本發(fā)明屬于飼料添加劑技術(shù)領(lǐng)域。更具體地，涉及脂多糖在制備促進(jìn)動(dòng)物采食和改善胴體組成添加劑方面的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

采食是動(dòng)物機(jī)體獲取營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，維持體內(nèi)新陳代謝平衡的重要手段，因此在畜禽生產(chǎn)過(guò)程中，采食量的高低直接影響動(dòng)物生產(chǎn)性能的發(fā)揮。研究表明，動(dòng)物的采食量與生長(zhǎng)發(fā)育、繁殖、和泌乳等息息相關(guān)，動(dòng)物采食量已經(jīng)成為限制其充分發(fā)揮生產(chǎn)性能的重要因素。在一定程度上提高動(dòng)物的采食量，才能充分發(fā)揮出動(dòng)物的生產(chǎn)潛能。此外，現(xiàn)代養(yǎng)殖業(yè)通過(guò)優(yōu)化飼料配方，能在最大程度上保證動(dòng)物的營(yíng)養(yǎng)需要，提高生長(zhǎng)速度，但仍存在著動(dòng)物體脂過(guò)多沉積等問(wèn)題。過(guò)多的脂肪沉積不但降低了生產(chǎn)的經(jīng)濟(jì)效益，也降低了畜禽胴體品質(zhì)。因此，提高動(dòng)物食欲，改善體組成對(duì)畜禽養(yǎng)殖具有重要應(yīng)用價(jià)值。

目前在養(yǎng)殖生產(chǎn)中，主要通過(guò)添加香味劑和甜味劑等誘食劑，通過(guò)刺激動(dòng)物味覺(jué)和嗅覺(jué)系統(tǒng)提高采食量，但這些誘食劑均存在一定的適應(yīng)現(xiàn)象，其促進(jìn)采食的效果隨時(shí)間延長(zhǎng)也逐漸減弱。另外，也有部分方案采用一些調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)元興奮性的藥物雖然可以達(dá)到一定的促采食效應(yīng)，但多數(shù)藥物具有潛在的殘留，對(duì)人類健康具有不可估量的危害。此外，在胴體組成的調(diào)控方面，以往也有方案采用β腎上腺素受體激動(dòng)劑類藥物能夠促進(jìn)肌肉發(fā)育，降低脂肪沉積。但這些“瘦肉精”類物質(zhì)同樣容易殘留在肉品和內(nèi)臟中，人類食用后容易造成各種中毒癥狀。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是克服上述現(xiàn)有添加劑和誘食劑的缺陷和技術(shù)不足，提供脂多糖的一種新應(yīng)用，即能夠促進(jìn)動(dòng)物采食和改善胴體組成的應(yīng)用。

本發(fā)明的目的是提供脂多糖在制備促進(jìn)動(dòng)物采食的飼料添加劑方面的應(yīng)用。

本發(fā)明另一目的是提供脂多糖在制備改善胴體組成的飼料添加劑方面的應(yīng)用。

本發(fā)明上述目的通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

本發(fā)明研究發(fā)現(xiàn)，飲水添加大腸桿菌不同亞型脂多糖能顯著提高動(dòng)物的累積采食量，顯著提高動(dòng)物弓狀核agrpmrna的表達(dá)，顯著降低動(dòng)物體內(nèi)脂肪含量沉積，提高動(dòng)物體內(nèi)瘦組織含量，增加動(dòng)物骨骼肌含量，顯著降低動(dòng)物皮下脂肪含量，增加動(dòng)物體內(nèi)腓腸肌含量，，增強(qiáng)褐色脂肪代謝水平。因此大腸桿菌不同亞型脂多糖能提高動(dòng)物食欲，改善動(dòng)物胴體品質(zhì)。

因此，以下所述應(yīng)用均應(yīng)在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)：

脂多糖在制備促進(jìn)動(dòng)物采食的飼料添加劑方面的應(yīng)用。

脂多糖在制備改善胴體組成的飼料添加劑方面的應(yīng)用。

其中優(yōu)選地，所述脂多糖為來(lái)源于大腸桿菌的脂多糖。

更優(yōu)選地，所述來(lái)源于大腸桿菌的脂多糖為來(lái)源于大腸桿菌o128:b12、o127:b8或o55:b5的脂多糖。

另外，具體地，所述促進(jìn)動(dòng)物采食包括提高動(dòng)物的累積采食量和/或提高動(dòng)物弓狀核agrpmrna的表達(dá)。

所述改善胴體組成是指降低動(dòng)物體內(nèi)脂肪、皮下脂肪含量沉積，提高動(dòng)物體內(nèi)瘦組織含量，增加小鼠骨骼肌含量，增強(qiáng)褐色脂肪代謝水平和/或增加小鼠體內(nèi)腓腸肌含量。

所述增強(qiáng)褐色脂肪代謝水平是指升高動(dòng)物體內(nèi)褐色脂肪ucp-1，pgc-1ɑ的表達(dá)。

腸道菌群能夠通過(guò)腸腦軸直接調(diào)控神經(jīng)中樞，影響動(dòng)物的采食和能量代謝。脂多糖是動(dòng)物腸道革蘭氏陰性菌細(xì)菌壁的主要組成成分，主要由脂質(zhì)a，核心多糖，o抗原三部分組成，其中脂質(zhì)a是免疫系統(tǒng)主要結(jié)構(gòu)識(shí)別區(qū)。動(dòng)物體內(nèi)存在的脂多糖主要由腸道細(xì)菌死亡后產(chǎn)生。動(dòng)物腸道存在大量迷走神經(jīng)末梢和內(nèi)分泌細(xì)胞。這些迷走神經(jīng)可直接控制中樞食欲調(diào)節(jié)神經(jīng)元的活性，且腸道內(nèi)分泌細(xì)胞分泌各種激素信號(hào)也直接參與了動(dòng)物機(jī)體能量代謝和蛋白質(zhì)沉積。另外研究表明，動(dòng)物腸道迷走神經(jīng)末梢和內(nèi)分泌細(xì)胞均表達(dá)多種脂多糖受體。鑒于上述理論基礎(chǔ)，本發(fā)明通過(guò)口服添加脂多糖可以促進(jìn)動(dòng)物采食量，降低動(dòng)物體內(nèi)脂肪含量，同時(shí)增加體內(nèi)的肌肉含量。而且，口服脂多糖主要在腸道直接通過(guò)其受體調(diào)節(jié)腸道迷走神經(jīng)和內(nèi)分泌細(xì)胞功能，從而在腸道局部發(fā)揮作用，而不用進(jìn)入動(dòng)物血液循環(huán)系統(tǒng)造成殘留，具有更高的安全性。

本發(fā)明具有以下有益效果：

本發(fā)明研究發(fā)現(xiàn)，來(lái)源于大腸桿菌o128:b12，o127:b8，o55:b5的脂多糖能顯著提高動(dòng)物的累積采食量，顯著降低動(dòng)物體內(nèi)脂肪含量沉積，同時(shí)提高小鼠體內(nèi)瘦組織含量，增加小鼠骨骼肌含量。而且，還能顯著降低小鼠皮下脂肪含量，增加小鼠體內(nèi)腓腸肌含量，增強(qiáng)褐色脂肪代謝水平。因此大腸桿菌不同亞型脂多糖能提高動(dòng)物食欲，改善動(dòng)物胴體品質(zhì)。

而且，脂多糖在體內(nèi)是由腸道細(xì)菌產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物。動(dòng)物腸道和血液中均存在一定生理濃度的脂多糖，且低劑量的脂多糖具有一定的免疫增強(qiáng)作用，對(duì)動(dòng)物機(jī)體無(wú)其他不良反應(yīng)。脂多糖性質(zhì)比較穩(wěn)定，不易降解，可直接加入飲水或飼料中，添加過(guò)程方便快捷，制備方法簡(jiǎn)單，無(wú)特殊設(shè)備要求，具有很好的推廣應(yīng)用前景。

附圖說(shuō)明

圖1為飲水添加大腸桿菌不同亞型脂多糖對(duì)小鼠累積采食量的影響。

圖2為飲水添加大腸桿菌不同亞型脂多糖對(duì)小鼠弓狀核agrpmrna表達(dá)的影響。

圖3為飲水添加不同大腸桿菌亞型脂多糖對(duì)小鼠體組成的影響。

圖4為飲水添加大腸桿菌不同亞型脂多糖對(duì)小鼠體內(nèi)皮下脂肪細(xì)胞面積的影響。

圖5為飲水添加大腸桿菌不同亞型脂多糖對(duì)小鼠體內(nèi)褐色脂肪ucp-1，pgc-1ɑ的表達(dá)影響。

具體實(shí)施方式

以下結(jié)合說(shuō)明書附圖和具體實(shí)施例來(lái)進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但實(shí)施例并不對(duì)本發(fā)明做任何形式的限定。除非特別說(shuō)明，本發(fā)明采用的試劑、方法和設(shè)備為本技術(shù)領(lǐng)域常規(guī)試劑、方法和設(shè)備。

除非特別說(shuō)明，本發(fā)明所用試劑和材料均為市購(gòu)。

實(shí)施例1飲水添加脂多糖對(duì)小鼠累積采食量及弓狀核agrp表達(dá)的影響

試驗(yàn)選取32只4周齡雄性c57/bl小鼠（13±1g）經(jīng)預(yù)飼后平均分為4組，單籠飼養(yǎng)，一組為空白對(duì)照組，正常飲水；處理組一：飲水添加5μg/ml的e.coilo128:b12脂多糖；處理組二：飲水添加5μg/ml的e.coilo127:b8脂多糖；處理組三：飲水添加5μg/ml的e.coilo55:b5脂多糖。以上各組，自由采食及飲水，12h小鼠循環(huán)光照，環(huán)境濕度在70%±10%，溫度恒定在23℃±1℃。

飼養(yǎng)12周，檢測(cè)小鼠累積采食量。結(jié)果如附圖1所示。由圖可知，飲水添加5μg/ml的大腸桿菌不同亞型脂多糖均能顯著提高小鼠的累計(jì)采食量，其中以o128:b12脂多糖效果最好。

隨后提取小鼠弓狀核，用trizol方法提取小鼠弓狀核mrna，用mx3000p熒光定量pcr儀檢測(cè)agrpmrna的相對(duì)表達(dá)量。結(jié)果如附圖2所示。試驗(yàn)結(jié)果表明，飲水添加5μg/ml的大腸桿菌不同亞型脂多糖能顯著提高小鼠弓狀核agrpmrna的表達(dá)。

實(shí)施例2飲水添加不同大腸桿菌亞型脂多糖對(duì)小鼠體組成的影響

試驗(yàn)選取32只4周齡雄性c57/bl小鼠（13±1g）經(jīng)預(yù)飼后平均分為4組，單籠飼養(yǎng)，一組為空白對(duì)照組，正常飲水；處理組一：飲水添加5μg/ml的e.coilo128:b12脂多糖；處理組二：飲水添加5μg/ml的e.coilo127:b8脂多糖；處理組三：飲水添加5μg/ml的e.coilo55:b5脂多糖。以上各組，自由采食及飲水，12h小鼠循環(huán)光照，環(huán)境濕度在70%±10%，溫度恒定在23℃±1℃，飼養(yǎng)12周。

試驗(yàn)結(jié)束用mesoqmr23-060h核磁共振成像儀（紐邁，蘇州）測(cè)定每只小鼠體內(nèi)的脂肪含量與瘦組織含量；12周后小鼠脫頸處死，測(cè)量小鼠體內(nèi)皮下脂肪與腓腸肌含量。結(jié)果如附圖3所示，試驗(yàn)結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，飲水添加5μg/ml的大腸桿菌不同亞型脂多糖能顯著降低小鼠體內(nèi)脂肪含量，提高小鼠體內(nèi)瘦組織含量，同時(shí)采集小鼠皮下脂肪與腓腸肌發(fā)現(xiàn)，飲水添加5μg/ml的大腸桿菌不同亞型脂多糖能顯著降低小鼠皮下脂肪含量，增加小鼠體內(nèi)腓腸肌含量。

實(shí)施例3飲水添加不同大腸桿菌亞型脂多糖對(duì)小鼠能量代謝的影響

試驗(yàn)選取32只4周齡雄性c57/bl小鼠（13±1g）經(jīng)預(yù)飼后平均分為4組，單籠飼養(yǎng)，一組為空白對(duì)照組，正常飲水；處理組一：飲水添加5μg/ml的e.coilo128:b12脂多糖；處理組二：飲水添加5μg/ml的e.coilo127:b8脂多糖；處理組三：飲水添加5μg/ml的e.coilo55:b5脂多糖。以上各組，自由采食及飲水，12h小鼠循環(huán)光照，環(huán)境濕度在70%±10%，溫度恒定在23℃±1℃，飼養(yǎng)12周。試驗(yàn)結(jié)束后，剪取小鼠皮下脂肪投入4%甲醛溶液中固定過(guò)夜，然后經(jīng)過(guò)酒精脫水，二甲苯透明，及石蠟包埋；he染色過(guò)程，經(jīng)二甲苯脫蠟，酒精脫水，蘇木精伊紅染色，二甲苯透明，中性樹(shù)膠封片。用dm2500光學(xué)顯微鏡（leica，德國(guó)）皮下脂肪切片拍照，并統(tǒng)計(jì)細(xì)胞面積。結(jié)果如附圖4所示，試驗(yàn)結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，飲水添加5μg/ml的大腸桿菌不同亞型脂多糖能顯著降低小鼠體內(nèi)皮下脂肪細(xì)胞面積。

此外，試驗(yàn)還剪取褐色脂肪，勻漿后離心取上清，用bca法檢測(cè)蛋白濃度，取等量蛋白，加入適量的上樣緩沖液（5×sds），99℃變性10min，將樣品用sds-聚丙烯酰胺凝膠電泳，然后將蛋白從凝膠中轉(zhuǎn)移到pvdf膜上，用含5%的脫脂奶粉的封閉液封閉2h，然后在4℃孵育ucp-1，pgc-1ɑ，β-action抗體過(guò)夜，次日用tbst洗滌后孵育二抗2h，結(jié)束后用tbst洗滌，將膜放于發(fā)光液1min，在凝膠成像系統(tǒng)中進(jìn)行掃描。結(jié)果如附圖5所示。由圖可知，與對(duì)照組相比，飲水添加5μg/ml的大腸桿菌不同亞型脂多糖能顯著升高小鼠體內(nèi)褐色脂肪ucp-1，pgc-1ɑ的表達(dá)，以o55:b5脂多糖效果最好。

綜上研究結(jié)果顯示，飲水添加大腸桿菌不同亞型脂多糖能顯著提高小鼠累積采食量，并降低小鼠體內(nèi)脂肪含量沉積，同時(shí)增加小鼠骨骼肌含量，增強(qiáng)褐色脂肪代謝水平。因此大腸桿菌不同亞型脂多糖能提高動(dòng)物食欲，改善動(dòng)物胴體品質(zhì)。