本發(fā)明涉及藥渣發(fā)酵技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種玉屏風(fēng)藥渣發(fā)酵的工藝方法。

背景技術(shù)：

隨著中醫(yī)藥事業(yè)的不斷發(fā)展，中藥制劑的需求量也越來越大，中藥渣的排放量也隨之增加。調(diào)查統(tǒng)計顯示，目前我國約有1500家中醫(yī)藥企業(yè)，中藥渣每年排放量已達1200萬噸。中藥渣主要來源于中藥加工與炮制，中成藥以及其他中藥相關(guān)產(chǎn)品的加工過程，其中中成藥所產(chǎn)生的藥渣最多，約占藥渣總量的70％。在過去的中藥產(chǎn)業(yè)發(fā)展過程中剩余藥渣大多數(shù)通過堆放，填埋焚燒等方式進行廢棄處理，然而中藥渣一般含水量較高，極易腐敗，對周圍的環(huán)境(尤其是水質(zhì)或土壤)會造成嚴重污染，同時企業(yè)也會投入一定資金作為排污處理費，因此藥渣排放和處理問題成為目前困擾廣大中藥制藥企業(yè)的難題之一。

為了避免中藥渣直接廢棄造成的環(huán)境污染問題，同時有效利用中藥渣資源，目前對中藥渣直接利用主要有以下幾種方式：(1)中藥渣作為有機肥料用于果蔬種植；(2)利用一些中藥渣的吸附能力進行污水處理和凈化；(3)中藥渣制成動物飼料應(yīng)用于養(yǎng)殖中。其中將中藥渣直接作為飼料添加劑使用也是目前較為廣泛的利用方式。

由于中藥渣被提取后雖然存在一定的營養(yǎng)價值和藥用成分，但是含量不是很高，卻富含粗纖維，目前有研究者也提出直接將藥渣作為飼料添加劑可能會不利于動物吸收其有效成分，從而造成過大的添加量來達到藥效目的，這將導(dǎo)致飼料配比不當(dāng)，藥渣質(zhì)量方面也無法得到控制。

中藥提取后會剩余很多藥渣，而藥渣處理不當(dāng)會造成環(huán)境污染。在中藥渣成分分析利用研究中表明，中藥渣尚存在部分活性物質(zhì)及營養(yǎng)物質(zhì)。玉屏風(fēng)藥渣是中成藥玉屏風(fēng)口服液、顆粒、膠囊等提取后剩余的藥渣，玉屏風(fēng)口服液是1990版藥典收載的新劑型，由于療效好因此年產(chǎn)量大，然而產(chǎn)生的藥渣尚未被有效利用。藥渣粗纖維含量高，直接使用會使植物細胞壁阻礙機體對活性成分的吸收和利用。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種玉屏風(fēng)藥渣發(fā)酵的工藝方法。

本發(fā)明的技術(shù)方案為：

一種玉屏風(fēng)藥渣發(fā)酵的工藝方法，先對菌種進行活化和培養(yǎng)，然后將菌液接種到藥渣中，進行發(fā)酵。

優(yōu)選的，所述的菌種為黑曲霉。

優(yōu)選的，所述的發(fā)酵為固態(tài)發(fā)酵。

所述的玉屏風(fēng)藥渣發(fā)酵工藝方法，所述的菌種活化和培養(yǎng)為將菌種接種在固體培養(yǎng)基上，于恒溫培養(yǎng)箱28—32℃培養(yǎng)2-4d，然后將活化后的菌種用無菌水洗脫，制成孢子懸液，轉(zhuǎn)接于液體培養(yǎng)基中，于恒溫震蕩培養(yǎng)箱28—32℃，120—170r/min振蕩培養(yǎng)20-26h，即可用于接種發(fā)酵。

優(yōu)選的，所述的玉屏風(fēng)藥渣發(fā)酵工藝方法，所述的菌種活化和培養(yǎng)為將菌種接種在固體培養(yǎng)基上，于恒溫培養(yǎng)箱30℃培養(yǎng)3d，然后將活化后的菌種用無菌水洗脫，制成孢子懸液，轉(zhuǎn)接于液體培養(yǎng)基中，于恒溫震蕩培養(yǎng)箱30℃，150r/min振蕩培養(yǎng)27h，即可用于接種發(fā)酵。

優(yōu)選的，所述的固定培養(yǎng)基為馬鈴薯固體培養(yǎng)基；所述的無菌水為無菌超純水。

優(yōu)選的，將活化后的菌種用無菌超純水洗脫，制成孢子懸液，濃度調(diào)為1×10⁷個/ml，轉(zhuǎn)接于100ml液體培養(yǎng)基中。

菌液接種到藥渣中的時間60—85h，接種量8—18％，含水量30—50％。

優(yōu)選的，菌液接種到藥渣中的時間68—75h，接種量10—15％，含水量35—45％。

優(yōu)選的，菌液接種到藥渣中的時間72h，接種量12％，含水量40％。

本發(fā)明的有益效果為：

1、本發(fā)明利用固態(tài)發(fā)酵技術(shù)，采用黑曲霉發(fā)酵玉屏風(fēng)口服液藥渣實現(xiàn)降解粗纖維的目的，對藥渣進行生物轉(zhuǎn)化，技術(shù)簡單，節(jié)約能源，保護環(huán)境。

2、本發(fā)明以纖維素酶活為指標(biāo)，采用單因素和正交試驗研究黑曲霉發(fā)酵玉屏風(fēng)口服液藥渣的最佳發(fā)酵條件，結(jié)果顯示最佳發(fā)酵條件為時間72h，接種量12％，含水量40％，纖維素酶活為3.94iu/g。

3、本發(fā)明采用高效液相色譜分析水提和醇提方式提取于最佳發(fā)酵條件下發(fā)酵玉屏風(fēng)藥渣前后成分的變化。結(jié)果顯示未發(fā)酵藥渣水提物和醇提物幾乎沒有含量高的成分。發(fā)酵藥渣水提物出現(xiàn)了比未發(fā)酵含量高的相似保留時間峰，差異倍數(shù)約為5倍，但整體峰高低于口服液。發(fā)酵醇提物水溶后出現(xiàn)了兩個含量較高的峰，峰面積約為未發(fā)酵相似保留時間兩處峰的20倍和50倍。

4、本發(fā)明初步評價發(fā)酵玉屏風(fēng)藥渣醇提物對小鼠的免疫效果，即對免疫抑制小鼠免疫器官指數(shù)恢復(fù)作用和對h9n2滅活流感病毒免疫小鼠血清抗體效價的提高作用。另一方面考察發(fā)酵玉屏風(fēng)藥渣醇提物對小鼠的促生長作用。結(jié)果顯示發(fā)酵藥渣醇提物與未發(fā)酵對免疫器官指數(shù)和抗體效價均無影響。發(fā)酵玉屏風(fēng)藥渣醇提物與未發(fā)酵和空白組相比可顯著提高小鼠增重，且料肉比低于未發(fā)酵和空白組，差值在1～2之間；發(fā)酵藥渣醇提物對小鼠臟器沒有毒性作用。

5、本發(fā)明采用高效液相色譜考察發(fā)酵藥渣醇提物兩個特征性成分色譜方法學(xué)可靠性，成分可能來源因素以及不同批次發(fā)酵物的穩(wěn)定性。色譜方法學(xué)考察結(jié)果顯示成分1和成分2線性關(guān)系，重復(fù)性，穩(wěn)定性均良好；由成分來源的可能因素(黑曲霉菌液，纖維素酶以及黑曲霉常用發(fā)酵基質(zhì)麥麩發(fā)酵產(chǎn)物)指紋圖譜得知，通過保留時間對比發(fā)現(xiàn)三個因素均沒有這兩個成分；對不同批次的發(fā)酵藥渣醇提物進行兩個成分比較，發(fā)現(xiàn)兩個成分保留時間基本一致，但是含量有所差異。

結(jié)論：黑曲霉固態(tài)發(fā)酵玉屏風(fēng)口服液藥渣醇提物與未發(fā)酵相比出現(xiàn)了兩個含量較高的成分；發(fā)酵藥渣醇提物可提高小鼠增重，降低料肉比，初步說明發(fā)酵藥渣醇提物對小鼠有一定的促生長的作用。

附圖說明：

圖1：玉屏風(fēng)口服液藥渣固體發(fā)酵工藝路線；

圖2：葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線；

圖3：時間對產(chǎn)纖維素酶活的影響；

圖4：接種量對產(chǎn)纖維素酶活的影響；

圖5：初始含水量對產(chǎn)纖維素酶活的影響；

圖6：為正交試驗酶活變化趨勢圖；

具體實施方式

以下實施例和實驗例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。

實施例1

一種玉屏風(fēng)藥渣發(fā)酵的工藝方法，先對菌種進行活化和培養(yǎng)，然后將菌液接種到藥渣中，進行發(fā)酵；所述的菌種為黑曲霉；所述的發(fā)酵為固態(tài)發(fā)酵；所述的菌種活化和培養(yǎng)為將菌種接種在固體培養(yǎng)基上，于恒溫培養(yǎng)箱28—32℃培養(yǎng)2-4d，然后將活化后的菌種用無菌水洗脫，制成孢子懸液，轉(zhuǎn)接于液體培養(yǎng)基中，于恒溫震蕩培養(yǎng)箱28—32℃，120—170r/min振蕩培養(yǎng)20-26h，即可用于接種發(fā)酵；菌液接種到藥渣中的時間60—85h，接種量8—18％，含水量30—50％。

實施例2

一種玉屏風(fēng)藥渣發(fā)酵的工藝方法，先對菌種進行活化和培養(yǎng)，然后將菌液接種到藥渣中，進行發(fā)酵；所述的菌種為黑曲霉；所述的發(fā)酵為固態(tài)發(fā)酵；所述的菌種活化和培養(yǎng)為將菌種接種在馬鈴薯固體培養(yǎng)基上，于恒溫培養(yǎng)箱30℃培養(yǎng)3d，然后將活化后的菌種用無菌超純水洗脫，制成孢子懸液，濃度調(diào)為1×10⁷個/ml，轉(zhuǎn)接于100ml液體培養(yǎng)基中，于恒溫震蕩培養(yǎng)箱30℃，150r/min振蕩培養(yǎng)27h，即可用于接種發(fā)酵；菌液接種到藥渣中的時間60—85h，接種量8—18％，含水量30—50％；

固體培養(yǎng)基：馬鈴薯葡萄糖瓊脂(potatodextroseagar,pda)培養(yǎng)基：馬鈴薯200g，葡萄糖20g，水1000ml，瓊脂15g，121℃高壓蒸汽滅菌20min，分裝倒板，4℃保存?zhèn)溆茫?/p>

馬鈴薯液體培養(yǎng)基：上述培養(yǎng)基不加瓊脂，滅菌冷卻后4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

實施例3

一種玉屏風(fēng)藥渣發(fā)酵的工藝方法，先對菌種進行活化和培養(yǎng)，然后將菌液接種到藥渣中，進行發(fā)酵；所述的菌種為黑曲霉；所述的發(fā)酵為固態(tài)發(fā)酵；所述的菌種活化和培養(yǎng)為將菌種接種在馬鈴薯固體培養(yǎng)基上，于恒溫培養(yǎng)箱30℃培養(yǎng)3d，然后將活化后的菌種用無菌超純水洗脫，制成孢子懸液，濃度調(diào)為1×10⁷個/ml，轉(zhuǎn)接于100ml液體培養(yǎng)基中，于恒溫震蕩培養(yǎng)箱30℃，150r/min振蕩培養(yǎng)27h，即可用于接種發(fā)酵；菌液接種到藥渣中的時間68—75h，接種量10—15％，含水量35—45％；

固體培養(yǎng)基：馬鈴薯葡萄糖瓊脂(potatodextroseagar,pda)培養(yǎng)基：馬鈴薯200g，葡萄糖20g，水1000ml，瓊脂15g，121℃高壓蒸汽滅菌20min，分裝倒板，4℃保存?zhèn)溆茫?/p>

馬鈴薯液體培養(yǎng)基：上述培養(yǎng)基不加瓊脂，滅菌冷卻后4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

實施例4

一種玉屏風(fēng)藥渣發(fā)酵的工藝方法，先對菌種進行活化和培養(yǎng)，然后將菌液接種到藥渣中，進行發(fā)酵；所述的菌種為黑曲霉；所述的發(fā)酵為固態(tài)發(fā)酵；所述的菌種活化和培養(yǎng)為將菌種接種在馬鈴薯固體培養(yǎng)基上，于恒溫培養(yǎng)箱30℃培養(yǎng)3d，然后將活化后的菌種用無菌超純水洗脫，制成孢子懸液，濃度調(diào)為1×10⁷個/ml，轉(zhuǎn)接于100ml液體培養(yǎng)基中，于恒溫震蕩培養(yǎng)箱30℃，150r/min振蕩培養(yǎng)27h，即可用于接種發(fā)酵；菌液接種到藥渣中的時間72h，接種量12％，含水量40％；

固體培養(yǎng)基：馬鈴薯葡萄糖瓊脂(potatodextroseagar,pda)培養(yǎng)基：馬鈴薯200g，葡萄糖20g，水1000ml，瓊脂15g，121℃高壓蒸汽滅菌20min，分裝倒板，4℃保存?zhèn)溆茫?/p>

馬鈴薯液體培養(yǎng)基：上述培養(yǎng)基不加瓊脂，滅菌冷卻后4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

實施例5

一種玉屏風(fēng)藥渣發(fā)酵的工藝方法，先對菌種進行活化和培養(yǎng)，然后將菌液接種到藥渣中，進行發(fā)酵；所述的菌種為黑曲霉；所述的發(fā)酵為固態(tài)發(fā)酵；所述的菌種活化和培養(yǎng)為將菌種接種在馬鈴薯固體培養(yǎng)基上，于恒溫培養(yǎng)箱30℃培養(yǎng)3d，然后將活化后的菌種用無菌超純水洗脫，制成孢子懸液，濃度調(diào)為1×10⁷個/ml，轉(zhuǎn)接于100ml液體培養(yǎng)基中，于恒溫震蕩培養(yǎng)箱30℃，150r/min振蕩培養(yǎng)27h，即可用于接種發(fā)酵；菌液接種到藥渣中的時間72h，接種量12％，含水量40％；

固體培養(yǎng)基：馬鈴薯葡萄糖瓊脂(potatodextroseagar,pda)培養(yǎng)基：馬鈴薯200g，葡萄糖20g，水1000ml，瓊脂15g，121℃高壓蒸汽滅菌20min，分裝倒板，4℃保存?zhèn)溆茫?/p>

馬鈴薯液體培養(yǎng)基：上述培養(yǎng)基不加瓊脂，滅菌冷卻后4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

實驗例1玉屏風(fēng)口服液藥渣發(fā)酵單因素的研究

1菌種及材料

1.1菌種

黑曲霉(atcc16404)購于上海復(fù)祥生物有限公司。

1.2材料

玉屏風(fēng)口服液藥渣(yupingfengoralliquidresidues，yolrs)：保定冀中藥業(yè)有限公司提供。

1.2培養(yǎng)基

馬鈴薯葡萄糖瓊脂(potatodextroseagar,pda)培養(yǎng)基：馬鈴薯200g，葡萄糖20g，水1000ml，瓊脂15g，121℃高壓蒸汽滅菌20min，分裝倒板，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

馬鈴薯液體培養(yǎng)基：上述培養(yǎng)基不加瓊脂，滅菌冷卻后4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3化學(xué)試劑

1.4儀器設(shè)備

2試驗方法

2.1菌種活化和培養(yǎng)

將黑曲霉標(biāo)準(zhǔn)菌種接種在馬鈴薯固體培養(yǎng)基上，于恒溫培養(yǎng)箱30℃培養(yǎng)3d，然后將活化后的黑曲霉用適量無菌超純水洗脫，制成孢子懸液，濃度調(diào)為1×10⁷個/ml，轉(zhuǎn)接于100ml液體培養(yǎng)基中，于恒溫震蕩培養(yǎng)箱30℃，150r/min振蕩培養(yǎng)24h，即可用于接種發(fā)酵。

2.2玉屏風(fēng)口服液藥渣固體發(fā)酵工藝路線，見圖1

2.2.1時間對玉屏風(fēng)口服液藥渣發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶活影響的研究

將菌液按照藥渣發(fā)酵工藝的流程接種到10g藥渣中，接種量為10％，含水量為50％，置于電熱恒溫振蕩培養(yǎng)箱中30℃，150r/min分別在24h、48h、72h、96h、120h、144h條件下進行發(fā)酵，按照設(shè)定條件取藥渣測定纖維素酶活，研究時間對藥渣發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶活的影響。

2.2.2接種量對玉屏風(fēng)口服液藥渣發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶活影響的研究

將菌液按照藥渣發(fā)酵工藝的流程接種到10g藥渣中，發(fā)酵時間為2.2.1篩選出的最佳時間，含水量為50％，分別在接種量6％、8％、10％、12％、14％、16％條件下進行發(fā)酵，按照設(shè)定條件取藥渣測定纖維素酶活，研究接種量對藥渣發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶活的影響。

2.2.3含水量對玉屏風(fēng)口服液藥渣發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶活影響的研究

將菌液按照藥渣發(fā)酵工藝的流程接種到10g藥渣中，發(fā)酵時間為2.2.1篩選出的最佳時間，接種量為2.2.3.2篩選的最佳接種量，分別在含水量30％、40％、50％、60％、70％、80％條件下進行發(fā)酵，按照設(shè)定條件取藥渣測定纖維素酶活，研究含水量對藥渣發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶活的影響。

2.2.4發(fā)酵玉屏風(fēng)口服液藥渣最佳發(fā)酵條件的確定

根據(jù)單因素試驗的結(jié)果，選取時間、接種量和含水量三個因素作為試驗因子，每個因素三個水平作正交發(fā)酵試驗，通過產(chǎn)纖維素酶活來確定藥渣接種發(fā)酵的最佳工藝參數(shù)。

2.2.5粗酶液的制取

按上述設(shè)置的試驗條件發(fā)酵結(jié)束后，取1g發(fā)酵物，溶于10ml醋酸緩沖溶液，置于搖床中，50℃，150r/min，2h提取，6000r/min離心10min，取上清液作為粗酶液備用。

2.2.6纖維素酶活檢測方法

2.2.6.1溶液配制

(1)ph5.0醋酸緩沖溶液配制：50gnach3cooh.3h2o溶于適量水，6molch3cooh34ml，定容至500ml。

(2)葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液(10mg/ml):稱取105℃烘干至恒重?zé)o水葡萄糖約200mg，加檸檬酸鹽緩沖溶液溶解，定容至20ml

(3)檸檬酸鹽緩沖溶液配置：稱取檸檬酸1.05g，加入氫氧化鈉0.5g，再加80ml水溶解，用檸檬酸溶液(0.1mol/l)調(diào)節(jié)ph至5.5，再用水定容至100ml。

(4)檸檬酸溶液配置：稱取檸檬酸(c6h8o7·h2o)2.1g，加水溶解定容至100ml。

(5)naoh溶液(200g/l)配制：10g，50ml水溶解。

(6)dns試劑配置：稱3，5-二硝基水楊酸1.575g，加水250ml，攪拌溶解，水浴至45℃，然后逐步加入naoh(200g/l)50ml，不斷攪拌，直至完全溶解，在逐步加入酒石酸鈉鉀45.5g，苯酚1.25g，亞硫酸鈉1.25g，攪拌至溶解，冷卻至室溫后，定容至500ml，過濾，取濾液儲存于棕色瓶中，避光保存，室溫下存放7d，可以使用，有效期為6個月。

(7)0.5％的羧甲基纖維素鈉溶液：0.5g，100ml醋酸緩沖溶液定容。

2.2.6.2葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

稱取105℃烘干至恒重?zé)o水葡萄糖約100mg，加檸檬酸鹽緩沖溶液溶解，定容至10ml，利用檸檬酸鹽緩沖液再稀釋至1mg/ml。取1mg/ml葡萄糖溶液0.4，0.8，1.2，1.6，2.0ml，分別加檸檬酸緩沖溶液定容至2ml。取配制的不同濃度的葡萄糖溶液各1ml于試管中，分別加2ml水，2mldns試劑，沸水浴5min。冷卻至室溫，用水定容至10ml，在540nm波長下比色測定od值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，如圖2。

2.2.6.3纖維素酶活性的測定

取粗酶液1ml，加0.5％的羧甲基纖維素鈉溶液(ph＝5的醋酸緩沖液配置)3ml，于50℃水浴30min，冷卻加2mldns，再沸水浴5min，冷卻至室溫，加水定容至25ml，在540nm波長下測od值。

公式：

c＝根據(jù)吸光度從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得的葡萄糖濃度(mg/ml)

25＝加入的lml粗酶液到總?cè)芤?5ml為稀釋25倍(ml)

10＝總的粗酶液量(ml)

5.56＝lmg葡萄糖的摩爾質(zhì)量為5.56(umol)

m＝發(fā)酵物質(zhì)量(g)

30＝反應(yīng)時間(min)

3統(tǒng)計分析

數(shù)據(jù)分析采用spss17.0軟件進行，用方差齊性檢驗和單因素方差分析(onewayanova)進行多組間比較分析，以p<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

4結(jié)果

4.1時間對玉屏風(fēng)口服液藥渣發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶活影響

在溫度為30℃條件下恒溫發(fā)酵，接種量10％，含水量50％，時間范圍從24h至144h，每隔24h設(shè)一檢測點測定纖維素酶活，篩選出最佳發(fā)酵時間點。由圖3可見，隨發(fā)酵時間的增加，發(fā)酵后纖維素酶活先升高后降低，且發(fā)酵時間在72h時，藥渣發(fā)酵后纖維素酶活最高。

4.2接種量對玉屏風(fēng)口服液藥渣發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶活影響

在溫度為30℃條件下恒溫發(fā)酵，時間72h，含水量50％，接種量在6％至16％范圍內(nèi)測定酶活，選取最佳接種量。由圖4可知，隨接種量的增加，發(fā)酵后纖維素酶活先升高后降低，且接種量在12％時，藥渣發(fā)酵后纖維素酶活最高。

4.3含水量對玉屏風(fēng)口服液藥渣發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶活影響

在溫度為30℃條件下恒溫發(fā)酵，時間72h，接種量12％，含水量在30％至80％范圍內(nèi)測定酶活，選取最佳含水量。由圖5可知，隨含水量的增加，發(fā)酵后纖維素酶活先升高后降低，且含水量在50％時，藥渣發(fā)酵后纖維素酶活最高。

4.4正交優(yōu)選玉屏風(fēng)口服液藥渣的最佳發(fā)酵條件

為了得到藥渣發(fā)酵后纖維素酶活最高的的發(fā)酵條件，以單因素試驗為基礎(chǔ)，選取每個因素下纖維素酶活高的三個水平作為正交試驗條件組合，研究各因素及其水平組合對纖維素酶活的影響。按照藥渣發(fā)酵條件，以表1對應(yīng)的因素水平進行發(fā)酵，表2正交結(jié)果表明，確定藥渣發(fā)酵后纖維素酶活最優(yōu)發(fā)酵條件為a2b3c1，即時間72h，接種量12％，含水量40％，此條件下酶活最高。經(jīng)極差分析，ra＝1.22>rb＝0.74>rc＝0.35，影響因素大小順序為c(發(fā)酵時間)>b(接菌量)>a(含水量)。且由最佳發(fā)酵條件處理的纖維素酶活為3.94iu/g。圖6為正交試驗酶活變化趨勢圖。

表1正交因素水平表

表2正交試驗直觀分析表

采用正交試驗?zāi)康脑谟谝暂^少的試驗，找到試驗因素的最佳水平，以得到試驗所需量的目標(biāo)產(chǎn)物。本試驗為了得到藥渣發(fā)酵后纖維素酶活最高的的發(fā)酵條件，以單因素試驗為基礎(chǔ)，選取每個因素下纖維素酶活高的三個水平作為正交試驗條件組合，研究各因素及其水平組合對纖維素酶活的影響。確定藥渣發(fā)酵后纖維素酶活最優(yōu)發(fā)酵條件為a2b3c1，即時間72h，接種量12％，含水量40％，此條件下酶活最高，為3.94iu/g。經(jīng)極差分析，影響因素大小順序為c(發(fā)酵時間)>b(接菌量)>a(含水量)。

不同發(fā)酵時間、接種量、含水量影響黑曲霉作用藥渣產(chǎn)纖維素酶活的高低，通過篩選最佳發(fā)酵條件，使黑曲霉作用藥渣降解細胞壁纖維素能力達到最佳，從而有助于藥渣成分的析出和改變。同時，優(yōu)化發(fā)酵工藝也利于得到安全有效的產(chǎn)物，對發(fā)酵產(chǎn)物在質(zhì)量方面的評價具有重要意義。