本發(fā)明屬于微生物發(fā)酵飼料技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種發(fā)酵肉雞全價飼料及其制備方法。

背景技術(shù)：

抗生素作為動物飼料添加劑是由于它能調(diào)節(jié)畜禽腸道微生物菌群，抑制病原菌的生長，從而了降低動物的腹瀉率，并且有利于飼料營養(yǎng)物質(zhì)的消化和吸收，這將提高動物的生產(chǎn)性能以及提高飼料利用率。陳代文等試驗表明，飼料中添加黃霉素降低了仔豬腹瀉率，提高了飼料的利用率，增加了日增重。而且驗證添加抗生素改變了腸道微生物數(shù)量，抑制一些能產(chǎn)生有害物質(zhì)的微生物的生長。另外驗證了抗生素可以降低腸壁的厚度，使得營養(yǎng)物質(zhì)更加容易吸收。抗生素能夠增強(qiáng)畜禽的免疫功能，比如促進(jìn)免疫球蛋白的形成、增加淋巴細(xì)胞數(shù)量等。

近幾十年來由于抗生素不斷的使用以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，人們開始深刻的認(rèn)識到抗生素長期并且大量應(yīng)用帶來的負(fù)面影響：(1)抗生素在畜產(chǎn)品，如肉、蛋、奶中殘留，直接威脅著人類身體健康與安全。(2)抗生素的使用引起耐藥菌株的產(chǎn)生，造成使用量日漸增多，而且由于耐藥性，原有的抗生素已起不到作用，這給畜禽疾病的治療帶來很大麻煩。(3)抗生素的濫用會引起動物內(nèi)源性感染或二重感染。(4)抗生素的長期而且不科學(xué)的大量使用，破壞了畜禽細(xì)胞免疫、體液免疫功能，從而使部分畜禽生產(chǎn)性能受到影響。(5)抗生素可破壞腸道先天免疫力，這也是引起耐抗生素細(xì)菌感染的原因。研究發(fā)現(xiàn)，盡管抗生素能夠消滅腸道中的很多細(xì)菌，但也引起腸道先天免疫功能的損傷，這為耐抗生素細(xì)菌的繁殖提供了溫床。

發(fā)酵飼料的前身是微生態(tài)制劑，其概念最早由美國人Parker提出，從微生物生態(tài)學(xué)理論來說，微生態(tài)制劑能夠調(diào)整腸道內(nèi)微生態(tài)，維持腸道正常菌群數(shù)量和機(jī)體健康水平，它的代謝產(chǎn)物能選擇性的促進(jìn)腸道內(nèi)正常菌群生長繁殖^[29]。1908年，俄國的微生物學(xué)家諾貝爾獎獲得者 Meffichnikoff 首先提出了細(xì)菌具有治療腹瀉的作用，研究得出乳酸桿菌對大腸桿菌具有抑制作用。從上世紀(jì)70年代，美國開始研究飼用微生物制劑，并取得了一些研究成果。自從美國開始使用飼用微生物以來，日本、瑞典等一些發(fā)達(dá)國家也相繼開發(fā)使用益生素來替代抗生素的使用。到80年代，日本對已經(jīng)對可適合應(yīng)用的26種益生素深入研究。法國從1991年在市場銷售已經(jīng)大約50多種用于畜禽的益生菌，并在實際生產(chǎn)中取得良好的效果。另外德、英、丹麥等國家微生態(tài)制劑在仔豬、肉牛、雞的飼料中已普遍使用。而我國對益生菌的研究比較晚，開始于80年代，在畜牧業(yè)中的應(yīng)用則是最近幾年才普及開來，這方面我們已經(jīng)落后于西方發(fā)達(dá)國家。我國1992年成立微生態(tài)學(xué)會，并把益生菌及其應(yīng)用技術(shù)列入國家“八五”科技攻關(guān)課題，經(jīng)過近幾年的研究，一些飼用微生物制劑在畜禽、水產(chǎn)養(yǎng)殖中取得了顯著的作用和效果。此外我國還引進(jìn)了日本EM微生物復(fù)合劑，在應(yīng)用中也取得了很好的效果。

發(fā)酵飼料是在人為控制的條件下，以植物性農(nóng)副產(chǎn)品為主要原料，通過微生物自身的生長代謝作用，將飼料原料中難以消化的大分子物質(zhì)降解成容易被畜禽消化吸收的養(yǎng)分，具體就是分解部分多糖、蛋白質(zhì)和脂肪等大分子物質(zhì)，生成有機(jī)酸、可溶性多肽等小分子物質(zhì)，最終形成適口性好、營養(yǎng)豐富、活菌含量高的生物飼料。發(fā)酵飼料不僅能改善飼料原料中的營養(yǎng)成分，促進(jìn)畜禽對營養(yǎng)成分的吸收，還能降解飼料原料中可能存在的有毒物質(zhì)，同時還能減少甚至代替抗生素的使用，提高了動物的健康水平，從而保證了食品的安全性。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明公開了多種微生物發(fā)酵肉雞全價飼料的制備方法和應(yīng)用，以取代抗生素的添加提高飼料利用率，增加肉雞的免疫功能和生產(chǎn)性能。

本發(fā)明公開的技術(shù)內(nèi)容如下：

一種用于發(fā)酵肉雞全價飼料的液體菌液，其特征在于它是由芽孢菌、乳酸菌混菌組合而成；其中芽孢菌與乳酸菌接種比例為2:1~3:1（v/v），所述的芽孢菌指的是：芽孢菌Y1與芽孢菌Y2接種比例為2:1（v/v），乳酸菌指的是：乳酸菌L1和乳酸菌L2接種比例為1:2（v/v）；所述的芽孢菌Y1指的是枯草芽孢桿菌（CGMCC 1.504），芽孢菌Y2指的是解淀粉芽孢桿菌（CGMCC3413），乳酸菌L1指的是嗜酸乳桿菌（CGMCC1.2686），乳酸菌L2指的是糞腸球菌（CGMCC1.130）。

本發(fā)明進(jìn)一步公開了采用液體菌液進(jìn)行肉雞全價飼料發(fā)酵的制備方法，其特征在于，包括以下步驟；

1）將肉雞全價植物性原料粉碎，與水混合均勻，外加水量46%~56%（v/w）；

2）接種液體菌液，接種量為6%~8%（v/w），混合均勻后裝入塑料桶或不銹鋼桶內(nèi)發(fā)酵；所述的液體菌液指的是：芽孢菌與乳酸菌，其接種比例為2:1~3:1（v/v）。

所述步驟1）中，肉雞全價飼料料粉碎粒度80%通過10-20目篩。 植物性原料配比為：玉米粉:豆粕=3:2(w/w）；

所述步驟2）中，發(fā)酵溫度20℃～45℃，發(fā)酵時間為4天～10天，發(fā)酵肉雞全價飼料使飼料乳酸含量達(dá)到4.0%以上，還原糖含量增加2倍，乳酸菌數(shù)達(dá)到10⁹cfu/g，大腸桿菌檢測不到。

本發(fā)明更進(jìn)一步公開了用于發(fā)酵肉雞全價飼料的液體菌液，經(jīng)該菌液發(fā)酵的肉雞全價飼料可提高飼料的利用率，改善飼料風(fēng)味方面的應(yīng)用。特別是在制備無抗生素肉雞制品方面的應(yīng)用。實驗結(jié)果顯示：本發(fā)明制備的發(fā)酵肉雞全價飼料使飼料乳酸含量達(dá)到4.0%以上，還原糖含量增加2倍，明顯提高飼料的利用率，可替代抗生素的使用，改善動物的健康水平，比含抗生素全價肉雞飼料料肉比降低6.1%。在改善飼料風(fēng)味的同時，提高適口性，也增加了肉雞的免疫功能和生產(chǎn)性能。

從上面所述可以看出，本發(fā)明利用芽孢菌、乳酸菌混合發(fā)酵植物性原料，由此制備的發(fā)酵肉雞全價飼料無任何抗生素添加，富含乳酸、蛋白質(zhì)、小肽、多糖、維生素、礦物質(zhì)及微量元素等營養(yǎng)物質(zhì)，抗?fàn)I養(yǎng)因子少，具有適口性好、易消化等特點，益生菌明顯增多，以替代抗生素的添加提高飼料利用率，增加肉雞的免疫功能。

本發(fā)明更加詳細(xì)的描述如下:：

一、發(fā)酵菌種的篩選

（1）篩選具有抑制性的菌株

通過抑制有害腸道菌的實驗對發(fā)酵飼料所用菌株進(jìn)行篩選，不僅在發(fā)酵過程中起到抑制雜菌生長的作用，而且飼喂動物后也可在其腸道中發(fā)揮作用，防止腸道致病菌的生長。利用大腸桿菌和金黃色葡萄球菌作為指示菌，將其混入已放涼的培養(yǎng)基后倒平板，然后將活化好的24株菌點接到平板上，進(jìn)行培養(yǎng)后觀察是否產(chǎn)生抑菌圈，有抑菌圈的說明該菌株具有抑菌性能。編號為：1、2、3、4、5、6、10、14、16、19、20、21、22、23、24在大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的平板上都能形成抑菌圈。對具有抑菌性的菌株進(jìn)行復(fù)篩，進(jìn)一步確定抑菌性強(qiáng)的菌株。選擇初篩中抑菌圈較為明顯的幾株菌，將活化后的菌株進(jìn)行稀釋涂布，利用金黃色葡萄球菌作為指示菌，觀察單菌落形成的抑菌圈大小，計算抑菌圈直徑與菌落直徑的比值，比值大的說明抑菌能力強(qiáng)。選出菌株編號1、2、3、19、21、23均具有較強(qiáng)的抑菌能力。

（2）產(chǎn)淀粉酶菌株的篩選

大多數(shù)枯草芽孢桿菌在其發(fā)酵過程中能夠產(chǎn)生淀粉酶，可以將淀粉轉(zhuǎn)變?yōu)閱翁腔蚝苁沟脛游锶菀讓I養(yǎng)物質(zhì)消化吸收。將具有抑菌性初篩后的菌株點接到淀粉培養(yǎng)基上培養(yǎng)后進(jìn)行觀察，有透明圈的說明該菌株能夠產(chǎn)生淀粉酶。篩選菌株編號1、2、3、4、5、6、10、19、20、21、22、24都有透明圈，說明該菌株可以產(chǎn)淀粉酶。將產(chǎn)淀粉酶初篩實驗中透明圈較為明顯的菌株3、10、19、21、22、24進(jìn)行復(fù)篩，將其涂布到淀粉培養(yǎng)基上，培養(yǎng)后觀察單菌落形成的透明圈大小，計算透明圈直徑與菌落直徑的比值，比值大的說明產(chǎn)淀粉酶能力強(qiáng)。得到菌株編號為10、19、21產(chǎn)淀粉酶能力較強(qiáng)。

（3）產(chǎn)蛋白酶菌株的篩選

蛋白含量是動物飼料中一個重要指標(biāo)，但飼料中的蛋白并未被動物真正利用，因為各種動物對植物性蛋白消化吸收能力有限，尤其是年幼動物。通過對產(chǎn)蛋白酶菌株的篩選可以使其在發(fā)酵過程中產(chǎn)生蛋白酶，使飼料中的大分子蛋白分解為可溶性多肽，從而使畜禽更好的消化吸收，提高了飼料的利用率。將上述篩選過的菌株點接到酪素培養(yǎng)基上培養(yǎng)后進(jìn)行觀察，有透明圈的說明該菌株能夠產(chǎn)生蛋白酶。菌株編號為1、2、3、4、10、19、21、22、24都有透明圈，說明該菌株可以產(chǎn)蛋白酶。將產(chǎn)蛋白酶初篩實驗中透明圈較為明顯的菌株進(jìn)行復(fù)篩，將其涂布到酪素培養(yǎng)基上，培養(yǎng)后計算透明圈直徑與菌落直徑的比值，比值大的說明產(chǎn)蛋白酶能力強(qiáng)。從圖3可以看出，菌株3、19、21、產(chǎn)蛋白酶能力較強(qiáng)。

（4）乳酸菌的篩選

發(fā)酵飼料中乳酸菌產(chǎn)生的乳酸可以增加飼料的適口性，從而提高畜禽的采食量；乳酸的產(chǎn)生降低了飼料的pH，而較低的pH值可以刺激畜禽分泌胃酸、胰液，促進(jìn)胃腸蠕動，從而有利于營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收；乳酸還能起到抑制雜菌的生長，因此發(fā)酵后如果有較高的乳酸含量，可以防止飼料腐敗變質(zhì)，延長飼料的保質(zhì)時間。所以對乳酸菌產(chǎn)乳酸的性能進(jìn)行篩選，以得到能在飼料發(fā)酵過程中高產(chǎn)乳酸的菌株，將活化后的乳酸菌分別接種于飼料發(fā)酵后，測定發(fā)酵飼料中的乳酸含量。從8株乳酸菌中經(jīng)發(fā)酵乳酸測定后，發(fā)現(xiàn)編號1和8發(fā)酵后乳酸含量最高，從而確定發(fā)酵飼料所用乳酸菌為嗜酸乳桿菌和糞腸球菌LJ。

二、發(fā)酵肉雞全價飼料的菌株組合

對肉雞飼料進(jìn)行芽孢菌單菌發(fā)酵試驗，從表1可以看出，4株菌的發(fā)酵均有較好的發(fā)酵效果，然后對其進(jìn)行混合發(fā)酵試驗，將3、19、21、24四株菌進(jìn)行兩兩組合試驗，需要進(jìn)行3+19、3+21、3+24、19+21、19+24、21+24六組試驗。

表1 肉雞發(fā)酵飼料芽孢菌單菌發(fā)酵試驗

對肉雞飼料的芽孢菌組合發(fā)酵試驗可以看出，19+21的組合還原糖含量和芽孢菌數(shù)都高于其他組合，而且乳酸含量和乳酸菌數(shù)也有較高的水平，所以選取19+21組合的菌株作為肉雞飼料的發(fā)酵菌株，最終選定肉雞發(fā)酵飼料的菌株為兩株芽孢菌和兩株乳酸菌，兩株芽孢菌為枯草芽孢桿菌 WL-BA-1和枯草芽孢桿菌 BI₂，兩株乳酸菌為嗜酸乳桿菌和糞腸球菌LJ。

表2 肉雞發(fā)酵飼料芽孢菌組合發(fā)酵試驗

三、發(fā)酵肉雞全價飼料發(fā)酵條件

（1）Plackett-Burman實驗優(yōu)化發(fā)酵肉雞全價飼料條件

前期實驗已篩選出肉雞飼料發(fā)酵所用的2株芽孢菌和2株乳酸菌，應(yīng)用Plackett-Burman實驗，現(xiàn)選用實驗次數(shù)N=12的實驗設(shè)計對接種量，2株芽孢菌的比例，2株乳酸菌的比例，芽孢菌與乳酸菌的比例，外加水量5個因素進(jìn)行考察，每個因素高低2個水平，如表3所示：

表3 Plackett-Burman實驗設(shè)計因素及編碼水平

按照上述實驗設(shè)計，將發(fā)酵瓶放入37 ℃恒溫生化培養(yǎng)箱中發(fā)酵3 d后，測定其還原糖、乳酸、大腸菌數(shù)和乳酸菌數(shù)。結(jié)果如表4所示：

表4 Plackett-Burman實驗設(shè)計及結(jié)果

以還原糖作為響應(yīng)值，計算各因素效應(yīng)，如表5所示：

表5 Plackett-Burman實驗各因素主效應(yīng)分析

由表5可以看出，因素A(接種量)，因素D(芽孢菌乳酸菌比例)，因素E(外加水量)P值小于0.05，可作為進(jìn)一步優(yōu)化的因素，其他因素對結(jié)果影響不大，在進(jìn)一步研究中，其影響效果不進(jìn)行分析。

（2）肉雞飼料發(fā)酵條件最陡爬坡實驗

Plackett-Burman實驗已確定三個因素：因素A(接種量)，因素D(芽孢菌乳酸菌比例)，因素E(外加水量)是關(guān)鍵影響因子，根據(jù)這三個因素效應(yīng)大小的比例，設(shè)定它們的變化方向以及步長，其他各因素分別取各自的最優(yōu)水平，設(shè)計實驗。

表6 最陡爬坡實驗設(shè)計

按照表6設(shè)計，將發(fā)酵瓶置于37 ℃恒溫生化培養(yǎng)箱中發(fā)酵3 d后，測定其還原糖、乳酸、大腸菌數(shù)和乳酸菌數(shù)。如表7所示：

表7 最陡爬坡實驗結(jié)果

從上表可以看出，5組實驗乳酸含量均在4.0%以上，乳酸菌數(shù)均在10⁹ CFU/g 以上，而第2組的還原糖含量最高，說明以還原糖作為響應(yīng)值的最優(yōu)點在第2組附近，故以實驗2的條件作為響應(yīng)面實驗因素水平的中心點。

（3）肉雞飼料發(fā)酵條件Box-Behnken實驗

采用Box-Behnken模型，對飼料發(fā)酵條件中重要影響因素的水平進(jìn)一步優(yōu)化。以Plackett-Burman實驗所確定的顯著因素即接種量、芽孢菌與乳酸菌比例、外加水量為自變量，分別以X₁、X₂、X₃來表示，并以1、0、-1代表自變量的高、中、低水平，按公式(3-1)對自變量進(jìn)行編碼，Y為響應(yīng)值，實驗因素的水平和編碼如表8所示。

實驗中心點處自變量的真實值，△X為自變量的變化步長。

表8 Box-Behnken實驗設(shè)計因素及編碼水平

按照上述因素設(shè)計，將發(fā)酵瓶放入37 ℃恒溫生化培養(yǎng)箱中發(fā)酵3 d后，測定其還原糖，乳酸，大腸菌數(shù)和乳酸菌數(shù)。如表9所示：

表9 Box-Behnken實驗設(shè)計與結(jié)果

以接種量(X₁)、接種比例(X₂)和外加水量(X₃)為自變量，還原糖含量作為響應(yīng)值(Y)，建立回歸模型。根據(jù)Box-Behnken設(shè)計的實驗結(jié)果，進(jìn)行二次回歸分析分析，回歸方程為：

表10 Box-Behnken實驗回歸模型方差分析

由表10可以看出回歸模型F檢驗顯著(P<0.01)，失擬項在α=0.05水平上不顯著，其復(fù)相關(guān)系數(shù)的平方R²＝99.14%，表明此模型擬合程度良好，方程應(yīng)變量與全體自變量之間線性關(guān)系明顯。

由響應(yīng)面中各圖素交互作用分析可知，穩(wěn)定點是極大值點，通過嶺脊分析，得到極大值所對應(yīng)的各主要因素的編碼值(x₁、x₂、x₃)分別為(-0.1938，0.4380，0.2790)，從而得到各主要因素(X₁、X₂、X₃)的實際值為(6.806，2.219，55.395)，即接種量6.806% ，接種比例2.219:1，外加水量55.395%。

（4）Box-Behnken回歸模型驗證試驗

響應(yīng)面法得到的最佳條件需進(jìn)一步驗證，按照優(yōu)化后的發(fā)酵條件進(jìn)行實驗，即接種量為6.8%，芽孢菌與乳酸菌的比例為2.2:1，外加水量為55.4%，37 ℃恒溫生化培養(yǎng)箱中發(fā)酵3 d后，測定其還原糖，乳酸，大腸菌數(shù)、芽孢菌數(shù)和乳酸菌數(shù)。

表11 Box-Behnken回歸模型驗證試驗結(jié)果

驗證試驗結(jié)果中還原糖平均值為2.32%，與響應(yīng)面理論值2.29%非常接近，這表明實驗值和實際值之間具有良好的擬合性，從而驗證了優(yōu)化模型的有效性。

（5）肉雞發(fā)酵飼料溫度的優(yōu)化

表12 溫度對肉雞發(fā)酵飼料的影響

從表12不同發(fā)酵溫度所得的結(jié)果可以看出，20 ℃、30 ℃和45 ℃下發(fā)酵也能達(dá)到較好的發(fā)酵效果，可以得出在20 ℃~45 ℃下發(fā)酵均可以，所以發(fā)酵時控制溫度在此溫度范圍即可。

四、微生物發(fā)酵肉雞全價飼料的制備方法

通過上述多次實驗研究，最終微生物發(fā)酵肉雞全價飼料的制備方法如下：

1）將乳酸菌在MRS培養(yǎng)基液體42℃ 靜置培養(yǎng)24h，芽孢菌在LB培養(yǎng)基35℃,200轉(zhuǎn)/分鐘，震蕩培養(yǎng)18h，得到乳酸菌種子液和芽孢菌種子液；

LB培養(yǎng)基（g/L）：胰蛋白胨10，酵母浸出粉5，NaCl 10，pH7.5。

MRS培養(yǎng)基（g/L）：蛋白胨10，牛肉膏10，酵母浸出粉5，葡萄糖5，CH₃COONa 5，檸檬酸二胺2，吐溫80 1，K₂HPO₄ 2，MgSO₄?7H₂O 0.2，MnSO₄?7H₂O 0. 05，pH6.2。

2）將植物性原料粉碎，與水混合均勻，加水量46%~56%（v/w）。

3）發(fā)酵菌液是由芽孢菌、乳酸菌混菌組合而成；其中芽孢菌與乳酸菌混合接種量為6%~8%（v/w），芽孢菌與乳酸菌接種比例為2:1~3:1（v/v），芽孢菌Y1與芽孢菌Y2接種比例為2:1（v/v），乳酸菌L1和乳酸菌L2接種比例為1:2（v/v），發(fā)酵溫度范圍為20 ℃~45℃。本發(fā)明制備的發(fā)酵肉雞全價飼料使飼料乳酸含量達(dá)到4%以上，還原糖含量增加2倍，明顯提高飼料的利用率，改善飼料風(fēng)味，提高適口性作用。

本發(fā)明公開的用于發(fā)酵肉雞全價飼料的液體菌液及其制備方法與應(yīng)用所具有的積極效果在于：

（1）本發(fā)明利用芽孢菌、乳酸菌混合發(fā)酵植物性原料，由此制備的肉雞全價飼料無任何抗生素添加，富含乳酸、蛋白質(zhì)、小肽、多糖、維生素、礦物質(zhì)及微量元素等營養(yǎng)物質(zhì)，抗?fàn)I養(yǎng)因子少，具有適口性好、易消化等特點，益生菌明顯增多。

（2）本發(fā)明的肉雞全價飼料具有安全可靠、無藥物殘留、適口性好、易消化等特點，可大幅度減少抗生素的使用，改善動物的健康水平，提高機(jī)體免疫力。

附圖說明：

圖1 菌株形成的抑菌圈；在芽孢菌落周圍形成抑制金黃色葡萄球菌生長的抑菌圈；

圖2菌株形成的淀粉酶透明圈；在芽孢菌落周圍形成水解培養(yǎng)基中淀粉的透明圈；

圖3 菌株形成的蛋白酶透明圈；在芽孢菌落周圍形成水解培養(yǎng)基中酪蛋白的透明圈；

圖4乳酸菌產(chǎn)乳酸性能比較；不同乳酸菌在MRS培養(yǎng)基中產(chǎn)乳酸的比較；

圖5多種微生物發(fā)酵肉雞全價飼料生產(chǎn)工藝流程圖。

具體實施方式

下面通過具體的實施方案敘述本發(fā)明。除非特別說明，本發(fā)明中所用的技術(shù)手段均為本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的方法。另外，實施方案應(yīng)理解為說明性的，而非限制本發(fā)明的范圍，本發(fā)明的實質(zhì)和范圍僅由權(quán)利要求書所限定。對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，在不背離本發(fā)明實質(zhì)和范圍的前提下，對這些實施方案中的物料成分和用量進(jìn)行的各種改變或改動也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。

實施例1

一種用于發(fā)酵肉雞全價飼料的液體菌液，它是由芽孢菌、乳酸菌混菌組合而成；其中芽孢菌與乳酸菌接種比例為2:1（v/v），所述的芽孢菌指的是：芽孢菌Y1與芽孢菌Y2接種比例為2:1（v/v），乳酸菌指的是：乳酸菌L1和乳酸菌L2接種比例為1:2（v/v）；所述的芽孢菌Y1指的是枯草芽孢桿菌（CGMCC 1.504），芽孢菌Y2指的是解淀粉芽孢桿菌（CGMCC3413），乳酸菌L1指的是嗜酸乳桿菌（CGMCC1.2686），乳酸菌L2指的是糞腸球菌（CGMCC1.130）。

實施例2

微生物發(fā)酵肉雞全價飼料的制備方法

通過上述多次實驗研究，最終微生物發(fā)酵肉雞全價飼料的制備方法如下：

1）將乳酸菌在MRS培養(yǎng)基液體42℃ 靜置培養(yǎng)24h，芽孢菌在LB培養(yǎng)基35℃,200轉(zhuǎn)/分鐘，震蕩培養(yǎng)18h，得到乳酸菌種子液和芽孢菌種子液；

LB培養(yǎng)基（g/L）：胰蛋白胨10，酵母浸出粉5，NaCl 10，pH7.5。

MRS培養(yǎng)基（g/L）：蛋白胨10，牛肉膏10，酵母浸出粉5，葡萄糖5，CH₃COONa 5，檸檬酸二胺2，吐溫80 1，K₂HPO₄ 2，MgSO₄?7H₂O 0.2，MnSO₄?7H₂O 0. 05，pH6.2。

2）將植物性原料粉碎，與水混合均勻，加水量56%（v/w）。

3）發(fā)酵菌液是由芽孢菌、乳酸菌混菌組合而成；其中芽孢菌與乳酸菌混合接種量為6%（v/w），芽孢菌與乳酸菌接種比例為2:1（v/v），芽孢菌Y1與芽孢菌Y2接種比例為2:1（v/v），乳酸菌L1和乳酸菌L2接種比例為1:2（v/v），發(fā)酵溫度范圍為45℃。本發(fā)明制備的發(fā)酵肉雞全價飼料使飼料乳酸含量達(dá)到4%以上，還原糖含量增加2倍，明顯提高飼料的利用率，改善飼料風(fēng)味，提高適口性作用。

實施例3

微生物發(fā)酵肉雞全價飼料的制備方法

通過上述多次實驗研究，最終微生物發(fā)酵肉雞全價飼料的制備方法如下：

1）將乳酸菌在MRS培養(yǎng)基液體42℃ 靜置培養(yǎng)24h，芽孢菌在LB培養(yǎng)基35℃,200轉(zhuǎn)/分鐘，震蕩培養(yǎng)18h，得到乳酸菌種子液和芽孢菌種子液；

LB培養(yǎng)基（g/L）：胰蛋白胨10，酵母浸出粉5，NaCl 10，pH7.5。

MRS培養(yǎng)基（g/L）：蛋白胨10，牛肉膏10，酵母浸出粉5，葡萄糖5，CH₃COONa 5，檸檬酸二胺2，吐溫80 1，K₂HPO₄ 2，MgSO₄?7H₂O 0.2，MnSO₄?7H₂O 0. 05，pH6.2。

2）將植物性原料粉碎，與水混合均勻，加水量46%（v/w）。

3）發(fā)酵菌液是由芽孢菌、乳酸菌混菌組合而成；其中芽孢菌與乳酸菌混合接種量為8%（v/w），芽孢菌與乳酸菌接種比例為3:1（v/v），芽孢菌Y1與芽孢菌Y2接種比例為2:1（v/v），乳酸菌L1和乳酸菌L2接種比例為1:2（v/v），發(fā)酵溫度范圍為20 ℃。本發(fā)明制備的發(fā)酵肉雞全價飼料使飼料乳酸含量達(dá)到4%以上，還原糖含量增加2倍，明顯提高飼料的利用率，改善飼料風(fēng)味，提高適口性作用。

實施例4

多種微生物發(fā)酵肉雞全價飼料飼喂結(jié)果

實驗所用肉雞為7日齡愛拔益加(AA)肉雞，試驗日糧營養(yǎng)水平參照中華人民共和國專業(yè)標(biāo)準(zhǔn)(2004)推薦量平衡日糧中的能量和各種營養(yǎng)物質(zhì)。采用單因子隨機(jī)化試驗設(shè)計，將90只7日齡的愛拔益加(AA)肉雞分為3個處理，每個處理有三個平行，不同處理組分別飼喂不同飼料，處理組1有抗生素肉雞粉狀飼料，處理組2發(fā)酵飼料和無抗粉狀飼料混合(比例1:2)，處理組3微生物發(fā)酵肉雞全價飼料

肉雞飼養(yǎng)管理

進(jìn)雛前1周徹底清掃沖洗雞舍地面、墻壁、雞籠、料槽和水槽，然后用甲醛熏蒸消毒，24 h后通風(fēng)。試驗雞飼喂方式為籠養(yǎng)，選用塑膠的料槽和水槽，將實驗雞置于不銹鋼雞籠內(nèi)，采用單籠網(wǎng)上平養(yǎng)的方式，自由采食，自由飲水，每天清洗水槽，定期清掃雞舍，并及時通風(fēng)換氣，保證雞舍內(nèi)環(huán)境衛(wèi)生良好，每天觀察雞只的健康狀況和精神狀態(tài)，每周統(tǒng)計試驗雞采食量和增重。

表13 發(fā)酵飼料對肉雞生長性能的影響

注：同行數(shù)據(jù)肩標(biāo)不同字母表示差異顯著(P<0.05)。

可見發(fā)酵飼料能夠提高飼料的利用率，使得飼料更容易消化吸收，較低的料肉比可以降低養(yǎng)殖的成本，使養(yǎng)殖戶得到較好的收益，而且節(jié)省糧食資源。

表14發(fā)酵飼料對肉雞屠宰性能的影響

注：同行數(shù)據(jù)肩標(biāo)不同字母表示差異顯著(P<0.05)。

3號組的全凈膛重和腿肌率明顯高于1號組，差異顯著，胸肌率也高于1號組，但差異不顯著，飼喂發(fā)酵飼料的實驗組胴體品質(zhì)要明顯優(yōu)于未發(fā)酵的粉狀飼料，也要好于顆粒飼料。

表15雞肉的抗生素殘留分析

將屠宰實驗中的腿肌和胸肌送到譜尼測試科技股份有限公司，運(yùn)用標(biāo)準(zhǔn)SN/T 2318-2009《動物源食品中地克珠利、妥曲珠利、妥曲珠利亞砜和妥曲珠利砜殘留量的檢測高效液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法》測定雞肉中地克珠利的含量，結(jié)果如表15，只有粉狀飼料中檢測到地克珠利的含量，發(fā)酵飼料組沒有檢測到地克珠利的含量，可見添加有抗生素的飼料能夠?qū)⒖股貧埩舻诫u肉中，而發(fā)酵飼料飼喂的肉雞雞肉屬于無抗生素雞肉。因此，通過飼喂微生物發(fā)酵飼料是獲得無抗生素肉制品的一種有效手段。