本發(fā)明屬于食品加工領(lǐng)域，具體涉及一種可抑制黃曲霉的食品添加劑，還涉及一種上述食品添加劑的制備方法。
背景技術(shù)：
黃曲霉，半知菌類，一種常見腐生真菌。多見于發(fā)霉的糧食、糧制品及其它霉腐的有機(jī)物上。黃曲霉菌落生長較快，結(jié)構(gòu)疏松，表面灰綠色，背面無色或略呈褐色。菌體有許多復(fù)雜的分枝菌絲構(gòu)成。營養(yǎng)菌絲具有分隔；氣生菌絲的一部分形成長而粗糙的分生孢子梗，頂端產(chǎn)生燒瓶形或近球形頂囊，表面產(chǎn)生許多小梗(一般為雙層)，小梗上著生成串的表面粗糙的球形分生孢子。分生孢子梗、頂囊、小梗和分生孢子合成孢子頭，可用于產(chǎn)生淀粉酶、蛋白酶和磷酸二酯酶等，也是釀造工業(yè)中的常見菌種。
1993年黃曲霉毒素被世界衛(wèi)生組織(who)的癌癥研究機(jī)構(gòu)劃定為1類致癌物，是一種毒性極強(qiáng)的劇毒物質(zhì)。黃曲霉毒素的危害性在于對(duì)人及動(dòng)物肝臟組織有破壞作用，嚴(yán)重時(shí)，可導(dǎo)致肝癌甚至死亡。黃曲霉毒素中毒主要對(duì)動(dòng)物肝臟的傷害，受傷害的個(gè)體因動(dòng)物種類，年齡，性別和營養(yǎng)狀態(tài)而異。研究結(jié)果表明，黃曲霉毒素可導(dǎo)致肝功能下降，降低牛奶產(chǎn)量和產(chǎn)蛋率，并使動(dòng)物的免疫力降低，易受有害微生物的感染。此外，長期食用含低濃度黃曲霉毒素的飼料也可導(dǎo)致胚胎內(nèi)中毒。通常年幼的動(dòng)物對(duì)黃曲霉毒素更敏感。黃曲霉毒素的臨床表現(xiàn)為消化系統(tǒng)功能紊亂，降低生育能力，降低飼料利用率，貧血等。黃曲霉毒素不僅能夠使奶牛的產(chǎn)奶量下降，而且還使牛奶中含有轉(zhuǎn)型的黃曲霉毒素m1和m2。據(jù)美國農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)學(xué)家統(tǒng)計(jì)，由于食用黃曲霉毒素污染的飼料，每年至少要使美國畜牧業(yè)遭受10％的經(jīng)濟(jì)損失。在中國，黃曲霉同樣給畜牧業(yè)帶來嚴(yán)重的損失。因此，開發(fā)出一種能抑制黃曲霉的食品添加劑具有重要的研發(fā)價(jià)值和市場價(jià)值。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的之一是提供一種可抑制黃曲霉的食品添加劑，以有效抑制黃曲霉菌。
為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案，一種可抑制黃曲霉的食品添加劑的制備方法，包括以下步驟：
(1)將培養(yǎng)至穩(wěn)定期的小球藻培養(yǎng)液離心、棄上清液收集沉淀的小球藻細(xì)胞，向收集的小球藻內(nèi)加入重量為收集的小球藻質(zhì)量的5-10％的蒸餾水，震蕩混勻，放入超低溫冰箱中存放4-6小時(shí)，取出，放水浴振蕩器中30-40℃溶解20-30分鐘，再超聲波處理30-40min；
(2)將綠茶用開水浸泡4-6小時(shí)，過濾取綠茶浸泡液；
(3)將海水中打撈的滸苔清洗干凈，晾干或烘干，粉碎，過80目篩，得滸苔粉；
(4)將新鮮的大蒜去皮、搗碎，得大蒜泥；
(5)按照配比稱取以下質(zhì)量份數(shù)的各組分：藿香18-25份、牡丹皮4-5份、土荊皮3-5份、姜末2-5份、魚腥草9-12份、淡竹葉9-15份、馬齒莧6-8份、步驟(1)所得到的小球藻15-20份、步驟(2)所得到的綠茶浸泡液40-50份、步驟(3)所得到的滸苔粉15-20份、步驟(4)所得到的大蒜泥1-3份；
(6)將稱量好的牡丹皮和土荊皮用清水浸泡至藥材變軟；
(7)將稱量好的藿香、姜末、魚腥草、淡竹葉和馬齒莧分別研細(xì)，與步驟(6)浸泡所得的牡丹皮和土荊皮混合，加入適量清水，文火煎煮至剩余的液體量為初始液體總量的30％-40％，過濾取煎煮液；
(8)將步驟(7)所得的煎煮液與稱量好的步驟(1)所得到的小球藻、步驟(2)所得到的綠茶浸泡液、步驟(3)所得到的滸苔粉混勻，放置于超臨界萃取儀中的萃取釜中，利用二氧化碳作為介質(zhì)進(jìn)行萃取，萃取釜壓力為40mpa，萃取溫度為45℃，分離器壓力12mpa，分離器溫度為70℃，萃取2小時(shí)，得到萃取液；
(9)將步驟(4)所得到的大蒜泥與步驟(8)所得的萃取液混勻，然后放振蕩器中以100-150r/min的轉(zhuǎn)速常溫震蕩12h；
(10)將步驟(9)所得的混合物減壓濃縮，濃縮至60℃時(shí)測密度為1.14～1.18的稠膏狀流浸膏，即得。
步驟(1)中，將離心收集的小球藻培養(yǎng)液放入超低溫冰箱中存放4-6小時(shí)然后取出放水浴振蕩器中30-40℃溶解20-30分鐘的作用是有利于將大部分小球藻細(xì)胞壁破碎，進(jìn)而有利于使小球藻細(xì)胞內(nèi)的有效成分被釋放出來進(jìn)而發(fā)揮其相應(yīng)的作用，超聲波處理30-40min的作用是使小球藻細(xì)胞壁更充分破壁。將綠茶用開水浸泡的作用是充分浸出綠茶中的殺菌抑菌成分。將滸苔清洗、晾干或烘干、粉碎的作用是有利于后續(xù)步驟中充分萃取出滸苔中的有效成分。將大蒜搗碎的作用是增大其與其他組分的接觸面積，有利于各組分之間更好的反應(yīng)。牡丹皮和土荊皮用清水浸泡至藥材變軟的作用是有利于后續(xù)步驟中充分煎出牡丹皮和土荊皮中的有效成分。將藿香、姜末、魚腥草、淡竹葉和馬齒莧分別研細(xì)并與浸泡后的牡丹皮和土荊皮一起煎煮的作用是使上述各組分充分煎出和反應(yīng)，并能改善藥物的刺激作用。步驟(8)的萃取步驟可以充分萃取出小球藻和滸苔粉的有效成分，并與步驟(7)所得的煎煮液、綠茶浸泡液充分結(jié)合和反應(yīng)，進(jìn)而有利于發(fā)揮各組分之間的協(xié)同效果。將步驟(4)所得到的大蒜泥與步驟(8)所得的萃取液混勻、然后放振蕩器中以100-150r/min的轉(zhuǎn)速常溫震蕩12h的作用是，使大蒜泥與步驟(8)所得的萃取液充分混合和反應(yīng)，所制得的產(chǎn)品能對(duì)黃曲霉菌發(fā)揮很好的抑制作用。
優(yōu)選地，步驟(5)中，稱取的各組分的質(zhì)量份數(shù)如下：藿香18份、牡丹皮5份、土荊皮5份、姜末3份、魚腥草9份、淡竹葉12份、馬齒莧8份、步驟(1)所得到的小球藻20份、步驟(2)所得到的綠茶浸泡液45份、步驟(3)所得到的滸苔粉15份、步驟(4)所得到的大蒜泥2份。
優(yōu)選地，步驟(5)中，稱取的各組分的質(zhì)量份數(shù)如下：藿香20份、牡丹皮4份、土荊皮4份、姜末4份、魚腥草12份、淡竹葉9份、馬齒莧6份、步驟(1)所得到的小球藻20份、步驟(2)所得到的綠茶浸泡液40份、步驟(3)所得到的滸苔粉18份、步驟(4)所得到的大蒜泥1份。
優(yōu)選地，步驟(5)中，稱取的各組分的質(zhì)量份數(shù)如下：藿香21份、牡丹皮4份、土荊皮5份、姜末3份、魚腥草10份、淡竹葉10份、馬齒莧7份、步驟(1)所得到的小球藻16份、步驟(2)所得到的綠茶浸泡液50份、步驟(3)所得到的滸苔粉20份、步驟(4)所得到的大蒜泥3份。
優(yōu)選地，步驟(5)中，稱取的各組分的質(zhì)量份數(shù)如下：藿香24份、牡丹皮5份、土荊皮3份、姜末5份、魚腥草9份、淡竹葉14份、馬齒莧7份、步驟(1)所得到的小球藻18份、步驟(2)所得到的綠茶浸泡液48份、步驟(3)所得到的滸苔粉16份、步驟(4)所得到的大蒜泥2份。
優(yōu)選地，步驟(5)中，稱取的各組分的質(zhì)量份數(shù)如下：藿香25份、牡丹皮5份、土荊皮4份、姜末2份、魚腥草11份、淡竹葉15份、馬齒莧6份、步驟(1)所得到的小球藻15份、步驟(2)所得到的綠茶浸泡液45份、步驟(3)所得到的滸苔粉20份、步驟(4)所得到的大蒜泥3份。
一種上述制備方法所制得的可抑制黃曲霉的食品添加劑。
用法用量：每1kg食品或飼料中加入2-5g本發(fā)明所制得的可抑制黃曲霉的食品添加劑。
本發(fā)明的各原料組分均為綠色天然原料，對(duì)動(dòng)物和人無毒副作用，可有效抑制黃曲霉菌，因此可作為優(yōu)良的食品添加劑。以上述比例、按本發(fā)明的制備方法所制得的食品添加劑能很好的發(fā)揮各組分的殺菌抑菌效果，對(duì)黃曲霉菌具有顯著的抑制效果，添加到食物或飼料中可以減少黃曲霉菌的危害，且食品添加劑中的各組分不僅天然無毒，還具有一定的保健作用，有利于人體或養(yǎng)殖動(dòng)物的健康。在養(yǎng)殖動(dòng)物的飼料中添加本發(fā)明的食品添加劑，可降低黃曲霉菌的影響，提高養(yǎng)殖動(dòng)物的免疫力，提高養(yǎng)殖收益。
具體來說本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比可產(chǎn)生如下積極效果：
(1)步驟(1)中，將離心收集的小球藻培養(yǎng)液放入超低溫冰箱中存放4-6小時(shí)然后取出放水浴振蕩器中30-40℃溶解20-30分鐘的作用是有利于將大部分小球藻細(xì)胞壁破碎，進(jìn)而有利于使小球藻細(xì)胞內(nèi)的有效成分被釋放出來進(jìn)而發(fā)揮其相應(yīng)的作用，超聲波處理30-40min的作用是使小球藻細(xì)胞壁更充分破壁。將綠茶用開水浸泡的作用是充分浸出綠茶中的殺菌抑菌成分。將滸苔清洗、晾干或烘干、粉碎的作用是有利于后續(xù)步驟中充分萃取出滸苔中的有效成分。將大蒜搗碎的作用是增大其與其他組分的接觸面積，有利于各組分之間更好的反應(yīng)。牡丹皮和土荊皮用清水浸泡至藥材變軟的作用是有利于后續(xù)步驟中充分煎出牡丹皮和土荊皮中的有效成分。將藿香、姜末、魚腥草、淡竹葉和馬齒莧分別研細(xì)并與浸泡后的牡丹皮和土荊皮一起煎煮的作用是使上述各組分充分煎出和反應(yīng)，并能改善藥物的刺激作用。步驟(8)的萃取步驟可以充分萃取出小球藻和滸苔粉的有效成分，并與步驟(7)所得的煎煮液、綠茶浸泡液充分結(jié)合和反應(yīng)，進(jìn)而有利于發(fā)揮各組分之間的協(xié)同效果。將步驟(4)所得到的大蒜泥與步驟(8)所得的萃取液混勻、然后放振蕩器中以100-150r/min的轉(zhuǎn)速常溫震蕩12h的作用是，使大蒜泥與步驟(8)所得的萃取液充分混合和反應(yīng)，所制得的產(chǎn)品能對(duì)黃曲霉菌發(fā)揮很好的抑制作用。
(2)本發(fā)明的各原料組分均為綠色天然原料，對(duì)動(dòng)物和人無毒副作用，可有效抑制黃曲霉菌，因此可作為優(yōu)良的食品添加劑。以上述比例、按本發(fā)明的制備方法所制得的食品添加劑能很好的發(fā)揮各組分的殺菌抑菌效果，對(duì)黃曲霉菌具有顯著的抑制效果，添加到食物或飼料中可以減少黃曲霉菌的危害，且食品添加劑中的各組分不僅天然無毒，還具有一定的保健作用，有利于人體或養(yǎng)殖動(dòng)物的健康。在養(yǎng)殖動(dòng)物的飼料中添加本發(fā)明的食品添加劑，可降低黃曲霉菌的影響，提高養(yǎng)殖動(dòng)物的免疫力，提高養(yǎng)殖收益。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1
一種可抑制黃曲霉的食品添加劑的制備方法，包括以下步驟：
(1)將培養(yǎng)至穩(wěn)定期的小球藻培養(yǎng)液以8000r/min的轉(zhuǎn)速離心5min、棄上清液收集沉淀的小球藻細(xì)胞，向收集的小球藻內(nèi)加入重量為收集的小球藻質(zhì)量的6％的蒸餾水，震蕩混勻，放入超低溫冰箱中存放4-6小時(shí)，取出，放水浴振蕩器中30-40℃溶解20-30分鐘，再超聲波處理30-40min使小球藻細(xì)胞壁破碎；
(2)將綠茶用開水浸泡4-6小時(shí)，加入的開水的重量為綠茶重量的30倍，過濾取綠茶浸泡液；
(3)將海水中打撈的滸苔清洗干凈，晾干或烘干，粉碎，過80目篩，得滸苔粉；
(4)將新鮮的大蒜去皮、搗碎，得大蒜泥；
(5)按照配比稱取以下質(zhì)量份數(shù)的各組分：藿香18份、牡丹皮5份、土荊皮5份、姜末3份、魚腥草9份、淡竹葉12份、馬齒莧8份、步驟(1)所得到的小球藻20份、步驟(2)所得到的綠茶浸泡液45份、步驟(3)所得到的滸苔粉15份、步驟(4)所得到的大蒜泥2份；
(6)將稱量好的牡丹皮和土荊皮用清水浸泡至藥材變軟；
(7)將稱量好的藿香、姜末、魚腥草、淡竹葉和馬齒莧分別研細(xì)，與步驟(6)浸泡所得的牡丹皮和土荊皮混合，加入適量清水(加入的清水的質(zhì)量為藿香、姜末、魚腥草、淡竹葉、馬齒莧牡丹皮和土荊皮總質(zhì)量的25倍)，文火煎煮至剩余的液體量為初始液體總量的30％-40％，過濾取煎煮液；
(8)將步驟(7)所得的煎煮液與稱量好的步驟(1)所得到的小球藻、步驟(2)所得到的綠茶浸泡液、步驟(3)所得到的滸苔粉混勻，放置于超臨界萃取儀中的萃取釜中，利用二氧化碳作為介質(zhì)進(jìn)行萃取，萃取釜壓力為40mpa，萃取溫度為45℃，分離器壓力12mpa，分離器溫度為70℃，萃取2小時(shí)，得到萃取液；
(9)將步驟(4)所得到的大蒜泥與步驟(8)所得的萃取液混勻，然后放振蕩器中以100-150r/min的轉(zhuǎn)速常溫震蕩12h；
(10)將步驟(9)所得的混合物減壓濃縮，濃縮至60℃時(shí)測密度為1.14～1.18的稠膏狀流浸膏，即得。
一種上述制備方法所制得的可抑制黃曲霉的食品添加劑。
實(shí)施例2
一種可抑制黃曲霉的食品添加劑的制備方法，包括以下步驟：
(1)將培養(yǎng)至穩(wěn)定期的小球藻培養(yǎng)液放入離心機(jī)中以8000r/min的轉(zhuǎn)速離心5min、棄上清液收集沉淀的小球藻細(xì)胞，向收集的小球藻內(nèi)加入重量為收集的小球藻質(zhì)量的10％的蒸餾水，震蕩混勻，放入超低溫冰箱中存放4-6小時(shí)，取出，放水浴振蕩器中30-40℃溶解20-30分鐘，再超聲波處理30-40min使小球藻細(xì)胞壁破碎；
(2)將綠茶用開水浸泡4-6小時(shí)，加入的開水的重量為綠茶重量的30倍，過濾取綠茶浸泡液；
(3)將海水中打撈的滸苔清洗干凈，晾干或烘干，粉碎，過80目篩，得滸苔粉；
(4)將新鮮的大蒜去皮、搗碎，得大蒜泥；
(5)按照配比稱取以下質(zhì)量份數(shù)的各組分：藿香20份、牡丹皮4份、土荊皮4份、姜末4份、魚腥草12份、淡竹葉9份、馬齒莧6份、步驟(1)所得到的小球藻20份、步驟(2)所得到的綠茶浸泡液40份、步驟(3)所得到的滸苔粉18份、步驟(4)所得到的大蒜泥1份；
(6)將稱量好的牡丹皮和土荊皮用清水浸泡至藥材變軟；
(7)將稱量好的藿香、姜末、魚腥草、淡竹葉和馬齒莧分別研細(xì)，與步驟(6)浸泡所得的牡丹皮和土荊皮混合，加入適量清水(加入的清水的質(zhì)量為藿香、姜末、魚腥草、淡竹葉、馬齒莧牡丹皮和土荊皮總質(zhì)量的25倍)，文火煎煮至剩余的液體量為初始液體總量的30％-40％，過濾取煎煮液；
(8)將步驟(7)所得的煎煮液與稱量好的步驟(1)所得到的小球藻、步驟(2)所得到的綠茶浸泡液、步驟(3)所得到的滸苔粉混勻，放置于超臨界萃取儀中的萃取釜中，利用二氧化碳作為介質(zhì)進(jìn)行萃取，萃取釜壓力為40mpa，萃取溫度為45℃，分離器壓力12mpa，分離器溫度為70℃，萃取2小時(shí)，得到萃取液；
(9)將步驟(4)所得到的大蒜泥與步驟(8)所得的萃取液混勻，然后放振蕩器中以100-150r/min的轉(zhuǎn)速常溫震蕩12h；
(10)將步驟(9)所得的混合物減壓濃縮，濃縮至60℃時(shí)測密度為1.14～1.18的稠膏狀流浸膏，即得。
一種上述制備方法所制得的可抑制黃曲霉的食品添加劑。
實(shí)施例3
一種可抑制黃曲霉的食品添加劑的制備方法，包括以下步驟：
(1)將培養(yǎng)至穩(wěn)定期的小球藻培養(yǎng)液放入離心機(jī)中以8000r/min的轉(zhuǎn)速離心5min、棄上清液收集沉淀的小球藻細(xì)胞，向收集的小球藻內(nèi)加入重量為收集的小球藻質(zhì)量的8％的蒸餾水，震蕩混勻，放入超低溫冰箱中存放4-6小時(shí)，取出，放水浴振蕩器中30-40℃溶解20-30分鐘，再超聲波處理30-40min使小球藻細(xì)胞壁破碎；
(2)將綠茶用開水浸泡4-6小時(shí)，加入的開水的重量為綠茶重量的30倍，過濾取綠茶浸泡液；
(3)將海水中打撈的滸苔清洗干凈，晾干或烘干，粉碎，過80目篩，得滸苔粉；
(4)將新鮮的大蒜去皮、搗碎，得大蒜泥；
(5)按照配比稱取以下質(zhì)量份數(shù)的各組分：藿香21份、牡丹皮4份、土荊皮5份、姜末3份、魚腥草10份、淡竹葉10份、馬齒莧7份、步驟(1)所得到的小球藻16份、步驟(2)所得到的綠茶浸泡液50份、步驟(3)所得到的滸苔粉20份、步驟(4)所得到的大蒜泥3份；
(6)將稱量好的牡丹皮和土荊皮用清水浸泡至藥材變軟；
(7)將稱量好的藿香、姜末、魚腥草、淡竹葉和馬齒莧分別研細(xì)，與步驟(6)浸泡所得的牡丹皮和土荊皮混合，加入適量清水(加入的清水的質(zhì)量為藿香、姜末、魚腥草、淡竹葉、馬齒莧牡丹皮和土荊皮總質(zhì)量的25倍)，文火煎煮至剩余的液體量為初始液體總量的30％-40％，過濾取煎煮液；
(8)將步驟(7)所得的煎煮液與稱量好的步驟(1)所得到的小球藻、步驟(2)所得到的綠茶浸泡液、步驟(3)所得到的滸苔粉混勻，放置于超臨界萃取儀中的萃取釜中，利用二氧化碳作為介質(zhì)進(jìn)行萃取，萃取釜壓力為40mpa，萃取溫度為45℃，分離器壓力12mpa，分離器溫度為70℃，萃取2小時(shí)，得到萃取液；
(9)將步驟(4)所得到的大蒜泥與步驟(8)所得的萃取液混勻，然后放振蕩器中以100-150r/min的轉(zhuǎn)速常溫震蕩12h；
(10)將步驟(9)所得的混合物減壓濃縮，濃縮至60℃時(shí)測密度為1.14～1.18的稠膏狀流浸膏，即得。
一種上述制備方法所制得的可抑制黃曲霉的食品添加劑。
實(shí)施例4
一種可抑制黃曲霉的食品添加劑的制備方法，包括以下步驟：
(1)將培養(yǎng)至穩(wěn)定期的小球藻培養(yǎng)液放入離心機(jī)中以8000r/min的轉(zhuǎn)速離心5min、棄上清液收集沉淀的小球藻細(xì)胞，向收集的小球藻內(nèi)加入重量為收集的小球藻質(zhì)量的6％的蒸餾水，震蕩混勻，放入超低溫冰箱中存放4-6小時(shí)，取出，放水浴振蕩器中30-40℃溶解20-30分鐘，再超聲波處理30-40min使小球藻細(xì)胞壁破碎；
(2)將綠茶用開水浸泡4-6小時(shí)，加入的開水的重量為綠茶重量的30倍，過濾取綠茶浸泡液；
(3)將海水中打撈的滸苔清洗干凈，晾干或烘干，粉碎，過80目篩，得滸苔粉；
(4)將新鮮的大蒜去皮、搗碎，得大蒜泥；
(5)按照配比稱取以下質(zhì)量份數(shù)的各組分：藿香24份、牡丹皮5份、土荊皮3份、姜末5份、魚腥草9份、淡竹葉14份、馬齒莧7份、步驟(1)所得到的小球藻18份、步驟(2)所得到的綠茶浸泡液48份、步驟(3)所得到的滸苔粉16份、步驟(4)所得到的大蒜泥2份；
(6)將稱量好的牡丹皮和土荊皮用清水浸泡至藥材變軟；
(7)將稱量好的藿香、姜末、魚腥草、淡竹葉和馬齒莧分別研細(xì)，與步驟(6)浸泡所得的牡丹皮和土荊皮混合，加入適量清水(加入的清水的質(zhì)量為藿香、姜末、魚腥草、淡竹葉、馬齒莧牡丹皮和土荊皮總質(zhì)量的25倍)，文火煎煮至剩余的液體量為初始液體總量的30％-40％，過濾取煎煮液；
(8)將步驟(7)所得的煎煮液與稱量好的步驟(1)所得到的小球藻、步驟(2)所得到的綠茶浸泡液、步驟(3)所得到的滸苔粉混勻，放置于超臨界萃取儀中的萃取釜中，利用二氧化碳作為介質(zhì)進(jìn)行萃取，萃取釜壓力為40mpa，萃取溫度為45℃，分離器壓力12mpa，分離器溫度為70℃，萃取2小時(shí)，得到萃取液；
(9)將步驟(4)所得到的大蒜泥與步驟(8)所得的萃取液混勻，然后放振蕩器中以100-150r/min的轉(zhuǎn)速常溫震蕩12h；
(10)將步驟(9)所得的混合物減壓濃縮，濃縮至60℃時(shí)測密度為1.14～1.18的稠膏狀流浸膏，即得。
一種上述制備方法所制得的可抑制黃曲霉的食品添加劑。
實(shí)施例5
一種可抑制黃曲霉的食品添加劑的制備方法，包括以下步驟：
(1)將培養(yǎng)至穩(wěn)定期的小球藻培養(yǎng)液放入離心機(jī)中以8000r/min的轉(zhuǎn)速離心5min、棄上清液收集沉淀的小球藻細(xì)胞，向收集的小球藻內(nèi)加入重量為收集的小球藻質(zhì)量的5％的蒸餾水，震蕩混勻，放入超低溫冰箱中存放4-6小時(shí)，取出，放水浴振蕩器中30-40℃溶解20-30分鐘，再超聲波處理30-40min使小球藻細(xì)胞壁破碎；
(2)將綠茶用開水浸泡4-6小時(shí)，加入的開水的重量為綠茶重量的30倍，過濾取綠茶浸泡液；
(3)將海水中打撈的滸苔清洗干凈，晾干或烘干，粉碎，過80目篩，得滸苔粉；
(4)將新鮮的大蒜去皮、搗碎，得大蒜泥；
(5)按照配比稱取以下質(zhì)量份數(shù)的各組分：藿香25份、牡丹皮5份、土荊皮4份、姜末2份、魚腥草11份、淡竹葉15份、馬齒莧6份、步驟(1)所得到的小球藻15份、步驟(2)所得到的綠茶浸泡液45份、步驟(3)所得到的滸苔粉20份、步驟(4)所得到的大蒜泥3份；
(6)將稱量好的牡丹皮和土荊皮用清水浸泡至藥材變軟；
(7)將稱量好的藿香、姜末、魚腥草、淡竹葉和馬齒莧分別研細(xì)，與步驟(6)浸泡所得的牡丹皮和土荊皮混合，加入適量清水(加入的清水的質(zhì)量為藿香、姜末、魚腥草、淡竹葉、馬齒莧牡丹皮和土荊皮總質(zhì)量的25倍)，文火煎煮至剩余的液體量為初始液體總量的30％-40％，過濾取煎煮液；
(8)將步驟(7)所得的煎煮液與稱量好的步驟(1)所得到的小球藻、步驟(2)所得到的綠茶浸泡液、步驟(3)所得到的滸苔粉混勻，放置于超臨界萃取儀中的萃取釜中，利用二氧化碳作為介質(zhì)進(jìn)行萃取，萃取釜壓力為40mpa，萃取溫度為45℃，分離器壓力12mpa，分離器溫度為70℃，萃取2小時(shí)，得到萃取液；
(9)將步驟(4)所得到的大蒜泥與步驟(8)所得的萃取液混勻，然后放振蕩器中以100-150r/min的轉(zhuǎn)速常溫震蕩12h；
(10)將步驟(9)所得的混合物減壓濃縮，濃縮至60℃時(shí)測密度為1.14～1.18的稠膏狀流浸膏，即得。
一種上述制備方法所制得的可抑制黃曲霉的食品添加劑。
抑菌實(shí)驗(yàn)
培養(yǎng)基：察氏培養(yǎng)基，加熱溶解，分裝后121℃滅菌15-20min。
菌種為：黃曲霉菌(atcc28539)，購自北納創(chuàng)聯(lián)生物技術(shù)研究院。
菌懸液制備：用接種環(huán)挑取3-4環(huán)培養(yǎng)5天左右的黃曲霉菌孢子，置于10ml帶無菌玻璃珠的無菌水中，采用活菌計(jì)數(shù)法測定菌數(shù)，制成菌體濃度為106-107cfu/ml的均勻菌懸液。
抑菌圈實(shí)驗(yàn)：取0.1ml菌懸液滴入察氏培養(yǎng)基，涂布均勻，即為含菌平板。實(shí)驗(yàn)組處理如下：用滅菌去離子水分別將本發(fā)明實(shí)施例1-實(shí)施例5所制得的可抑制黃曲霉的食品添加劑溶解稀釋至質(zhì)量百分比為2％，將滅菌濾紙片(d＝6mm)分別用質(zhì)量百分比為2％的本發(fā)明實(shí)施例1-實(shí)施例5所制得的可抑制黃曲霉的食品添加劑浸泡1h，取出分別貼于各處理組的含菌平板的瓊脂表面中央。對(duì)照組處理如下：將滅菌濾紙片(d＝6mm)用滅菌去離子水浸泡1h，取出貼于含菌平板的瓊脂表面中央。每個(gè)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組分別設(shè)置3個(gè)平行。將各處理組的培養(yǎng)皿置于28℃條件下恒溫培養(yǎng)，倒置培養(yǎng)5天后用游標(biāo)卡尺(精度為0.02mm)測量抑菌圈大小，計(jì)算平均值，并記錄。
無抑菌圈以“-”表示；
抑菌圈直徑7-9mm為輕度抑菌，以“+”表示；
抑菌圈直徑10～15mm為中度抑菌，以“++”表示；
抑菌圈直徑＞15mm為高度抑菌，以“+++”表示；
實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1：
表1本發(fā)明的可抑制黃曲霉的食品添加劑對(duì)黃曲霉的抑制效果
由表1可知，本發(fā)明的可抑制黃曲霉的食品添加劑對(duì)黃曲霉具有顯著的抑菌效果。
最低抑菌濃度實(shí)驗(yàn)
培養(yǎng)基：察氏培養(yǎng)基，加熱溶解，分裝后121℃滅菌15-20min。
菌種為：黃曲霉菌(atcc28539)，購自北納創(chuàng)聯(lián)生物技術(shù)研究院。
菌懸液制備：用接種環(huán)挑取3-4環(huán)培養(yǎng)5天左右的黃曲霉菌孢子，置于10ml帶無菌玻璃珠的無菌水中，采用活菌計(jì)數(shù)法測定菌數(shù)，制成菌體濃度為106-107cfu/ml的均勻菌懸液。
將本發(fā)明實(shí)施例1-實(shí)施例5的可抑制黃曲霉的食品添加劑用滅菌去離子水分別進(jìn)行50倍、100倍、200倍、400倍、800倍、1000倍、1500倍稀釋。取0.1ml菌懸液滴入已滅菌冷卻凝固的培養(yǎng)基中，涂布均勻，得含菌平板。吸取各稀釋液0.1ml，于無菌條件下涂布到含菌平板的瓊脂表面，倒置培養(yǎng)5天(培養(yǎng)溫度28℃)，以不生長菌的樣品的濃度為可抑制黃曲霉的食品添加劑的最低抑菌濃度(mic)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見下表(表2)：
表2本發(fā)明的可抑制黃曲霉的食品添加劑對(duì)黃曲霉的mic
以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出：對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)，這些改進(jìn)應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。