本發(fā)明涉及飼料領(lǐng)域，具體涉及一種仔豬飼料添加劑。
背景技術(shù)：
長(zhǎng)期以來(lái)，斷奶仔豬疾病高發(fā)是嚴(yán)重困擾我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展的重要原因。仔豬斷奶后，由于母乳被中斷，環(huán)境、飼料等的突然改變，造成各系統(tǒng)功能紊亂、機(jī)體免疫力下降，容易感染各種免疫抑制性疾病(如藍(lán)耳病病毒、豬瘟野毒偽狂犬病毒、圓環(huán)病毒等)，造成仔豬斷奶后發(fā)病率和死亡率高等嚴(yán)重后果。
目前，國(guó)外主要通過(guò)調(diào)整飼糧組成(如高營(yíng)養(yǎng)性、高適應(yīng)性仔豬斷奶料)、溫控及其他環(huán)境的控制來(lái)防制仔豬斷奶綜合征。國(guó)內(nèi)主要通過(guò)在飼料中添加抗生素類藥物來(lái)控制繼發(fā)感染，但容易造成耐藥性、仔豬免疫機(jī)能下降、藥物殘留及污染環(huán)境等弊端。
中藥制劑富含多種多糖等活性成分，在提高機(jī)體免疫力和抗病力方面有著顯著的作用，現(xiàn)已證明數(shù)百種中草藥有多方面的免疫活性，如促進(jìn)免疫器官的生長(zhǎng)發(fā)育，增強(qiáng)機(jī)體的細(xì)胞免疫和體液免疫，促進(jìn)干擾素-γ、白細(xì)胞介素-2等細(xì)胞因子產(chǎn)生等作用，并且綠色、安全、不易產(chǎn)生耐藥性。因此，中草藥的開發(fā)利用已成為眾望所歸。
阿魏酸(ferulicacid)，化學(xué)名為4-羥基-3-甲氧基苯丙烯酸，分子量194.18。阿魏酸溶于熱水，乙醇和乙酸乙酯，稍溶于乙醚，難溶于苯和石油醚。從化學(xué)結(jié)構(gòu)上看，阿魏酸有順式和反式兩種立體異構(gòu)體。阿魏酸的合成有半合成法、生物合成法及化學(xué)合成法。其中，半合成法以谷維素為原料，工藝簡(jiǎn)單，收率可達(dá)，適于工業(yè)化生產(chǎn)。
現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，阿魏酸至少具有以下功能：抗血小板凝集和血栓、清除亞硝酸鹽、氧自由基、過(guò)氧化亞硝基、抗菌消炎、抗腫瘤、抗突變、增加免疫功能、增強(qiáng)人體精子活力和運(yùn)動(dòng)性等。
研究表明，阿魏酸具有很強(qiáng)抗氧化活性，對(duì)過(guò)氧化氫、超氧自由基、輕自由基、過(guò)氧化亞硝基都有強(qiáng)烈清除作用。阿魏酸不僅能清除自由基，且能調(diào)節(jié)人體生理機(jī)能，抑制產(chǎn)生自由基之酶，促進(jìn)清除自由基的酶產(chǎn)生。阿魏酸能增加谷胱甘肽轉(zhuǎn)硫酶和醌還原酶活性，抑制酪氨酸酶活性。實(shí)驗(yàn)研究還發(fā)現(xiàn)，阿魏酸能保護(hù)體內(nèi)產(chǎn)生過(guò)氧化物，特別是羥自由基、一氧化氮造成的細(xì)胞損傷。
阿魏酸鈉能明顯抑制血小板聚集、抑制經(jīng)色胺、血栓素(txa2)樣物質(zhì)釋放，選擇性抑制txa2合成酶活性，使前列環(huán)素pgi2/txa2比率升高。其抑制血栓素機(jī)制可能為：一是選擇性抑制血栓素合成酶；二是拮抗血栓素作用；三是通過(guò)抑制磷脂酶a2阻止花生四烯酸游離，從而阻止txa2生成。另外，阿魏酸用于自發(fā)性高血壓大鼠短期和長(zhǎng)期研究表明，阿魏酸有明顯降壓作用。當(dāng)給麻痹自發(fā)性高血壓大鼠靜脈注射阿魏酸，其降低頸動(dòng)脈壓效果與劑量呈依賴關(guān)系。另外，用no合酶抑制劑lname3mg/kg預(yù)處理自發(fā)性高血壓大鼠后，靜注阿魏酸，阿魏酸降壓作用減弱，提示阿魏酸降壓效果可能與介導(dǎo)血管舒張有關(guān)。
近年來(lái)，阿魏酸抗結(jié)腸癌研究較多?？蒲腥藛T采用偶氮甲烷(aom)誘導(dǎo)f334鼠產(chǎn)生結(jié)腸癌，發(fā)現(xiàn)飼喂含有500mg/kg阿魏酸，異常病灶隱窩數(shù)下降27％?？蒲腥藛T認(rèn)為，阿魏酸抗癌活性與其能激活解毒酶如谷胱甘肽轉(zhuǎn)硫酶、醌還原酶活性有關(guān)。
阿魏酸對(duì)多種視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞均具有促增殖作用，細(xì)胞活性強(qiáng)度呈現(xiàn)劑量依賴性，對(duì)于小鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞，阿魏酸在15.6-1000mg/l內(nèi)均具有促細(xì)胞增殖作用。對(duì)于新生小牛和7個(gè)月人胚胎視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞，阿魏酸在125-1000mg/l內(nèi)具有促細(xì)胞增殖作用。對(duì)7個(gè)月人胚胎視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞，阿魏酸在62.5-1000mg/l內(nèi)具有促dna合成作用，最佳效應(yīng)濃度為500mg/l。腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(bdnf)在12.5-50μg/l內(nèi)具有促細(xì)胞增殖作用，最佳效應(yīng)濃度為50μg/l，阿魏酸對(duì)3種視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞促增殖作用明顯強(qiáng)于bdnf。阿魏酸能有效提高視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞活性，有望成為一種新的防治退行性視網(wǎng)膜病變有效成分。另外，阿魏酸能有效降低視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)游離鈣水平，對(duì)于促進(jìn)增殖和保護(hù)細(xì)胞具有重要作用。
豬苓(polyporusumbellatus)在分類學(xué)上屬于擔(dān)子菌綱、無(wú)褶菌目、多孔菌科、多孔菌屬。它的干燥菌核稱為豬苓，是常用藥用真菌。豬苓藥用價(jià)值在我國(guó)古代早有應(yīng)用和記載，至今已有2500多年藥用歷史，在國(guó)內(nèi)外享有盛名。豬苓味甘、淡，性平，歸腎、膀胱經(jīng)，功效利水滲濕，主治小便不利、水腫、泄瀉、淋濁、帶下。
豬苓之所以有如此之多的藥用價(jià)值是因其中含有大量的生物活性物質(zhì)豬苓多糖。豬苓中提取的多糖是由10種以上單糖分子組成的高分子多糖，無(wú)甜味，溶于水而不溶于酒精。它與有甜味的單糖(葡萄糖等)和雙塘(蔗糖、乳糖、麥芽糖等)以及無(wú)甜味的淀粉、糖元、纖維素等低分子多糖均不同，它不僅是生物的主要能源，更重要的是它具有多方面的生物活性。研究發(fā)現(xiàn)，豬苓多糖具有抗衰老、能提高機(jī)體的非特異性免疫能力、能顯著地加強(qiáng)網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬細(xì)胞的功能，增強(qiáng)b細(xì)胞對(duì)抗原刺激的反應(yīng)，使癌細(xì)胞的生長(zhǎng)受到抑制，它們的抑瘤作用機(jī)理不同于細(xì)胞毒類藥物的直接殺傷作用，而是通過(guò)提高機(jī)體免疫功能，間接抑制腫瘤的生長(zhǎng)，為抗癌藥研究開辟了一條新途徑。
豬苓多糖能明顯提高小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬指數(shù)和吞噬率、淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率、e玫瑰花環(huán)率及eac花環(huán)率，表明豬苓多糖可以通過(guò)提高巨噬細(xì)胞生物活性，淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力，t細(xì)胞免疫活性等增強(qiáng)或促進(jìn)小鼠的非特異性和特異性免疫功能。用mtt比色法檢測(cè)有或無(wú)豬苓多糖作用的腫瘤細(xì)胞s180培養(yǎng)上清，對(duì)cona誘導(dǎo)的小鼠脾細(xì)胞增殖和il-2產(chǎn)生，對(duì)小鼠脾細(xì)胞殺傷活性，以及ctll-2細(xì)胞對(duì)il-2反應(yīng)性的影響。用流式細(xì)胞儀檢測(cè)該培養(yǎng)上清對(duì)小鼠脾細(xì)胞表面il-2rα表達(dá)的影響，結(jié)果表明豬苓多糖可抵消腫瘤上清的免疫抑制作用，下調(diào)腫瘤細(xì)胞s180合成和/或分泌免疫抑制物質(zhì)。
豬苓多糖可以增強(qiáng)糖原異生酶活性，加速糖異生使荷癌鼠肝糖原積累增加，改善機(jī)體自穩(wěn)狀態(tài)，同時(shí)使荷癌鼠亢進(jìn)的皮質(zhì)功能恢復(fù)正常。提示豬苓多糖有適應(yīng)原作用，可能為其抗腫瘤作用的一個(gè)藥理基礎(chǔ)。豬苓多糖具有抑制腫瘤生長(zhǎng)和增強(qiáng)荷瘤動(dòng)物及腫瘤患者免疫功能的作用。豬苓多糖對(duì)小鼠s180瘤體的抑制率達(dá)50％-70％，瘤重抑制率達(dá)30％以上，約6％-7％荷瘤小鼠腫瘤完全消退，同時(shí)可增強(qiáng)荷瘤小鼠的免疫功能，使荷瘤小鼠脾淋巴樣細(xì)胞對(duì)瘤細(xì)胞的殺傷作用增強(qiáng)。研究發(fā)現(xiàn)豬苓多糖注射液可抵消s180腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清的免疫抑制作用，下調(diào)腫瘤細(xì)胞s180合成和分泌免疫抑制物質(zhì)而發(fā)揮抗瘤作用。通過(guò)豬苓多糖對(duì)結(jié)直腸癌colon26細(xì)胞腫瘤免疫抑制的研究，表明豬苓多糖確實(shí)可以下調(diào)腫瘤細(xì)胞免疫抑制分子分泌，在一定程度上逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞的免疫抑制，可能是其抗瘤效應(yīng)機(jī)制之一。
豬苓多糖能減輕四氯化碳對(duì)小鼠肝臟的損傷，使肝組織病理?yè)p傷減輕、血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性下降，防止肝6-磷酸葡萄糖磷酸酶和結(jié)合酸性磷酸酶活性降低。豬苓多糖在整體及體外肝勻漿試驗(yàn)中均對(duì)四氯化碳引起的脂質(zhì)過(guò)氧化作用增強(qiáng)無(wú)抑制作用，提示其保肝作用不在于抑制四氯化碳的激活或四氯化碳代謝的作用，具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究。豬苓多糖治療慢性乙型肝炎的療效較為肯定，無(wú)論豬苓多糖單獨(dú)應(yīng)用，或是與其他中藥、乙肝疫苗、干擾素、拉米夫定等聯(lián)合應(yīng)用，均可有效抑制乙肝病毒復(fù)制，提高h(yuǎn)beag和hbv-dna陰轉(zhuǎn)率、抗-hbe陽(yáng)轉(zhuǎn)率，改善肝功能。尤其在與其他藥物聯(lián)合時(shí)可以從不同方面發(fā)揮治療作用，提高療效，并在一定程度上減輕他藥的不良反應(yīng)，為中西醫(yī)結(jié)合治療慢性乙型肝炎開辟了一條新途徑。
豬苓多糖具有明顯的防治小鼠急性放射病的效果，有效劑量和時(shí)間都比較寬，而且照前照后，腹腔注射和口服都有防護(hù)效價(jià)，預(yù)防比治療效價(jià)高。豬苓多糖對(duì)受照小鼠的造血功能無(wú)保護(hù)作用，但能明顯提高受照小鼠腎上腺皮質(zhì)的應(yīng)激功能，因此豬苓多糖可能是通過(guò)調(diào)節(jié)垂體-腎上腺系統(tǒng)使機(jī)體處于應(yīng)激狀態(tài)，從而增強(qiáng)抗輻射損傷的能力。豬苓多糖對(duì)環(huán)磷酰胺(ctx)產(chǎn)生的微核有一定抑制作用，能降低ctx致突變作用，并抑制突變細(xì)胞有絲分裂，減少微核產(chǎn)生，穩(wěn)定和促進(jìn)dna修復(fù)，具有抗誘變作用。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種能有效改善仔豬免疫力，且毒副作用低的仔豬飼料添加劑。
本發(fā)明解決上述問(wèn)題所采用的技術(shù)方案是，提供一種改善仔豬免疫力的飼料添加劑，其中活性成分阿魏酸與豬苓多糖的重量比為(1:10)～(10:1)。
優(yōu)選的，所述飼料添加劑中阿魏酸與豬苓多糖的重量比為(1:1)～(1:9)。
更優(yōu)選的，阿魏酸與豬苓多糖的重量比為1:3。
優(yōu)選的，所述豬苓多糖的制備方法如下：取豬苓加水于浸提，多次提取后合并上清液真空濃縮，用無(wú)水乙醇沉淀，沉淀物再溶于適量水中，用sevag法脫蛋白，適量90％-95％乙醇沉淀，真空干燥得豬苓多糖。
更優(yōu)選的，所述豬苓多糖的制備方法如下：取豬苓加10-20倍重量水于70-80℃浸提1-2小時(shí)，共提取1-3次，合并上清液真空濃縮，用5-10倍濃縮液體積的無(wú)水乙醇沉淀，沉淀物再溶于適量水中，用sevag法脫蛋白，適量90％-95％乙醇沉淀，真空干燥得豬苓多糖。
優(yōu)選的，所述飼料添加劑進(jìn)一步包括其他活性成分。
更優(yōu)選的，所述其他活性成分選自氨基酸、維生素等中的一種或多種。
最優(yōu)選的，所述氨基酸為蛋氨酸、賴氨酸和/或蘇氨酸等，所述維生素為維生素a、維生素c和/或維生素e等。
本發(fā)明還提供一種上述飼料添加劑在制備改善仔豬免疫力的飼料中的應(yīng)用。
優(yōu)選的，所述100重量份的飼料中，含有1-5重量％的飼料添加劑。
本發(fā)明具有積極有益的效果：
令人驚奇的是，本發(fā)明意外發(fā)現(xiàn)將阿魏酸與豬苓多糖組合使用，對(duì)于改善仔豬免疫力具有協(xié)同增效的效果，配合其他活性成分使用效果更佳。
與普通飼料添加劑相比，本發(fā)明的豬飼料添加劑制備方法簡(jiǎn)單，配伍合理，療效顯著，能夠顯著提高豬瘟抗體水平，增強(qiáng)b淋巴細(xì)胞的增殖反應(yīng)，實(shí)驗(yàn)證明對(duì)改善仔豬免疫力有特效；由于添加劑中無(wú)西藥成分，因此飼料添加劑無(wú)毒副作用，無(wú)耐藥性。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作更進(jìn)一步的說(shuō)明，但本發(fā)明的實(shí)施方式不限于此。下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法。
實(shí)施例1、豬苓多糖的提取
取豬苓加20倍重量的水于80℃浸提1小時(shí)，共提取3次，合并上清液真空濃縮，用5倍濃縮液體積的無(wú)水乙醇沉淀，沉淀物再溶于適量水中，用sevag法脫蛋白，適量95％乙醇沉淀，真空干燥得豬苓多糖。
實(shí)施例2、飼料添加劑的制備
取阿魏酸5重量份，實(shí)施例1制備的豬苓多糖5重量份，混合后制成阿魏酸和豬苓多糖重量比為1:1的飼料添加劑a1。
取阿魏酸2.5重量份，實(shí)施例1制備的豬苓多糖7.5重量份，混合后制成阿魏酸和豬苓多糖重量比為1:3的飼料添加劑a2。
取阿魏酸1重量份，實(shí)施例1制備的豬苓多糖9重量份，混合后制成阿魏酸和豬苓多糖重量比為1:9的飼料添加劑a3。
實(shí)施例3、本發(fā)明飼料添加劑在改善仔豬免疫力中的應(yīng)用
1.試驗(yàn)動(dòng)物及分組處理
選取臨床健康、體質(zhì)量相近的20日齡仔豬，采血檢測(cè)豬瘟母源抗體水平，挑選出抗體水平相近的仔豬60頭，隨機(jī)分成6組，即本發(fā)明中藥組合物組1-3(實(shí)施例2制備的飼料添加劑a1-a3)、阿魏酸組、豬苓多糖組和對(duì)照組。21日齡進(jìn)行豬瘟兔化弱毒苗(購(gòu)自上海海利生物技術(shù)有限公司)免疫。27-31日齡開始在a1-a3中藥組合物組、阿魏酸組、豬苓多糖組日糧中按照飼料總重量的1％添加上述飼料添加劑(每組加入的中藥活性成分總量相同)，對(duì)照組的日糧為不添加上述飼料添加劑的相同重量的豬飼料，各組豬每日投喂3次。在55日齡對(duì)每組仔豬前腔靜脈采血各5ml，分離血清用于豬瘟抗體測(cè)定，全血用于b淋巴細(xì)胞增殖的測(cè)定。
2.試驗(yàn)檢測(cè)指標(biāo)和方法
(1)血清豬瘟抗體水平
采用elisa法測(cè)定豬瘟抗體，參照豬瘟抗體檢測(cè)試劑盒(購(gòu)自南京建成生物工程研究所)說(shuō)明書進(jìn)行。
(2)血液b細(xì)胞增殖反應(yīng)
采用mtt法進(jìn)行。取各組濃度為1×106個(gè)/ml的淋巴細(xì)胞懸液加入96孔細(xì)胞培養(yǎng)板上，每孔加100μl，然后對(duì)照組每孔加入100μlrpmi1640(購(gòu)自ibco公司)完全培養(yǎng)液，試驗(yàn)組每孔加入100μl質(zhì)量濃度為10mg/llps(購(gòu)自sigma公司)，每個(gè)樣品設(shè)置3個(gè)重復(fù)。37℃、5％co2培養(yǎng)44h，每孔加入5g/l四甲基偶氮唑鹽(mtt)溶液10μl，培養(yǎng)4h后每孔再加入dmso溶液100μl，繼續(xù)培養(yǎng)2h，使紫色結(jié)晶完全溶解，用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀在570nm波長(zhǎng)下測(cè)定d值，作為淋巴細(xì)胞增殖的指標(biāo)。
3.試驗(yàn)結(jié)果
血清豬瘟抗體水平和淋巴細(xì)胞增殖指標(biāo)試驗(yàn)結(jié)果見表1。
表1各試驗(yàn)組仔豬血清豬瘟抗體水平及b淋巴細(xì)胞增殖情況
由實(shí)施例3可以看出，與對(duì)照組相比，本發(fā)明的飼料添加劑能顯著提高仔豬血清中豬瘟抗體水平，改善b淋巴細(xì)胞增殖水平，是效果優(yōu)異的仔豬免疫增強(qiáng)劑。特別是阿魏酸和豬苓多糖的組合使用產(chǎn)生了協(xié)同效果，減少了藥物的使用量，其中阿魏酸和豬苓多糖重量比為1:3的飼料添加劑效果最為突出，產(chǎn)生了難以預(yù)期的優(yōu)異效果。