瑣，而且營養(yǎng)物質(zhì)流失嚴(yán)重，未能保留全部的營養(yǎng)物質(zhì)。超微粉碎技術(shù)是目前應(yīng)用較多的一種中藥加工方法，將中藥進(jìn)行破壁超微粉碎可促進(jìn)小腸吸收，提高營養(yǎng)價(jià)值利用率，本發(fā)明利用這一技術(shù)，首次將石斛、靈芝、西洋參、人參花、枸杞等調(diào)制在一起制成復(fù)合超微粉，起到協(xié)同作用。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種石斛復(fù)合超微粉及其制備方法，制備方法加工方便、營養(yǎng)流失少，制得的石斛復(fù)合超微粉功效好，易被人體吸收，營養(yǎng)補(bǔ)充全面。
為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種石斛復(fù)合超微粉，其組分包括：石斛、靈芝、西洋參、人參花、枸杞；各組分的重量配比為：石斛2份、靈芝0.8-1.2份、西洋參1.5-3份、人參花0.5-1.5份、枸杞4-6份。
所述石斛復(fù)合超微粉的制備方法如下：
（1）鮮品處理：將新鮮石斛莖條、靈芝、西洋參、人參花、枸杞洗凈，晾干，將石斛切成0.5-1cm的長段，靈芝、西洋參切成薄片，其中各原料的重量配比為：石斛2份、靈芝0.8-1.2份、西洋參1.5-3份、人參花0.5-1.5份、枸杞4-6份；
（2）冷凍處理：將切好的石斛、靈芝、西洋參、人參花和枸杞放入5-10L液氮內(nèi)速凍10-15min，將其冷凍成晶體；
（3）干燥處理：將冷凍后石斛、靈芝、西洋參、人參花、枸杞混合物放入真空干燥器內(nèi)進(jìn)行抽真空干燥處理8-10小時(shí)；
（4）超低溫超微粉碎：將干燥的石斛混合物放入超微振動(dòng)磨中進(jìn)行破壁粉碎，使用液氮作為研磨介質(zhì)，控制溫度在-20℃以下，將粉碎的超微粉過篩，通過800目篩網(wǎng)進(jìn)行篩分，不能通過的粉體再次轉(zhuǎn)回超微振動(dòng)磨，在相同條件下再次粉碎直至全部通過篩網(wǎng)，即得到石斛復(fù)合超微粉。
本發(fā)明的技術(shù)效果：本發(fā)明所采用的石斛、靈芝、西洋參、人參花和枸杞中含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì)，通過最優(yōu)比例混合，在功效上有協(xié)同作用，滿足了人們的營養(yǎng)補(bǔ)充需求，降低了服用保健品的成本，避免了因服用多種保健品引起的不良反應(yīng)；另外，采用液氮速凍真空冷凍干燥的方法避免了低溫冷凍和高溫干燥造成的營養(yǎng)成分流失，使用液氮作為研磨介質(zhì)，控制溫度在-20℃以下，避免活性有效成分因粉碎產(chǎn)生高溫失活，同時(shí)本發(fā)明采用低溫破壁粉碎的方法可促進(jìn)活性成分被吸收性能，克服了傳統(tǒng)中藥保健品加工程序繁瑣，加工過程營養(yǎng)物質(zhì)流失、不易被人體吸收等缺點(diǎn)。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1
本實(shí)施例的石斛復(fù)合超微粉的制備方法如下：
（1）取材：稱取鮮石斛200g、靈芝100g、西洋參200g、人參花100g、枸杞400g；
（2）鮮品處理：將新鮮石斛莖條、靈芝、西洋參、人參花、枸杞洗凈，晾干，將石斛切成0.5cm的長段，靈芝、西洋參切成薄片；
（3）冷凍處理：將切好的石斛、靈芝、西洋參、人參花和枸杞放入8L液氮內(nèi)速凍12min，將其冷凍成晶體；
（4）干燥處理：將冷凍后石斛、靈芝、西洋參、人參花、枸杞混合物放入真空干燥器內(nèi)進(jìn)行抽真空干燥處理8小時(shí)；
（5）超低溫超微粉碎：將干燥的石斛混合物放入超微振動(dòng)磨中進(jìn)行破壁粉碎，使用液氮作為研磨介質(zhì)，控制溫度在-20℃；將粉碎的超微粉過篩，通過800目篩網(wǎng)進(jìn)行篩分，不能通過的粉體再次轉(zhuǎn)回超微振動(dòng)磨，在相同條件下再次粉碎直至全部通過篩網(wǎng)，即得到石斛復(fù)合超微粉。
實(shí)施例2
本實(shí)施例的石斛復(fù)合超微粉的制備方法如下：
（1）取材：稱取鮮石斛200g、靈芝100g、西洋參200g、人參花100g、枸杞600g；
（2）鮮品處理：將新鮮石斛莖條、靈芝、西洋參、人參花、枸杞洗凈，晾干，將石斛切成1cm的長段，靈芝、西洋參切成薄片；
（3）冷凍處理：將切好的石斛、靈芝、西洋參、人參花和枸杞放入10L液氮內(nèi)速凍10min，將其冷凍成晶體；
（4）干燥處理：將冷凍后石斛、靈芝、西洋參、人參花和枸杞混合物放入真空干燥器內(nèi)進(jìn)行抽真空干燥處理10小時(shí)；
（5）超低溫超微粉碎：將干燥的石斛混合物放入超微振動(dòng)磨中進(jìn)行破壁粉碎，使用液氮作為研磨介質(zhì)，控制溫度在-30℃；將粉碎的超微粉過篩，通過800目篩網(wǎng)進(jìn)行篩分，不能通過的粉體再次轉(zhuǎn)回超微振動(dòng)磨，在相同條件下再次粉碎直至全部通過篩網(wǎng)，即得到石斛復(fù)合超微粉。
實(shí)施例3
本實(shí)施例的石斛復(fù)合超微粉的制備方法如下：
（1）取材：稱取鮮石斛200g、靈芝120g、西洋參250g、人參花100g、枸杞500g；
（2）鮮品處理：將新鮮石斛莖條、靈芝、西洋參、人參花、枸杞洗凈，晾干，將石斛切成1cm的長段，靈芝、西洋參切成薄片；
（3）冷凍處理：將切好的石斛、靈芝、西洋參、人參花和枸杞放入5L液氮內(nèi)速凍15min，將其冷凍成晶體；
（4）干燥處理：將冷凍后石斛、靈芝、西洋參、人參花和枸杞混合物放入真空干燥器內(nèi)進(jìn)行抽真空干燥處理10小時(shí)；
（5）超低溫超微粉碎：將干燥的石斛混合物放入超微振動(dòng)磨中進(jìn)行破壁粉碎，使用液氮作為研磨介質(zhì)，控制溫度在-35℃；將粉碎的超微粉過篩，通過800目篩網(wǎng)進(jìn)行篩分，不能通過的粉體再次轉(zhuǎn)回超微振動(dòng)磨，在相同條件下再次粉碎直至全部通過篩網(wǎng)，即得到石斛復(fù)合超微粉。
本發(fā)明的石斛復(fù)合超微粉中人參皂甙的檢測(cè)：本發(fā)明中的石斛復(fù)合超微粉采用人參花與鐵皮石斛相配伍，代替?zhèn)鹘y(tǒng)常用的人參和西洋參，其原因在于與人參相比，人參花為補(bǔ)陰中藥，與石斛具有相輔相成的功效，與傳統(tǒng)補(bǔ)陰的西洋參相比，人參花具有綠色黃金之美稱，含有多種皂甙化合物，其皂甙含量最高。采用專利申請(qǐng)?zhí)枮?01010510089.8中所用測(cè)定人參皂甙的方法測(cè)定人參花中人參皂苷的含量，測(cè)得干人參花中人參皂苷的含量為12.8%，同專利申請(qǐng)?zhí)枮?01010510089.8中測(cè)定的西洋參中人參皂苷含量比較，明顯高于西洋參中人參皂苷的含量。
本發(fā)明的石斛復(fù)合超微粉具有提高免疫力功能，其實(shí)驗(yàn)方法及數(shù)據(jù)如下：
1、劑量：本發(fā)明中鐵皮石斛復(fù)合超微粉人體推薦劑量為9g/天，在實(shí)驗(yàn)檢測(cè)中檢測(cè)劑量設(shè)置低、中、高三個(gè)劑量，即0.5g/kg，1.0g/kg、3.0g/kg，分別相當(dāng)于人體劑量的5、10、30倍。對(duì)各實(shí)驗(yàn)組小鼠經(jīng)口服用本發(fā)明樣品30天，另設(shè)置空白對(duì)照。
2、試驗(yàn)方法
1）將200只小鼠按重量隨機(jī)分為五個(gè)組，每組40只。一組用于NK細(xì)胞活性檢測(cè)和淋轉(zhuǎn)實(shí)驗(yàn)，二組用于DTH、脾指數(shù)和胸腺指數(shù)實(shí)驗(yàn)，三組進(jìn)行溶血空斑和溶血素實(shí)驗(yàn)，四組進(jìn)行碳廓清實(shí)驗(yàn)，五組進(jìn)行吞噬實(shí)驗(yàn)。
2）喂養(yǎng)并稱重：按劑量設(shè)計(jì)連續(xù)喂養(yǎng)小鼠30天，每周稱重一次，計(jì)算實(shí)驗(yàn)過程中小鼠體重變化。
3）臟器/體重比值（胸腺指數(shù)、脾指數(shù)）測(cè)定：小鼠連續(xù)服用30天，頸椎脫臼處處死，取胸腺、脾臟稱重，分別計(jì)算胸腺指數(shù)和脾指數(shù)。
4）細(xì)胞免疫功能測(cè)定
a) ConA誘導(dǎo)的小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)：小鼠連續(xù)給樣30天后，頸椎脫臼處死，取脾臟，制成脾淋巴細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞濃度為3*106個(gè)/ml，將細(xì)胞懸浮液分兩孔加入24孔培養(yǎng)板中，每孔1ml，一孔加75μlConA液（相當(dāng)于7.5μg/ml），另一孔作為對(duì)照，置5%CO2,37℃培養(yǎng)72h，培養(yǎng)結(jié)束前4h，每孔加入MTT（5mg/ml）50μl/孔，繼續(xù)培養(yǎng)4h，培養(yǎng)結(jié)束后，每孔加入1ml酸性異丙醇，吹打混勻，使紫色結(jié)晶完全溶解后，以570nm波長進(jìn)行比色，記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。
b) DTH測(cè)定及胸腺指數(shù)、脾指數(shù)的測(cè)定：致敏：小鼠連續(xù)給養(yǎng)30天后，將小鼠腹部去毛，范圍約3*3cm，將1%DNFB的溶液10μl均勻涂抹于小鼠右耳進(jìn)行攻擊。24h后稱重，頸椎脫臼處死，用打孔器取下直徑8mm的左右耳片，稱重并計(jì)算腫脹度。再取胸腺、脾臟稱重，分別計(jì)算胸腺指數(shù)、脾指數(shù)。
5）體液免疫功能測(cè)定
a)抗體產(chǎn)生檢測(cè)試驗(yàn)：動(dòng)物連續(xù)給養(yǎng)樣品30天后，將脫纖維綿羊紅細(xì)胞免疫5天后，動(dòng)物頸椎脫臼處死，取脾臟，制成脾細(xì)胞懸浮液，調(diào)整細(xì)胞濃度為5*106個(gè)/ml。將表層培養(yǎng)基（1g瓊脂糖加雙蒸水至100ml）加熱溶解后，放入45℃水浴保溫，與等量pH7.2-7.4、2倍濃度的Hanks液混合，分裝小試管，每管0.5ml，再向管內(nèi)加50μl110%SRBC，20μl中溫育1.5h，然后各排比做倍比稀釋，每孔加1%SRBC100μl震蕩后37℃放置3h，當(dāng)血球?qū)φ粘霈F(xiàn)沉落后觀察結(jié)果。
6）單核—巨噬細(xì)胞功能測(cè)定實(shí)驗(yàn)
a）小鼠碳廓清實(shí)驗(yàn)：小鼠連續(xù)給予樣品30天后，在尾部靜脈注射1:3稀釋的印度墨汁，待墨汁注入，立即計(jì)時(shí)。注入墨汁后2-10min后，分別從眼靜脈取血20μl，并將其加到2ml0.1%碳酸鈉溶液中，用分光光度計(jì)在600nm處測(cè)定OD值，以碳酸鈉溶液作空白對(duì)照。根據(jù)動(dòng)物體重、肝重和脾重計(jì)算吞噬指數(shù)。
b）小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：動(dòng)物連續(xù)給養(yǎng)樣品30天后，每鼠腹腔注射20%雞紅細(xì)胞懸浮液1ml，間隔30min，頸椎脫臼處死，固定于鼠板上，剪開腹部皮膚，注射生理鹽水2ml，轉(zhuǎn)動(dòng)鼠板1min，吸出腹腔洗液1ml，分滴于2片玻片上，37℃孵箱濕孵30min，用生理鹽水漂洗晾干，用油鏡鏡檢，計(jì)算吞噬百分率（%）和吞噬指數(shù)。
7）NK細(xì)胞活性測(cè)定：小鼠連續(xù)給養(yǎng)樣品30天后，動(dòng)物頸椎脫臼處死，取脾臟，制成脾臟懸浮液（效應(yīng)細(xì)胞），取傳代后24Hyac-1細(xì)胞加入RPMI1640完全培養(yǎng)液，調(diào)整細(xì)胞濃度為4*105個(gè)/ml（靶細(xì)胞），取靶細(xì)胞和效應(yīng)細(xì)胞各100μl（效靶比50:1），加入U(xiǎn)型96孔板，靶細(xì)胞自然釋放孔加靶細(xì)胞和培養(yǎng)液各100μl，最大釋放孔加靶細(xì)胞和1%NP40各100μl，上述各項(xiàng)均設(shè)三個(gè)重復(fù)組，于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4h，每孔吸取上清液100μl置平底96孔板中，同時(shí)加入LDH基質(zhì)液100μl，反應(yīng)30min，每孔加入1mol/l的HCL30μl終止，用酶標(biāo)儀在490nm處測(cè)定OD值。
4、結(jié)果
實(shí)驗(yàn)過程中小鼠體重觀察的結(jié)果如表1所示。
表1 小鼠體重變化
免疫一組測(cè)定NK細(xì)胞活性和脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表2所示。
表2 NK細(xì)胞活性及脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化
免疫二組測(cè)定胸腺指數(shù)、脾指數(shù)和腫脹度的結(jié)果如表3所示。
表3胸腺指數(shù)、脾指數(shù)和腫脹度
免疫三組測(cè)定溶血空斑和溶血素實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表4所示。
表4 溶血空斑和溶血素實(shí)驗(yàn)結(jié)果
免疫四組測(cè)定小鼠免疫碳廓清實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表5所示。
表5 免疫碳廓清實(shí)驗(yàn)結(jié)果
免疫五組吞噬實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表6所示。
表6 吞噬實(shí)驗(yàn)結(jié)果
5、結(jié)論：在本實(shí)驗(yàn)條件下，細(xì)胞免疫功能陽性，體液免疫功能陽性、NK細(xì)胞活性陽、單核-巨噬細(xì)胞功能陽性，根據(jù)《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》中“增強(qiáng)免疫功能”的結(jié)果判定，認(rèn)為小鼠經(jīng)口服用本發(fā)明產(chǎn)品30天后，具有增強(qiáng)免疫力功能。
顯然，上述實(shí)施例僅僅是為清楚地說明本發(fā)明所作的舉例，而并非是對(duì)本發(fā)明的實(shí)施方式的限定。對(duì)于所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在上述說明的基礎(chǔ)上還可以做出其它不同形式的變化或變動(dòng)。這里無需也無法對(duì)所有的實(shí)施方式予以窮舉。而這些屬于本發(fā)明的精神所引伸出的顯而易見的變化或變動(dòng)仍處于本發(fā)明的保護(hù)范圍之中。