本發(fā)明屬于畜牧業(yè)動物營養(yǎng)技術(shù)研究領(lǐng)域，涉及一種含丁酸梭菌的低蛋白飼料配方，更具體的說是一種提高仔豬生長性能和腸道健康等方面的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
仔豬斷奶是養(yǎng)豬生產(chǎn)中的一個重要階段，斷奶應(yīng)激是仔豬出生后經(jīng)受的最大應(yīng)激。斷奶仔豬由于消化與免疫系統(tǒng)發(fā)育尚未完善，飼糧形態(tài)由母乳到固體飼料的轉(zhuǎn)變將會影響其對營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收。未消化吸收的營養(yǎng)物質(zhì)在腸道內(nèi)作為細(xì)菌的發(fā)酵底物而引起病原菌增殖，產(chǎn)生大量的毒性物質(zhì)，從而導(dǎo)致腹瀉，損害腸道健康。且仔豬斷奶后飼喂高蛋白質(zhì)飼料易引起腸道功能紊亂，進(jìn)而導(dǎo)致腹瀉。
在仔豬飼料中添加抗生素類生長促進(jìn)劑可有效降低腹瀉發(fā)生率，然而抗生素類生長促進(jìn)劑在飼料工業(yè)中的大量使用導(dǎo)致諸多問題出現(xiàn)，如病原菌產(chǎn)生耐藥性、動物免疫機(jī)能下降、體內(nèi)菌群失調(diào)、畜禽產(chǎn)品中的藥物殘留等。因此仔豬生長性能和腸道健康的營養(yǎng)調(diào)控這一領(lǐng)域的創(chuàng)新性有待于提高。這促使研究人員尋找控制斷奶期腹瀉、維持腸道完整性的替代方法，其中降低飼料蛋白質(zhì)水平同時補(bǔ)充合成氨基酸是提高仔豬生長性能、控制仔豬斷奶后腹瀉的有效措施。
丁酸梭菌是熱門的抗生素替代品之一，用于仔豬低蛋白飼料添加劑的相關(guān)報道還不多見。通過低蛋白質(zhì)平衡氨基酸飼糧中添加丁酸梭菌我們研究了一種調(diào)節(jié)仔豬飼料利用率和腸道菌群的配合飼料，以此來改善仔豬生長性能和腸道健康的營養(yǎng)調(diào)控，會在一定程度上緩解蛋白質(zhì)原料缺乏問題，降低飼料成本，同時減少養(yǎng)殖場對環(huán)境的污染，減少仔豬的腹瀉，提高養(yǎng)殖業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的一個目的是公開了一種含丁酸梭菌的仔豬低蛋白配合飼料。
本發(fā)明的另一個目的是公開了所配制的飼料對斷奶仔豬生長性能和腸道健康調(diào)節(jié)的應(yīng)用效果。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明公開了如下的技術(shù)內(nèi)容
一種調(diào)節(jié)仔豬生長性能和腸道健康的配合飼料，其特征在于降低飼料原料中蛋白質(zhì)含量，同時使用丁酸梭菌飼料添加劑，進(jìn)行合理配制日糧，由下述重量份數(shù)的原料組成：
玉米60-65 豆粕15-22 乳清粉3-6
魚粉3-9 小麥麩1-6 葡萄糖1-3
豆油1-3 酸化劑0.1-0.5 磷酸氫鈣0.5-1.2
石粉0.5-1.1 食鹽0.1-0.5 L-賴氨酸鹽酸鹽0.1-0.7
DL-蛋氨酸0.1-0.7 色氨酸0.1-0.8 蘇氨酸0.05-0.3
仔豬預(yù)混料1-4丁酸梭菌0.001-0.005（凍干粉中活菌含量為1×109CFU/g）
其中所述的仔豬預(yù)混料是指每千克預(yù)混料中含有：14,600 mg鐵，630 mg銅，410 mg 錳，10,400 mg鋅，15,000μg碘，17,000μg硒，227,600 IU VA，22,800 IU VD3，1,100 mg VE，30 mg VK3，700 mg VB2，200 mg VB6，1,340 mg泛酸，2,300 mg煙酸，8 mg生物素。
本發(fā)明所述酸化劑指的是山東天惠源生物科技有限公司產(chǎn)品，主要成分是乳酸、正磷酸、檸檬酸、富馬酸、甲酸。
本發(fā)明所述的斷奶仔豬配合飼料的制備方法：將玉米、豆粕兩種原料粉碎，其他原料均不需要粉碎，按照重量比例分別進(jìn)行稱量，在小型混合機(jī)中混勻即可。
本發(fā)明一個優(yōu)選的配方：
玉米64.495豆粕16.3乳清粉4
魚粉3.8小麥麩5葡萄糖1.5
豆油1 酸化劑0.4 磷酸氫鈣0.65石粉0.6食鹽0.3
L-賴氨酸鹽酸鹽0.4DL-蛋氨酸0.4 色氨酸0.05蘇氨酸0.1
仔豬預(yù)混料1丁酸梭菌0.005（凍干粉中活菌含量為1×109CFU/g）
其中所述的仔豬預(yù)混料是指每千克預(yù)混料中含有：14,600 mg鐵，630 mg銅，410 mg 錳，10,400 mg鋅，15,000μg碘，17,000μg硒，227,600 IU VA，22,800 IU VD3，1,100 mg VE，30 mg VK3，700 mg VB2，200 mg VB6，1,340 mg泛酸，2,300 mg煙酸，8 mg生物素。
本發(fā)明另一個優(yōu)選的配方：
玉米64.199豆粕16.3乳清粉4.5
魚粉4小麥麩3.7葡萄糖2.5
豆油1 酸化劑0.4 磷酸氫鈣0.5石粉0.6食鹽0.3
L-賴氨酸鹽酸鹽0.4DL-蛋氨酸0.4色氨酸0.05蘇氨酸 0.15
仔豬預(yù)混料1丁酸梭菌0.001（凍干粉中活菌含量為1×109CFU/g）
其中所述的仔豬預(yù)混料是指每千克預(yù)混料中含有：14,600 mg鐵，630 mg銅，410 mg 錳，10,400 mg鋅，15,000μg碘，17,000μg硒，227,600 IU VA，22,800 IU VD3，1,100 mg VE，30 mg VK3，700 mg VB2，200 mg VB6，1,340 mg泛酸，2,300 mg煙酸，8 mg生物素。
本發(fā)明進(jìn)一步公開了所配制的飼料對斷奶仔豬腸道微生物區(qū)系的應(yīng)用效果。特別是對改善斷奶仔豬腹瀉和腸道菌群平衡等方面的應(yīng)用。
本發(fā)明的斷奶仔豬配合飼料實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：
試驗(yàn)C組、試驗(yàn)D組和試驗(yàn)E組顯著（P＜0.05）降低了仔豬腹瀉率和料重比，顯著（P＜0.05）提高平均日增重；試驗(yàn)C組和試驗(yàn)D組空腸和回腸乳酸桿菌的數(shù)量顯著（P＜0.05）高于試驗(yàn)B組，而試驗(yàn)C組和試驗(yàn)D組回腸中大腸桿菌的數(shù)量顯著降低（P＜0.05）。為了更進(jìn)一步說明本發(fā)明的積極效果，提供如下的試驗(yàn)方法及結(jié)果：
1．試驗(yàn)動物及分組：
采用單因子試驗(yàn)設(shè)計(jì)，選取體重6.78 ± 0.51 kg的健康杜×長×大三元雜交斷奶仔豬120頭，隨機(jī)分為5個處理，每個處理分為4個重復(fù)，每個重復(fù)6頭豬。每個處理組分別飼喂不同日糧：飼喂基礎(chǔ)日糧(NC)、飼喂低蛋白飼糧、飼喂低蛋白飼糧＋0.001丁酸梭菌（濃度為1×105CFU/g）、飼喂低蛋白飼糧＋0.005丁酸梭菌（濃度為5×105CFU/g）組、飼喂低蛋白飼糧＋0.009丁酸梭菌（濃度為9×105CFU/g）。
2．基礎(chǔ)飼糧配方及營養(yǎng)水平：
根據(jù)NRC（1998）配制豬基礎(chǔ)日糧配方及營養(yǎng)水平如表1所示。
表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平（飼喂基礎(chǔ)）
a 每千克預(yù)混料中含有：14,600 mg鐵，630 mg銅，410 mg 錳，10,400 mg鋅，15,000μg碘，17,000μg硒，227,600 IU VA，22,800 IU VD3，1,100 mg VE，30 mg VK3，700 mg VB2，200 mg VB6，1,340 mg泛酸，2,300 mg煙酸，8 mg生物素。
b 根據(jù)NRC（1998）飼料成分表計(jì)算。
3．試驗(yàn)規(guī)程：
試驗(yàn)在一個商品萬頭豬場進(jìn)行，試驗(yàn)期28天。飼喂、管理、免疫按豬場規(guī)定程序進(jìn)行。飼喂28天后，從每個處理的每個重復(fù)組中隨機(jī)選取1頭斷奶仔豬屠宰，剖殺前12h禁食，然后采用頸靜脈放血的辦法處死，打開腹腔，立即結(jié)扎噴門瓣、幽門瓣、直腸遠(yuǎn)端，無菌取十二指腸、空腸、回腸等內(nèi)容物，置于液氮速凍后，轉(zhuǎn)放到-80℃冰箱中凍存以待分析。整個試驗(yàn)過程中觀察仔豬的健康狀況，記錄死、淘仔豬以及腹瀉、用藥情況。
4．測定指標(biāo)：
生長性能的測定：分別于試驗(yàn)的28 d、56 d稱個體重、結(jié)料，計(jì)算ADG、ADFI和F/G。
腹瀉率的測定：在整個試驗(yàn)期內(nèi)，每天分別統(tǒng)計(jì)兩個處理組的發(fā)生腹瀉仔豬的頭數(shù)，試驗(yàn)結(jié)束計(jì)算每組的腹瀉率。腹瀉評分標(biāo)準(zhǔn)見表2。
表 2 腹瀉評分標(biāo)準(zhǔn)
注：腹瀉指數(shù)評分標(biāo)準(zhǔn)參照Kelly （1990）提供的方法進(jìn)行。
腸道菌群的測定：
5．統(tǒng)計(jì)分析：
采用SAS統(tǒng)計(jì)軟件下的Compare Means模塊中的One-Way ANOVA進(jìn)行方差分析，并采用Duncan’s多重比較進(jìn)行組間差異顯著性檢驗(yàn)，P<0.05為差異顯著。
本發(fā)明公開的低蛋白配合飼料在斷奶仔豬飼料中的應(yīng)用效果，主要包括：
（1）血清指標(biāo)：
表3中，A為基礎(chǔ)飼糧組，B為低蛋白飼糧組，C為低蛋白飼糧＋0.001丁酸梭菌（濃度為1×105CFU/g）組，D為低蛋白飼糧＋0.005丁酸梭菌（濃度為5×105CFU/g）組，E為低蛋白飼糧＋0.009丁酸梭菌（濃度為9×105CFU/g）組。
表3對仔豬生長性能的影響
由表3可知，①試驗(yàn)B組與試驗(yàn)A組初體均重、末體均重、ADG、ADFI和F/G差異均不顯著（P＞0.05）；因此，所配低蛋白飼糧合理，在滿足仔豬生長需要，不影響仔豬生長性能的前提下，節(jié)約了成本。
②試驗(yàn)C組的料重比（F/G）顯著低于試驗(yàn)A組和試驗(yàn)B組，因此，試驗(yàn)C組添加量為添加下限。
③試驗(yàn)D組的料重比（F/G）顯著低于試驗(yàn)C組和試驗(yàn)E組，因此，試驗(yàn)D組添加量為添加上限。
④因此，丁酸梭菌添加劑的添加量在0.001-0.005范圍內(nèi)均可。
（2）腹瀉率：
表4中，A為基礎(chǔ)飼糧組，B為低蛋白飼糧組，C為低蛋白飼糧＋0.001丁酸梭菌（濃度為1×105CFU/g）組，D為低蛋白飼糧＋0.005丁酸梭菌（濃度為5×105CFU/g）組，E為低蛋白飼糧＋0.009丁酸梭菌（濃度為9×105CFU/g）組。
表4低蛋白飼糧對斷奶仔豬腹瀉率的影響
注：同行之間肩注，無字母表示差異不顯著（P＞0.05），字母不同表示差異顯著（P＜0.05）。
由表4可知，①低蛋白飼糧B組可顯著降低仔豬腹瀉率；
②添加了丁酸梭菌的C、D、E試驗(yàn)組與B組相比，仔豬腹瀉率顯著降低，但試驗(yàn)C、D、E組之間差異不顯著。
③試驗(yàn)E組成本高于試驗(yàn)C組和試驗(yàn)D組。因此，在低蛋白飼糧中丁酸梭菌的添加量為0.001-0.005比較適宜。
（3）腸道菌群：
表5中，B為低蛋白飼糧組，C為低蛋白飼糧＋0.001丁酸梭菌（濃度為1×105CFU/g）組，D為低蛋白飼糧＋0.005丁酸梭菌（濃度為5×105CFU/g）組。
表5丁酸梭菌對仔豬腸道微生物的影響 (lg CFU/g)
由表5的試驗(yàn)結(jié)果表明：
①十二指腸中的乳酸桿菌和大腸桿菌含量在各試驗(yàn)組間差異不顯著（P＞0.05）。
②試驗(yàn)C組和試驗(yàn)D組空腸中乳酸桿菌數(shù)顯著（P＜0.05）高于試驗(yàn)B組。大腸桿菌數(shù)量三組之間差異不顯著（P＞0.05）。
③試驗(yàn)C組和試驗(yàn)D組回腸中的乳酸桿菌和大腸桿菌數(shù)量顯著（P＜0.05）高于試驗(yàn)B組。試驗(yàn)C組和試驗(yàn)D組回腸中的乳酸桿菌和大腸桿菌數(shù)量差異不顯著（P＞0.05）。但試驗(yàn)D組的乳酸桿菌數(shù)量比試驗(yàn)C組提高了1.73%，試驗(yàn)D組的大腸桿菌數(shù)量比試驗(yàn)C組降低了2.99%。
④因此，丁酸梭菌添加劑的添加量在0.001-0.005范圍內(nèi)均可。
本發(fā)明對以丁酸梭菌為飼料添加劑的低蛋白飼料配方進(jìn)行了安全性實(shí)驗(yàn)，其方法如下：
（1）步驟：
材料和方法：選擇28日齡斷奶的杜×長×大仔豬6頭，臨床健康、發(fā)育正常，試驗(yàn)期28天，試驗(yàn)期內(nèi)隨時觀察中毒表現(xiàn)及死亡情況。
（2）飼喂的仔豬飼料原料組成：
玉米63.54、豆粕16.5、乳清粉4、魚粉4.4、小麥麩4.2、葡萄糖2、豆油1、酸化劑0.3、磷酸氫鈣0.5、石粉0.6、食鹽0.35、L-賴氨酸鹽酸鹽0.2、DL-蛋氨酸0.25、色氨酸0.05、蘇氨酸0.1、仔豬預(yù)混料2、丁酸梭菌0.01（凍干粉中活菌含量為1×109CFU/g）。
結(jié)果：給斷奶仔豬飼喂上述試驗(yàn)日糧，連續(xù)飼喂28天，未見明顯中毒現(xiàn)象，觀察期內(nèi)無死亡，尸檢中各主要臟器未見明顯異常。
（3）結(jié)論：斷奶仔豬日糧中添加0.01%丁酸梭菌（凍干粉中活菌含量為1×109CFU/g）飼喂仔豬，飼喂效果安全。
具體實(shí)施方式
通過以下實(shí)施例對本發(fā)明作一步說明，但不作為本發(fā)明的限制。本發(fā)明的實(shí)施例中所述的重量份數(shù)原料指的是克、公斤或噸，可根據(jù)生產(chǎn)實(shí)際的需要加以調(diào)整。本發(fā)明所用到的各種原料例如：磷酸氫鈣、石粉、食鹽、L-賴氨酸鹽酸鹽、DL-蛋氨酸、色氨酸、蘇氨酸、丁酸梭菌對外均有售；其中下面的產(chǎn)品均有市售：
酸化劑指的是山東天惠源生物科技有限公司產(chǎn)品；
仔豬預(yù)混料指的是天津市鼎圣飼料有限公司產(chǎn)品；
玉米指的是普通市售二級玉米；
豆粕指的是中糧集團(tuán)有限公司產(chǎn)品；
乳清粉和葡萄糖指的是天津市升騰飼料有限公司產(chǎn)品；
魚粉指的是進(jìn)口秘魯魚粉；
小麥麩指的是河北永生食品有限公司產(chǎn)品；
丁酸梭菌指的是洛陽瑞萊生物工程有限公司產(chǎn)品。
實(shí)施例1
斷奶仔豬的低蛋白配合飼料原料組成：
玉米63.199、豆粕17.3、乳清粉4.5、魚粉4、小麥麩3.7、葡萄糖2.5、豆油1、酸化劑0.4、磷酸氫鈣0.5、石粉0.6、食鹽0.3、L-賴氨酸鹽酸鹽0.4、DL-蛋氨酸0.4、蘇氨酸0.15、仔豬預(yù)混料1、丁酸梭菌0.001（凍干粉中活菌含量為1×109CFU/g）。
其中所述的仔豬預(yù)混料是指每千克預(yù)混料中含有：14,600 mg鐵，630 mg銅，410 mg 錳，10,400 mg鋅，15,000μg碘，17,000μg硒，227,600 IU VA，22,800 IU VD3，1,100 mg VE，30 mg VK3，700 mg VB2，200 mg VB6，1,340 mg泛酸，2,300 mg煙酸，8 mg生物素。
制備方法：將玉米、豆粕兩種原料粉碎，其他原料均不需要粉碎，按照重量比例分別進(jìn)行稱量，在小型混合機(jī)中混勻即可。
實(shí)施例2
斷奶仔豬的低蛋白配合飼料原料組成：
玉米64.495、豆粕16.8、乳清粉4、魚粉3.3、小麥麩4.5、葡萄糖2、豆油1、酸化劑0.4、磷酸氫鈣0.65、石粉0.6、食鹽0.3、L-賴氨酸鹽酸鹽0.4、DL-蛋氨酸0.4、色氨酸0.05、蘇氨酸0.1、仔豬預(yù)混料1、丁酸梭菌0.005（凍干粉中活菌含量為1×109CFU/g）。
其中所述的仔豬預(yù)混料是指每千克預(yù)混料中含有：14,600 mg鐵，630 mg銅，410 mg 錳，10,400 mg鋅，15,000μg碘，17,000μg硒，227,600 IU VA，22,800 IU VD3，1,100 mg VE，30 mg VK3，700 mg VB2，200 mg VB6，1,340 mg泛酸，2,300 mg煙酸，8 mg生物素。
制備方法：將玉米、豆粕兩種原料粉碎，其他原料均不需要粉碎，按照重量比例分別進(jìn)行稱量，在小型混合機(jī)中混勻即可。
實(shí)施例3
采用斷奶仔豬的低蛋白配合飼料飼喂斷奶仔豬的方法：
此系列配方適用28日齡斷奶仔豬，適用期為斷奶后28~40天，根據(jù)情況讓仔豬自由采食即可，必須提供充足的飲水，其他按正常的飼養(yǎng)管理進(jìn)行。
實(shí)施例4
比較試驗(yàn)
常規(guī)的斷奶仔豬飼料：
方法：配制玉米-豆粕型斷奶仔豬日糧，不添加丁酸梭菌。選擇28日齡6頭仔豬，試驗(yàn)期28天。
步驟：試驗(yàn)結(jié)束后對3頭仔豬進(jìn)行屠宰，取十二指腸、空腸、回腸腸段內(nèi)容物樣品1 g，溶解于9 mL的無菌生理鹽水中，充分混合，然后逐級10 倍系列稀釋至10-7。選擇10-5-10-7的稀釋度，取0.1 mL 稀釋液接種到相應(yīng)的滾管培養(yǎng)基中進(jìn)行乳酸桿菌培養(yǎng)。選取10-2-10-5的稀釋度，取0.2 mL稀釋液于相應(yīng)的平板培養(yǎng)基中進(jìn)行大腸桿菌的計(jì)數(shù)。
大腸桿菌計(jì)數(shù)采用麥康凱瓊脂培養(yǎng)基：蛋白胨，20.0 g/L；乳糖，10.0g/L；膽鹽，5.0 g/L；氯化鈉，5.0 g/L；中性紅，0.075 g/L；瓊脂，12.0 g/L；pH 7.4 ± 0.2。
乳酸桿菌計(jì)數(shù)采用Rogosa瓊脂：胰蛋白胨，10.0 g/L；酵母膏，5.0 g/L；葡萄糖，20.0 g/L；吐溫80，1.0 mL/L；磷酸二氫鉀，6.0 g/L；檸檬酸銨，2.0 g/L；乙酸鈉，17.0 g/L；硫酸鎂，0.575 g/L；硫酸錳，0.12 g/L；硫酸亞鐵，0.034 g/L；瓊脂，20.0 g/L；pH 5.4 ± 0.2。
其中乳酸桿菌的瓊脂培養(yǎng)基制成Hungates滾管；大腸桿菌采用平板培養(yǎng)。所有的培養(yǎng)基置于37 ℃培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)24～48 h 后計(jì)數(shù)。每個稀釋度做兩個平板或者滾管，以30～300 個菌落的平板或者滾管的稀釋度做計(jì)數(shù)用。
結(jié)果：十二指腸中乳酸桿菌和大腸桿菌含量分別為5.16lg CFU/g和3.91 lg CFU/g；空腸中乳酸桿菌和大腸桿菌含量分別為6.33 lg CFU/g和3.55 lg CFU/g；回腸中乳酸桿菌和大腸桿菌含量分別為6.57 lg CFU/g和3.93 lg CFU/g。
結(jié)論：通過比較試驗(yàn)說明：低蛋白飼糧中添加丁酸梭菌能調(diào)節(jié)斷奶仔豬腸道菌群，改善腸道健康和提高仔豬整體健康狀況。