本發(fā)明涉及一種菌膜制備方法，更具體地說涉及一種紅茶菌菌膜的制備方法。

背景技術(shù)：

紅茶菌又名海寶，其含有一部分茶葉浸出物、活的微生物及其代謝產(chǎn)物。紅茶菌抑制了有害細(xì)菌的生長，其能夠清理腸胃、預(yù)防和治療便秘和痔瘡、幫助消化，對高血壓、高血脂、動脈硬化等心血管疾病和糖尿病有預(yù)防和治療作用；且其具有增強(qiáng)機(jī)體免疫力等功能。紅茶菌發(fā)酵過程中起主導(dǎo)作用的主要微生物是醋酸菌、酵母菌和乳酸菌，形成三大類微生物的共生體系。紅茶菌發(fā)酵期間酵母菌可以快速將糖轉(zhuǎn)化為乙醇，從而刺激醋酸菌的生長；而醋酸菌的生長代謝形成的主要代謝產(chǎn)物又對酵母菌代謝及自身代謝提供防止污染的環(huán)境。菌膜的成分以粗蛋白和粗纖維為主，參與菌膜形成的主要微生物是醋酸菌，酵母菌和乳酸菌對其貢獻(xiàn)較小。因此，調(diào)控醋酸菌的生長速度可以有效控制菌膜的形成。

紅茶菌培養(yǎng)液中主要包含菌液和菌膜兩部分，人們飲用的是菌液部分，目前對紅茶菌研究較多的是紅茶菌加工工藝等方面，如紅茶菌飲料的制作方法、發(fā)酵設(shè)備、功能、風(fēng)味等，卻很少關(guān)注紅茶菌菌膜的功效與利用。紅茶菌菌膜在培養(yǎng)液中呈乳白色半透明膠質(zhì)菌團(tuán)，又稱為細(xì)菌纖維素，在食品、醫(yī)藥、化妝品等行業(yè)有廣泛的應(yīng)用；主要是利用產(chǎn)膜醋酸菌為主要菌劑發(fā)酵茶飲料，在發(fā)酵過程中形成菌膜(細(xì)菌纖維素)。但是，現(xiàn)有的紅茶菌菌膜制備產(chǎn)量低、口感差，不適合工廠化生產(chǎn)，因此亟需一種高效的紅茶菌菌膜制備方法。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明針對現(xiàn)有的紅茶菌菌膜制備產(chǎn)量低、口感差，不能高效生產(chǎn)等問題，提供一種紅茶菌菌膜的制備方法。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)解決方案是：一種紅茶菌菌膜的制備方法，包括以下步驟：步驟一、取紅茶，用60-90℃水連續(xù)兩次浸提10-30min，茶葉與水的質(zhì)量比為1:(100-200)，初濾后將兩次浸提液混合；步驟二、向步驟一中所得的浸提液中加入紅茶質(zhì)量比0.05-0.1％的單寧酶，然后在35-45℃條件下酶解60-90min，再在90-100℃下加熱5-10min滅酶活，然后冷卻至室溫；步驟三、將經(jīng)過步驟二處理的浸提液中加入浸提液質(zhì)量比為6-10％蔗糖，然后煮沸5-10min，再冷卻至室溫；步驟四、將經(jīng)過步驟三處理的浸提液調(diào)節(jié)濃度至0.5-0.8％之間，再用醋酸調(diào)節(jié)ph值至4-5之間；步驟五、向經(jīng)過步驟四處理的浸提液中加入浸提液質(zhì)量比為3％-5％的95％食用乙醇，再用0.45μm微孔濾膜抽濾除去細(xì)菌得到無菌茶湯；步驟六、將步驟五得到的無菌茶湯分裝至廣口玻璃瓶中，然后接種茶湯體積比為4-6％紅茶菌母液、茶湯質(zhì)量比為1-3％紅茶菌菌膜，再將玻璃瓶蓋上透氣的封口薄膜，然后放入25-30℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；步驟七、在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)10-12d后，待ph在2.5-3之間、菌膜成熟時，再用清水將菌液漂洗干凈，然后于85-90℃熱水中殺菌15-20min，冷卻后即得到紅茶菌菌膜成品。

所述步驟一中的初濾是將浸提后的紅茶浸提液經(jīng)200-400目的濾布過濾。

所述步驟二中酶解60-90min時溫度為40-45℃。

與現(xiàn)有技術(shù)相比較，本發(fā)明的有益效果是：

本發(fā)明中利用單寧酶切斷多酚類物質(zhì)的酯鍵，通過降低茶湯中酯型兒茶素含量來減弱其對紅茶菌中微生物的抑制作用；另外較低的酸度、適宜的茶湯濃度、乙醇、接種量等可有效促進(jìn)菌膜的形成，很大程度的提高了紅茶菌菌膜的生長量，且紅茶菌菌液澄清、風(fēng)味良好。

附圖說明

圖1是本發(fā)明中紅茶菌發(fā)酵期間醋酸菌變化規(guī)律圖。

圖2是本發(fā)明中紅茶菌發(fā)酵期間酵母菌變化規(guī)律圖。

具體實施方式

以下結(jié)合附圖說明和具體實施方式對本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)描述。

一種紅茶菌菌膜的制備方法，包括以下步驟：

步驟一、取紅茶，用60-90℃水連續(xù)兩次浸提10-30min，茶葉與水的質(zhì)量比為1:(100-200)，初濾后將兩次浸提液混合。用60-90℃水連續(xù)兩次浸提10-30min再將兩次浸提液混合，不但能獲得較高浸出率的紅茶浸出物，且能有效減少紅茶中熱敏性成分在高溫下被破壞，保證其原有風(fēng)味。

步驟二、向步驟一中所得的浸提液中加入紅茶質(zhì)量比0.05-0.1％的單寧酶，然后在35-45℃條件下酶解60-90min，再在90-100℃下加熱5-10min滅酶活，然后冷卻至室溫。茶葉中的多酚類化合物不僅具有強(qiáng)抗氧化活性，而且具有較好的抑菌活性，尤其是酯型兒茶素，對紅茶菌中的醋酸菌和酵母菌等微生物的抑菌能力相對較強(qiáng)，醋酸菌的數(shù)量減少會直接降低菌膜的形成量；而單寧酶能斷裂兒茶酚與沒食子酸間的酯鍵，使酯型兒茶素水解，減弱其對醋酸菌等的抑制作用，大大促進(jìn)了菌膜的生長。

步驟三、將經(jīng)過步驟二處理的浸提液中加入浸提液質(zhì)量比為6-10％蔗糖，然后煮沸5-10min，再冷卻至室溫。蔗糖作為紅茶菌微生物的碳源，能產(chǎn)生較多的乙醇和乳酸，可以刺激醋酸菌的生長，有利于菌膜的形成。

步驟四、將經(jīng)過步驟三處理的浸提液調(diào)節(jié)濃度至0.5-0.8％之間，再用醋酸調(diào)節(jié)ph值至4-5之間。提高起始浸提液的酸度，增加發(fā)酵液中的醋酸的含量,都有利于醋酸菌的快速生長，對菌膜的生成有促進(jìn)作用。

步驟五、向經(jīng)過步驟四處理的浸提液中加入浸提液質(zhì)量比為3％-5％的95％食用乙醇，再用0.45μm微孔濾膜抽濾除去細(xì)菌得到無菌茶湯。除去雜菌能更好保證醋酸菌、酵母菌等優(yōu)勢微生物的生長，防止不良風(fēng)味和成分的產(chǎn)生；加入一定量的乙醇可以刺激醋酸菌的生長，有利于菌膜的形成，高濃度的乙醇對酵母菌和醋酸菌反而有抑制作用。

步驟六、將步驟五得到的無菌茶湯分裝至廣口玻璃瓶中，然后接種茶湯體積比為4-6％紅茶菌母液、茶湯質(zhì)量比為1-3％紅茶菌菌膜，再將玻璃瓶蓋上透氣的封口薄膜，然后放入25-30℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。廣口玻璃瓶能給微生物提供更大的接觸面，加快其生長速度，適宜的溫度能保證微生物的快速生長，溫度過高或過低都會抑制其生長，菌膜的形成也會減少。

步驟七、在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)10-12d后，待ph在2.5-3之間、菌膜成熟時，將菌液漂洗干凈，然后于85-90℃熱水中殺菌15-20min，冷卻后即得到紅茶菌菌膜成品。

具體的，所述步驟一中的初濾是將浸提后的紅茶浸提液經(jīng)200-400目的濾布過濾。

具體的，所述步驟二中酶解60-90min時溫度為40-45℃。

下面以實施例說明以具體的不同培養(yǎng)基成分、不同培養(yǎng)條件對菌膜生成量的影響：

實施例一

取紅茶茶葉并將其粉碎，用純水在90℃下按茶水比1:150浸提25min；粗濾后，將茶渣按同樣茶水比浸提15min后過濾，將兩次浸提液混合。待茶浸提液冷卻至45℃，向浸提液中先加入茶葉重量0.08％單寧酶，酶解90min，加熱滅酶活，冷卻至室溫。然后加入10％蔗糖，煮沸10min，冷卻至室溫。調(diào)節(jié)浸提液濃度至0.9％，用醋酸調(diào)節(jié)ph值為4.5。加入質(zhì)量比為5％食用乙醇，用0.45μm微孔濾膜抽濾除去細(xì)菌得到無菌茶湯。將無菌茶湯分裝至1l玻璃瓶中，接種體積比5％紅茶菌母液、質(zhì)量比為3％紅茶菌菌膜，再將玻璃瓶蓋上透氣的封口薄膜，放入30℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)12d，待ph3、菌膜成熟時，用清水漂洗后，于90℃熱水中殺菌15min，冷卻后得到紅茶菌菌膜的成品。

同時，減掉酶解、酸度調(diào)節(jié)、加乙醇這三個步驟，且所用糖為白砂糖，其他步驟采用與實施例一相同的工藝制備紅茶菌菌膜作為對比例一。

且在對比例一的基礎(chǔ)上添加單寧酶水解，其他步驟采用與對比例一相同的工藝制備紅茶菌菌膜作為比例二。

紅茶菌發(fā)酵期間醋酸菌、酵母菌的數(shù)量變化具體結(jié)果參見圖1、圖2。由圖1和圖2可知，對比例二中紅茶茶湯經(jīng)過單寧酶處理后，酯型兒茶素含量降低，醋酸菌的數(shù)量在發(fā)酵期間較對比例一有顯著增加，酵母菌的數(shù)量也有一定程度增加；可見酶解處理減弱了酯型兒茶素對醋酸菌等優(yōu)勢微生物的抑制作用，有助于菌膜的形成。

將實施例一、對比例一和對比例二的紅茶菌菌膜瀝干，烘干稱重，比較其生成量，結(jié)果見下面的表1。

表1紅茶菌的菌膜生長情況與產(chǎn)量比較

由表1可知對比例二的紅茶菌菌膜生長量較對比例一有一定增加，菌液澄清、可見單寧酶處理后，菌液澄清度提高，可以促進(jìn)菌膜的生長。實施例一的紅茶菌菌膜生成量較對比例一明顯增加，菌液澄清、風(fēng)味好，說明酶處理后酯型兒茶素顯著減少，有助于菌液的澄清及紅茶菌中微生物的生長；另外酸度的調(diào)節(jié)、乙醇的添加與適宜的培養(yǎng)條件，可明顯增加醋酸菌等優(yōu)勢微生物的生長速率，從而顯著促進(jìn)紅茶菌菌膜的形成。

本發(fā)明指出了不同培養(yǎng)基成分、不同培養(yǎng)條件對菌膜生成量的影響，得出高產(chǎn)菌膜的培養(yǎng)方法。其中利用單寧酶切斷多酚類物質(zhì)的酯鍵，通過降低茶湯中酯型兒茶素含量來減弱其對紅茶菌中醋酸菌等優(yōu)勢微生物的抑制作用；另外較低的酸度、適宜的茶湯濃度、乙醇、接種量等可有效促進(jìn)菌膜的形成，很大程度的提高了紅茶菌菌膜的生長量，且紅茶菌菌液澄清、風(fēng)味良好。

以上內(nèi)容是結(jié)合具體的優(yōu)選實施方式對本發(fā)明所作的進(jìn)一步詳細(xì)說明，不能認(rèn)定本發(fā)明的具體實施只局限于這些說明。對于本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干簡單推演或替換，上述結(jié)構(gòu)都應(yīng)當(dāng)視為屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。