本發(fā)明涉及一種復(fù)合菌發(fā)酵蔬菜組合物及其制備方法和應(yīng)用，特別是涉及多種具有防癌抗癌功效的蔬菜經(jīng)過腸道益生菌和酵母菌發(fā)酵，提高和改善蔬菜的抗腫瘤活性，屬于功能性飲品。

背景技術(shù)：

1、隨著人類社會(huì)的發(fā)展，人們生活水平不斷提升，人均壽命也逐漸延長(zhǎng)，惡性腫瘤已經(jīng)成為了嚴(yán)重威脅人類健康的主要因素之一。目前對(duì)于腫瘤有多種治療手段，包括手術(shù)、放療、化療、靶向治療等。手術(shù)治療可作為腫瘤治療的主要方案，但存在一定風(fēng)險(xiǎn)；放療和化療雖然可以顯著減緩癌癥的發(fā)展，但也有明顯的副作用；靶向治療作為新型治療手段，但費(fèi)用較高。科學(xué)的飲食方式和良好的生活習(xí)慣可以預(yù)防癌癥的發(fā)生與發(fā)展。比如，對(duì)癌癥患者進(jìn)行一定的飲食干預(yù)可以增強(qiáng)化療的效果并減少化療藥物的用量，進(jìn)而起到輔助治療癌癥的效果。因此，食用具有防癌抗癌功效的功能性食品逐漸成為人們關(guān)注的熱點(diǎn)。

2、蔬菜是人們飲食中不可缺少的組成部分，蔬菜中含有豐富的維生素、礦物質(zhì)、纖維素和多種生物活性因子。長(zhǎng)期以來，蔬菜被視為是人體維生素和微量元素的重要來源，并且可以提供豐富的膳食纖維。近年來的流行病學(xué)及藥理學(xué)研究表明，蔬菜中存在一些植物化學(xué)物質(zhì)，可對(duì)致癌物質(zhì)和促癌因子起到一定抑制作用，因此科學(xué)食用蔬菜對(duì)預(yù)防癌癥有著積極作用。

3、公開號(hào)為cn?1395876?a的專利公開了一種雙歧果蔬飲料及制備方法，將鮮果汁、鮮蔬菜汁與水混合后，經(jīng)過雙歧桿菌、乳桿菌、嗜熱鏈球菌發(fā)酵后制得。該雙歧果蔬飲料中蔬菜含量少，發(fā)酵時(shí)間短，果蔬中的有效成分轉(zhuǎn)化不完全，很難起到一定的保健功效；公開號(hào)為cn?101953460?a的專利公開一種活性果蔬飲品，是一種簡(jiǎn)單的兌配型飲料，保健功能差，口感難以保證，很難使人堅(jiān)持服用。

4、隨著工作節(jié)奏的加快，上班一族的生活、工作壓力大，時(shí)間緊迫，人們很難做到每天攝入足夠量的各類蔬菜，迫切的需要一款口感好、能補(bǔ)充足量的各類蔬菜且具有保健功效的產(chǎn)品。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種復(fù)合菌發(fā)酵蔬菜組合物，所述的蔬菜組合物由以下重量份的蔬菜制成：紅薯100～200份，蘆筍100～200份，卷心菜50～200份，紫甘藍(lán)50～200份，西蘭花50～200份，胡蘿卜100～200份，番茄100～200份。

2、優(yōu)選的，本發(fā)明所述的蔬菜組合物由以下重量份蔬菜組成：紅薯100份，蘆筍100份，卷心菜100份，紫甘藍(lán)100份，西蘭花50份，胡蘿卜100份，番茄100份。

3、本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種上述復(fù)合菌發(fā)酵蔬菜組合物的制備方法，具體步驟如下：

4、(1)蔬菜處理：

5、a、將紅薯、蘆筍、卷心菜、紫甘藍(lán)、西蘭花、胡蘿卜、番茄7種新鮮的蔬菜挑揀、洗凈、晾干、稱重；

6、b、將卷心菜、紫甘藍(lán)、西蘭花切斷后放入沸水中進(jìn)行熱燙處理2～5分鐘，撈出瀝干水分，冷卻；

7、c、冷卻后的3種蔬菜與其余4種切斷后的蔬菜合并，與純凈水按質(zhì)量比1：1～5：1混合，經(jīng)過破壁機(jī)破碎，得到蔬菜漿汁，煮沸10分鐘，靜置備用。

8、(2)酶解：將步驟(1)得到的蔬菜漿汁，保持70～95℃恒溫，調(diào)節(jié)ph值至5.0～7.5，加入高溫淀粉酶，攪拌均勻后酶解，以碘液為指示劑，當(dāng)蔬菜漿汁遇碘液不變藍(lán)時(shí)，高溫淀粉酶酶解結(jié)束；將蔬菜漿汁溫度調(diào)整至50℃，保持50℃恒溫，調(diào)節(jié)ph值至3.0～6.0，加入果膠酶，攪拌均勻，酶解2小時(shí)；酶解結(jié)束后，將蔬菜漿汁加熱到100℃，滅酶10～15分鐘，得到蔬菜組合物酶解漿液，備用。

9、(3)酵母菌發(fā)酵：當(dāng)步驟(2)中的蔬菜組合物酶解漿液溫度降至20～30℃時(shí)，先接入預(yù)培養(yǎng)好的體積百分比為5％的酵母菌進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵過程不斷攪拌，20～30℃發(fā)酵20～36小時(shí)后，離心或者過濾，得到酵母菌發(fā)酵蔬菜組合物濾液備用。

10、(4)濃縮、配料：將步驟(3)得到的酵母菌發(fā)酵蔬菜組合物濾液減壓濃縮，得到蔬菜組合物濃縮液，20℃測(cè)其可溶性固形物為10％～15％。向上述蔬菜組合物濃縮液中添加葡萄糖、蛋白胨、酵母粉，添加無機(jī)鹽、膳食纖維，添加或不添加甜味劑，調(diào)節(jié)ph值至6.0～7.0，采用列管式瞬時(shí)高溫滅菌的方式，137℃滅菌4～8秒，得到無菌蔬菜組合物濃縮液。

11、(5)益生菌發(fā)酵：調(diào)整步驟(4)得到的無菌蔬菜組合物濃縮液溫度至39℃，再次接入預(yù)培養(yǎng)好的體積百分比為0.3％～0.8％的一種或幾種雙歧桿菌菌液，常規(guī)培養(yǎng)5～8小時(shí)，最后接入預(yù)培養(yǎng)好的體積百分比為0.3％～0.8％的鏈球菌菌液、0.3％～0.5％乳桿菌菌液，繼續(xù)發(fā)酵15～24小時(shí)；當(dāng)ph值降至4.20以下時(shí)，降低發(fā)酵溫度至25～32℃，繼續(xù)發(fā)酵至ph值降至3.90～4.10時(shí)結(jié)束發(fā)酵，即得到蔬菜組合物發(fā)酵液。

12、(6)調(diào)配、滅活：向步驟(5)得到的蔬菜組合物發(fā)酵液中添加或不添加果汁，攪勻溶解，115℃滅菌5～15分鐘，即得復(fù)合菌發(fā)酵蔬菜組合物。

13、所述的高溫淀粉酶添加量為蔬菜組合物重量的0.1～0.2％，添加前先用少量水將酶混勻；果膠酶添加量為蔬菜組合物制備體積的0.1～1.0％，添加前將果膠酶用飲用水稀釋成10％的濃度使用。

14、所述果汁為芒果汁、菠蘿汁、橙汁以及蘋果汁中的一種或幾種，其在復(fù)合菌發(fā)酵蔬菜組合物中重量g/體積ml百分比為：3～8％。

15、所述葡萄糖、酵母粉、蛋白胨在復(fù)合菌發(fā)酵蔬菜組合物中重量g/體積ml百分比為：葡萄糖0～0.5％，酵母粉0.1～0.2％，蛋白胨0.2～0.4％。

16、所述的膳食纖維為聚葡萄糖，其在復(fù)合菌發(fā)酵蔬菜組合物中重量g/體積ml百分比為：5～10％；

17、所述的甜味劑為蔗糖和/或三氯蔗糖，其在復(fù)合菌發(fā)酵蔬菜組合物中重量g/體積ml百分比為：蔗糖0～3.0％，三氯蔗糖0.006～0.008％。

18、所述的無機(jī)鹽為k2hpo4·3h2o?0.1g/100ml，kh2po40.1g/100ml，znso4·7h2o?4.4mg/100ml，na2seo3·5h2o?66.8μg/100ml。

19、所述的雙歧桿菌選自青春雙歧桿菌、兩歧雙歧桿菌、短雙岐桿菌和長(zhǎng)雙歧桿菌嬰兒亞種；所述乳桿菌選自嗜酸乳桿菌、德氏乳桿菌保加利亞亞種、干酪乳酪桿菌、鼠李糖乳酪桿菌和植物乳植桿菌；所述鏈球菌選自唾液鏈球菌嗜熱亞種；所述酵母菌選自安琪干酵母。

20、腸道益生菌是一種有益的微生物，它們能夠在人體腸道內(nèi)產(chǎn)生積極的影響，改善宿主的微生態(tài)平衡，促進(jìn)腸道內(nèi)菌群的健康，從而維護(hù)人體的健康。腸道益生菌及其代謝產(chǎn)物可通過多種機(jī)制對(duì)癌癥患者產(chǎn)生積極地影響，這些積極地影響大部分是通過調(diào)節(jié)宿主免疫和炎癥反應(yīng)來實(shí)現(xiàn)的。

21、唾液鏈球菌嗜熱亞種有多種益生功能，其胞外多糖(eps)具有明確的生物活性，在醫(yī)藥行業(yè)被開發(fā)成為抗氧化劑、抗癌藥物、抗炎藥物和免疫調(diào)節(jié)劑；具有抑制病原菌生長(zhǎng)的能力；其分泌的β-半乳糖苷酶還可以增加雙歧桿菌和乳酸桿菌等益生菌的腸道豐度；可以延緩結(jié)腸炎的發(fā)作，減輕疾病的臨床癥狀(包括體重減輕和消化道出血)。唾液鏈球菌嗜熱亞種還可促進(jìn)維持粘膜屏障的功能，減少細(xì)菌易位，從而減少免疫刺激和相關(guān)炎癥。

22、本發(fā)明的再一個(gè)目的是提供所述的復(fù)合菌發(fā)酵蔬菜組合物在制備具有防癌抗癌功能的保健品或飲品中的應(yīng)用。

23、優(yōu)選的，將所述的復(fù)合菌發(fā)酵蔬菜組合物或其上清液，按照已知的常規(guī)方法，添加一種或多種具有相同、相似或不同生物學(xué)活性，并對(duì)基本活性成分表現(xiàn)有輔助或協(xié)同作用，但彼此又互不拮抗的天然或合成的其他藥物成份或其混合物，配制成適于口服的合劑、乳劑。

24、可將本發(fā)明的發(fā)酵蔬菜組合物直接制成飲品或者保健食品，適用于健康人群腫瘤防治或者腫瘤患者輔助治療使用。

25、紅薯中含有酚醛酸、類胡蘿卜素、花青素、黏蛋白、去氫表雄酮等多種生理活性物質(zhì)，其中去氫表雄酮可以用來預(yù)防結(jié)腸癌和乳腺癌。紅薯中還含有的賴氨酸，它可促使上皮細(xì)胞正常成熟，抑制上皮細(xì)胞異常分化，消除有致癌作用的氧自由基，阻止致癌物與細(xì)胞核中的蛋白質(zhì)結(jié)合，增強(qiáng)人體免疫力。此外紅薯也含有硒元素，硒是一種抗癌物質(zhì)。紅薯還含有大量膳食纖維，在腸道內(nèi)無法被消化吸收，刺激腸道，增強(qiáng)蠕動(dòng)，通便排毒。最后紅薯含有豐富的β一胡蘿卜素，它是一種有效的抗氧化劑，有助于清除體內(nèi)的自由基。

26、十字花科蔬菜含有硫苷類化合物，此種化合物是十字花科蔬菜中一類重要的次生代謝物。這些代謝產(chǎn)物可以增加許多解毒酶的活性，抑制致癌因子的活化代謝能力，進(jìn)而降低癌癥的發(fā)生率等多種生理功能。經(jīng)常食用十字花科蔬菜可預(yù)防胃癌、肺癌、食道癌的發(fā)生。

27、蘆筍中的一些成分可以提高殺傷細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、腫瘤壞死因子等免疫細(xì)胞的活性，而這些免疫細(xì)胞對(duì)癌細(xì)胞都有不同程度殺死殺傷作用；蘆筍中的某些物質(zhì)可以保護(hù)正常細(xì)胞免受放化療毒副作用的損害刺激骨髓造血機(jī)能升高白細(xì)胞、血小板，從而提高人體免疫功能改善血項(xiàng)；蘆筍中含有大量的以高分子形式存在的硒和鍺，它們可以提高超氧化物歧化酶的活性，誘發(fā)干擾素的產(chǎn)生，消除體內(nèi)的自由基，加速新陳代謝。

28、胡蘿卜含有大量的胡蘿卜素，胡蘿卜素是維生素a的前體物質(zhì)。維生素a的抗癌機(jī)理：可提高免疫力；增強(qiáng)人體抗癌本能，修復(fù)dna損傷，阻止腫瘤生長(zhǎng)；制止自由基傷害而導(dǎo)致的惡性變化；清除和制止致癌物質(zhì)或化學(xué)促癌因子的作用等等。

29、番茄中含有大量的番茄紅素，番茄紅素具有多種生理功能,如淬滅單線態(tài)氧、清除過氧自由基,誘導(dǎo)細(xì)胞間連接、通訊、調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞增殖,活化免疫細(xì)胞,清除香煙和汽車廢氣中的有毒物質(zhì)等功能。多吃番茄紅素可預(yù)防胃癌、結(jié)腸癌、直腸癌、口腔癌、前列腺癌、乳腺癌和子宮癌等，尤其是前列腺癌。隨著番茄紅素?cái)z入量增加,前列腺癌發(fā)病危險(xiǎn)性大大下降。

30、有益效果：為檢測(cè)本發(fā)明的復(fù)合菌發(fā)酵蔬菜組合物防癌抗癌的功效，實(shí)驗(yàn)觀察了發(fā)酵蔬菜組合物的抗腫瘤實(shí)驗(yàn)結(jié)果。結(jié)果顯示本發(fā)明的復(fù)合菌發(fā)酵蔬菜組合物對(duì)實(shí)驗(yàn)用腫瘤細(xì)胞的抑制效果明顯，且隨著濃度增加而增強(qiáng)。實(shí)驗(yàn)同時(shí)觀察比較了復(fù)合菌發(fā)酵蔬菜組合物與未發(fā)酵的蔬菜組合物體外抑瘤實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示，復(fù)合菌發(fā)酵蔬菜組合物的抑瘤率明顯高于未發(fā)酵的蔬菜組合物，說明本發(fā)明的制備方法提高了蔬菜組合物的抑瘤功效。另外，通過對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物免疫指數(shù)、血清il-2和tnf-α水平的測(cè)定，證明本發(fā)明的復(fù)合菌發(fā)酵蔬菜組合物在抑制肉瘤組織生長(zhǎng)的同時(shí)，不會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的免疫功能產(chǎn)生抑制用。