本發(fā)明涉及豬飼料配制
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種改善早期斷奶仔豬腸道屏障功能和消化酶活性的配制飼料及其飼喂方法。
背景技術(shù)：
：早期斷奶仔豬由于消化系統(tǒng)功能還不全，在斷奶后開始從飼料中獲取蛋白質(zhì)，從而導(dǎo)致早期斷奶仔豬出現(xiàn)一系列的應(yīng)激反應(yīng)，其中腹瀉是最普遍的現(xiàn)象，輕度腹瀉會導(dǎo)致仔豬營養(yǎng)不良及生長受阻，嚴(yán)重腹瀉則導(dǎo)致仔豬脫水，成為僵豬甚至死亡。據(jù)報道，在美國，斷奶仔豬腹瀉病發(fā)生率為57％，所造成的死亡率達(dá)10.8％，給養(yǎng)豬生產(chǎn)帶來很大的經(jīng)濟(jì)損失。因此，如何在實行仔豬早期斷奶以提高養(yǎng)豬生產(chǎn)效率的同時，保證仔豬有較高的生長速度，防止仔豬早期斷奶腹瀉病的發(fā)生和仔豬腸道病原菌的感染已成為當(dāng)代養(yǎng)豬生產(chǎn)中最為關(guān)心的問題之一。由此可見，尋求價廉、高產(chǎn)與高效的適宜飼料蛋白質(zhì)來源以及有效抑制腸道內(nèi)有害菌的生長已成為動物營養(yǎng)學(xué)者研究的熱點。近年來，我國傳統(tǒng)飼料蛋白質(zhì)資源嚴(yán)重短缺，需求量也越來越大，而且價格昂貴，產(chǎn)量逐年下降，飼料資源的制約現(xiàn)今已成為影響畜牧業(yè)健康穩(wěn)定發(fā)展的瓶頸。據(jù)統(tǒng)計，畜禽飼料約為糧食總產(chǎn)量的35％，預(yù)計到2020年比重將達(dá)到45％，而到2030年比重達(dá)到50％，如此以來，糧食預(yù)期只有1％左右的年增量，在所難免會造成飼料糧的短缺，顯然一些優(yōu)質(zhì)的蛋白質(zhì)飼料資源將會更加緊張。而目前中國從國外進(jìn)口的優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)飼料已超過70％，如大豆和魚粉等。因此，目前緩解這一矛盾的關(guān)鍵就是提高中國現(xiàn)有的蛋白質(zhì)飼料資源的利用率。而我們公認(rèn)的居高不下的魚粉價格已經(jīng)成為畜牧養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的沉重負(fù)擔(dān)。長久以來我們都對植物性蛋白質(zhì)有所忽略，而在中國植物性蛋白質(zhì)飼料資源豐富。因此如何利用植物性蛋白質(zhì)飼料將成為養(yǎng)殖業(yè)關(guān)心的大問題。豆粕中不僅有大量的抗?fàn)I養(yǎng)因子存在，而且有30％的碳水化合物是不可消化的。豆粕粉是大豆經(jīng)萃取方法或壓榨方法得到脂肪后剩余的豆子殘渣，以此為原料進(jìn)行炒餅，磨粉制作的豆粉。但生大豆含有胰蛋白酶抑制因子、胃腸脹氣因子、大豆抗原等多種抗?fàn)I養(yǎng)因子，抑制動物生長發(fā)育，對動物的健康有嚴(yán)重影響。發(fā)酵豆粕就是用微生物發(fā)酵法消除豆粕中抗?fàn)I養(yǎng)因子成分，在不破壞豆粕營養(yǎng)價值的基礎(chǔ)上進(jìn)一步的提高豆粕的營養(yǎng)價值。發(fā)酵豆粕以優(yōu)質(zhì)豆粕為主要原料，將大豆蛋白、抗原蛋白分別降解為小分子蛋白、小肽和抵抗原蛋白，同時在發(fā)酵過程中產(chǎn)生大量的有機酸、有益菌代謝產(chǎn)物等，從而使仔豬腸道處于健康狀態(tài)，促進(jìn)仔豬的生長發(fā)育。大豆因其富含蛋白質(zhì)和油脂，且氨基酸較平衡而被廣泛利用。膨化大豆是對大豆經(jīng)過了加熱膨脹處理，可使抗?fàn)I養(yǎng)因子含量顯著減少，從而改善飼料適口性，提高動物對脂肪和蛋白質(zhì)等的利用率，并在一定程度上改善動物的健康。嗜酸乳桿菌是我們?nèi)粘？梢姷闹匾挠幸嫖⑸镏唬c其它微生物相比它有能夠在高膽鹽、強酸性的環(huán)境下生長繁殖的優(yōu)點，是定植于一些恒溫動物大腸和回腸的一種重要的益生菌，它不僅對動物的免疫功能具有一定的調(diào)節(jié)作用，而且還能阻止感染，使血清中的膽固醇下降，促進(jìn)乳糖消化，同時還可以預(yù)防癌癥的發(fā)生。嗜酸乳桿菌還具有生產(chǎn)成本低、無藥物殘留、保護(hù)生態(tài)環(huán)境等優(yōu)點。它從動物腸道等基礎(chǔ)方面發(fā)揮作用，抑制有害菌的生長，調(diào)節(jié)機體腸道微生態(tài)平衡，改善機體內(nèi)環(huán)境?？梢灶A(yù)防動物疾病，促進(jìn)機體健康，使畜禽更好更快的生長繁殖。由上所述，學(xué)者們分別對發(fā)酵豆粕、膨化大豆、嗜酸乳桿菌對畜禽生長性能等方面影響做了較多研究。但目前還沒有將嗜酸乳桿菌加入到基礎(chǔ)飼糧中來飼喂斷奶仔豬，達(dá)到改善早期斷奶仔豬腸道屏障功能和消化酶活性的研究報道。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供一種改善早期斷奶仔豬腸道屏障功能和消化酶活性的配制飼料及其飼喂方法，以解決上述
背景技術(shù)：
中所存在的不足。本發(fā)明提供：一種改善早期斷奶仔豬腸道屏障功能和消化酶活性的配制飼料，包括基礎(chǔ)飼糧和質(zhì)量占比為1％-5％的嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物。所述的基礎(chǔ)飼糧按重量份數(shù)包括：豆粕粉20.0-30.0份、玉米粉50.0-60.0份、膨化玉米粉1.0-5.0份、進(jìn)口魚粉3.0-8.0份、乳清粉1.0-5.0份、椰子油0.5-3.0份、含兩結(jié)晶水的磷酸氫鈣1.0-1.2份、石粉0.5-1.0份、食鹽0.2-0.4份、50％的氯化膽堿0.1-0.3份、L-賴氨酸鹽酸鹽0.3-0.5份、DL-蛋氨酸0.05-0.15份、L-蘇氨酸0.1-0.3份、預(yù)混料1.00份。所述的早期斷奶仔豬為為21-35日齡的斷奶仔豬。所述的豆粕粉選自普通豆粕粉、發(fā)酵豆粕粉、膨化大豆粉的一種或幾種；優(yōu)選地，所述的嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物，在飼喂期0-14天內(nèi)，配制飼料內(nèi)的嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物質(zhì)量占比為3％；在飼喂期15-21天內(nèi)，配制飼料內(nèi)的嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物質(zhì)量占比為1％。優(yōu)選地，所述的基礎(chǔ)飼糧內(nèi)的豆粕粉，在飼喂期0-14天內(nèi)優(yōu)選為膨化大豆粉，所述的基礎(chǔ)飼糧內(nèi)的豆粕粉，在飼喂期15-21天內(nèi)優(yōu)選為普通豆粕粉。所述的預(yù)混料，其配比為每千克飼糧提供:Fe170mg；Cu10mg；Mn40mg；Zn130mg；I0.2mg；Se0.3mg；Co1.5mg；VA10000IU；VD33000IU；VE40IU；VK31.5mg；VB12mg；VB26mg；VB63.5mg；VB120.2mg；泛酸Pantothenicacid25mg；尼克酸Niacin35mg；生物素Biotin0.15mg；葉酸Folicacid1.0mg。本發(fā)明還提供一種改善早期斷奶仔豬腸道屏障功能和消化酶活性配制飼料的飼喂方法，飼喂對象為21-35日齡的斷奶仔豬，在飼喂期內(nèi)用基礎(chǔ)飼糧和質(zhì)量占比為1％-5％的嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物進(jìn)行飼喂。所述的基礎(chǔ)飼糧，按重量份數(shù)包括：豆粕粉20.0-30.0份、玉米粉50.0-60.0份、膨化玉米粉1.0-5.0份、進(jìn)口魚粉3.0-8.0份、乳清粉1.0-5.0份、椰子油0.5-3.0份、含兩結(jié)晶水的磷酸氫鈣1.0-1.2份、石粉0.5-1.0份、食鹽0.2-0.4份、50％的氯化膽堿0.1-0.3份、L-賴氨酸鹽酸鹽0.3-0.5份、DL-蛋氨酸0.05-0.15份、L-蘇氨酸0.1-0.3份、預(yù)混料1.00份。優(yōu)選地，在0-14天的飼喂期內(nèi)，用含有質(zhì)量占比為20-30％膨化大豆粉的基礎(chǔ)飼糧和質(zhì)量占比為3％的嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物進(jìn)行飼喂；在15-21天的飼喂期內(nèi)，用含有質(zhì)量占比為20-30％普通豆粕粉的基礎(chǔ)飼糧和質(zhì)量占比為1％的嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物進(jìn)行飼喂。實施本發(fā)明取得的有益效果是：一是通過在基礎(chǔ)飼糧中添加質(zhì)量百分比為1％-5％的嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物對早期斷奶仔豬進(jìn)行飼喂，可顯著提高斷奶仔豬平均日采食量(P＜0.05)，顯著提高十二指腸、空腸、回腸的絨毛高度(P＜0.05)，顯著降低十二指腸和回腸隱窩深度(P＜0.05)，顯著提高斷奶仔豬小腸各腸段絨毛高度/隱窩深度(P＜0.05)。而在基礎(chǔ)飼糧中添加普通豆粕、發(fā)酵豆粕和膨化大豆對仔豬平均日采食量無顯著影響。但添加膨化大豆代替普通豆粕能顯著降低十二指腸和回腸隱窩深度(P＜0.05)，并能顯著提高仔豬十二指腸絨毛高度/隱窩深度(P＜0.05)。二是本發(fā)明在飼糧中添加3％嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物可顯著提高空腸蔗糖酶、乳糖酶、麥芽糖酶以及粗蛋白的表觀消化率水平(P<0.05)，添加3％嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物可顯著提高斷奶仔豬空腸和結(jié)腸IgA水平(P<0.05)。三是本發(fā)明針對早期斷奶仔豬腸道屏障功能隨斷奶時間長短的不同，其飼料內(nèi)嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物的添加量也不同。其最佳添加量為：在0-14天的飼喂期里，添加質(zhì)量占比為3％的嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物進(jìn)行飼喂；而在15-21天的飼喂期內(nèi)，添加質(zhì)量占比為1％的嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物進(jìn)行飼喂。這樣既可滿足不同飼喂期里斷奶仔豬對嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物的需求，又可有效減少嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物的的浪費，有效降低了飼喂成本。四是本發(fā)明針對早期斷奶仔豬腸道屏障功能隨斷奶時間長短的不同，其基礎(chǔ)飼糧中豆粕粉也不同。在0-14天的飼喂期中，用含有20-30％膨化大豆粉的基礎(chǔ)飼糧進(jìn)行飼喂；在15-21天的飼喂期內(nèi)，用含有20-30％普通豆粕粉的基礎(chǔ)飼糧進(jìn)行飼喂。既保證了營養(yǎng)成份的滿足，又有效降低了飼喂成本。五是使用方便。本發(fā)明是在0-14天的飼喂期中，在0-14天的飼喂期內(nèi)，使用營養(yǎng)豐富，易消化吸收的，含有質(zhì)量占比為20-30％膨化大豆粉的基礎(chǔ)飼糧和質(zhì)量占比為3％的嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物對早期斷奶仔豬進(jìn)行飼喂；在15-21天的飼喂期內(nèi)，用含有質(zhì)量占比為20-30％普通豆粕粉的基礎(chǔ)飼糧和質(zhì)量占比為1％的嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物早期斷奶仔豬進(jìn)行飼喂，使用非常方便。六是本發(fā)明所述的一種改善早期斷奶仔豬腸道屏障功能和消化酶活性的配制飼料，制備方法簡單、原料易得，適于大規(guī)模的生產(chǎn)。說明書附圖圖1：仔豬空腸透射電鏡圖×12000。圖1中：A—對照組；B—發(fā)酵豆粕組；C—膨化大豆組；D—3％嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物組；E—5％嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物組。圖2：不同處理豆粕及嗜酸乳桿菌對斷奶仔豬粗蛋白的表觀消化率的影響。具體實施方式下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步闡述，但本發(fā)明并不限于以下實施例。所述方法如無特別說明均為常規(guī)方法。所述原材料如無特別說明均能從公開商業(yè)途徑獲得。下述實施例表中，發(fā)酵豆粕，膨化大豆，嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物由上海源耀生物科技有限公司提供，發(fā)酵豆粕、膨化大豆、嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物的粗蛋白含量分別為50％、35％、20％。實施例1不同處理豆粕及嗜酸乳桿菌對斷奶仔豬生長性能以及腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響1.1材料與方法1.1.1試驗材料發(fā)酵豆粕，膨化大豆，嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物由上海源耀生物科技有限公司提供，發(fā)酵豆粕、膨化大豆、嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物的粗蛋白含量分別為50％、35％、20％。1.1.2試驗動物與分組設(shè)計試選用遺傳背景、胎次和體重相近的21日齡斷奶仔豬240頭，按隨機區(qū)組設(shè)計分為5個處理，分別為對照A組、試驗B組、試驗C組、試驗D組、試驗E組，每個處理4個重復(fù)，每個重復(fù)12頭仔豬。試驗期21d。1.1.3試驗飼糧日糧配方參照NRC(2012)和我國豬飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)(2004)配制。其中：試驗A組飼喂含玉米55％+普通豆粕26％的基礎(chǔ)飼糧，試驗B組飼喂含玉米57％+普通豆粕14％+發(fā)酵豆粕10％的試驗飼糧，試驗C組飼喂含玉米54％-膨化大豆27％的試驗飼糧，試驗D組飼喂含玉米53％+普通豆粕25％+嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物3.0％的試驗飼糧。試驗E組飼喂含玉米52％-普通豆粕24％+嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物5.0％的試驗飼糧，各組飼糧組成如表1-1。表1-1試驗設(shè)計各組基礎(chǔ)飼糧內(nèi)其余19％的公共成分為：膨化玉米2.5％、進(jìn)口魚粉5.5％、乳清粉5.0％、椰子油2.0％、含兩結(jié)晶水的磷酸氫鈣1.1％、石粉0.7％、食鹽0.3％、50％的氯化膽堿0.2％、L-賴氨酸鹽酸鹽0.4％、DL-蛋氨酸0.1％、L-蘇氨酸0.2％、預(yù)混料1.0％。1.1.4飼養(yǎng)管理試驗在某豬場進(jìn)行，試驗豬在保育床上飼養(yǎng)，舍溫控制在25～28℃，濕度控制在55～65％。仔豬先用對照組飼料飼喂，觀察2d。第3d，淘汰仍不采食豬只后，稱重，正式試驗豬體重接近，共計240頭，閹公豬與小母豬各半。自由采食和飲水，粉料飼喂，與豬場其他飼喂時間一致。正試期21d，仔豬免疫按常規(guī)程序執(zhí)行。試驗第1、21d清晨對仔豬進(jìn)行空腹個體稱重，其他日常管理按常規(guī)飼養(yǎng)管理方法進(jìn)行。1.1.5測定指標(biāo)與方法于試驗第21d從每個重復(fù)隨機選1頭仔豬，切開腹腔，剪取仔豬十二指腸、空腸、回腸中段5cm，用蒸餾水洗去食糜，然后用濾紙吸干其上的水分后，置于10％甲醛溶液小廣口瓶中固定24h以上。取仔豬空腸中段約2cm，用鑷子將組織塊移至盛有預(yù)冷4％戊二醛固定液的小廣口瓶中進(jìn)行前固定。觀察并記錄每一天仔豬數(shù)和投料量，淘汰或者死亡仔豬應(yīng)及時稱重并做好記錄。試驗第1、21d清晨對仔豬進(jìn)行空腹個體稱重，試驗開始和結(jié)束時，仔豬空腹16h后于第二天上午稱個體重，以每個重復(fù)為單位計算平均日增重。并以窩為單位記錄相應(yīng)的飼料消耗量。記錄仔豬腹瀉情況，每天上下午喂料之前記錄每窩拉稀的份數(shù)。計算平均日采食量(ADFI)、日增重(ADG)、料肉比(F/G)。剪取仔豬十二指腸、空腸、回腸中段3cm，用生理鹽水沖洗后置于10％甲醛溶液中固定，經(jīng)常規(guī)脫水、石蠟包埋、切片、HE染色后測量空腸黏膜厚度、隱窩深度(CryptDepth，C)和絨毛高度(VillusLength，V)，雙盲法讀片，每張切片觀察5個視野。計算絨毛高度/隱窩深度(V/C)。取仔豬空腸腸段約2cm，將腸組織樣在冰上用刀片修成大約1×1×1mm大小，用鑷子將組織塊移至盛有預(yù)冷4％戊二醛固定液的小廣口瓶中進(jìn)行前固定，PBS磷酸緩沖液沖洗三次，1％鋨酸后固定，PBS磷酸緩沖液沖洗三次，梯度酒精脫水(50％，70％，80％，95％，100％兩次)每次15min。純丙酮脫水兩次(15min)，EPON812：丙酮(1：1)浸透30min，純包埋液浸透1h，純包埋液固化37℃24h后60℃48h。使用超薄切片機切片(BROMMALKB-V)，經(jīng)醋酸雙氧鈾、枸櫞酸鉛雙重染色后用日立H-600透射電鏡觀察并拍照。1.1.6數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計分析所有試驗數(shù)據(jù)采用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計。以重復(fù)為單位，以P<0.05為顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)。各處理數(shù)據(jù)以“平均數(shù)±SD”表示，并分析比較發(fā)酵豆粕、膨化大豆及嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物對斷奶仔豬生長性能及小腸形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響差異。1.2結(jié)果與分析1.2.1仔豬生長性能不同處理豆粕及嗜酸乳桿菌對仔豬生長性能的影響見表1-2。從表中數(shù)據(jù)可知，發(fā)酵豆粕、膨化大豆及嗜酸乳桿菌組仔豬的日增重與對照組仔豬日增重差異不顯著(P＞0.05)。3％嗜酸乳桿菌組仔豬的日采食量為614.43g，顯著高于對照組的604.17g(P＜0.05)。膨化大豆、3％嗜酸乳桿菌及5％嗜酸乳桿菌組仔豬料重比與對照組差異不顯著(P＞0.05)，但用10％發(fā)酵豆粕代替普通豆粕后，仔豬料重比顯著低于對照組(P＜0.05)。表1-2不同處理豆粕及嗜酸乳桿菌對斷奶仔豬生長性能的影響參數(shù)試驗A組試驗B組試驗C組試驗D組試驗E組P值日增重ADG(g)416.31424.59413.73426.28419.080.224日采食量ADFI(g)604.17a591.76a592.79a614.43b607.52ab0.000料重比F/G1.45b1.39a1.43ab1.44ab1.45b0.361同行數(shù)據(jù)肩標(biāo)字母不同說明差異顯著(P＜0.05)，字母相同或未標(biāo)注說明差異不顯著(P＞0.05)。下表同。1.2.2斷奶仔豬小腸形態(tài)結(jié)構(gòu)不同處理豆粕及嗜酸乳桿菌對斷奶仔豬腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響見表1-3。絨毛高度：從表中數(shù)據(jù)可知，飼料中添加3％、5％嗜酸乳桿菌后，仔豬十二指腸、空腸及回腸絨毛高度顯著高于對照組及發(fā)酵豆粕、膨化大豆組(P＜0.05)。發(fā)酵豆粕和膨化大豆組仔豬十二指腸、空腸和回腸絨毛高度與對照組差異不顯著(P＞0.05)。隱窩深度：從表中數(shù)據(jù)可知，膨化大豆和3％嗜酸乳桿菌組仔豬十二指腸、回腸隱窩深度顯著低于對照組(P＜0.05)，但與5％嗜酸乳桿菌組、發(fā)酵豆粕組差異不顯著(P＞0.05)。各試驗組對空腸隱窩深度影響不大(P＞0.05)。絨毛高度/隱窩深度：與對照組相比，飼料中使用3％、5％嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物代替部分豆粕后，仔豬十二指腸、回腸、空腸的絨毛高度/隱窩深度顯著提高(P＜0.05)，膨化大豆組仔豬十二指腸絨毛高度/隱窩深度顯著提高(P＜0.05)。但膨化大豆對空腸、回腸以及發(fā)酵豆粕對十二指腸、空腸、回腸絨毛高度/隱窩深度影響不大(P＞0.05)。表1-3不同處理豆粕及嗜酸乳桿菌對斷奶仔豬腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響1.2.3斷奶仔豬空腸上皮超微結(jié)構(gòu)不同處理豆粕及嗜酸乳桿菌對仔豬空腸上皮超微結(jié)構(gòu)的影響見橫切電鏡透射圖見圖1。由圖1可以看出，與其他組相比，對照組(A組)空腸上皮微絨毛較稀疏、短小、疏密不等、長短不一，且部分絨毛有一定的脫落和損傷跡象。給斷奶仔豬日糧中添加發(fā)酵豆粕(B組)、膨化大豆(C組)或嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物(D、E組)后，斷奶仔豬空腸上皮微絨毛明顯比對照組密集，整齊且腸絨毛長度基本一致。基礎(chǔ)飼糧中添加3％嗜酸乳桿菌(D組)及5％嗜酸乳桿菌組(E組)的腸上皮微絨毛較其他各組更密集、整齊、纖細(xì)。1.3討論1.3.1不同處理豆粕及嗜酸乳桿菌對斷奶仔豬生長性能以及腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響斷奶后仔豬的日糧由液體母乳變成固態(tài)飼料，這對仔豬腸道來說是一個巨大的刺激。許多研究表明，斷奶后仔豬小腸絨毛長度和隱窩深度都造成不同程度的變化。小腸是仔豬營養(yǎng)物質(zhì)消化吸收的主要場所，其中絨毛和微絨毛結(jié)構(gòu)可在很大程度上增加小腸內(nèi)壁表面積，從而提高小腸吸收營養(yǎng)物質(zhì)的效率。斷奶應(yīng)激使仔豬小腸絨毛萎縮，隱窩加深以及消化道酶活性受到抑制等組織結(jié)構(gòu)變化，同時會引起仔豬腹瀉、生長停滯等外在表現(xiàn)。仔豬斷奶后，小腸絨毛萎縮，隱窩加深，這表明腸上皮分泌細(xì)胞增多，吸收細(xì)胞減少，且腸黏膜萎縮，進(jìn)而吸收面積大大減少導(dǎo)致吸收能力下降，這些是造成消化道形態(tài)和功能變化的根本原因。本實驗結(jié)果顯示，對照組空腸微絨毛較稀疏、短小，且部分出現(xiàn)損傷現(xiàn)象。與對照組相比，加發(fā)酵豆粕替代普通豆粕可促進(jìn)斷奶仔豬絨毛發(fā)育，降低隱窩深度。飼喂用3％嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物及5％嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物的試驗日糧能夠有效的改善仔豬小腸形態(tài)結(jié)構(gòu)，降低腸道損傷。許多研究報道，動物胃腸道內(nèi)環(huán)境在微生物制劑的作用下得到調(diào)控，腸道微生態(tài)環(huán)境有所改善，動物的屏障及免疫功能大幅度的提高，這可能是由于乳酸菌代謝產(chǎn)生大量有機酸等酸性物質(zhì)，使得腸道pH值下降，胃腸道處于偏酸性狀態(tài)，大部分病原微生物受到抑制。由此，微生物制劑添加到動物日糧中可以達(dá)到提高畜禽成活率和日增重的目的。本實驗結(jié)果顯示，與對照組相比，加發(fā)酵豆粕替代普通豆粕可提高斷奶仔豬的飼料轉(zhuǎn)化率，飼喂用3％嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物及5％嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物的試驗組效果更佳。1.4小結(jié)飼糧中添加3％、5％嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物提高斷奶仔豬生長性能以及改善小腸形態(tài)結(jié)構(gòu)方面可以取得更好的效果。3％嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物效果最佳。實施例2：不同處理豆粕以及嗜酸乳桿菌對蛋白質(zhì)代謝以及腸粘膜消化酶活性和腸粘膜腸道免疫球蛋白的影響2.1材料與方法2.1.1試驗材料試驗材料同實施例1。2.1.2試驗動物與分組設(shè)計試驗動物與分組設(shè)計同實施例1。2.1.3試驗飼糧與飼喂方法基礎(chǔ)飼糧組成與飼喂方法同實施例1。2.1.4飼養(yǎng)管理飼養(yǎng)管理與飼喂方法同實施例1。2.1.5樣品采集配制的日糧隨機少量抽取多份，混勻后用密封袋，采用四分法取樣500g放在-20℃冰箱保存，用于測定發(fā)酵豆粕、膨化大豆、膨化豆粕、3％嗜酸乳桿菌和5％嗜酸乳桿菌以及各處理日糧的粗蛋白含量。試驗飼養(yǎng)最后3d時，豬只排出的新鮮糞便，每個重復(fù)采集200g左右每天定時采集新鮮糞便，然后在表面加入少量10％硫酸和幾滴甲苯防腐和氮的損失，將收集的糞樣稱重，按20mL/100g糞樣加入10％硫酸充分混勻(采樣完成)。取500g糞樣平攤與瓷盤中65℃烘干48h，室溫下回潮24h，粉碎、過40目篩，4℃保存待測。在飼養(yǎng)第21d，早晨全部仔豬空腹稱重后，進(jìn)行前腔靜脈采血4mL于非抗凝管中(用于離心制成血清)冰袋泡沫箱保存。于試驗第21d進(jìn)行屠宰取樣，從每個重復(fù)中選取1頭接近仔豬，屠宰。參考ArneDahlqvist方法制備黏膜勻漿液，即仔豬屠宰后立即取空腸15cm，輕輕擠出腸內(nèi)容物，用4℃去離子水小心沖洗后，縱向剪開腸壁，并展開于表面皿上。經(jīng)濾紙吸水，用載玻片小心刮取小腸黏膜，分裝在5mL無菌凍存管中，立即放入液氮中速凍。剪取20cm空腸和結(jié)腸中部腸段，用37℃去離子水小心洗，縱向剪開腸壁，在表面皿中展開，再用去離子水小心洗去腸內(nèi)食糜，濾紙或抽紙吸去水分，用潔凈的載玻片小心刮取黏膜，分裝在2mL無菌凍存管(JET)中，立即放入液氮中速凍。-80℃保存2.1.6測定指標(biāo)和方法試驗飼養(yǎng)最后3d時，豬只排出的新鮮糞便，每個重復(fù)采集200g左右每天定時采集新鮮糞便，然后在表面加入少量10％硫酸和幾滴甲苯防腐和氮的損失，將收集的糞樣稱重，按20mL/100g糞樣加入10％硫酸充分混(采勻樣完成)。取500g糞樣平攤與瓷盤中65℃烘干48h，室溫下回潮24h，粉碎、過40目篩，4℃保存待測定糞便中的蛋白質(zhì)。樣品采回后，收集于離心管中，靜置30min后，3000rpm離心l0min，分離制備血清，-20℃冰箱保存待測。測定代表蛋白質(zhì)代謝的血液常規(guī)指標(biāo)(血清總蛋白、白蛋白、球蛋白、尿素氮等)含量。樣品采回后，再轉(zhuǎn)入-80℃低溫冰箱中凍存。準(zhǔn)確稱取一定質(zhì)量的空腸黏膜，按1：9質(zhì)量體積比加入PBS，冰浴勻漿后，于4℃條件下3000r/min離心10min。分離上清液，即為10％的小腸黏膜勻漿液。二糖酶(蔗糖酶、乳糖酶、麥芽糖酶)采用試劑盒測定。ELLSA試劑盒測測定空腸和回腸粘膜IgA、IgG、IgM和SIgA含量。2.1.7數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計分析所有試驗數(shù)據(jù)采用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計。以重復(fù)為單位，以P<0.05為顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)。各處理數(shù)據(jù)以“平均數(shù)±SD”表示，并分析比較發(fā)酵豆粕、膨化大豆以及嗜酸乳桿菌對斷奶仔豬蛋白質(zhì)代謝以及腸粘膜消化酶活性的影響。2.2結(jié)果與分析2.2.1斷奶仔豬粗蛋白表觀消化率不同處理豆粕以及嗜酸乳桿菌對斷奶仔豬養(yǎng)分表觀消化率的影響見圖2。由圖2可知，對照組粗蛋白表觀消化率為66.05％，發(fā)酵豆粕組粗蛋白表觀消化率為67.33％，膨化大豆組粗蛋白表觀消化率為62.12％，3％以及5％嗜酸乳桿菌組粗蛋白表觀消化率分別為70.13％、66.56％。3％嗜酸乳桿菌組粗蛋白的表觀消化率顯著高于對照組，存在顯著差異(P<0.05)。發(fā)酵豆粕組及5％嗜酸乳桿菌組與對照組相比不存在顯著差異(P>0.05)，但由圖可知發(fā)酵豆粕組以及5％嗜酸乳桿菌組粗蛋白表觀消化率均高于對照組。2.2.2斷奶仔豬血液生化指標(biāo)不同處理豆粕及嗜酸乳桿菌對斷奶仔豬血液生化指標(biāo)的影響見表2-1。從表中數(shù)據(jù)可知，3％、5％嗜酸乳桿菌組斷奶仔豬血清中白蛋白含量分別為24.86g/L和25.20g/L，顯著高于對照組21.96g/L，存在顯著差異(P<0.05)，其他各實驗組間不存在顯著差異(P>0.05)。由表可以看出，斷奶仔豬血清中總蛋白、球蛋白、尿素氮和白/球的水平差異不顯著(P>0.05)，但發(fā)酵豆粕、膨化大豆、3％嗜酸乳桿菌、5％嗜酸乳桿菌組的尿素氮以及白/球的水平均高于對照組。3％嗜酸乳桿菌、5％嗜酸乳桿菌組的總蛋白含量高于對照組。表2-1不同處理豆粕及嗜酸乳桿菌對斷奶仔豬血液生化指標(biāo)的影響參數(shù)試驗A組試驗B組試驗C組試驗D組試驗E組P值總蛋白TP(g/L)49.6546.5546.7951.8952.230.825白蛋白ALB(g/L)21.96a21.85a22.03a24.86b25.20b0.050球蛋白globulin(g/L)27.6924.7024.7627.0327.030.858白/球A/G0.830.900.900.931.000.825尿素BUN(nmol/L)3.934.305.053.934.280.4372.2.3斷奶仔豬空腸粘膜消化酶活性不同處理豆粕及嗜酸乳桿菌對斷奶仔豬空腸黏膜消化酶活性的影響見表2-2。從表中數(shù)據(jù)可知，飼喂3％嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物的試驗日糧蔗糖酶活性達(dá)152.92U/mggrot，顯著高于對照組的107.19U/mggrot(P＜0.05)，但與其他實驗組差異不顯著。飼喂用膨化大豆代替普通豆粕的試驗日糧和5％嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物的試驗日糧蔗糖酶活性顯著高于對照組仔豬空腸蔗糖酶活性(P＜0.05)。發(fā)酵豆粕、3％嗜酸乳桿菌組空腸乳糖酶活性顯著高于對照組(P＜0.05)，發(fā)酵豆粕組空腸乳糖酶活性為165.23U/mggrot，且3％嗜酸乳桿菌組空腸乳糖酶活性達(dá)到174.13U/mggrot，均比其他組空腸乳糖酶活性高，具有顯著差異(P＜0.05)。發(fā)酵豆粕、膨化大豆、3％嗜酸乳桿菌、5％嗜酸乳桿菌組空腸麥芽糖活性分別為195.7U/mggrot、214.6U/mggrot、286.9U/mggrot、276.99U/mggrot，顯著高于對照組171.50U/mggrot(P＜0.05)，且3％嗜酸乳桿菌、5％嗜酸乳桿菌組空腸麥芽糖活性顯著高于發(fā)酵豆粕、膨化大豆組空腸麥芽糖活性(P＜0.05)，但發(fā)酵豆粕、膨化大豆組間及3％嗜酸乳桿菌、5％嗜酸乳桿菌組間差異不顯著。表2-2不同處理豆粕及嗜酸乳桿菌對斷奶仔豬空腸黏膜消化酶指標(biāo)的影響(U/mggrot)參數(shù)試驗A組試驗B組試驗C組試驗D組試驗E組P值蔗糖酶107.19a126.77ab139.84b152.92b147.22b0.014乳糖酶133.19a165.23bc146.21ab174.13c154.64ab0.008麥芽糖酶171.50a195.78b214.60b286.95c276.99c0.0002.2.4斷奶仔豬小腸免疫蛋白的測定不同處理豆粕及嗜酸乳桿菌對斷奶仔豬小腸免疫蛋白指標(biāo)的影響見表2-3。從表中數(shù)據(jù)可知，3％嗜酸乳桿菌組仔豬空腸黏膜IgA達(dá)到309.63mg/L，是對照組的2.05倍，顯著高于對照組(P<0.05)。膨化大豆、5％嗜酸乳桿菌組仔豬空腸黏膜IgA值分別為247.94mg/L、289.27mg/L，顯著高于對照組的空腸黏膜IgA(P<0.05)，且分別是對照組仔豬空腸黏膜IgA值的1.64及1.92倍?？梢婏暳现刑砑舆m當(dāng)?shù)氖人崛闂U菌及膨化大豆可顯著提高斷奶仔豬空腸黏膜IgA水平(P<0.05)。由表可知，斷奶仔豬空腸黏膜IgG表達(dá)量由高到低的順序依次為對照組、發(fā)酵豆粕組、膨化大豆組、5％嗜酸乳桿菌組以及3％嗜酸乳桿菌組，表達(dá)量分別為10.25g/L、11.76g/L、11.84g/L、12.04g/L、12.19g/L，各試驗組均高于對照組但不存在顯著差異(P>0.05)。3％嗜酸乳桿菌組及對照組斷奶仔豬空腸黏膜IgM表達(dá)量分別為2.61g/L、2.88g/L，高于其他各試驗組，顯著高于發(fā)酵豆粕組(P<0.05)，與其他組間不存在顯著差異(P>0.05)。膨化大豆、3％嗜酸乳桿菌組空腸黏膜SIgA水平高于對照組，但不存在顯著差異(P>0.05)，但3％嗜酸乳桿菌組斷奶仔豬結(jié)腸黏膜IgA表達(dá)量顯著高于其他各試驗組(P<0.05)，且3％嗜酸乳桿菌組斷奶仔豬結(jié)腸黏膜IgA表達(dá)量高達(dá)419.60mg/L，與對照組286.79mg/L相比升高了46.3％。發(fā)酵豆粕、膨化大豆、5％嗜酸乳桿菌組斷奶仔豬結(jié)腸黏膜IgA水平高于對照組，但不存在顯著差異(P>0.05)。膨化大豆、3％嗜酸乳桿菌、5％嗜酸乳桿菌組斷奶仔豬結(jié)腸黏膜IgG表達(dá)量分別為12.85g/L、13.48g/L、13.59g/L，與對照組12.46g/L相比升高了3.1％、8.2％、9.1％，但不存在顯著差異(P>0.05)。3％嗜酸乳桿菌組及對照組斷奶仔豬結(jié)腸黏膜IgM表達(dá)量分別為3.41g/L、3.95g/L，顯著高于其他各試驗組(P<0.05)，但其他各試驗組間不存在顯著差異(P>0.05)。發(fā)酵豆粕、膨化大豆、3％嗜酸乳桿菌、5％嗜酸乳桿菌組及對照組斷奶仔豬結(jié)腸黏膜SIgA表達(dá)量分別為49.02g/L、56.08g/L、54.34g/L、48.57g/L、43.56g/L，各組間不存在顯著差異(P>0.05)，但膨化大豆、3％嗜酸乳桿菌組斷奶仔豬結(jié)腸黏膜SIgA表達(dá)量與對照組比分別升高了12.52g/L，10.78g/L。表2-3不同處理豆粕及嗜酸乳桿菌對斷奶仔豬小腸免疫蛋白指標(biāo)的影響參數(shù)試驗A組試驗B組試驗C組試驗D組試驗E組P值IgG空腸(g/L)10.2511.7611.8412.1912.040.633IgM空腸(g/L)2.88c2.13a2.18ab2.61bc2.37ab0.011SIgA空腸(g/L)30.5526.4635.332.3826.400.417IgA結(jié)腸(mg/L)286.79a306.61a355.73ab419.60b296.95a0.040IgG結(jié)腸(g/L)12.4612.0312.8513.4813.590.904IgM結(jié)腸(g/L)3.95b2.60a2.54a3.41ab2.17a0.033SIgA結(jié)腸(g/L)43.56a49.02ab56.08b54.34b48.57ab0.0732.3討論不同處理豆粕以及嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物對蛋白質(zhì)代謝、腸粘膜消化酶活性和腸粘膜免疫球蛋白的影響：一般情況下，動物45％的能量由碳水化合物提供。動物飼糧中的碳水化合物的主要結(jié)構(gòu)由單糖、二糖、多糖、寡糖和多糖(淀粉和一些纖維素)組成。其中單糖可被動物直接消化吸收，而寡糖和多糖先經(jīng)機體消化酶的作用形成二糖，二糖被二糖酶分解成單糖后才能被吸收。因此，小腸二糖酶對營養(yǎng)物質(zhì)消化吸收起著至關(guān)重要的作用，沒有消化道粘膜二糖酶，就不能徹底分解糖類物質(zhì)，就不能使單糖吸收、轉(zhuǎn)化和利用。蔗糖酶、乳糖酶和麥芽糖酶是腸道內(nèi)3種最重要的二糖酶。蔗糖酶水解蔗糖得到果糖和葡萄糖，是小腸內(nèi)重要的二糖酶，由小腸絨毛上皮細(xì)胞合成并分泌，存在于小腸絨毛頂端，是腸道消化吸收的重要物質(zhì)。乳糖酶水解乳糖生成葡萄糖及半乳糖，隨后被機體吸收。乳糖酶在二糖酶中不僅成熟最晚，含量最低，且最易受損，恢復(fù)最慢。研究發(fā)現(xiàn)，仔豬腸道發(fā)育成熟的一個重要依據(jù)是麥芽糖酶和蔗糖酶活性水平的提高。眾所周知，消化酶對各種飼料養(yǎng)分的水解過程實質(zhì)代表著動物的消化過程，因此，酶活性的改變在很大程度上可能導(dǎo)致養(yǎng)分消化率的變化。消化酶不僅能夠維護(hù)胃腸道功能，而且，還可以間接為機體提供各種營養(yǎng)物質(zhì)，是改善機體消化不良的重要物質(zhì)，起到改善患者營養(yǎng)狀況的目的。早期斷奶仔豬的腸道發(fā)育還不完全，二糖酶活性水平還很低，斷奶后，使得仔豬出現(xiàn)一系列的斷奶綜合征。假如能通過提高斷奶仔豬的二糖酶活性水平，促進(jìn)腸道生長發(fā)育，則能促進(jìn)仔豬生長發(fā)育。本試驗研究表明，飼料中添加3％嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物可顯著提高空腸蔗糖酶、乳糖酶、麥芽糖酶以及表觀消化率水平，5％嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物能顯著提高斷奶仔豬白蛋白水平。飼料中添加適當(dāng)?shù)陌l(fā)酵豆粕可顯著增加空腸乳糖酶以及麥芽糖酶活性水平。飼料中添加膨化大豆可顯著增加空腸蔗糖酶以及麥芽糖酶活性水平。2.4小結(jié)2.4.1飼料中添加3％嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物可顯著提高空腸蔗糖酶、乳糖酶、麥芽糖酶以及表觀消化率水平，5％嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物能顯著提高斷奶仔豬白蛋白水平。2.4.2飼料中添加發(fā)酵豆粕可顯著增加空腸乳糖酶以及麥芽糖酶活性水平。2.4.3飼料中添加膨化大豆可顯著增加空腸蔗糖酶以及麥芽糖酶活性水平。2.4.4飼料中添加3％、5％嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物及膨化大豆可顯著提高斷奶仔豬空腸IgA水平，3％嗜酸乳桿菌組可顯著提高斷奶仔豬結(jié)腸IgA水平，各試驗組結(jié)腸SIgA有上升的趨勢。實施例3：不同飼喂期采用不同處理的豆粕及不同含量的嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物，對斷奶仔豬生長性能和腸粘膜消化酶活性的影響比較3.1材料與方法3.1.1試驗材料膨化大豆，嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物由上海源耀生物科技有限公司提供，膨化大豆、嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物的粗蛋白含量分別為35％、20％。3.1.2試驗動物與分組設(shè)計試選用遺傳背景、胎次和體重相近的21日齡斷奶仔豬216頭，按隨機區(qū)組設(shè)計分為6個處理，分別為試驗A組、試驗B組、試驗C組、試驗D組、試驗E組、試驗F組，每個處理3個重復(fù)，每個重復(fù)12頭仔豬。試驗期21d。3.1.3試驗飼糧日糧配方參照NRC(2012)和我國豬飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)(2004)配制。各組飼糧組成如表3-1。表3-1試驗設(shè)計各組基礎(chǔ)飼糧內(nèi)其余19％的公共成分為：膨化玉米2.5％、進(jìn)口魚粉5.5％、乳清粉5.0％、椰子油2.0％、含兩結(jié)晶水的磷酸氫鈣1.1％、石粉0.7％、食鹽0.3％、50％的氯化膽堿0.2％、L-賴氨酸鹽酸鹽0.4％、DL-蛋氨酸0.1％、L-蘇氨酸0.2％、預(yù)混料1.0％.3.1.4飼養(yǎng)管理：同實施例1。3.1.5測定指標(biāo)與方法：日采食量的測定同實施例1，空腸黏膜消化酶指標(biāo)的測定同實施例2。3.2結(jié)果與分析表3-2不同豆粕及嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物對斷奶仔豬小腸絨毛形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響(21d)表3-3不同豆粕及嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物對斷奶仔豬生產(chǎn)性能和消化酶指標(biāo)的影響(21d)分析：不同飼喂期采用不同處理豆粕及嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物，對斷奶應(yīng)激仔豬飼喂效果的影響對表3-2中各組數(shù)據(jù)對比分析發(fā)現(xiàn)，BCEF組十二指腸、空腸絨毛高度顯著高于AD兩組，且BCEF組十二指腸隱窩深度相比于AD兩組顯著降低。對表3-3中ABCDEF六組數(shù)據(jù)進(jìn)行對比分析可知，試驗AD二組飼喂效果相近，試驗BCEF四組飼喂效果相近，但試驗BCEF四組的空腸黏膜蔗糖酶和麥芽糖酶含量均明顯高于試驗AD二組、試驗BCEF四組的平均日增重均明顯高于試驗AD二組，說明飼喂前期(0-14天)采用膨化大豆+嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物進(jìn)行飼喂，其飼喂效果明顯好于普通豆粕+嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物；對表3-3中BCEF四組數(shù)據(jù)進(jìn)一步對比分析可知，飼喂后期(15-21天)采用3％嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物的BC二組與采用1％嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物的EF二組，其飼喂效果基本一致，從飼喂成本考慮，飼喂后期(15-21天)宜采用1％嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物；對表3-3中EF二組數(shù)據(jù)進(jìn)一步對比分析可知，飼喂后期(15-21天)采用25％普通豆粕+1％嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物的E組與采用25％膨化大豆+1％嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物的F組，其飼喂效果基本一致，從飼喂成本考慮，飼喂后期(15-21天)宜采用25％普通豆粕+1％嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物。3.3結(jié)論：在0-14天的飼喂期里，使用營養(yǎng)豐富，易消化吸收的膨化大豆并添加3％嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物進(jìn)行分組飼喂，效果最好，而在15-21天的飼喂期里，使用飼喂成本較低的普通豆粕并添加1％嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物進(jìn)行飼喂，也同樣能達(dá)到改善斷奶仔豬腸道屏障功能和提高消化酶活性的目的。對不同飼喂期采用不同處理豆粕及不同含量的嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物進(jìn)行飼喂，既可滿足不同飼喂期里斷奶仔豬對營養(yǎng)成分的需求，又可有效降低了飼喂成本。以上對本發(fā)明的具體實施例進(jìn)行了詳細(xì)描述，但其只是作為范例，本發(fā)明并不限制于以上描述具體實施例。對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，任何對本發(fā)明進(jìn)行的等同修改和替代也都在本發(fā)明的范疇之中。因此，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍下所作的均等變換和修改，都涵蓋在本發(fā)明范圍內(nèi)。當(dāng)前第1頁1 2 3