技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明涉及多菌種發(fā)酵芝麻粕生產(chǎn)富含?；撬岬木娘暳系闹苽浞椒?，屬于農(nóng)畜牧業(yè)技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：
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飼料制造業(yè)競爭激烈，飼料價(jià)格居高不下,常規(guī)蛋白原料如豆粕、魚粉緊缺導(dǎo)致價(jià)格不斷上漲，飼料成本急劇增加、養(yǎng)殖收益不斷降低，如何降低飼料成本成為市場(chǎng)廣泛關(guān)注的問題。最常用的降低成本的方法是采用較經(jīng)濟(jì)的芝麻粕、棉粕等來代替部分傳統(tǒng)性品質(zhì)較高的豆粕及魚粉。

芝麻粕、棉粕等植物源蛋白與魚粉相比，缺少?；撬徇@一重要物質(zhì)，而對(duì)于畜禽魚類動(dòng)物來說，?；撬崾菞l件性必需氨基酸，因?yàn)槠渥陨荒芎铣善渖硭璧?0％～40％，所以必須從食物中補(bǔ)充一部分。?；撬峋哂刑岣咝笄萆L、繁殖性能，改善其免疫力，促進(jìn)采食等生物學(xué)功能。研究表明，缺乏?；撬岬闹参镌吹鞍尊D料會(huì)導(dǎo)致魚體出現(xiàn)生長緩慢和一些病理現(xiàn)象，如綠色肝臟綜合癥和溶血性貧血等。

我國是世界芝麻產(chǎn)量最多的國家，芝麻粕是芝麻榨油后的副產(chǎn)物，成本比豆粕還要低20％-30％。其粗蛋白高達(dá)45％左右，蛋氨酸含量高出豆粕40％，而蛋氨酸正是?；撬岷铣赏緩降那绑w物質(zhì)。多菌種固態(tài)發(fā)酵芝麻粕生產(chǎn)的菌肽飼料，能夠解決動(dòng)物的營養(yǎng)性腹瀉；調(diào)理和激活細(xì)胞和機(jī)體的整體活性，促進(jìn)動(dòng)物的胃腸道功能，提高防疾病抗病能力；還能補(bǔ)充大量活性益生菌，增強(qiáng)有益微生物的生長繁殖，抑制大腸桿菌、沙門氏菌等有害菌的生長，改善腸道的微生態(tài)平衡，減少疾病的發(fā)生；提高動(dòng)物機(jī)體的免疫功能，減少抗生素的用量；其中的營養(yǎng)物質(zhì)能被道粘膜直接吸收，吸收速率快，有營養(yǎng)和提高免疫力雙重功能。同時(shí)，通過微生物發(fā)酵作用，可以有效降低粕類中抗?fàn)I養(yǎng)因子。

隨著生物技術(shù)的發(fā)展，應(yīng)用微生物發(fā)酵技術(shù)降解植物蛋白資源制備活性肽蛋白飼料，成為研究小肽的生物活性的重要手段，使高效、安全地獲得活性肽制品成為可能。芝麻粕蛋白是一個(gè)十分豐富的肽資源庫,用芝麻粕制備小肽飼料及添加劑，將成為提高芝麻副產(chǎn)品附加值,提高畜禽生產(chǎn)性能,改進(jìn)畜禽品質(zhì)的一個(gè)有效途徑。通過微生物發(fā)酵制備新型綠色的飼用活性小肽制品，對(duì)改善動(dòng)物營養(yǎng)和促進(jìn)養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展是十分有益的。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
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針對(duì)上述問題，本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供多菌種發(fā)酵芝麻粕生產(chǎn)富含牛磺酸的菌肽飼料的制備方法。

本發(fā)明的多菌種發(fā)酵芝麻粕生產(chǎn)富含牛磺酸的菌肽飼料的制備方法為：步驟一、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配制：準(zhǔn)確稱取牛肉膏3g、蛋白胨5g、氯化鈉10g放入燒杯中，加入1000ml水用玻璃棒攪拌均勻，然后調(diào)節(jié)ph7.0～7.2；

馬鈴薯培養(yǎng)基的配制：馬鈴薯去皮，切成塊加水煮沸30min，其中馬鈴薯:水＝1:4～6，然后用紗布過濾，再加入20g葡萄糖，攪拌均勻后補(bǔ)足水至1000ml；

查氏培養(yǎng)基的配制：準(zhǔn)確稱取硝酸鈉2g、磷酸氫二鉀1g、氯化鉀0.5g、硫酸鎂0.5g、硫酸亞鐵0.01g、蔗糖30g放入燒杯中，加入1000ml水用玻璃棒攪拌均勻。

步驟二、菌種的活化、培養(yǎng)，將枯草芽孢桿菌ys-45、酵母s-78、黑曲霉pl-39的活化菌種分別加入15ml～20ml步驟一制備的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、馬鈴薯培養(yǎng)基和查氏培養(yǎng)基，制成菌懸液，再將菌懸液在30℃～32℃、250r/min搖床中擴(kuò)大培養(yǎng)12h～14h，離心后將上清液去除，即分別得到枯草芽孢桿菌ys-45種子菌懸液、酵母s-78種子菌懸液和黑曲霉pl-39種子菌懸液；

步驟三：將用于發(fā)酵生產(chǎn)含牛磺酸的菌肽飼料的原料：芝麻粕、麩皮、糖蜜、磷酸氫二鉀、氯化鈣攪拌混合均勻，在110℃～130℃高溫蒸汽滅菌25min～35min，冷卻后為固體發(fā)酵物，將步驟二中分別制備的芽孢桿菌ys-45、酵母s-78和黑曲霉pl-39種子菌懸液，各按4％～8％的體積比接種到滅菌好的固體發(fā)酵物中，再加入上述原料總質(zhì)量的35％～40％的水，攪拌均勻，然后在固態(tài)發(fā)酵罐中在30℃～32℃條件下培養(yǎng)65h～70h，即得富含?；撬岬木娘暳?。

作為優(yōu)選,所述的步驟三中用于生產(chǎn)多菌種發(fā)酵芝麻粕生產(chǎn)富含?；撬岬木娘暳习韵沦|(zhì)量份數(shù)的原料：芝麻粕7-9份，麩皮0.5-1.5份，糖蜜0.3-0.7份，磷酸氫二鉀0.1-0.4份，氯化鈣0.1-0.4份。

本發(fā)明的有益效果：枯草芽孢桿菌ys-45含有蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶，能夠分解芝麻粕蛋白，產(chǎn)生小分子活性物質(zhì)，在動(dòng)物腸道內(nèi)具有較強(qiáng)的生物多樣能力。酵母s-78具有促生長特性，細(xì)胞內(nèi)含有豐富的蛋白質(zhì)、維生素、氨基酸，其中蛋白質(zhì)占其干重的50％以上，能為動(dòng)物提供大量的菌體營養(yǎng)，在發(fā)酵過程中能產(chǎn)生醇類物質(zhì)，可以增加飼料的風(fēng)味，提高適口性，同時(shí)能改善動(dòng)物腸道的微生態(tài)環(huán)境，提高動(dòng)物免疫力；黑曲霉pl-39能夠分泌產(chǎn)生植酸酶和纖維素酶，能有效降解植酸、纖維素等抗?fàn)I養(yǎng)因子。且三種菌對(duì)動(dòng)物均無毒害作用。三者共同作用產(chǎn)生多種類型酶，發(fā)酵降解芝麻粕生成富含牛磺酸的菌肽飼料，?；撬崾钦{(diào)節(jié)機(jī)體正常生理活動(dòng)的活性物質(zhì)，具有維持正常視覺功能、維持機(jī)體滲透壓平衡，調(diào)節(jié)細(xì)胞鈣平衡等優(yōu)點(diǎn)，且?；撬崤c細(xì)胞膜的流動(dòng)性有關(guān)，能降血糖、調(diào)節(jié)神經(jīng)傳導(dǎo)、參與內(nèi)分泌活動(dòng)、調(diào)節(jié)脂類消化與吸收、增加心臟收縮能力、提高機(jī)體免疫能力、增強(qiáng)細(xì)胞膜抗氧化能力、保護(hù)心肌細(xì)胞等廣泛生物學(xué)作用。發(fā)酵產(chǎn)物含有多種多肽，提供豐富營養(yǎng)并促進(jìn)營養(yǎng)的充分吸收。且作為發(fā)酵底物的芝麻粕，來源廣泛，價(jià)格低廉。因此含?；撬岬木娘暳峡赏耆虿糠痔娲~粉，從而降低飼料成本。

附圖說明：

為了易于說明，本發(fā)明由下述的具體實(shí)施及附圖作以詳細(xì)描述。

圖1為本發(fā)明實(shí)施例中?；撬針?biāo)準(zhǔn)品的高效液相色譜圖。

圖2為本發(fā)明實(shí)施例1在固態(tài)發(fā)酵罐中制備的富含?；撬峋娘暳现信；撬岬母咝б合嗌V圖。

圖3為本發(fā)明實(shí)施例2中菌肽飼料替代魚粉對(duì)草魚生產(chǎn)性能影響的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)圖。

具體實(shí)施方式：

以下結(jié)合具體實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明的多菌種發(fā)酵芝麻粕生產(chǎn)富含?；撬岬木娘暳系闹苽浞椒ㄗ鲞M(jìn)一步的詳細(xì)說明。

實(shí)施例1：多菌種發(fā)酵生產(chǎn)富含?；撬岬木娘暳习韵沦|(zhì)量份數(shù)的原料：芝麻粕9份，麩皮0.5份，糖蜜0.3份，磷酸氫二鉀0.1份，氯化鈣0.1份。

多菌種發(fā)酵生產(chǎn)富含?；撬岬木娘暳系闹苽浞椒ú襟E為：

步驟一、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配制：準(zhǔn)確稱取牛肉膏3g、蛋白胨5g、氯化鈉10g放入燒杯中，加入1000ml水用玻璃棒攪拌均勻，然后調(diào)節(jié)ph7.0；

馬鈴薯培養(yǎng)基的配制：馬鈴薯去皮，切成塊加水煮沸30min，其中馬鈴薯:水＝1:4，然后用紗布過濾，再加入20g葡萄糖，攪拌均勻后補(bǔ)足水至1000ml；

查氏培養(yǎng)基的配制：準(zhǔn)確稱取硝酸鈉2g、磷酸氫二鉀1g、氯化鉀0.5g、硫酸鎂0.5g、硫酸亞鐵0.01g、蔗糖30g放入燒杯中，加入1000ml水用玻璃棒攪拌均勻。

步驟二、菌種的活化、培養(yǎng)：將枯草芽孢桿菌ys-45、酵母s-78、黑曲霉pl-39的活化菌種分別加入15ml步驟一制備的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、馬鈴薯培養(yǎng)基和查氏培養(yǎng)基，制成菌懸液，再將菌懸液在30℃、250r/min搖床中擴(kuò)大培養(yǎng)12h，離心后將上清液去除，即分別得到枯草芽孢桿菌ys-45、酵母s-78和黑曲霉pl-39的種子菌懸液；

步驟三：將用于多菌種發(fā)酵生產(chǎn)富含牛磺酸的菌肽飼料的原料：芝麻粕、麩皮以及糖蜜、磷酸氫二鉀、氯化鈣等營養(yǎng)因子按比例稱取后，攪拌混合均勻，在110℃下高溫蒸汽滅菌25min，冷卻后為固體發(fā)酵物，將步驟二中分別制備的芽孢桿菌ys-45、酵母s-78和黑曲霉pl-39種子菌懸液，各按8％的體積比接種到滅菌好的固體發(fā)酵物中，再加入上述原料總質(zhì)量的40％的水，攪拌均勻，然后在固態(tài)發(fā)酵罐中30℃條件下培養(yǎng)70h，即得富含?；撬岬木娘暳?。

?；撬岷康臋z測(cè)：取實(shí)施例1制備的富含?；撬岬木娘暳?0g溶于50ml水，離心取上清，加等量體積三氯乙酸除蛋白，等量乙醚脫脂，凍干，取5mg凍干粉溶于100μl水中，加入300μl衍生劑，衍生30min，再凍干，采用高效液相色譜法檢測(cè)?；撬?，圖2為實(shí)施例中富含?；撬岬木娘暳现信；撬岬母咝б合嗌V圖。

進(jìn)口魚粉?；撬岷?％左右，國產(chǎn)魚粉?；撬岷?.5％左右，參照?qǐng)D2所示，實(shí)施例1中富含?；撬岬木娘暳现信；撬岷繛?.57％(即100g干物質(zhì)中?；撬岬暮渴?.57g)。

通過實(shí)施例1可以看出采用此方法制備的富含牛磺酸的菌肽飼料中?；撬岷勘冗M(jìn)口魚粉中的牛磺酸含量高。

實(shí)施例2：試驗(yàn)采用單因子試驗(yàn)設(shè)計(jì)，選用初始體重約為10g的草魚，隨機(jī)分成4個(gè)處理，每個(gè)處理3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)20尾魚，養(yǎng)殖地點(diǎn)在長沙學(xué)院內(nèi)水產(chǎn)養(yǎng)殖產(chǎn)學(xué)研基地進(jìn)行，室內(nèi)循環(huán)控溫玻璃水族缸規(guī)格為120cm×80cm×80cm，進(jìn)行為期60天的試驗(yàn)。每天飼喂3次，分別為8:00、12:00、16:00。在對(duì)照組配方中魚粉用量為51％的基礎(chǔ)上，分別用24％、34％和44％的菌肽飼料代替配方中16％、23％和31％的魚粉用量，研究菌肽飼料代替魚粉對(duì)草魚生長性能的影響(測(cè)定指標(biāo)包括成活率、增重率、飼料系數(shù)和特定生長率)。

從圖3可以看出，相對(duì)于對(duì)照組，試驗(yàn)組1、2、3養(yǎng)殖效果好，增重率、飼料系數(shù)、特定生長率等都提高顯著，其中用34％菌肽飼料代替23％的進(jìn)口魚粉，效果最佳。

以上顯示和描述了本發(fā)明的基本原理、主要特征和本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)。本行業(yè)的技術(shù)人員應(yīng)該了解，本發(fā)明不受上述實(shí)施例的限制，上述實(shí)施例和說明書中描述的只是說明本發(fā)明的原理，在不脫離本發(fā)明精神和范圍的前提下，本發(fā)明還會(huì)有各種變化和改進(jìn)，這些變化和改進(jìn)都落入要求保護(hù)的本發(fā)明范圍內(nèi)。本發(fā)明要求保護(hù)范圍由所附的權(quán)利要求書及其等效物界定。