本發(fā)明涉及改善睡眠保健食品領(lǐng)域，具體涉及一種提高五味子改善睡眠功效的方法。

背景技術(shù)：

人一生中三分之一時(shí)間都在睡眠中度過，優(yōu)質(zhì)充足的睡眠有助于保護(hù)大腦和神經(jīng)中樞、恢復(fù)體力、延緩衰老和增強(qiáng)免疫等，如睡眠不足或睡眠質(zhì)量低會(huì)引起人體內(nèi)分泌系統(tǒng)失調(diào)、認(rèn)知功能下降、情緒低迷等，長此以往甚至誘導(dǎo)高血壓、神經(jīng)衰弱、抑郁癥等疾病病發(fā)。世界衛(wèi)生組織（who）在全球調(diào)查表明27%的人存在睡眠問題，在中國的調(diào)查顯示我國人民高達(dá)42.7%存在睡眠問題，遠(yuǎn)高于國際平均水平，如何提高人們睡眠質(zhì)量是急需研究的重要社會(huì)問題。

五味子是一種傳統(tǒng)中藥植物，含有五味子素、維生素c、樹脂、鞣質(zhì)及少量糖類。具有收斂固澀、益氣生津、補(bǔ)腎寧心、鎮(zhèn)靜促眠的作用。但五味子過多使用容易引起胃痛、胃部泛酸，帶來胃部燒灼不適感。

目前許多研究表明多肽具有多種生物學(xué)功能，袁文鵬等人研究表明多肽具有潛在改善睡眠功效（響應(yīng)面法優(yōu)化仿刺參酶解工藝及其改善睡眠活性的研究，袁文鵬）。從油菜籽中制備的菜籽多肽具有一定改善睡眠功效且無副作用，將其與五味子混合使用有利于減少五味子的用量，減少胃部燒灼不適感的出現(xiàn)率，同時(shí)協(xié)同發(fā)揮改善睡眠功能。但目前關(guān)于兩者共同使用以提高五味子改善睡眠作用方面的研究，未見過報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是為了提供一種在降低五味子用量同時(shí)提高其改善睡眠功效的方法。

為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，其具體的技術(shù)方案如下：

菜籽多肽與五味子水提物，其為五味子水提物和菜籽多肽上清液按2：8~8：2（固形物質(zhì)量比，m/m）比例混合后干燥備用。

菜籽多肽與五味子水提物的制備方法，按照下述步驟進(jìn)行：

（1）五味子水提物的制備

將五味子果實(shí)于105℃干燥2h后粉碎過篩，按比例添加蒸餾水，在85℃下反復(fù)浸泡，離心后合并所有上清液備用。

（2）菜籽多肽的制備方法

通過堿溶酸沉的制備工藝從菜籽泊中提取菜籽蛋白，在合適條件下用復(fù)合蛋白酶酶解菜籽蛋白制備菜籽多肽，經(jīng)滅酶、離心取上清備用。

（3）混合干燥

將上述五味子水提物和菜籽多肽溶液按2：8~8：2（固形物質(zhì)量比）比例混合后干燥，也可以采用分別將五味子水提物和菜籽多肽溶液干燥為粉末后按比例混合。其中干燥方法可以為冷凍干燥、噴霧干燥等。

其中所述的五味子水提物粉末的制備方法，按照下述步驟進(jìn)行：

將五味子果實(shí)于105℃烘箱中干燥2h，之后粉碎過60目篩得五味子粉。稱取適量五味子粉按10%（m/v）底物濃度加蒸餾水，常壓下85℃中浸泡1h，離心（4000r/min，15min）后收集上清液，重復(fù)此過程2輪合并上清液備用。

菜籽多肽粉末的制備方法，按照下述步驟進(jìn)行：

取菜籽粕按固液比1：8（m/v）加入蒸餾水，調(diào)ph到5，在30℃溫度下攪拌1h，經(jīng)4000r/min離心10min，保留殘?jiān)堅(jiān)僦貜?fù)此過程2輪。

將殘?jiān)垂桃罕?：12（m/v）加入蒸餾水，調(diào)ph到11，于50℃溫度下攪拌30min，經(jīng)4000r/min離心10min，保留上清，對殘?jiān)僦貜?fù)此過程3輪。最終合并上清液。

將上清液ph調(diào)到4，充分?jǐn)嚢韬箪o置30min。經(jīng)4000r/min離心10min。收集沉淀，經(jīng)冷凍干燥獲得菜籽蛋白粉末。

取菜籽蛋白粉末，使用復(fù)合蛋白酶，在固液比1：20（m/v）、酶底比1：20（m/m）、ph7.5、溫度50℃的條件下酶解3h。于80℃熱水浴中滅酶15min，經(jīng)4000r/min離心10min，取上清液備用。

上述菜籽多肽可由類似工藝制備的其他多肽簡單替代。

菜籽多肽與五味子水提物的用途，可以用于制備協(xié)同改善睡眠的保健食品或者藥物。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是將五味子與菜籽多肽同時(shí)使用，用于改善睡眠既起到了協(xié)同改善睡眠的作用，又降低五味子使用量：

（1）將五味子和菜籽多肽共同使用，能起到協(xié)同改善睡眠作用，相比單一使用五味子，五味子-菜籽多肽混合物喂養(yǎng)的小鼠睡眠時(shí)間延長2.55~19.28min，睡眠潛伏期縮短0.33~2.39min，五味子、菜籽多肽協(xié)同改善睡眠功效突出。

（2）五味子大量使用容易引起胃痛、胃部泛酸，帶來胃部燒灼不適感，通過五味子與無副作用菜籽多肽混合使用，有助于減少五味子使用量，降低胃部燒灼不適感出現(xiàn)率。

具體實(shí)施方式

在本發(fā)明中所使用的術(shù)語，除非有另外說明，一般具有本領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常理解的含義。下面結(jié)合具體的實(shí)施例，并參照數(shù)據(jù)進(jìn)一步詳細(xì)地描述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例只是對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步說明，不能理解為對本發(fā)明保護(hù)范圍的限定，該領(lǐng)域的技術(shù)工程師可根據(jù)上述發(fā)明的內(nèi)容對本發(fā)明作出一些非本質(zhì)的改進(jìn)和調(diào)整。

在以下的實(shí)施例中，未詳細(xì)描述的各種過程和方法是本領(lǐng)域中公知的常規(guī)方法。所用試劑的來源、商品名以及有必要列出其組成成分者，均在首次出現(xiàn)時(shí)標(biāo)明，其后所用相同試劑如無特殊說明，均以首次標(biāo)明的內(nèi)容相同。

本對照和實(shí)施例所用的五味子購買自吉林科創(chuàng)中藥材種植有限公司。

本對照和實(shí)施例所用五味子水提物粉末由以下方法制備：

將五味子果實(shí)于105℃烘箱中干燥2h，之后粉碎過60目篩得五味子粉。稱取適量五味子粉按10%（m/v）底物濃度加蒸餾水，常壓下85℃中浸泡1h，離心（4000r/min，15min）后收集上清液，重復(fù)此過程2輪合并上清液備用。

本對照和實(shí)施例所用的菜籽多肽粉末由以下方法制備：

取菜籽粕按固液比1：8（m/v）加入蒸餾水，調(diào)ph到5，在30℃溫度下攪拌1h，經(jīng)4000r/min離心10min，保留殘?jiān)?。對殘?jiān)僦貜?fù)此過程2輪。

將殘?jiān)垂桃罕?：12（m/v）加入蒸餾水，調(diào)ph到11，于50℃溫度下攪拌30min，經(jīng)4000r/min離心10min，保留上清，對殘?jiān)僦貜?fù)此過程3輪。最終合并上清液。

將上清液ph調(diào)到4，充分?jǐn)嚢韬箪o置30min。經(jīng)4000r/min離心10min。收集沉淀，經(jīng)冷凍干燥獲得菜籽蛋白粉末。

取菜籽蛋白粉末，使用復(fù)合蛋白酶，在固液比1：20（m/v）、酶底比1：20（m/m）、ph7.5、溫度50℃的條件下酶解3h。于80℃熱水浴中滅酶15min，經(jīng)4000r/min離心10min，取上清液備用。

將上述五味子水提物和菜籽多肽上清液按2：8~8：2（固形物質(zhì)量比，m/m）比例混合后干燥備用。

本實(shí)施例所用樣品改善睡眠功效評價(jià)方法如下：

本實(shí)施例使用健康雄性icr（instituteofcancerresearch，美國癌癥研究所）小鼠，體重為20±2g，飼養(yǎng)環(huán)境溫度保持22±2℃，濕度保持50±5%，日夜時(shí)間各半，小鼠灌胃30天后進(jìn)行試驗(yàn)。

（1）延長戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間試驗(yàn)：各組小鼠末次灌胃30min后，按一定劑量腹腔注射戊巴比妥鈉，以翻正反射消失和翻正反射恢復(fù)為指標(biāo)，兩者之間時(shí)間段為睡眠時(shí)間。記錄各組小鼠睡眠時(shí)間。

（2）巴比妥鈉睡眠潛伏期試驗(yàn)：各組小鼠末次灌胃30min后，按一定劑量腹腔注射巴比妥鈉，從注射開始到翻正反射消失所用時(shí)間為睡眠潛伏期，記錄各組小鼠睡眠潛伏期。

對照1

以0.4g/kgbw（bodyweight，體重）劑量五味子水提物溶液進(jìn)行灌胃，每組各小鼠給藥30min后，測定小鼠睡眠時(shí)間和睡眠潛伏期。五味子組睡眠時(shí)間為67.33±9.38min，睡眠潛伏期為9.15±1.03min。

對照2

以0.4g/kgbw劑量菜籽多肽溶液進(jìn)行灌胃，每組各小鼠給藥30min后，測定小鼠睡眠潛伏期和睡眠時(shí)間。菜籽多肽組睡眠時(shí)間為59.84±10.33min，睡眠潛伏期為11.37±1.44min。

實(shí)施例1

取五味子水提物和菜籽多肽上清液按8：2（固形物質(zhì)量比，m/m）混合，以0.4g/kgbw劑量進(jìn)行灌胃，每組各小鼠給藥30min后，測定小鼠睡眠時(shí)間和睡眠潛伏期，分別為77.46±8.21min和8.33±0.88min。相比于對照1五味子組睡眠時(shí)間延長10.13min，睡眠潛伏期縮短0.82min；相比于對照2菜籽多肽組睡眠時(shí)間延長17.62min，睡眠潛伏期縮短3.04min。

實(shí)施例2

取五味子水提物和菜籽多肽上清液按6：4（固形物質(zhì)量比，m/m）混合，以0.4g/kgbw劑量進(jìn)行灌胃，每組各小鼠給藥30min后，測定小鼠睡眠時(shí)間和睡眠潛伏期，分別為86.61±8.34min和6.76±1.01min。相比于對照1五味子組睡眠時(shí)間延長19.28min，睡眠潛伏期縮短2.39min；相比于對照2菜籽多肽組睡眠時(shí)間延長26.77min，睡眠潛伏期縮短4.61min。

實(shí)施例3

取五味子水提物和菜籽多肽上清液按4：6（固形物質(zhì)量比，m/m）混合，以0.4g/kgbw劑量進(jìn)行灌胃，每組各小鼠給藥30min后，測定小鼠睡眠時(shí)間和睡眠潛伏期，分別為75.54±9.38min和7.55±1.17min。相比于對照1五味子組睡眠時(shí)間延長8.21min，睡眠潛伏期縮短1.60min；相比于對照2菜籽多肽組睡眠時(shí)間延長15.70min，睡眠潛伏期縮短3.82min。

實(shí)施例4

取五味子水提物和菜籽多肽上清液按2：8（固形物質(zhì)量比，m/m）混合，以0.4g/kgbw劑量進(jìn)行灌胃，每組各小鼠給藥30min后，測定小鼠睡眠時(shí)間和睡眠潛伏期，分別為69.88±10.05min和8.82±1.19min。相比于對照1五味子組睡眠時(shí)間延長2.55min，睡眠潛伏期縮短0.33min；相比于對照2菜籽多肽組睡眠時(shí)間延長10.04min，睡眠潛伏期縮短2.55min。