本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，特別是涉及一種沙棘黃酮及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：前列腺癌是指發(fā)生在前列腺的上皮性惡性腫瘤。2004年who《泌尿系統(tǒng)及男性生殖器官腫瘤病理學(xué)和遺傳學(xué)》中前列腺癌病理類型上包括腺癌(腺泡腺癌)、導(dǎo)管腺癌、尿路上皮癌、鱗狀細(xì)胞癌、腺鱗癌。其中前列腺腺癌占95％以上，因此，通常所說的前列腺癌就是指前列腺腺癌。前列腺癌是西方國家男性發(fā)病率居于第一位、致死率居于第二位的惡性腫瘤。近幾年，我國男性的前列腺癌發(fā)病率也逐年升高，尤其是我國正步入老齡化社會，未來數(shù)十年很有可能出現(xiàn)前列腺癌發(fā)病高峰。2012年我國腫瘤登記地區(qū)前列腺癌發(fā)病率為9.92/10萬，列男性惡性腫瘤發(fā)病率的第6位。發(fā)病年齡在55歲前處于較低水平，55歲后逐漸升高，發(fā)病率隨著年齡的增長而增長，高峰年齡是70～80歲。家族遺傳型前列腺癌患者發(fā)病年齡稍早，年齡≤55歲的患者占43％。前列腺癌由于其生理位置的隱蔽性，且早期常無癥狀，往往容易被忽視，診斷發(fā)現(xiàn)后大多處在中晚期，從而失去了治療的最佳時(shí)間?；瘜W(xué)藥物療法在治療前列腺癌中占有重要地位。然而，近幾年新生產(chǎn)的化療藥物在藥物靶向性和全身毒性方面效果一直不好，這使得從天然植物中尋找藥物活性成分成為開發(fā)抗前列腺癌藥物的重要手段。沙棘(hippophaerhamnoidesl.)又名醋柳、黑刺，屬胡頹子科沙棘屬植物，廣泛分布于我國西北部地區(qū)，是我國藏醫(yī)傳統(tǒng)習(xí)用藥材。目前，沙棘作為藥食兩用作物被允許使用在食品、藥品等行業(yè)，具有廣泛的應(yīng)用前景。沙棘黃酮是沙棘果實(shí)和沙棘葉中黃酮的總稱，不同產(chǎn)地來源和不同活性部位其黃酮成分和含量有較大差異，但主要都以槲皮素苷元、異鼠李素苷元、山奈酚及其苷類為主。黃酮類物質(zhì)是沙棘最主要的活性成分之一，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)證明，沙棘黃酮在降血脂、降血糖、提高心肌耐缺氧能力、抗氧化、抗腫瘤等方面具有較好的生理功效。公開號為cn105982928a的中國發(fā)明專利公開了沙棘果抗腫瘤提取物及其組合物的醫(yī)藥用途和制備方法。一種維吾爾藥沙棘果提取物，維吾爾藥沙棘果經(jīng)溶劑超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱，先用體積比為100∶0-100∶10的二氯甲烷：甲醇混合溶劑洗脫，繼用體積比100∶12-100∶17的二氯甲烷：甲醇混合溶劑洗脫，用體積比為100∶12-100∶17的二氯甲烷：甲醇混合溶劑洗脫的洗脫液經(jīng)回收溶劑，干燥即為該提取物。還公開了所述維吾爾藥沙棘果提取物在制備預(yù)防及治療乳腺癌、肺癌、胃癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、宮頸癌、腦膠質(zhì)瘤或肝癌中的應(yīng)用。目前尚無沙棘黃酮用于抗前列腺癌的相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明提供了一種沙棘黃酮及其應(yīng)用，該沙棘黃酮為利用本發(fā)明方法從沙棘中提取，對前列腺癌具有一定的療效。沙棘黃酮，由沙棘果提取獲得，所述提取方法包括以下步驟：(1)沙棘果經(jīng)有機(jī)溶劑超聲提取獲得提取液；(2)提取液濃縮并去除有機(jī)溶劑獲得粗提物；(3)粗提物經(jīng)柱層析分離純化獲得洗脫液；(4)洗脫液經(jīng)酸水解獲得所述沙棘黃酮。步驟(1)用于初步提取沙棘果的有效成分，可以多次抽提后合并提取液。所述的沙棘黃酮，步驟(1)中有機(jī)溶劑為60％～80％的乙醇溶液。所述的沙棘黃酮，超聲時(shí)的溫度為50℃～60℃。超聲輔助提取，超聲時(shí)，適當(dāng)?shù)奶岣邷囟扔欣谟行С煞秩芙獾接袡C(jī)溶劑中。步驟(2)中去除步驟(1)中的有機(jī)溶劑，可以通過多種方法，比如說減壓蒸餾，或者濃縮后冷凍干燥得到粉末狀的粗提物，下一步分離純化時(shí)再用水復(fù)溶。步驟(3)中，柱層析分離主要去除的是糖類、蛋白質(zhì)、鞣制等物質(zhì)。所述柱層析使用ab-8大孔樹脂作為填料。ab-8型大孔吸附樹脂是苯乙烯型弱極性共聚體，比表面積在480-520m2/g左右，適合黃酮類化合物的純化；其他類似的填料還有d-101，hp-20等。所述的沙棘黃酮，大孔吸附樹脂分離時(shí)使用50％乙醇作為洗脫溶劑。使用ab-8大孔樹脂作為填料時(shí)，上樣后，先用水洗，再用10％乙醇、30％乙醇梯度洗，洗去雜質(zhì)后，最后再用50％乙醇洗脫，以50％乙醇洗脫下來的組分用于下一步的酸水解。當(dāng)然，洗雜時(shí)的乙醇濃度可以適當(dāng)變動，以洗凈雜質(zhì)為準(zhǔn)，而洗脫時(shí)乙醇的濃度也可以適當(dāng)變動，以能夠?qū)⒛繕?biāo)物洗脫下來為宜。所述的沙棘黃酮，步驟(4)中酸水解所使用的水解液為鹽酸-甲醇溶液，由質(zhì)量濃度為2％～6.5％的鹽酸與甲醇按體積比1∶3～5混合獲得。酸水解，也可以使用硫酸或醋酸等其他酸。甲醇是作為溶劑使用，其他醇也是可以使用具有相同作用，比如乙醇。酸水解是將糖苷水解成為苷元和糖基。所述的沙棘黃酮，酸水解前，將洗脫液濃縮、冷凍干燥去除溶劑。所述的沙棘黃酮，酸水解溫度為60～80℃，水解時(shí)間為3～5h。所述的沙棘黃酮，以質(zhì)量比計(jì)，槲皮素苷元含量不低于4.20％、異鼠李素苷元含量不低于17.50％。本發(fā)明還提供了所述的沙棘黃酮在制備預(yù)防或治療前列腺癌的藥物或保健食品中的應(yīng)用。本發(fā)明沙棘黃酮由沙棘果經(jīng)有機(jī)溶劑粗提，再經(jīng)柱層析分離純化，然后酸水解獲得。不同的提取方法對沙棘黃酮中各有效成分的含量具有較大的影響。本發(fā)明沙棘黃酮經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)對前列腺癌具有一定的治療和預(yù)防效果，能夠被用于制備預(yù)防或治療前列腺癌的藥物或保健食品。附圖說明圖1為實(shí)施例5中mtt法檢測細(xì)胞活性結(jié)果圖，其中，*表示與對照組相比，p<0.01，具有顯著性。圖2為rtca實(shí)時(shí)監(jiān)測沙棘黃酮對細(xì)胞影響的結(jié)果圖，其中，曲線a～h分別代表沙棘黃酮濃度0、0.78、1.56、3.13、6.25、12.5、25、50μg/ml。圖3為細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)24h時(shí)的結(jié)果圖，其中，圖a為對照組，圖b沙棘黃酮濃度為100μg/ml，圖c沙棘黃酮濃度為200μg/ml。圖4為實(shí)施例8中細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖，其中，圖a為對照組，圖b為沙棘黃酮濃度為50μg/ml。圖5為實(shí)施例8中細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)的統(tǒng)計(jì)結(jié)果圖，其中，“*”表示與對照組相比具有顯著性差異。圖6為實(shí)施例9中細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖，其中，圖a為對照組，圖b為沙棘黃酮濃度為50μg/ml。圖7為實(shí)施例9中細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)的統(tǒng)計(jì)結(jié)果圖，其中，“*”表示與對照組相比具有顯著性差異。圖8為對比例1中mtt法檢測細(xì)胞活性結(jié)果圖。具體實(shí)施方式實(shí)驗(yàn)材料和儀器：雄激素非依賴性前列腺癌pc-3細(xì)胞(來源：中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院細(xì)胞庫)；bio-rad680酶標(biāo)儀(美國bio-rad公司)；rtcas16實(shí)時(shí)無標(biāo)記細(xì)胞功能分析儀(艾森生物(杭州)有限公司)；噻唑藍(lán)(mtt)(北京雷根生物技術(shù)有限公司)；6ht流式細(xì)胞計(jì)(美國bd公司)；annexinv/pi細(xì)胞凋亡檢測試劑盒(索萊寶生物科技有限公司)；dna含量(細(xì)胞周期)檢測試劑盒(索萊寶生物科技有限公司)培養(yǎng)基：含有10％胎牛血清和1％鏈霉素、赤霉素的dmem/f12培養(yǎng)基(hyclone公司)。實(shí)施例1取干燥沙棘果100g，加入10倍體積(1.0l)70％乙醇溶液，55℃超聲輔助提取1h，重復(fù)3次，過濾，合并濾液，減壓蒸餾，除去乙醇，濃縮樣品，經(jīng)冷凍干燥后得到沙棘果粗提物粉末23.6g；取上述沙棘果粗提物粉末10.0g，加水100ml復(fù)溶，取上清液過ab-8大孔樹脂，其中，上樣速率為0.2bv/h，吸附一晚。依次用10％、30％、50％乙醇梯度洗脫，洗脫流速為40ml/min，共洗脫1.5bv，保留50％乙醇洗脫組分，濃縮，冷凍干燥；取冷凍干燥所得粉末1.0g，加入600ml水解液，水解液由質(zhì)量濃度為4％的鹽酸與甲醇按體積比1∶4混合，其余為水，70℃水解4h，減壓蒸餾，除去甲醇，冷凍干燥即得到沙棘黃酮樣品。取樣進(jìn)行檢測，以槲皮素苷元、異鼠李素苷元標(biāo)準(zhǔn)品對對照品，通過高效液相色譜(hplc)法進(jìn)行檢測，其中，槲皮素苷元含量5.20％，異鼠李素苷元含量19.02％。實(shí)施例2取干燥沙棘果150g，加入10倍體積(1.5l)60％乙醇溶液，60℃超聲輔助提取1h，重復(fù)3次，過濾，合并濾液，減壓蒸餾，除去乙醇，濃縮樣品，經(jīng)冷凍干燥后得到沙棘果粗提物粉末40.18g；取上述沙棘果粗提物粉末20.2g，加水200ml復(fù)溶，取上清液過ab-8大孔樹脂，其中，上樣速率為0.2bv/h，吸附一晚。依次用10％、30％、50％乙醇梯度洗脫，洗脫流速為40ml/min，共洗脫1.5bv，保留50％乙醇洗脫組分，濃縮，冷凍干燥；取冷凍干燥所得粉末1.2g，加入650ml水解液，水解液由質(zhì)量濃度為6.5％的鹽酸與甲醇按體積比1∶3混合制得，其余為水，60℃水解3h，除去甲醇，冷凍干燥即得到沙棘黃酮樣品。取樣進(jìn)行檢測，以槲皮素苷元、異鼠李素苷元標(biāo)準(zhǔn)品對對照品，通過高效液相色譜(hplc)法進(jìn)行檢測，其中，槲皮素苷元含量4.98％，異鼠李素苷元含量20.87％。實(shí)施例3取干燥沙棘果250g，加入10倍體積(2.5l)80％乙醇溶液，50℃超聲輔助提取1h，重復(fù)3次，過濾，合并濾液，減壓蒸餾，除去乙醇，濃縮樣品，經(jīng)冷凍干燥后得到沙棘果粗提物粉末60.2g；取上述沙棘果粗提物粉末30.0g，加入300ml蒸餾水復(fù)溶，取上清液過ab-8大孔樹脂，其中，上樣速率為0.2bv/h，吸附一晚。依次用10％、30％、50％乙醇梯度洗脫，洗脫流速為40ml/min，共洗脫1.5bv，保留50％乙醇洗脫組分，濃縮，冷凍干燥；取冷凍干燥獲得的粉末2.0g，加入1200ml水解液，水解液由質(zhì)量濃度為2％的鹽酸與甲醇按體積比1∶5混合制得，其余為水，80℃水解5h，除去甲醇，冷凍干燥即得到沙棘黃酮樣品。取樣進(jìn)行檢測，以槲皮素苷元、異鼠李素苷元標(biāo)準(zhǔn)品對對照品，通過高效液相色譜(hplc)法進(jìn)行檢測，其中，槲皮素苷元含量5.21％，異鼠李素苷元含量19.47％。實(shí)施例4取干燥沙棘果200g，加入2.0l70％乙醇溶液，60℃超聲輔助提取1h，重復(fù)3次，過濾，合并濾液，減壓蒸餾除去乙醇，濃縮樣品，經(jīng)冷凍干燥后得到沙棘果渣粗提物粉末45.8g；取上述沙棘果渣粗提物粉末15.0g，加入150ml蒸餾水復(fù)溶，取上清液過ab-8大孔樹脂，其中，上樣速率為0.2bv/h，吸附一晚。依次用0、10％、30％、50％乙醇梯度洗脫，洗脫流速為40ml/min，共洗脫1.5bv，保留50％乙醇洗脫組分，濃縮，冷凍干燥；取上述干燥粉末2.0g，加入1.2l水解液，水解液由質(zhì)量濃度為6.5％的鹽酸與甲醇按體積比1∶4混合，其余為水，60℃水解3h，除去甲醇，冷凍干燥即得到沙棘黃酮樣品。以槲皮素苷元、異鼠李素苷元標(biāo)準(zhǔn)品為對照品，通過高效液相色譜(hplc)進(jìn)行檢測，其中槲皮素苷元含量4.20％，異鼠李素苷元含量17.50％。實(shí)施例5取新復(fù)蘇的pc-3細(xì)胞于37℃，5％co2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待細(xì)胞穩(wěn)定傳代2次后，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。取對數(shù)生長期的pc-3細(xì)胞，用0.25％胰酶消化后，計(jì)數(shù)，調(diào)整細(xì)胞濃度為2×104個(gè)/ml，接種200μl細(xì)胞懸浮液于96孔培養(yǎng)板，在37℃、5％co2培養(yǎng)箱培養(yǎng)24h使細(xì)胞貼壁。更換培養(yǎng)液，每孔加入沙棘黃酮樣品(實(shí)施例1制備)的培養(yǎng)液200μl(樣品用0.5％dmso溶解)。設(shè)置空白組和樣品組，每組6個(gè)復(fù)孔，濃度分別為50、100、150、200μg/ml，繼續(xù)培養(yǎng)24h，48h，72h。終止反應(yīng)前4h，每孔加入5g/lmtt20μl繼續(xù)培養(yǎng)4h。吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)液，每孔加入dmso150μl，振蕩10min使紫色結(jié)晶完全溶解后，在570nm測定吸光度。相對細(xì)胞活力＝(加藥組od值-本底o(hù)d值)/(空白對照組od值-本底o(hù)d值)其中，空白對照組為0.5％dmso的培養(yǎng)基組；本底組為未加細(xì)胞組。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以mean±sd表示，采用spss軟件分析，統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)用t檢驗(yàn)和單因素f檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水平p＝0.01。結(jié)果如圖1所示，相比于對照組，一定劑量的沙棘黃酮可以明顯抑制pc-3細(xì)胞的活力，且呈劑量和時(shí)間依賴性。各樣品處理時(shí)間段的ic50值見表1。表1時(shí)間24h48h72hic50(μg/ml)91.07549.74227.921實(shí)施例6rtca(realtimecellularanalysis)實(shí)時(shí)無標(biāo)記細(xì)胞分析技術(shù)是將微電子細(xì)胞傳感器芯片整合到表面適于細(xì)胞貼附與生長的細(xì)胞檢測板的底部或細(xì)胞浸潤遷移板的微孔膜，用以構(gòu)建實(shí)時(shí)、動態(tài)、定量跟蹤細(xì)胞形態(tài)和增殖分化等改變的細(xì)胞阻抗檢測傳感系統(tǒng)。本實(shí)驗(yàn)中的細(xì)胞培養(yǎng)板e(cuò)-plate16的底部整合有微金電子傳感器芯片，貼壁生長在微電極表面的細(xì)胞狀態(tài)改變會引起電極阻抗的變化，這種改變與細(xì)胞的實(shí)時(shí)狀態(tài)改變成相關(guān)性，因此可基于電阻抗的測定用細(xì)胞指數(shù)(cellindex，ci)來表示細(xì)胞狀態(tài)，實(shí)現(xiàn)實(shí)時(shí)監(jiān)測。取對數(shù)生長期的pc-3細(xì)胞，以5000/孔的密度接種于rtca16孔板中，培養(yǎng)24h，加入不同濃度的樣品溶液50μl，繼續(xù)培養(yǎng)72h，實(shí)時(shí)監(jiān)測電極阻抗變化，每個(gè)濃度設(shè)置3個(gè)重復(fù)。結(jié)果如圖2所示，相比于對照組，一定劑量的沙棘黃酮可以明顯抑制pc-3細(xì)胞的增殖，且呈劑量和時(shí)間依賴性，通過rtca實(shí)時(shí)監(jiān)測沙棘黃酮對細(xì)胞的影響，發(fā)現(xiàn)低劑量的沙棘黃酮樣品(6.25μg/ml)即可明顯改變細(xì)胞的狀態(tài)，造成細(xì)胞指數(shù)的下降。實(shí)施例7對數(shù)生長期的pc-3細(xì)胞經(jīng)胰酶消化后，調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度，加入適量(1×105個(gè))細(xì)胞至6孔板中，待一段時(shí)間的培養(yǎng)后細(xì)胞貼壁。當(dāng)細(xì)胞長至基本鋪滿6孔板時(shí)，用10μl的槍頭在6孔板上進(jìn)行劃痕，劃痕后用pbs清洗3次去除脫落的細(xì)胞。分別向6孔板中加入不同濃度的沙棘黃酮樣品(實(shí)施例1制備)，同時(shí)設(shè)置空白組，放入培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。別在12h、24h、36h進(jìn)行拍照觀察細(xì)胞在劃線區(qū)域的遷移情況。結(jié)果如圖3所示，相比于對照組，100μg/ml的沙棘黃酮即可明顯抑制pc-3細(xì)胞的橫向遷移，當(dāng)濃度達(dá)到200μg/ml時(shí)，pc-3細(xì)胞基本失去遷移的能力。實(shí)施例8annexinv是一種磷脂結(jié)合蛋白，能與細(xì)胞凋亡過程中翻轉(zhuǎn)到膜外的磷酯酰絲氨酸高親和力特異結(jié)合，在藍(lán)色光的激發(fā)下，發(fā)出綠色熒光，從而區(qū)分出凋亡細(xì)胞和正常細(xì)胞；碘化丙啶(pi)是一種核酸染料，它不能穿透完整細(xì)胞膜，但對凋亡晚期細(xì)胞和死細(xì)胞的破損細(xì)胞膜能夠穿透，并使細(xì)胞核紅染。將annexinv與pi匹配使用，可以將凋亡早期、凋亡晚期的細(xì)胞區(qū)分開來。取對數(shù)生長期的pc-3細(xì)胞，調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度，以20000/孔的密度接種于6孔板中，培養(yǎng)24h，棄去原培養(yǎng)基，加入含有不同濃度(25、50、100μg/ml)沙棘黃酮樣品(實(shí)施例1制備)的培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)48h。按照annexinv/pi細(xì)胞凋亡檢測試劑盒說明書上的操作收集細(xì)胞染色后，流式細(xì)胞計(jì)檢測細(xì)胞凋亡情況。結(jié)果如圖4所示，其中圖4a為不加藥的對照組，圖4b為加入了50μg/ml沙棘黃酮的實(shí)驗(yàn)組。左下象限代表正常細(xì)胞，左上象限代表機(jī)械損傷細(xì)胞，右下象限代表早期凋亡細(xì)胞，右上象限代表晚期凋亡細(xì)胞或壞死細(xì)胞。統(tǒng)計(jì)結(jié)果如圖5所示，處理48h后，與正常對照組比較，各實(shí)驗(yàn)組中細(xì)胞早期凋亡率雖然沒有明顯變化，但晚期凋亡(壞死)率和總凋亡率都顯著升高(p<0.01)，且呈一定的劑量依賴性，說明實(shí)施例1制備的沙棘黃酮具有誘導(dǎo)pc-3細(xì)胞凋亡的作用。實(shí)施例9細(xì)胞周期是指連續(xù)分裂細(xì)胞從一次有絲分裂結(jié)束到下一次有絲分裂結(jié)束所經(jīng)歷的整個(gè)過程，包括g0/g1期、s期、g2/m期。熒光染料碘化丙啶pi可以與細(xì)胞內(nèi)dna結(jié)合，細(xì)胞各個(gè)時(shí)期其dna含量不同從而導(dǎo)致結(jié)合的熒光染料不同，流式細(xì)胞儀可以根據(jù)熒光強(qiáng)度的不同來檢測dna含量，從而判斷細(xì)胞周期分布。取對數(shù)生長期的pc-3細(xì)胞，調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度，以20000/孔的密度接種于6孔板中，培養(yǎng)24h，棄去原培養(yǎng)基，加入含有不同濃度(25、50、100μg/ml)沙棘黃酮樣品(實(shí)施例1制備)的培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)48h。按照dna含量(細(xì)胞周期)檢測試劑盒說明書上的操作收集細(xì)胞染色后，流式細(xì)胞計(jì)檢測細(xì)胞周期情況。結(jié)果如圖6所示，其中圖6a為不加藥的對照組，圖6b為加入了50μg/ml沙棘黃酮的實(shí)驗(yàn)組，各個(gè)峰代表不同的細(xì)胞周期階段。統(tǒng)計(jì)結(jié)果如圖7所示，沙棘黃酮樣品作用pc-3細(xì)胞48h后，與正常對照組比較，樣品組中細(xì)胞g2/m期比例顯著升高(p<0.01)，且呈一定劑量依賴性。因此樣品主要通過將細(xì)胞周期阻滯在g2/m期，延緩細(xì)胞完成有絲分裂過程，并進(jìn)一步延遲進(jìn)入下一個(gè)細(xì)胞周期的時(shí)間，影響物質(zhì)合成和dna復(fù)制，從而抑制pc-3細(xì)胞增殖。影響dna合成并延緩細(xì)胞周期的進(jìn)行，從而抑制pc-3細(xì)胞增殖。對比例1沙棘黃酮未水解樣的制備，沙棘黃酮的制備工藝：取干燥沙棘果，加入10倍體積70％乙醇溶液，55℃超聲輔助提取1h，重復(fù)3次，過濾，合并濾液，濃縮，經(jīng)冷凍干燥后得到沙棘果粗提物粉末；取上述沙棘果粗提物粉末，加水復(fù)溶，取上清液過ab-8大孔樹脂。其中，上樣速率為0.2bv/h，吸附一晚。依次用10％、30％、50％乙醇梯度洗脫，洗脫流速為40ml/min，共洗脫1.5bv，保留50％乙醇洗脫組分，濃縮，冷凍干燥，得到沙棘黃酮未水解樣品。其中測得槲皮素苷元含量0.1％，異鼠李素苷元含量0.08％。mtt法檢測細(xì)胞活力的方法同實(shí)施例5。沙棘黃酮未水解樣品對pc-3細(xì)胞活力的影響見圖8，相比于對照組，250μg/ml的沙棘樣品仍能促進(jìn)pc-3細(xì)胞的生長，不存在抑制細(xì)胞增殖作用，由此分析可知，本發(fā)明中的沙棘黃酮必須經(jīng)過水解才能發(fā)揮抑制前列腺增殖的作用。當(dāng)前第1頁12