本發(fā)明涉及一種鹵蟲(chóng)卵的孵化方法，具體涉及一種提高鹵蟲(chóng)卵孵化同步性的方法。
背景技術(shù)：
鹵蟲(chóng)卵在水產(chǎn)養(yǎng)殖行業(yè)已普遍應(yīng)用，孵化率一直是受關(guān)注的熱點(diǎn)。但是無(wú)節(jié)幼體孵化的同步性一直沒(méi)有受到足夠重視。無(wú)節(jié)幼體從孵化到投喂經(jīng)歷的時(shí)間內(nèi)，無(wú)節(jié)幼體要靠消耗自身的卵黃囊來(lái)維持生命，所以這個(gè)時(shí)間越長(zhǎng)無(wú)節(jié)幼體的營(yíng)養(yǎng)成分損耗越大。通常情況下，經(jīng)過(guò)若干小時(shí)孵化的無(wú)節(jié)幼體從卵殼中出來(lái)，開(kāi)始游泳生活，一般體長(zhǎng)不超過(guò)500微米。此時(shí)沒(méi)有口、腸道以及肛門(mén)，這個(gè)階段的鹵蟲(chóng)幼體被稱(chēng)為“ⅰ期幼體”。很快幼體發(fā)育形成口、腸道、肛門(mén)，體長(zhǎng)超過(guò)700微米，這時(shí)被稱(chēng)作“ⅱ期幼體”。由于運(yùn)動(dòng)耗能，較之“ⅰ期幼體”，“ⅱ期幼體”所積累的營(yíng)養(yǎng)成分大幅度消耗，水分大幅度增加，而這種狀態(tài)的鹵蟲(chóng)不僅不能叫做“優(yōu)質(zhì)”，甚至水產(chǎn)動(dòng)物飼用之后很難從中吸收到有效營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。很多苗場(chǎng)還在使用孵化時(shí)間超過(guò)到50小時(shí)以上的鹵蟲(chóng)做為餌料生物。據(jù)統(tǒng)計(jì)，孵化同步性好的幼體比傳統(tǒng)技術(shù)所得的幼體至少能多提供20%的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。除了能提供更多的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，對(duì)于鹵蟲(chóng)卵來(lái)說(shuō)能夠在孵化過(guò)程中規(guī)避攜帶弧菌的風(fēng)險(xiǎn)同樣很關(guān)鍵。鹵蟲(chóng)卵孵化后，如果鹵蟲(chóng)幼體攜帶弧菌等病原，會(huì)對(duì)苗期造成巨大困擾。通常情況下成品鹵蟲(chóng)卵本身并不攜帶弧菌，弧菌主要是以孵化過(guò)程中通過(guò)空氣等介質(zhì)帶入蟲(chóng)卵，然后在營(yíng)養(yǎng)豐富、條件適宜的孵化水體中快速繁殖起來(lái)，并且一旦鹵蟲(chóng)幼體發(fā)育到ii期，形成了口及消化道，弧菌則會(huì)從消化道進(jìn)入蟲(chóng)體，此時(shí)就連徹底地消毒也很難將弧菌除去。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種提高鹵蟲(chóng)卵孵化同步性的方法，用于提高鹵蟲(chóng)卵的利用率同時(shí)降低無(wú)節(jié)幼體攜帶弧菌的風(fēng)險(xiǎn)。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)措施如下：
鹵蟲(chóng)卵按正常方法人工孵化8-12小時(shí)后，按50-150毫克/升的比例稱(chēng)取已制備好的鹵蟲(chóng)卵孵化液提取物，將提取物先溶于磷酸鹽緩沖液中，然后加入孵化體系中，25℃繼續(xù)保溫10小時(shí)以上至孵化率不再顯著增加，即可收集無(wú)節(jié)幼體。
上述方法中鹵蟲(chóng)卵孵化液提取物的制備方法為：
1.將鹵蟲(chóng)卵充分清洗、水合后，按每克干卵100毫升人工海水的比例將卵分散于三角瓶中，搖床100rpm/min振蕩，溫度25℃；
2.孵化28小時(shí)后，孵化液中加入0.8%聚乙二醇，超聲波處理20秒，功率密度0.5w/cm2，離心分離，收集孵化液。將沉淀重新溶于100毫升人工海水，攪拌5分鐘，離心分離，將兩次離心上清液合并；
3.將孵化液離心，轉(zhuǎn)速500g，5分鐘，上清液加入硫酸銨至飽和度為55%，將沉淀用磷酸鹽緩沖液重新溶解，葡聚糖凝膠sephadexg-25層析脫鹽，凍干。
本發(fā)明有如下優(yōu)點(diǎn)：
有效提高了鹵蟲(chóng)卵孵化的同步性，縮短了鹵蟲(chóng)無(wú)節(jié)幼體從孵化到飼喂的時(shí)間，減少了無(wú)節(jié)幼體營(yíng)養(yǎng)和能量的消耗，最大程度保留了無(wú)節(jié)幼體的營(yíng)養(yǎng)成分，提高了鹵蟲(chóng)卵的利用率，降低了幼體攜帶弧菌的風(fēng)險(xiǎn)。本方法容易操作，使用天然提取物無(wú)污染。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合具體的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明方法做進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明。
實(shí)施例
產(chǎn)于天津的鹵蟲(chóng)卵，按照數(shù)粒法測(cè)試孵化率的要求，每組選取400粒卵經(jīng)浸泡水合后，保溫28℃，海水鹽度29‰，充氣攪拌，開(kāi)始人工孵化。10小時(shí)后，按50毫克/升的比例稱(chēng)取鹵蟲(chóng)卵孵化液提取物，將提取物先溶于磷酸鹽緩沖液中，然后加入孵化體系中，25℃保溫。于孵化20小時(shí)開(kāi)始至36小時(shí)，每小時(shí)收集孵化出的無(wú)節(jié)幼體，采用數(shù)粒法計(jì)算孵化率，結(jié)果如表1。由表1數(shù)據(jù)可以看出，對(duì)照組孵化率增幅明顯的時(shí)間跨度為8小時(shí)，實(shí)驗(yàn)組相應(yīng)時(shí)間跨度為4小時(shí)，期間兩組孵化率增幅相近，但所需時(shí)間差別顯著；實(shí)驗(yàn)組孵化時(shí)間較對(duì)照組有所提前。因?yàn)闇囟雀邥?huì)加速孵化液提取物降解，本實(shí)驗(yàn)孵化溫度選為較低的25℃，使孵化時(shí)間相對(duì)有所增加。無(wú)節(jié)幼體孵化后，在海水中不?？焖儆緞?dòng)，所需大量能量和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)都由自身卵黃囊供給。孵化時(shí)間跨度大，先孵化的無(wú)節(jié)幼體消耗多，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值損失大，降低了餌料利用效率。孵化同步性好，可以在孵化后較短時(shí)間內(nèi)及時(shí)投喂，無(wú)節(jié)幼體所含營(yíng)養(yǎng)成分保留多，所以提高孵化同步性對(duì)于實(shí)際生產(chǎn)具有重要意義。本發(fā)明對(duì)于提高鹵蟲(chóng)卵孵化同步性效果顯著。