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一種添加有植物乳桿菌增殖劑的發(fā)酵產(chǎn)品及其制作方法與流程

文檔序號:12200232閱讀:598來源:國知局
本發(fā)明屬于微生物發(fā)酵及食品加工
技術(shù)領(lǐng)域
中,特別是在發(fā)酵類食品中,利用一種植物乳桿菌增殖劑制作的發(fā)酵產(chǎn)品及其制作方法。
背景技術(shù)
:益生菌是一類對宿主有益的活性微生物,是定植于人體腸道、生殖系統(tǒng)內(nèi),能產(chǎn)生確切健康功效從而改善宿主微生態(tài)平衡、發(fā)揮有益作用的活性有益微生物的總稱。目前世界上研究的功能最強大的產(chǎn)品主要是各類微生物組成的復(fù)合活性益生菌,其廣泛應(yīng)用于生物工程、工農(nóng)業(yè)、食品安全以及生命健康領(lǐng)域,其益生功能越來越受廣大消費者的認(rèn)同和歡迎。植物乳桿菌屬于益生菌中的一種,它能夠有效耐受人體消化系統(tǒng),具有調(diào)節(jié)腸內(nèi)菌群平衡、促進人體消化吸收、調(diào)節(jié)膽固醇、調(diào)節(jié)血脂、增強人體免疫及預(yù)防癌癥和抑制腫瘤生長等益生保健功能。因此,開發(fā)高活菌數(shù)的純植物乳桿菌產(chǎn)品,對于提高消費者健康具有積極意義。目前市場上的益生菌產(chǎn)品主要是以嗜熱鏈球菌和保加利亞乳桿菌為主要發(fā)酵劑,同時添加其它有功能的益生菌,純益生菌發(fā)酵產(chǎn)品少之又少,且所有活菌產(chǎn)品都未進行雜菌檢測。由于植物乳桿菌在牛乳中生長緩慢,產(chǎn)酸能力差,難以凝乳。國內(nèi)外有不少研究嘗試解決此問題,但都存在一些缺陷,實際生產(chǎn)困難。論文《植物乳桿菌ST-Ⅲ在脫脂乳體系中生長限制因子的研究》[陳帥等,食品與發(fā)酵工業(yè),2008,34(10):53~57]以及《有效外源添加物魚蛋白胨組分的分級分離研究》[陳帥等,乳業(yè)科學(xué)與技術(shù),2010,4:201~204〕研究了魚蛋白胨中不同蛋白組分等對植物乳桿菌在乳中發(fā)酵的促進作用,但所用的魚蛋白胨為試劑級的;同時發(fā)酵時間較長(24h),成本高,難以滿足實際產(chǎn)品生產(chǎn)要求。專利《一種活性植物乳桿菌飲品及其制備方法》[馬成杰等,CN102715235A:2012-10-10]公開了一種活性植物乳桿菌增殖劑配方,植物乳桿菌活含量高。但所用試劑組成復(fù)雜,發(fā)酵時間較長(24-72h)。專利《一種植物乳桿菌發(fā)酵乳及其制備方法》[馬成杰等,CN103004984A:2013-04-03]公開了一種植物乳桿菌發(fā)酵乳及其制備方法,主要是添加適量氨基酸、核苷酸,解除了植物乳桿菌在乳中生長繁殖的限制性因子。但添加劑組成復(fù)雜,成本高;且純植物乳桿菌發(fā)酵時發(fā)酵時間較長(15h)。論文《植物乳桿菌ST-Ⅲ脫脂乳的發(fā)酵工藝優(yōu)化》[華寶珍等,農(nóng)業(yè)工程學(xué)報,2014,30(23711):276-284]研究了大豆多肽對植物乳桿菌的增殖作用,活菌數(shù)較高;但發(fā)酵時間較長(48h)。國外研究植物乳桿菌增殖的較少,其中有家日本公司利用谷物酒糟提取物增殖植物乳桿菌,但只對部分植物乳桿菌有增殖作用,且發(fā)酵時間較長(大于16h),特別是對有些植物乳桿菌(如植物乳桿菌ST-Ⅲ)增殖效果不理想。這主要是因為植物乳桿菌基因差異較大,不同菌株營養(yǎng)需求不一樣。以上國內(nèi)外研究都忽略植物乳桿菌純發(fā)酵產(chǎn)品中的雜菌污染檢測。如果所研究的增殖方法即使具有發(fā)酵時間短,活菌數(shù)高的特點,但沒有檢測雜菌,都是沒有意義的。大家知道乳及常見食品中常含有耐熱的芽孢桿菌污染,難以殺滅,如果植物乳桿菌不能盡快生長從而抑制雜菌生長,發(fā)酵乳中的雜菌將大大超標(biāo);特別是一些有害菌如蠟狀芽孢桿菌、葡萄球菌等將嚴(yán)重危害人體健康。這就要求所研究的植物乳桿菌的增殖方法不但有增菌效果好,活菌數(shù)高;而且要生長快速,從而抑制雜菌生長。利用植物乳桿菌增殖劑制作的發(fā)酵產(chǎn)品,首先是要在產(chǎn)品活菌數(shù)上有較高要求,同時要求其發(fā)酵時間短,盡量降低其他有害雜菌的含量;另外,在保藏時間內(nèi)活菌數(shù)較高,保證其產(chǎn)品的長期有效性。技術(shù)實現(xiàn)要素:本申請的技術(shù)方案要解決的技術(shù)問題是通過發(fā)酵產(chǎn)品中添加一種植物乳桿菌增殖劑以顯著提高含有植物乳桿菌發(fā)酵產(chǎn)品中的活性菌含量,同時保證發(fā)酵產(chǎn)品的發(fā)酵時間盡可能縮短、口感良好、有害雜菌污染盡量降低,解決了發(fā)酵活菌產(chǎn)品制備的技術(shù)難題。實現(xiàn)上述發(fā)明目的技術(shù)方案為:一種添加有植物乳桿菌增殖劑的發(fā)酵產(chǎn)品,該植物乳桿菌增殖劑是通過蛋白酶或含有蛋白酶的物質(zhì)降解植物蛋白反應(yīng)后的酶解混合物,該發(fā)酵產(chǎn)品中含有植物乳桿菌增殖劑質(zhì)量百分比為0.1-20%。上述植物乳桿菌增殖劑中的蛋白酶是植物蛋白酶、動物蛋白酶或者微生物蛋白酶中一種或混合物;含有蛋白酶的物質(zhì)是含有植物蛋白酶的物質(zhì)、動物蛋白酶的物質(zhì)或者微生物蛋白酶的物質(zhì)中一種或混合物。該發(fā)酵產(chǎn)品是發(fā)酵乳或活菌飲用水或活菌化妝品。植物蛋白可以選擇大豆蛋白、綠豆蛋白、鷹嘴豆蛋白、豌豆蛋白、蠶豆蛋白、扁豆蛋白、小麥蛋白或上述蛋白的混合物。上述植物蛋白酶通常選擇水果蛋白酶、蔬菜蛋白酶、藥用植物蛋白酶(如羅漢果蛋白酶、山藥蛋白酶)或其混合物。含有這些植物蛋白酶的物質(zhì)是水果、蔬菜或藥用植物。若選擇動物蛋白酶,則具體可以是胰蛋白酶、胃蛋白酶、胰凝乳蛋白酶。若選擇微生物蛋白酶,則可以具體為地衣芽孢桿菌蛋白酶、黑曲霉蛋白酶、解淀粉芽孢桿菌蛋白酶、枯草芽孢桿菌蛋白酶、米黑根毛霉蛋白酶、米曲霉蛋白酶、乳克魯維酵母蛋白酶、微小毛霉蛋白酶、蜂蜜曲霉蛋白酶、寄生內(nèi)座殼(栗疫菌)蛋白酶中的一種或其混合物。上述發(fā)酵乳的制作方法步驟是:(1)牛奶和植物乳桿菌增殖劑按照質(zhì)量比100:0.1-20混合;(2)滅菌,冷卻至37℃;(3)接種達到植物乳桿菌終濃度為1.0×105-1.0×108cfu/g;(3)發(fā)酵至凝乳,發(fā)酵時間不超過12h。上述活菌飲用水的制作方法步驟是:(1)純凈水和植物乳桿菌增殖劑按照質(zhì)量比100:0.1-20混合;(2)上步混合液預(yù)熱升溫在65℃、20MPa下實現(xiàn)均質(zhì),滅菌,冷卻至37℃;(4)接種、發(fā)酵16h達到植物乳桿菌終濃度為2.0×109cfu/g;(5)在(4)步的產(chǎn)物中按照200mg/100ml添加維生素C,并用純凈水進行稀釋至植物乳桿菌終濃度2.0×108cfu/g。上述活菌化妝品的制作方法為步驟是:(1)將化妝品與植物乳桿菌增殖劑按質(zhì)量比100:0.1-20混合;(2)滅菌;(3)接種、發(fā)酵。本發(fā)明的發(fā)酵產(chǎn)品具有以下優(yōu)點:(1)該增殖劑屬于天然可食用混合物,發(fā)酵產(chǎn)品中添加后對人體不會產(chǎn)生副作用;(2)通過該增殖劑的使用,可以大大縮短發(fā)酵產(chǎn)品的發(fā)酵時間,避免了有害雜菌的污染;(3)通過該增殖劑的添加可以實現(xiàn)發(fā)酵產(chǎn)品中的活菌數(shù)達到1.0×109cfu/g,活菌數(shù)大大高于其他增殖劑所產(chǎn)生的活菌數(shù);(4)該增殖劑的使用降低了高活菌數(shù)發(fā)酵產(chǎn)品的成本。具體實施方式為更清楚說明本發(fā)明技術(shù)方案,下面具體進行介紹。植物乳桿菌增殖劑采用蛋白酶降解植物蛋白反應(yīng)后生成的酶解混合物;植物蛋白可以選擇大豆蛋白或綠豆蛋白、鷹嘴豆蛋白、豌豆蛋白、蠶豆蛋白、扁豆蛋白、小麥蛋白或上述蛋白的混合物。上述植物蛋白酶通常選擇水果蛋白酶、蔬菜蛋白酶、藥用植物蛋白酶(如羅漢果蛋白酶、山藥蛋白酶)或其混合物。含有這些植物蛋白酶的物質(zhì)是水果、蔬菜或藥用植物。若選擇動物蛋白酶,則具體可以是胰蛋白酶、胃蛋白酶、胰凝乳蛋白酶。若選擇微生物蛋白酶,則可以具體為地衣芽孢桿菌蛋白酶、黑曲霉蛋白酶、解淀粉芽孢桿菌蛋白酶、枯草芽孢桿菌蛋白酶、米黑根毛霉蛋白酶、米曲霉蛋白酶、乳克魯維酵母蛋白酶、微小毛霉蛋白酶、蜂蜜曲霉蛋白酶、寄生內(nèi)座殼(栗疫菌)蛋白酶中的一種或其混合物。上述植物乳桿菌增殖劑的制作方法是將植物蛋白和植物蛋白酶在水溶液中在25℃-80℃下酶解反應(yīng)0.5~8h。實施例1:為確定該增殖劑的作用,將上述制備的植物乳桿菌增殖劑0.5-10%添加至牛奶中,在95℃下滅菌10min,接種得到了終濃度為1.0×105-1.0×108cfu/g植物乳桿菌ST-III,經(jīng)發(fā)酵至凝乳(不超過12h),通過LB平板計數(shù)好氧菌落總數(shù)檢測污染情況、并通過MRS平板計數(shù)植物乳桿菌活菌數(shù)。方法制得的凝乳測試結(jié)果如表1:表1.植物乳桿菌純發(fā)酵乳實驗結(jié)果表1的實驗結(jié)果證明,該增殖劑:能促進植物乳桿菌ST-Ⅲ在牛奶中快速生長凝乳,30天保質(zhì)期內(nèi)活菌數(shù)變化不大,無雜菌污染;且植物乳桿菌活菌計數(shù)較高。實施例2:采用大豆蛋白和無花果蛋白酶進行酶解反應(yīng)生成增殖劑,用該增殖劑和生牛乳混合、接種、發(fā)酵,觀察凝乳情況,樣品梯度稀釋計數(shù),上述樣品冷藏30天后再計數(shù);為比較增殖劑的效果用大豆蛋白胨、胰蛋白胨做增殖劑進行對照試驗,結(jié)果如表2。表2.大豆蛋白胨、胰蛋白胨做增殖劑進行對照試驗結(jié)果增殖劑凝乳情況好氧菌落總數(shù)(cfu/g)植物乳桿菌活菌計數(shù)(cfu/g)本技術(shù)方案的增殖劑凝乳<1×1011.2×109大豆蛋白胨未凝乳2.1×1033.1×108胰蛋白胨未凝乳2.1×1051.5×108由表2可知,本申請技術(shù)方案的增菌劑增菌效果遠超了大豆蛋白胨、胰蛋白胨的效果。實施例3:采用類似上述實施例的方法,使用大豆蛋白和菠蘿蛋白酶進行酶解反應(yīng)生成增殖劑,利用該用該增殖劑和生牛乳混合、發(fā)酵、接種,觀察凝乳情況,結(jié)果如表3。表3.大豆蛋白和菠蘿蛋白酶進行酶解反應(yīng)生成增殖劑的實驗效果時間凝乳情況好氧菌落總數(shù)(cfu/g)植物乳桿菌活菌計數(shù)(cfu/g)0天凝乳<1×1011.4×10930天后凝乳<1×1015.0×108實施例4:利用上述的大豆蛋白和菠蘿全汁進行酶解反應(yīng)生成增殖劑,利用該用該增殖劑和生牛乳混合、發(fā)酵、接種,觀察凝乳情況,如表4。表4.大豆蛋白和菠蘿全汁進行酶解反應(yīng)生成增殖劑實驗效果時間凝乳情況好氧菌落總數(shù)(cfu/g)植物乳桿菌活菌計數(shù)(cfu/g)0天凝乳<1×1011.0×10930天后凝乳<1×1014.5×108實施例5:利用大豆蛋白和下述幾種植物蛋白酶分別進行酶解反應(yīng)制作增殖劑的測試結(jié)果如下表5。表5.不同植物蛋白酶提取物效果植物蛋白酶凝乳情況好氧菌落總數(shù)(cfu/g)植物乳桿菌活菌計數(shù)(cfu/g)木瓜蛋白酶凝乳<1×1011.1×109無花果蛋白酶凝乳<1×1011.0×109菠蘿蛋白酶凝乳<1×1019.5×108羅漢果蛋白酶凝乳<1×1019.6×108實施例6:上述大豆蛋白也可以替換為其他植物蛋白,將其和菠蘿汁進行酶解反應(yīng)制作增殖劑并測試結(jié)果如下表6。表6.不同植物蛋白和菠蘿汁進行酶解反應(yīng)的增殖劑增菌實驗效果實施例7:上述植物蛋白酶也可以替換為動物蛋白酶,將其和大豆蛋白進行酶解反應(yīng)制作增殖劑,并測試,結(jié)果如下表7。表7.不同動物蛋白酶增菌實驗效果蛋白酶凝乳情況好氧菌落總數(shù)(cfu/g)植物乳桿菌活菌計數(shù)(cfu/g)胰蛋白酶凝乳<1×1019.2×108胃蛋白酶凝乳<1×1019.6×109胰凝乳蛋白酶凝乳<1×1018.3×108實施例8:上述植物蛋白酶也可以替換為微生物蛋白酶,將其和大豆蛋白進行酶解反應(yīng)制作增殖劑,并測試,結(jié)果如下表8。表8.不同微生物蛋白酶增菌實驗實施例9:植物乳桿菌增殖劑為大豆+菠蘿全汁,植物乳桿菌ST-III也可以被替換為其他植物乳桿菌菌株。表9.不同植物乳桿菌增殖試驗利用上述的植物乳桿菌增殖劑可以制作多種具有高活菌數(shù)的發(fā)酵產(chǎn)品,實施例10-18下面列舉了幾種發(fā)酵產(chǎn)品的制作過程。實施例10:植物乳桿菌發(fā)酵乳植物乳桿菌發(fā)酵乳配方:生牛乳80%,增殖劑2%(固形物含量),增稠劑適量,蔗糖7%,橙汁5%。制備方法:將上述混合料液預(yù)熱升溫,在65℃、20MPa下均質(zhì)后,95℃保溫殺菌10min,冷卻至37℃。接種(ST-Ⅲ接種量終濃度1.0×106cfu/g),發(fā)酵至凝乳。結(jié)果植物乳桿菌活菌數(shù)為1.0×109cfu/g,21天保值期內(nèi)活菌數(shù)大于3.0×108cfu/g,酸甜可口。目前國內(nèi)外市場上還沒有純植物乳桿菌發(fā)酵乳產(chǎn)品。實施例11:植物乳桿菌速溶發(fā)酵乳先將實施例10獲得的植物乳桿菌發(fā)酵乳噴霧干燥至含水量約為20%粉狀物。噴霧干燥的進風(fēng)溫度為110℃,所述噴霧干燥的排風(fēng)溫度為37℃,所述粉料的出口溫度在35℃;然后在低溫50℃的流化床內(nèi)進行流化干燥,使所述粉料中的含水量<5%的發(fā)酵乳粉。發(fā)酵乳粉發(fā)酵酸奶的使用方法,其包括下述步驟:將上述制得的發(fā)酵乳粉與溫水(50℃)1:4的質(zhì)量比混合,在保溫半小時,即可制成速溶發(fā)酵乳。植物乳桿菌活菌數(shù)為3.0×108cfu/g。目前國內(nèi)外市場上還沒有植物乳桿菌速溶發(fā)酵乳產(chǎn)品。實施例12:植物乳桿菌酸奶冰淇淋原料:生牛乳40%,增殖劑6%(固形物含量),白砂糖10%、脫脂乳粉10%、稀奶油20%、穩(wěn)定劑4%(主要成分為羧甲基纖維素鈉、淀粉),所有原料混勻,65℃,在200bar的壓力下進行均質(zhì),99℃殺菌10min;冷卻至37℃接種(ST-Ⅲ接種量終濃度1.0×107cfu/g)發(fā)酵12h。發(fā)酵產(chǎn)物在45℃150轉(zhuǎn)/min的轉(zhuǎn)速下攪拌20min破乳,降溫到15℃靜置后熟16h。O℃靜置老化12h,再O℃40bar的壓力下進行均質(zhì)。最后放入冰淇淋機-30℃制作酸奶冰淇淋。所獲得的產(chǎn)品酸甜可口,且含有益生功能的植物乳桿菌活菌(3個月之內(nèi)活菌數(shù)>4.0×108cfu/g)。目前國內(nèi)外市場上還沒有植物乳桿菌酸奶冰淇淋產(chǎn)品。實施例13:植物乳桿菌活菌飲料(1)發(fā)酵乳基料配方:脫脂奶粉15%,增殖劑4%(固形物含量),增稠劑適量,蔗糖7%,果汁10%。發(fā)酵乳基料制備方法:將料液預(yù)熱升溫,均質(zhì)后,105℃保溫殺菌10min,冷卻至37℃。接種(ST-Ⅲ接種量終濃度1.0×106cfu/g),發(fā)酵至凝乳。(2)活菌型酸乳飲料制作備料:白砂糖10%,水45%,穩(wěn)定劑(果膠)0.5%,將按上述比例穩(wěn)定劑與適量的白砂糖、水?dāng)嚢枞芙?,高壓均質(zhì)后殺菌冷卻。加入發(fā)酵乳基料約40%,攪拌混勻,調(diào)酸到pH值4.4,調(diào)香。在20MPa下無菌均質(zhì),得到植物乳桿菌活菌飲料。4℃冷藏1個月,植物乳桿菌活菌數(shù)為>1.0×108cfu/g。目前市場上植物乳桿菌活菌飲料較少,一般用直投菌粉,成本高,活菌數(shù)少,只有2.0×107cfu/g。實施例14:植物乳桿菌活菌水植物乳桿菌高密度發(fā)酵乳配方:脫脂奶粉10%,增殖劑5%(固形物含量)。制備方法:將料液預(yù)熱升溫,在65℃、20MPa下均質(zhì)后,115℃保溫殺菌10min,冷卻至37℃。接種(ST-Ⅲ接種量終濃度5.0×106cfu/g),發(fā)酵16h,植物乳桿菌活菌數(shù)為2.0×109cfu/g。稀釋添加到含有200mg/100ml維生素C以及0.2%果膠穩(wěn)定劑的純凈水中,制成終濃度為2.0×108cfu/g的活菌水。目前國內(nèi)外市場上還沒有植物乳桿菌活菌水產(chǎn)品。實施例15:植物乳桿菌益生菌制劑植物乳桿菌高密度發(fā)酵乳配方:脫脂奶粉12%,增殖劑5%(固形物含量)。制備方法:將料液預(yù)熱升溫,在65℃、20MPa下均質(zhì)后,115℃保溫殺菌10min,冷卻至37℃。接種(ST-Ⅲ接種量終濃度2.0×107cfu/g),發(fā)酵12h,植物乳桿菌活菌數(shù)為1.5×109cfu/g。發(fā)酵液離心,菌泥中加入蔗糖5%,L-半胱氨酸0.01%,真空干燥或冷凍干燥得到的植物乳桿菌菌粉。將真空干燥得到的植物乳桿菌菌粉經(jīng)過磨粉后與乳糖混合調(diào)配,壓片或制成菌粉膠囊。活菌數(shù)為1.0×1010cfu/g,常溫干燥保存一年后存活率大于40%。目前市場上的植物乳桿菌益生菌制劑所用培養(yǎng)基都是不能食用的,需要分離菌體,生產(chǎn)成本高。實施例16:植物乳桿菌混合發(fā)酵乳植物乳桿菌發(fā)酵乳配方:生牛乳80%,增殖劑2%(固形物含量),增稠劑適量,蔗糖7%。制備方法:將料液預(yù)熱升溫,在65℃、20MPa下均質(zhì)后,90℃保溫殺菌8min,冷卻至37℃。接種(ST-Ⅲ接種量終濃度2.0×106cfu/g,保加利亞乳桿菌粉0.02g/kg,嗜熱鏈球菌粉0.03g/kg),發(fā)酵至凝乳,添加或不添加果料如:草莓、獼猴桃等。結(jié)果植物乳桿菌活菌數(shù)為4.0×108cfu/g,21天保值期內(nèi)活菌數(shù)大于2.0×108cfu/g,酸甜可口。目前市場上有的發(fā)酵乳中含有植物乳桿菌,一般是菌粉直投的,成本高,活菌數(shù)低(接近1.0×107cfu/g。)。實施例17:含植物乳桿菌乳酸菌飲料發(fā)酵乳基料:實施例10制作的發(fā)酵乳作為發(fā)酵乳基料。備料:白砂糖10%,水45%,穩(wěn)定劑(果膠)0.5%,將按上述比例穩(wěn)定劑與適量的白砂糖、水?dāng)嚢枞芙?,高壓均質(zhì)后殺菌冷卻。加入發(fā)酵乳基料(40%),攪拌混勻,調(diào)酸到pH值4.4,調(diào)香。在20MPa下無菌均質(zhì),得到植物乳桿菌活菌飲料。4℃冷藏1個月,植物乳桿菌活菌數(shù)為>1.0×108cfu/g。由于植物乳桿菌難以在牛奶中增殖,目前市場上的植物乳桿菌乳酸菌飲料采用菌粉直投,成本高,活菌數(shù)低,小于1.0×107cfu/g。實施例18:含植物乳桿菌的活菌化妝品配方1:以凡士林甘油潤膚霜作為基質(zhì),與實施例1制作的植物乳桿菌活菌按100:1-20混合制得。涂抹皮膚表面,具有抑制雜菌生長,祛痘美容效果。配方2:以制作面膜材料作為基質(zhì)(如蜂蠟、透明質(zhì)酸鈉、膠原蛋白),與實施例1制作的植物乳桿菌活菌按100:1-20混合制得。涂抹皮膚表面,具有抑制雜菌生長,祛痘美容效果。以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例而已,并不用以限制本發(fā)明,凡在本發(fā)明實質(zhì)內(nèi)容上所作的任何修改、等同替換和簡單改進等,均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。當(dāng)前第1頁1 2 3 
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