本發(fā)明屬于保健食品技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種林蛙膠原蛋白多肽鐵復(fù)合物微膠囊的配方及其制備方法。

背景技術(shù)：

林蛙，又稱雪蛤、哈什螞，是一種分布在我國東北地區(qū)，尤其是長白山一帶的珍稀兩棲類野生動(dòng)物。由于其有著豐富的營養(yǎng)價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值，近些年來，日漸成為廣大學(xué)者研究的對(duì)象。林蛙皮為制備林蛙油的副產(chǎn)品，其中含有豐富的多肽類物質(zhì)，膠原蛋白及透明質(zhì)酸等，且具有抗炎、抑菌、保濕等功效。研究表明，林蛙皮酶解得到的林蛙膠原蛋白肽具有良好的吸濕保濕性，具有明顯的還原能力和清除超氧陰離子自由基能力，以及抗氧化作用。

當(dāng)今社會(huì)，缺鐵現(xiàn)象在人群中越來越普遍。特別存在于老年人、小孩和女性人群中。據(jù)報(bào)道，缺鐵性貧血的發(fā)病率在不同人群中有著不同的體現(xiàn)。其中男性同胞的發(fā)病率約為10％,女性同胞的發(fā)病率約為20％,但孕婦的發(fā)病率達(dá)40％,小孩的發(fā)病率更是高達(dá)52％。近些年來，隨著人們生活水平的不斷提高,人們對(duì)于各類健康問題也越來越重視。因此缺鐵造成的各類疾病和發(fā)育缺陷也受到越來越多人的關(guān)注。與此同時(shí)，補(bǔ)鐵劑對(duì)于治療缺鐵性貧血等疾病具有一定的功效，所以補(bǔ)鐵劑的研發(fā)也越來越受到社會(huì)各界的廣泛關(guān)注。

林蛙膠原蛋白多肽鐵復(fù)合物是一種以多肽為配體,與二價(jià)鐵結(jié)合形成的多肽鐵復(fù)合物，屬于第四代功能性補(bǔ)鐵劑。相比于前幾代補(bǔ)鐵劑，這種多肽鐵復(fù)合物不產(chǎn)生刺激性氣味，而且在動(dòng)物體內(nèi)不產(chǎn)生沉淀，易于被機(jī)體吸收，無毒副作用產(chǎn)生，因此，可將其直接對(duì)機(jī)體進(jìn)行補(bǔ)鐵。以此同時(shí)，它還不易受到溫度、ph值等的影響，是一款比較理想的補(bǔ)鐵劑。

本文通過林蛙膠原蛋白多肽與氯化亞鐵反應(yīng)，從而螯合生成一種新型的功能性補(bǔ)鐵劑—林蛙膠原蛋白多肽鐵復(fù)合物，這種復(fù)合物能有效改善貧血，且易于被機(jī)體吸收，穩(wěn)定性高，對(duì)胃腸道刺激甚小。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于利用我們東北地區(qū)豐富的林蛙資源，研發(fā)出一款易于被機(jī)體吸收，且穩(wěn)定性高，不對(duì)人體胃腸道產(chǎn)生刺激的新型功能性補(bǔ)鐵劑—林蛙膠原蛋白多肽鐵復(fù)合物微膠囊及其制備方法。

一種林蛙膠原蛋白多肽鐵復(fù)合物微膠囊的制備方法，其特征在于，采用銳孔凝固浴法，以林蛙膠原蛋白多肽鐵復(fù)合物為芯材、海藻酸鈉為壁材；以吐溫80為乳化劑、氯化鈣溶液為凝固浴制備林蛙膠原蛋白多肽鐵復(fù)合物微膠囊；

至少包括以下步驟：

(1)林蛙膠原蛋白多肽的制備方法

取篩選得到的林蛙皮，以料液比為1:8-1:12的比例浸泡于蒸餾水中，室溫浸泡24h；加入堿性蛋白酶，堿性蛋白酶的加入量為林蛙皮重量的1.5-3.0％，在40-60℃的恒溫條件下酶解反應(yīng)5-6小時(shí)，調(diào)節(jié)酶解液ph值為7.5-10.0；對(duì)酶解液在100℃條件下滅酶10-15min；冷卻至室溫，6000-8000r/min離心15-25min，取上清液即得林蛙膠原蛋白多肽粗提液；通過凝膠層析法分離純化，再經(jīng)真空冷凍干燥即得林蛙膠原蛋白多肽；

(2)林蛙膠原蛋白多肽鐵復(fù)合物的制備方法

將干燥的林蛙膠原蛋白多肽與蒸餾水按質(zhì)量比1:10-1:20加入到錐形瓶中，同時(shí)充分?jǐn)嚢枋蛊淙芑?；添加抗壞血酸到錐形瓶中，防止fe²⁺氧化，抗壞血酸質(zhì)量占林蛙膠原蛋白多肽溶液的1％-2％，攪拌使其溶解；再加入質(zhì)量占林蛙膠原蛋白多肽溶液1％-2％的fecl2，用濃度為10％-15％的naoh或hcl溶液調(diào)節(jié)其ph值為5.0-8.0；滴加結(jié)束后通過磁力攪拌在室溫下反應(yīng)10-30min，使用離心機(jī)，在5000-8000r/min的條件下離心10-20分鐘；離心結(jié)束后，取上層清液用無水乙醇處理，反應(yīng)液中迅速出現(xiàn)沉淀；靜置，過夜，使其完全沉淀；取沉淀物反復(fù)多次用無水乙醇處理，直至上層清液中無fe³⁺/fe²⁺檢出后，取沉淀物通過真空冷凍干燥，得無定型粉末，該物質(zhì)即為林蛙膠原蛋白多肽鐵復(fù)合物；

(3)林蛙膠原蛋白多肽鐵復(fù)合物微膠囊的制備方法

稱取海藻酸鈉，溶解于蒸餾水中，使得海藻酸鈉的濃度為1％-3％，在磁力攪拌器上進(jìn)行加熱磁力攪拌，攪拌溫度為50-70℃，直至完全溶解；緩緩地向壁材溶液中加入1％-2％的吐溫80作為乳化劑，混合均勻后加入壁材溶液1％-3％的林蛙膠原蛋白多肽鐵復(fù)合物，繼續(xù)攪拌直至混合均勻；稱取無水氯化鈣，溶解于蒸餾水中，使其濃度為2％-5％，攪拌均勻后制成凝固??；最后，采用微膠囊造粒機(jī)，通過注射器將上述配置好的乳化液以液滴狀緩慢滴入凝固浴中，固化，清水洗滌3-5次，真空冷凍干燥24h后得到林蛙膠原蛋白多肽鐵復(fù)合物微膠囊。

有益效果：

相比于第一代無機(jī)鐵補(bǔ)鐵劑、第二代有機(jī)鐵補(bǔ)鐵劑和第三代氨基酸螯合物補(bǔ)鐵劑，本發(fā)明所述的林蛙膠原蛋白多肽鐵復(fù)合物補(bǔ)鐵劑屬于第四代以血紅素鐵、多糖鐵、多肽鐵為代表的新型功能性補(bǔ)鐵劑。

研究結(jié)果表明，該款林蛙膠原蛋白鐵復(fù)合物具有抑菌性和抗氧化、抗貧血作用，且易于被機(jī)體吸收，在體內(nèi)不產(chǎn)生沉淀，無毒副作用，穩(wěn)定性高，對(duì)胃腸道刺激甚小。因此，是一款比較理想的補(bǔ)鐵劑。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的描述，但這些實(shí)施例僅用于解釋本發(fā)明，對(duì)本發(fā)明的范圍并不構(gòu)成任何限制。

實(shí)施例1：

(1)取篩選得到的林蛙皮10g，浸泡于100ml蒸餾水中，室溫浸泡24h；加入堿性蛋白酶2g，在50℃的恒溫條件下酶解反應(yīng)5小時(shí)，調(diào)節(jié)酶解液ph值為8.0；對(duì)酶解液在100℃條件下滅酶10min；冷卻至室溫，6000r/min離心15min，取上清液即得林蛙膠原蛋白多肽粗提液；通過凝膠層析法分離純化，再經(jīng)真空冷凍干燥即得林蛙膠原蛋白多肽；

(2)林蛙膠原蛋白多肽鐵復(fù)合物的制備方法：首先，稱取干燥的林蛙膠原蛋白多肽樣品0.5g，溶解于10ml蒸餾水中，同時(shí)充分?jǐn)嚢枋蛊淙芑?；添?.1g抗壞血酸，防止fe²⁺氧化。再加入0.1gfecl2，用濃度為10％的naoh或hcl溶液調(diào)節(jié)其ph值為6.0；滴加結(jié)束后通過磁力攪拌在室溫下反應(yīng)20min，使用離心機(jī)，在5000r/min的條件下離心15分鐘；離心結(jié)束后，取上層清液用無水乙醇處理，反應(yīng)液中迅速出現(xiàn)沉淀；靜置，過夜，使其完全沉淀；取沉淀物反復(fù)多次用無水乙醇處理，直至上層清液中無fe³⁺/fe²⁺檢出后，取沉淀物通過真空冷凍干燥，得無定型粉末，該物質(zhì)即為林蛙膠原蛋白多肽鐵復(fù)合物。

(3)林蛙膠原蛋白多肽鐵復(fù)合物微膠囊的制備方法：稱取海藻酸鈉2g，溶解于100ml蒸餾水中，在磁力攪拌器上進(jìn)行加熱磁力攪拌，攪拌溫度為70℃，直至完全溶解；緩緩地向壁材溶液中加入1g的吐溫80作為乳化劑，混合均勻后加入2g的林蛙膠原蛋白多肽鐵復(fù)合物，繼續(xù)攪拌直至混合均勻；準(zhǔn)確稱取3g的無水氯化鈣，溶解于100ml蒸餾水中，使其濃度為3％，攪拌均勻后制成凝固浴。最后，采用微膠囊造粒機(jī)，通過注射器將上述配置好的乳化液以液滴狀緩慢滴入凝固浴中，固化，清水洗滌3次，真空冷凍干燥24h后得到林蛙膠原蛋白多肽鐵復(fù)合物微膠囊。

實(shí)施例2：

(1)取篩選得到的林蛙皮12g，浸泡于100ml蒸餾水中，室溫浸泡24h；加入堿性蛋白酶3g，在50℃的恒溫條件下酶解反應(yīng)5小時(shí)，調(diào)節(jié)酶解液ph值為8.0；對(duì)酶解液在100℃條件下滅酶10min；冷卻至室溫，6000r/min離心20min，取上清液即得林蛙膠原蛋白多肽粗提液；通過凝膠層析法分離純化，再經(jīng)真空冷凍干燥即得林蛙膠原蛋白多肽；

(2)林蛙膠原蛋白多肽鐵復(fù)合物的制備方法：首先，稱取干燥的林蛙膠原蛋白多肽樣品1.0g，溶解于10ml蒸餾水中，同時(shí)充分?jǐn)嚢枋蛊淙芑?；添?.1g抗壞血酸，防止fe²⁺氧化。再加入0.1gfecl2，用濃度為10％的naoh或hcl溶液調(diào)節(jié)其ph值為7.0；滴加結(jié)束后通過磁力攪拌在室溫下反應(yīng)20min，使用離心機(jī)，在6000r/min的條件下離心20分鐘；離心結(jié)束后，取上層清液用無水乙醇處理，反應(yīng)液中迅速出現(xiàn)沉淀；靜置，過夜，使其完全沉淀；取沉淀物反復(fù)多次用無水乙醇處理，直至上層清液中無fe³⁺/fe²⁺檢出后，取沉淀物通過真空冷凍干燥，得無定型粉末，該物質(zhì)即為林蛙膠原蛋白多肽鐵復(fù)合物。

(3)林蛙膠原蛋白多肽鐵復(fù)合物微膠囊的制備方法：稱取海藻酸鈉1g，溶解于100ml蒸餾水中，在磁力攪拌器上進(jìn)行加熱磁力攪拌，攪拌溫度為70℃，直至完全溶解；緩緩地向壁材溶液中加入1g的吐溫80作為乳化劑，混合均勻后加入2g的林蛙膠原蛋白多肽鐵復(fù)合物，繼續(xù)攪拌直至混合均勻；準(zhǔn)確稱取4g的無水氯化鈣，溶解于100ml蒸餾水中，使其濃度為4％，攪拌均勻后制成凝固浴。最后，采用微膠囊造粒機(jī)，通過注射器將上述配置好的乳化液以液滴狀緩慢滴入凝固浴中，固化，清水洗滌3次，真空冷凍干燥24h后得到林蛙膠原蛋白多肽鐵復(fù)合物微膠囊。

實(shí)施例3：

(1)取篩選得到的林蛙皮9g，浸泡于100ml蒸餾水中，室溫浸泡24h；加入堿性蛋白酶2.5g，在55℃的恒溫條件下酶解反應(yīng)5.5小時(shí)，調(diào)節(jié)酶解液ph值為8.5；對(duì)酶解液在100℃條件下滅酶10min；冷卻至室溫，6000r/min離心15min，取上清液即得林蛙膠原蛋白多肽粗提液；通過凝膠層析法分離純化，再經(jīng)真空冷凍干燥即得林蛙膠原蛋白多肽；

(2)林蛙膠原蛋白多肽鐵復(fù)合物的制備方法：首先，稱取干燥的林蛙膠原蛋白多肽樣品0.7g，溶解于10ml蒸餾水中，同時(shí)充分?jǐn)嚢枋蛊淙芑?；添?.2g抗壞血酸，防止fe²⁺氧化。再加入0.1gfecl2，用濃度為10％的naoh或hcl溶液調(diào)節(jié)其ph值為6.0；滴加結(jié)束后通過磁力攪拌在室溫下反應(yīng)20min，使用離心機(jī)，在6000r/min的條件下離心15分鐘；離心結(jié)束后，取上層清液用無水乙醇處理，反應(yīng)液中迅速出現(xiàn)沉淀；靜置，過夜，使其完全沉淀；取沉淀物反復(fù)多次用無水乙醇處理，直至上層清液中無fe³⁺/fe²⁺檢出后，取沉淀物通過真空冷凍干燥，得無定型粉末，該物質(zhì)即為林蛙膠原蛋白多肽鐵復(fù)合物。

(3)林蛙膠原蛋白多肽鐵復(fù)合物微膠囊的制備方法：稱取海藻酸鈉2g，溶解于100ml蒸餾水中，在磁力攪拌器上進(jìn)行加熱磁力攪拌，攪拌溫度為70℃，直至完全溶解；緩緩地向壁材溶液中加入1g的吐溫80作為乳化劑，混合均勻后加入2g的林蛙膠原蛋白多肽鐵復(fù)合物，繼續(xù)攪拌直至混合均勻；準(zhǔn)確稱取3g的無水氯化鈣，溶解于100ml蒸餾水中，使其濃度為3％，攪拌均勻后制成凝固浴。最后，采用微膠囊造粒機(jī)，通過注射器將上述配置好的乳化液以液滴狀緩慢滴入凝固浴中，固化，清水洗滌3次，真空冷凍干燥24h后得到林蛙膠原蛋白多肽鐵復(fù)合物微膠囊。

實(shí)施例4：

(1)取篩選得到的林蛙皮10g，浸泡于100ml蒸餾水中，室溫浸泡24h；加入堿性蛋白酶2.5g，在60℃的恒溫條件下酶解反應(yīng)5小時(shí)，調(diào)節(jié)酶解液ph值為8.0；對(duì)酶解液在100℃條件下滅酶10min；冷卻至室溫，6000r/min離心15min，取上清液即得林蛙膠原蛋白多肽粗提液；通過凝膠層析法分離純化，再經(jīng)真空冷凍干燥即得林蛙膠原蛋白多肽；

(2)林蛙膠原蛋白多肽鐵復(fù)合物的制備方法：首先，稱取干燥的林蛙膠原蛋白多肽樣品0.8g，溶解于10ml蒸餾水中，同時(shí)充分?jǐn)嚢枋蛊淙芑?；添?.1g抗壞血酸，防止fe²⁺氧化。再加入0.1gfecl2，用濃度為10％的naoh或hcl溶液調(diào)節(jié)其ph值為7.0；滴加結(jié)束后通過磁力攪拌在室溫下反應(yīng)20min，使用離心機(jī)，在5500r/min的條件下離心15分鐘；離心結(jié)束后，取上層清液用無水乙醇處理，反應(yīng)液中迅速出現(xiàn)沉淀；靜置，過夜，使其完全沉淀；取沉淀物反復(fù)多次用無水乙醇處理，直至上層清液中無fe³⁺/fe²⁺檢出后，取沉淀物通過真空冷凍干燥，得無定型粉末，該物質(zhì)即為林蛙膠原蛋白多肽鐵復(fù)合物。

(3)林蛙膠原蛋白多肽鐵復(fù)合物微膠囊的制備方法：稱取海藻酸鈉3g，溶解于100ml蒸餾水中，在磁力攪拌器上進(jìn)行加熱磁力攪拌，攪拌溫度為60℃，直至完全溶解；緩緩地向壁材溶液中加入1.5g的吐溫80作為乳化劑，混合均勻后加入3g的林蛙膠原蛋白多肽鐵復(fù)合物，繼續(xù)攪拌直至混合均勻；準(zhǔn)確稱取5g的無水氯化鈣，溶解于100ml蒸餾水中，使其濃度為5％，攪拌均勻后制成凝固浴。最后，采用微膠囊造粒機(jī)，通過注射器將上述配置好的乳化液以液滴狀緩慢滴入凝固浴中，固化，清水洗滌4次，真空冷凍干燥24h后得到林蛙膠原蛋白多肽鐵復(fù)合物微膠囊。