本發(fā)明涉及一種復(fù)合菌劑，具體涉及一種包含桑黃菌的復(fù)合固態(tài)益生菌劑的制備方法。

背景技術(shù)：

復(fù)合固態(tài)益生菌劑是目前研究較多的一種動(dòng)物飼料及添加劑產(chǎn)品，目前常規(guī)的菌劑發(fā)酵是采用單個(gè)或多個(gè)菌種進(jìn)行一次性發(fā)酵制備的產(chǎn)品，其有益微生物的含量較少，并且對(duì)于培養(yǎng)基中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的分解利用不充分，在實(shí)際飼養(yǎng)過(guò)程中并不能產(chǎn)生理想的效果。并且，現(xiàn)有的發(fā)酵中大都采用酵母菌和乳酸菌等菌種進(jìn)行發(fā)酵，其發(fā)酵產(chǎn)物和效果大致相同，飼料中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)也基本一致，不能帶來(lái)新的喂養(yǎng)效果。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中的缺陷，設(shè)計(jì)一種包含桑黃菌的復(fù)合固態(tài)益生菌劑的制備方法，本發(fā)明根據(jù)不同益生菌對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)需求差異，進(jìn)行分段固態(tài)發(fā)酵，能夠高效分解培養(yǎng)基；桑黃菌利用固態(tài)基質(zhì)生長(zhǎng)產(chǎn)生活性多糖，同時(shí)降解纖維素和半纖維素類物質(zhì)生成葡萄糖、木糖等單糖；采用芽孢桿菌好氧發(fā)酵，再用乳酸菌和釀酒酵母菌兼性厭氧發(fā)酵，三次發(fā)酵能夠高效分解利用營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，利用此方法生產(chǎn)的固態(tài)益生菌劑具有特殊的醬香味，含有真菌多糖，有效活菌數(shù)高，有機(jī)氮含量高，具有調(diào)節(jié)動(dòng)物腸道菌群、提高免疫力、提高固態(tài)基質(zhì)利用率、降低牲畜糞便臭味、改善環(huán)境的功效。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是一種包含桑黃菌的復(fù)合固態(tài)益生菌劑的制備方法，所述方法采用桑黃菌種子液接種到固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基內(nèi)進(jìn)行發(fā)酵，降解纖維素和半纖維素類物質(zhì)生產(chǎn)單糖；然后再分若干次先后加入后發(fā)酵菌液，進(jìn)行有先后順序的若干次后發(fā)酵過(guò)程，發(fā)酵結(jié)束后得到發(fā)酵產(chǎn)物，將發(fā)酵產(chǎn)物干燥后制得復(fù)合固態(tài)益生菌劑。分別進(jìn)行多次的單獨(dú)發(fā)酵，能夠高效利用和分解培養(yǎng)基中的物質(zhì)，有利于動(dòng)物高效吸收。

優(yōu)選的，后發(fā)酵菌液包括芽孢桿菌、釀酒酵母菌和乳酸菌中的一種或多種。

優(yōu)選的，固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基中各組分的質(zhì)量份數(shù)為：玉米粉17-23份，玉米皮31-39份，豆粕5-9份，大豆皮7-13份，麩皮16-24份，玉米蛋白粉1.5-4.5份，滑石粉1-4份，蒙脫石0.1-0.3份，糖蜜0.8-2.8份。固態(tài)培養(yǎng)基中的滑石粉和蒙脫石可作為惰性固態(tài)基質(zhì)載體，促進(jìn)桑黃菌的生長(zhǎng)，促進(jìn)桑黃菌的發(fā)酵效率。

優(yōu)選的，固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基中各組分的質(zhì)量份數(shù)為：玉米粉20份，玉米皮35份，豆粕7.5份，大豆皮10份，麩皮20份，玉米蛋白粉3份，滑石粉2.5份，蒙脫石0.2份，糖蜜1.8份。本配比為發(fā)明人長(zhǎng)時(shí)間大量實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證的最佳配比，在本發(fā)明的發(fā)酵條件下，該培養(yǎng)基能夠滿足桑黃菌的高效發(fā)酵，并且能夠高效分解和利用各種組分，確保最終的菌劑中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)均被高效利用。

優(yōu)選的，桑黃菌接種到固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基內(nèi)進(jìn)行發(fā)酵的過(guò)程為：將固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌后，以5％-20％體積的接種量接入桑黃菌種子液，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基含水量為40％-85％，于25-35℃固態(tài)發(fā)酵3-8天；發(fā)酵完成后攪拌混合所得的固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基，將菌絲體均勻分散于固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基內(nèi)。

優(yōu)選的，桑黃菌種子液的制備方法為：將7mm的桑黃菌片接入桑黃菌培養(yǎng)基內(nèi)，于25-35℃搖床培養(yǎng)12-48h制得桑黃菌種子液；7mm桑黃菌片是用實(shí)驗(yàn)室的打孔器打孔取樣7mm直徑的桑黃菌片。

桑黃菌培養(yǎng)基的組分為：麥芽浸粉15-25g/l，葡萄糖10-25g/l，mgso40.1-0.8g/l，kh2po40.2-2g/l，mnso40.001-0.003g/l，cuso40.001-0.03g/l，nacl0.2-2g/l。

優(yōu)選的，后發(fā)酵菌液中，芽孢桿菌種子液的制備過(guò)程為，從試管斜面挑取挑取芽孢桿菌2環(huán)，接入lb培養(yǎng)基，于25-32℃搖床培養(yǎng)12-48h制得芽孢桿菌種子液；

釀酒酵母菌種子液的制備過(guò)程為：從試管斜面挑取挑取釀酒酵母菌2環(huán)，接入標(biāo)準(zhǔn)ypda培養(yǎng)基，于25-32℃靜置培養(yǎng)12-60h制得釀酒酵母菌種子液；

乳酸菌種子液的制備過(guò)程為：從試管斜面挑取挑取乳酸菌2環(huán)，接入mrs培養(yǎng)基，于30-42℃靜置培養(yǎng)12-48h制得乳酸菌種子液。

優(yōu)選的，后發(fā)酵過(guò)程的操作為：以5％-20％體積的接種量加入芽孢桿菌種子液，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的含水量為50-80％，于25-32℃靜置發(fā)酵12-48h；然后再分別以5％-20％體積的接種量同時(shí)加入釀酒酵母種子液和乳酸菌種子液，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的含水量為50-80％，于25-32℃靜置發(fā)酵12-72h。

優(yōu)選的，發(fā)酵產(chǎn)物干燥的操作是將發(fā)酵產(chǎn)物于40-80℃烘干，至發(fā)酵產(chǎn)物中的含水量為10-12.5％時(shí)，制得最終復(fù)合固態(tài)益生菌劑。

本發(fā)明同時(shí)公開(kāi)了一種上述方法制得的包含桑黃菌的復(fù)合固態(tài)益生菌劑作為動(dòng)物飼料或動(dòng)物飼料添加劑的應(yīng)用。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和有益效果在于：

本發(fā)明根據(jù)不同益生菌對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)需求差異，進(jìn)行分段固態(tài)發(fā)酵，能夠高效分解培養(yǎng)基；桑黃菌利用固態(tài)基質(zhì)生長(zhǎng)產(chǎn)生活性多糖，同時(shí)降解纖維素和半纖維素類物質(zhì)生成葡萄糖、木糖等單糖。

采用芽孢桿菌好氧發(fā)酵，再用乳酸菌和釀酒酵母菌兼性厭氧發(fā)酵，三次發(fā)酵能夠高效分解利用營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。

利用此方法生產(chǎn)的固態(tài)益生菌劑具有特殊的醬香味，含有真菌多糖，有效活菌數(shù)高，有機(jī)氮含量高，具有調(diào)節(jié)動(dòng)物腸道菌群、提高免疫力、提高固態(tài)基質(zhì)利用率、降低牲畜糞便臭味、改善環(huán)境的功效。

并且本發(fā)明降低了復(fù)合益生菌劑生產(chǎn)成本，設(shè)備簡(jiǎn)單，易于操作，無(wú)污染，加入桑黃真菌降解固態(tài)基質(zhì)纖維素提高飼料適口性，產(chǎn)生的活性多糖具有調(diào)節(jié)免疫力的功效，后續(xù)發(fā)酵過(guò)程中生成的乙酸乙酯，乳酸乙酯等賦予菌劑獨(dú)特的醬香味。改善口感，同時(shí)可以防止飼料腐變，改善飼養(yǎng)環(huán)境。

相比于傳統(tǒng)酵母菌、芽孢桿菌、乳酸菌固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基，本發(fā)明中由于桑黃菌具有分解纖維素的作用，可以將飼料配方中的纖維素類物質(zhì)分解成葡萄糖等，可以提供碳源，可以不需額外添加單糖。

本發(fā)明中的桑黃菌能夠分解培養(yǎng)基中的纖維素和半纖維素，半纖維素降解率為18％-50％，纖維素分解率為10-28％，能夠提供足夠的碳源和單糖。

本發(fā)明中桑黃菌發(fā)酵后產(chǎn)生胞內(nèi)活性多糖，活性多糖溶液濃度在0.1-2mg/l，羥自由基去除率為5％-59％，能夠?yàn)轱暳现性黾犹欠趾俊?/p>

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施方式作進(jìn)一步描述。以下實(shí)施例僅用于更加清楚地說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)方案，而不能以此來(lái)限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。

實(shí)施例1

本實(shí)施例為一種包含桑黃菌的復(fù)合固態(tài)益生菌劑的制備方法，所述方法采用桑黃菌種子液接種到固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基內(nèi)進(jìn)行發(fā)酵，降解纖維素和半纖維素類物質(zhì)生產(chǎn)單糖；然后再分2次先后加入后發(fā)酵菌液，進(jìn)行有先后順序的2次后發(fā)酵過(guò)程，發(fā)酵結(jié)束后得到發(fā)酵產(chǎn)物，將發(fā)酵產(chǎn)物干燥后制得復(fù)合固態(tài)益生菌劑。后發(fā)酵菌液為芽孢桿菌、釀酒酵母菌和乳酸菌。

固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基中各組分的質(zhì)量份數(shù)為：玉米粉20份，玉米皮35份，豆粕7.5份，大豆皮10份，麩皮20份，玉米蛋白粉3份，滑石粉2.5份，蒙脫石0.2份，糖蜜1.8份。

桑黃菌接種到固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基內(nèi)進(jìn)行發(fā)酵的過(guò)程為：將固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌后，以12.5％體積的接種量接入桑黃菌種子液，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基含水量為65％，于30℃固態(tài)發(fā)酵5.5天；發(fā)酵完成后攪拌混合所得的固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基，將菌絲體均勻分散于固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基內(nèi)。

桑黃菌種子液的制備方法為：將7mm的桑黃菌片接入桑黃菌培養(yǎng)基內(nèi)，于30℃搖床培養(yǎng)36h制得桑黃菌種子液；桑黃菌培養(yǎng)基的組分為：麥芽浸粉20g/l，葡萄糖17.5g/l，mgso40.5g/l，kh2po41.1g/l，mnso40.002g/l，cuso40.002g/l，nacl1.1g/l。7mm桑黃菌片是用實(shí)驗(yàn)室的打孔器打孔取樣7mm直徑的桑黃菌片。

后發(fā)酵菌液中，芽孢桿菌種子液的制備過(guò)程為，從試管斜面挑取挑取芽孢桿菌2環(huán)，接入lb培養(yǎng)基，于28.5℃搖床培養(yǎng)24h制得芽孢桿菌種子液；

釀酒酵母菌種子液的制備過(guò)程為：從試管斜面挑取挑取釀酒酵母菌2環(huán)，接入標(biāo)準(zhǔn)ypda培養(yǎng)基，于28.5℃靜置培養(yǎng)36h制得釀酒酵母菌種子液；

乳酸菌種子液的制備過(guò)程為：從試管斜面挑取挑取乳酸菌2環(huán)，接入mrs培養(yǎng)基，于36℃靜置培養(yǎng)24h制得乳酸菌種子液。

后發(fā)酵過(guò)程的操作為：以12.5％體積的接種量加入芽孢桿菌種子液，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的含水量為65％，于28.5℃靜置發(fā)酵36h；然后再分別以12.5％體積的接種量同時(shí)加入釀酒酵母種子液和乳酸菌種子液，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的含水量為65％，于28.5℃靜置發(fā)酵42h。

發(fā)酵產(chǎn)物干燥的操作是將發(fā)酵產(chǎn)物于60℃烘干，至發(fā)酵產(chǎn)物中的含水量為11.25％時(shí)，制得最終復(fù)合固態(tài)益生菌劑。

本實(shí)施例的有益效果在于：

本發(fā)明根據(jù)不同益生菌對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)需求差異，進(jìn)行分段固態(tài)發(fā)酵，能夠高效分解培養(yǎng)基；桑黃菌利用固態(tài)基質(zhì)生長(zhǎng)產(chǎn)生活性多糖，同時(shí)降解纖維素和半纖維素類物質(zhì)生成葡萄糖、木糖等單糖。

采用芽孢桿菌好氧發(fā)酵，再用乳酸菌和釀酒酵母菌兼性厭氧發(fā)酵，三次發(fā)酵能夠高效分解利用營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。

利用此方法生產(chǎn)的固態(tài)益生菌劑具有特殊的醬香味，含有真菌多糖，有效活菌數(shù)高，有機(jī)氮含量高，具有調(diào)節(jié)動(dòng)物腸道菌群、提高免疫力、提高固態(tài)基質(zhì)利用率、降低牲畜糞便臭味、改善環(huán)境的功效。

并且本發(fā)明降低了復(fù)合益生菌劑生產(chǎn)成本，設(shè)備簡(jiǎn)單，易于操作，無(wú)污染，加入桑黃真菌降解固態(tài)基質(zhì)纖維素提高飼料適口性，產(chǎn)生的活性多糖具有調(diào)節(jié)免疫力的功效，后續(xù)發(fā)酵過(guò)程中生成的乙酸乙酯，乳酸乙酯等賦予菌劑獨(dú)特的醬香味。改善口感，同時(shí)可以防止飼料腐變，改善飼養(yǎng)環(huán)境。

相比于傳統(tǒng)酵母菌、芽孢桿菌、乳酸菌固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基，本發(fā)明中由于桑黃菌具有分解纖維素的作用，可以將飼料配方中的纖維素類物質(zhì)分解成葡萄糖等，可以提供碳源，可以不需額外添加單糖。

本發(fā)明中的桑黃菌能夠分解培養(yǎng)基中的纖維素和半纖維素，半纖維素降解率為18％-50％，纖維素分解率為10-28％，能夠提供足夠的碳源和單糖。

本發(fā)明中桑黃菌發(fā)酵后產(chǎn)生胞內(nèi)活性多糖，活性多糖溶液濃度在0.1-2mg/l，羥自由基去除率為5％-59％，能夠?yàn)轱暳现性黾犹欠趾俊?/p>

實(shí)施例2

在實(shí)施例1的基礎(chǔ)上，本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施例是一種包含桑黃菌的復(fù)合固態(tài)益生菌劑的制備方法：

固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基中各組分的質(zhì)量份數(shù)為：玉米粉17份，玉米皮39份，豆粕5份，大豆皮13份，麩皮16份，玉米蛋白粉4.5份，滑石粉1份，蒙脫石0.3份，糖蜜0.8份。

桑黃菌接種到固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基內(nèi)進(jìn)行發(fā)酵的過(guò)程為：將固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌后，以5％體積的接種量接入桑黃菌種子液，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基含水量為85％，于25℃固態(tài)發(fā)酵8天；發(fā)酵完成后攪拌混合所得的固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基，將菌絲體均勻分散于固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基內(nèi)。

桑黃菌種子液的制備方法為：將7mm的桑黃菌片接入桑黃菌培養(yǎng)基內(nèi)，于25℃搖床培養(yǎng)48h制得桑黃菌種子液；桑黃菌培養(yǎng)基的組分為：麥芽浸粉15g/l，葡萄糖25g/l，mgso40.1g/l，kh2po42g/l，mnso40.001g/l，cuso40.03g/l，nacl0.2g/l。

后發(fā)酵菌液中，芽孢桿菌種子液的制備過(guò)程為，從試管斜面挑取挑取芽孢桿菌2環(huán)，接入lb培養(yǎng)基，于25℃搖床培養(yǎng)48h制得芽孢桿菌種子液；

釀酒酵母菌種子液的制備過(guò)程為：從試管斜面挑取挑取釀酒酵母菌2環(huán)，接入標(biāo)準(zhǔn)ypda培養(yǎng)基，于25℃靜置培養(yǎng)60h制得釀酒酵母菌種子液；

乳酸菌種子液的制備過(guò)程為：從試管斜面挑取挑取乳酸菌2環(huán)，接入mrs培養(yǎng)基，于30℃靜置培養(yǎng)48h制得乳酸菌種子液。

后發(fā)酵過(guò)程的操作為：以5％體積的接種量加入芽孢桿菌種子液，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的含水量為80％，于25℃靜置發(fā)酵48h；然后再分別以5％體積的接種量同時(shí)加入釀酒酵母種子液和乳酸菌種子液，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的含水量為80％，于25℃靜置發(fā)酵72h。

發(fā)酵產(chǎn)物干燥的操作是將發(fā)酵產(chǎn)物于40℃烘干，至發(fā)酵產(chǎn)物中的含水量為12.5％時(shí)，制得最終復(fù)合固態(tài)益生菌劑。

其余內(nèi)容與實(shí)施例1完全相同。

實(shí)施例3

在實(shí)施例2的基礎(chǔ)上，本發(fā)明較佳的實(shí)施例還包括一種包含桑黃菌的復(fù)合固態(tài)益生菌劑的制備方法：

固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基中各組分的質(zhì)量份數(shù)為：玉米粉23份，玉米皮31份，豆粕9份，大豆皮7份，麩皮24份，玉米蛋白粉1.5份，滑石粉4份，蒙脫石0.1份，糖蜜2.8份。

桑黃菌接種到固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基內(nèi)進(jìn)行發(fā)酵的過(guò)程為：將固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌后，以20％體積的接種量接入桑黃菌種子液，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基含水量為40％，于35℃固態(tài)發(fā)酵3天；發(fā)酵完成后攪拌混合所得的固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基，將菌絲體均勻分散于固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基內(nèi)。

桑黃菌種子液的制備方法為：將7mm的桑黃菌片接入桑黃菌培養(yǎng)基內(nèi)，于35℃搖床培養(yǎng)12h制得桑黃菌種子液；桑黃菌培養(yǎng)基的組分為：麥芽浸粉25g/l，葡萄糖10g/l，mgso40.8g/l，kh2po40.2g/l，mnso40.003g/l，cuso40.001g/l，nacl2g/l。

后發(fā)酵菌液中，芽孢桿菌種子液的制備過(guò)程為，從試管斜面挑取挑取芽孢桿菌2環(huán)，接入lb培養(yǎng)基，于32℃搖床培養(yǎng)12h制得芽孢桿菌種子液；

釀酒酵母菌種子液的制備過(guò)程為：從試管斜面挑取挑取釀酒酵母菌2環(huán)，接入標(biāo)準(zhǔn)ypda培養(yǎng)基，于32℃靜置培養(yǎng)12h制得釀酒酵母菌種子液；

乳酸菌種子液的制備過(guò)程為：從試管斜面挑取挑取乳酸菌2環(huán)，接入mrs培養(yǎng)基，于42℃靜置培養(yǎng)12h制得乳酸菌種子液。

后發(fā)酵過(guò)程的操作為：以20％體積的接種量加入芽孢桿菌種子液，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的含水量為50％，于32℃靜置發(fā)酵12h；然后再分別以20％體積的接種量同時(shí)加入釀酒酵母種子液和乳酸菌種子液，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的含水量為50％，于32℃靜置發(fā)酵12h。

發(fā)酵產(chǎn)物干燥的操作是將發(fā)酵產(chǎn)物于80℃烘干，至發(fā)酵產(chǎn)物中的含水量為10％時(shí)，制得最終復(fù)合固態(tài)益生菌劑。

其余內(nèi)容與實(shí)施例1完全相同。

實(shí)施例4

在實(shí)施例1的基礎(chǔ)上，本發(fā)明較佳的實(shí)施例為一種包含桑黃菌的復(fù)合固態(tài)益生菌劑的制備方法：

固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基中各組分的質(zhì)量份數(shù)為：玉米粉18.5份，玉米皮33份，豆粕6份，大豆皮8.5份，麩皮18.5份，玉米蛋白粉2.5份，滑石粉2.5份，蒙脫石0.15份，糖蜜1.2份。

桑黃菌接種到固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基內(nèi)進(jìn)行發(fā)酵的過(guò)程為：將固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌后，以8％體積的接種量接入桑黃菌種子液，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基含水量為35％，于28℃固態(tài)發(fā)酵4.5天；發(fā)酵完成后攪拌混合所得的固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基，將菌絲體均勻分散于固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基內(nèi)。

桑黃菌種子液的制備方法為：將7mm的桑黃菌片接入桑黃菌培養(yǎng)基內(nèi)，于29℃搖床培養(yǎng)20h制得桑黃菌種子液；桑黃菌培養(yǎng)基的組分為：麥芽浸粉7.5g/l，葡萄糖13.5g/l，mgso40.25g/l，kh2po40.95g/l，mnso40.0015g/l，cuso40.0015g/l，nacl0.85g/l。

后發(fā)酵菌液中，芽孢桿菌種子液的制備過(guò)程為，從試管斜面挑取挑取芽孢桿菌2環(huán)，接入lb培養(yǎng)基，于29℃搖床培養(yǎng)21h制得芽孢桿菌種子液；

釀酒酵母菌種子液的制備過(guò)程為：從試管斜面挑取挑取釀酒酵母菌2環(huán)，接入標(biāo)準(zhǔn)ypda培養(yǎng)基，于28℃靜置培養(yǎng)32h制得釀酒酵母菌種子液；

乳酸菌種子液的制備過(guò)程為：從試管斜面挑取挑取乳酸菌2環(huán)，接入mrs培養(yǎng)基，于35℃靜置培養(yǎng)24h制得乳酸菌種子液。

后發(fā)酵過(guò)程的操作為：以8.5％體積的接種量加入芽孢桿菌種子液，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的含水量為61％，于26℃靜置發(fā)酵22h；然后再分別以12％體積的接種量同時(shí)加入釀酒酵母種子液和乳酸菌種子液，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的含水量為57％，于27℃靜置發(fā)酵38h。

發(fā)酵產(chǎn)物干燥的操作是將發(fā)酵產(chǎn)物于52℃烘干，至發(fā)酵產(chǎn)物中的含水量為10.5％時(shí)，制得最終復(fù)合固態(tài)益生菌劑。

其余內(nèi)容與實(shí)施例1完全相同。

實(shí)施例5

在實(shí)施例1的基礎(chǔ)上，本發(fā)明較佳的實(shí)施例還包括一種包含桑黃菌的復(fù)合固態(tài)益生菌劑的制備方法：

固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基中各組分的質(zhì)量份數(shù)為：玉米粉21份，玉米皮37.5份，豆粕7.5份，大豆皮10.5份，麩皮21.5份，玉米蛋白粉3.7份，滑石粉3.2份，蒙脫石0.25份，糖蜜2.2份。

桑黃菌接種到固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基內(nèi)進(jìn)行發(fā)酵的過(guò)程為：將固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌后，以17％體積的接種量接入桑黃菌種子液，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基含水量為77％，于32℃固態(tài)發(fā)酵6.5天；發(fā)酵完成后攪拌混合所得的固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基，將菌絲體均勻分散于固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基內(nèi)。

桑黃菌種子液的制備方法為：將7mm的桑黃菌片接入桑黃菌培養(yǎng)基內(nèi)，于33℃搖床培養(yǎng)38h制得桑黃菌種子液；桑黃菌培養(yǎng)基的組分為：麥芽浸粉22g/l，葡萄糖21g/l，mgso40.65g/l，kh2po41.7g/l，mnso40.0025g/l，cuso40.0025g/l，nacl1.65g/l。

后發(fā)酵菌液中，芽孢桿菌種子液的制備過(guò)程為，從試管斜面挑取挑取芽孢桿菌2環(huán)，接入lb培養(yǎng)基，于30℃搖床培養(yǎng)38h制得芽孢桿菌種子液；

釀酒酵母菌種子液的制備過(guò)程為：從試管斜面挑取挑取釀酒酵母菌2環(huán)，接入標(biāo)準(zhǔn)ypda培養(yǎng)基，于31℃靜置培養(yǎng)52h制得釀酒酵母菌種子液；

乳酸菌種子液的制備過(guò)程為：從試管斜面挑取挑取乳酸菌2環(huán)，接入mrs培養(yǎng)基，于39℃靜置培養(yǎng)39h制得乳酸菌種子液。

后發(fā)酵過(guò)程的操作為：以17.5％體積的接種量加入芽孢桿菌種子液，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的含水量為76％，于30℃靜置發(fā)酵38h；然后再分別以17.5％體積的接種量同時(shí)加入釀酒酵母種子液和乳酸菌種子液，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的含水量為72％，于30℃靜置發(fā)酵64h。

發(fā)酵產(chǎn)物干燥的操作是將發(fā)酵產(chǎn)物于71℃烘干，至發(fā)酵產(chǎn)物中的含水量為12％時(shí)，制得最終復(fù)合固態(tài)益生菌劑。

其余內(nèi)容與實(shí)施例1完全相同。

以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明技術(shù)原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤(rùn)飾，這些改進(jìn)和潤(rùn)飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。