專利名稱：:源自植物材料的ace抑制肽的制作方法源自植物材料的ACE抑制肽發(fā)明領域本發(fā)明涉及從植物來源獲得具有高度特異活性的ACE抑制肽組合物的改進方法。發(fā)明背景高血壓或血壓過高在北美是一種常見的健康問題，其中每四個成年人就有一個患高血壓。由于高血壓是無癥狀的，因此在考慮高血壓之前，可能已經發(fā)生了不可逆的心血管并發(fā)癥。在血壓調節(jié)中發(fā)揮主要生理作用的一種酶是血管緊張素轉化酶(ACE:肽酰二肽水解酶，EC3，4，15，1)。ACE利用將非活化的十肽血管緊張素I轉化為血管收縮性鹽儲留肽血管緊張素II的能力(Skeggsetal.，1956)通過腎素血管緊張素系統(tǒng)，以及利用失活血管舒張劑和促鈉尿排泄九肽、血管舒緩激肽(bradykinin)的能力(Yangetal.，1970)通過血管舒緩素-激肽系統(tǒng)(kallikrein-kininsystem)參與血壓的增加。因此抑制ACE活性提供了降低血壓的手段。Ferreira(1965)發(fā)現(xiàn)了第一個強力和特異的ACE活性抑制劑，他證明巴西箭蛇(Brazilianarrowheadviper)毒液的提取物Bothropsiararaca能夠加強平滑肌的收縮并引起由血管舒緩激肽誘導的低血壓和毛細血管通透性增加。隨后從一些蛇的毒液中分離了所謂的"血管舒緩激肽增強因子"(BPF's)，并發(fā)現(xiàn)其為短肽，且是ACE的強力抑制劑。也已經制備了一類合成的ACE抑制劑，并已上市銷售，第一個產品為卡托普利(c即topril)(D-2-甲基-3-巰基氧丙基-L-脯氨酸)。盡管許多這類藥物對于降低高血壓的作用是無可估量的，但長期應用會伴隨一些不需要的副作用。因此仍需要新的控制高血壓的治療劑。已知通過對多種來源的蛋白進行蛋白水解消化可獲得ACE抑制肽，該蛋白的來源包括魚(例如歐洲專利第1094071號)、動物奶蛋白(例如公開號為WO99/65326的國際申請)以及植物(例如，Kawakamietal.，(1995);Yanoetal.，(1996);Pedrocheetal.，(2002);Wuetal.，(2002))。多數(shù)所描述的用于從植物蛋白中獲得ACE抑制肽的方法在水解之前均包括對所述蛋白進行初步純化的步驟，其增加了所述方法的成本和復雜性并因此增加了產品的成本。因此仍需要從植物材料中制備ACE抑制劑組合物的改進方法和高特異活性的ACE抑制肽的其它來源。發(fā)明概述根據本發(fā)明的一個實施方案，本發(fā)明涉及制備含血管緊張素轉化酶(ACE)抑制肽的水解物方法，包括將基本不含油的種子粗粉(meal)或細粉(flour)與有機溶劑接觸，從所述的溶劑中分離出所述的粗粉或細粉，及用至少一種蛋白水解酶處理所述的粗粉或細粉來產生含ACE抑制肽的水解物。根據本發(fā)明的另一實施方案，本發(fā)明涉及從亞麻或油菜籽中制備含ACE抑制肽的水解物的方法，包括[0016]用至少一種蛋白水解酶處理基本不含油的亞麻子粗粉或基本不含油的油菜種子粗粉來產生含ACE抑制肽的水解物。根據本發(fā)明的另一實施方案，本發(fā)明涉及通過上述方法制備的含ACE抑制肽的水解物。根據本發(fā)明的另一實施方案，本發(fā)明涉及通過部分蛋白水解消化亞麻粗粉或油菜籽粗粉制備的含ACE抑制肽的水解物。根據本發(fā)明的另一實施方案，本發(fā)明涉及通過干燥本發(fā)明的水解物制備的粉末。根據本發(fā)明的另一實施方案，本發(fā)明涉及包含本發(fā)明水解物的可食用產品。根據本發(fā)明的另一實施方案，本發(fā)明涉及包含肽Val-Ser-Val和Phe-Leu中至少一種和藥物可接受的載體的藥物組合物。根據本發(fā)明的另一實施方案，本發(fā)明涉及序列式Val-Ser-Val的肽。根據本發(fā)明的另一實施方案，本發(fā)明涉及序列式Phe-Leu的肽。根據本發(fā)明的另一實施方案，本發(fā)明涉及抑制哺乳動物的ACE活性的方法，包括對所述哺乳動物給予有效劑量的本發(fā)明水解物或粉末或可食用產品或組合物。這種對ACE活性的抑制可用于降低所述哺乳動物中已升高的血壓。因此本發(fā)明提供用于治療包括人類的哺乳動物個體的血壓升高的方法和組合物。本發(fā)明還提供本發(fā)明的水解物或粉末或可食用產品或組合物用于制備治療包括人類的哺乳動物個體的血壓升高的藥劑的用途。附圖的概述參考附圖本發(fā)明對一些實施方案進行了描述，其中圖l所示為對于多種作用于油菜籽粗粉的蛋白水解酶，作為孵育時間(X軸)函數(shù)的ACE抑制活性(Y軸)。圖2所示為對于多種作用于油菜籽粗粉的蛋白水解酶，作為孵育時間(X軸)函數(shù)的水解程度(DH-Y軸)。圖3所示為從S印hasil肽C1812iiST4.6/250柱獲得的部分(fraction)在214nm(mAU)處的吸光度。發(fā)明的詳細描述本發(fā)明提供用于從諸如粗粉和細粉的植物材料中制備ACE抑制組合物的改進的方法和新的來源，而不需首先從所述的植物中分離出高度富集或純化的蛋白部分。本發(fā)明使用的"粗粉"指磨碎的油提取后的油料種子的非油部分，而"細粉"指磨碎的諸如谷類(cereal)和豆類(legume)的非產油植物的種子。本發(fā)明方法可應用于例如油料種子粗粉，該油料種子粗粉可通過諸如對油料種子進行軋胚或壓榨(e鄧elling)，并對所產生的粗粉進行脫脂和溶劑提取的常規(guī)方法來制備；以及用于細粉，該細粉可從諸如谷類、假谷類(pseudocereals)和豆類的非油料種子中獲得。本發(fā)明所用"水解物"指將種子粗粉或細粉蛋白水解或部分蛋白水解后獲得的消化混合物。根據本發(fā)明的實施方案，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，在蛋白水解消化產生ACE抑制肽之前用有機溶劑提取種子粗粉或細粉，得到具有增強的ACE抑制活性的水解物。通過采用有機溶劑提取步驟，本發(fā)明人能夠克服將植物材料直接進行蛋白水解消化時所遇到的低產率和低ACE抑制活性的問題。表1顯示，對于所檢驗的大多數(shù)植物材料，在蛋白水解消化前對所述粗粉或細粉進行有機溶劑提取能改進所述水解物的IC50和蛋白含量。欲進行處理的植物材料可來自油料種子，例如亞麻、油菜籽/油菜籽(canola/rapeseed)、大豆、棉籽、向日葵、花生或芥菜(mustrad);來自豆類(legume)種子，例如大豆(soybeans)、豌豆(peas)、扁豆(lentils)、豆(bean)或鷹嘴豆(chichpeas)的種子；或來自谷類，例如小麥、燕麥、大麥、黑麥或諸如芥麥的假谷物。對于油料種子，例如油菜籽、亞麻和大豆，可通過將種子用常規(guī)的脫脂和油類提取方法處理可得到基本不含油的種子粗粉，諸如壓榨、用溶劑提取進行壓榨、以及軋胚和溶劑提取的油類提取方法，如商品植物油工業(yè)實踐中所采取的方法。所產生的材料通常含有少于1%的脂肪。種子諸如谷類和假谷類(例如，小麥、燕麥、黑麥、蕎麥)是天然的基本不含油的，并且不需要脫脂。土壤植物材料可以顆粒的形式存在，其通過將全種子或脫脂粗粉進行粗碾磨，隨后進行過篩，根據大小將顆粒分為粗(10-20目)、中(20-40目)或細(40-80目)顆粒；或者所述的土壤植物可以為細粉形式，其通過碾磨成非常細的顆粒來制備，使97%的所述產物能夠通過100目篩子。在制備所述的細粉之前除去在蛋白中通常含量較低的外殼、外皮和麩糠。適合用于所述粗粉或細粉提取的有機溶劑包括低級醇，例如甲醇、乙醇、丙醇和丁醇，或丙酮或乙酸乙酯。優(yōu)選乙醇。所述醇可單獨使用或以含至少50%醇的含水混合物使用。優(yōu)選65%_75%的乙醇。所述有機溶劑可與所述種子粗粉或細粉以液體固體比例8:l至約25:i進行混合，優(yōu)選約io:l至約20:i。在約2(TC至所述有機溶劑沸點的溫度下，將所述種子粗粉或細粉保持與有機溶劑接觸約1小時至約24小時。在一個實施方案中，溶劑處理在室溫(25°C)下進行24小時，或在更高溫度下進行更短的時間，例如在5(TC下進行3小時。在接觸階段，可對所述的粗粉/溶劑漿液進行攪拌或攪動。利用任何諸如離心、過篩、過濾或傾析的適合的常規(guī)方法從所述的液體溶劑相中分離出處理的粗粉或細粉，并通過水洗來減少殘留的有機溶劑水平。隨后所述材料準備進行蛋白消化來產生ACE抑制肽?？蛇x擇地，可通過熱氣干燥去除殘留的有機溶劑來產生可貯藏用于進一步再潤濕和蛋白水解消化的粗粉或細粉。通常通過本領域所屬技術人員公知的方法以及本發(fā)明的進一步描述來完成用于產生所述ACE抑制肽的種子粗粉或細粉的蛋白水解消化。適合的蛋白水解酶包括酸性、中性和堿性蛋白酶和肽酶，包括絲氨酸肽鏈內切酶和金屬肽鏈內切酶，或其混合物?？墒褂美绫?所列的多種商業(yè)銷售的蛋白水解酶。本領域所屬技術人員可容易地確定適合所用特定蛋白水解酶的消化條件。對具體植物材料，測定何種蛋白水解酶產生的水解物的ACE抑制IC50最低也是本領域所屬技術人員公知的，并如實施例和圖1所述。例如，已發(fā)現(xiàn)當用于亞麻子粗粉和大豆粗粉的消化時，嗜熱菌蛋白酶在所測試的酶中可產生最佳的抑制活性?？蛇M行一段時間的蛋白水解來產生ACE抑制IC50最低的水解物。通常，約3小時的消化可產生最大的抑制活性。[0046]如果將所述水解物用于諸如食物或食品補充劑的可食用產品時，為保留一些所述植物蛋白的食用價值，需要在達到最大的ACE抑制活性前，終止所述的蛋白水解消化。對于一些植物材料，蛋白水解消化可能會同時產生味道較差的消化產物。在這種情況下，為控制這種較差的味道，需要在達到最大的ACE抑制活性前終止所述的蛋白水解消化。在一個實施方案中，本發(fā)明所述水解物具有低于200iig粉末/ml的ACE抑制IC50。在另一實施方案中，所述水解物的IC50低于100iig粉末/ml、或低于60iig粉末/ml或低于50iig粉末/ml。通常，所述蛋白水解酶以約0.25%至約8.0%w/w(酶蛋白含量)的濃度使用。在另一實施方案中，所述的蛋白水解酶以約0.5%-約4.0%的濃度使用。通過適合的方法來終止所述的蛋白水解消化，例如所述酶的熱失活活或將所述消化混合物的pH調節(jié)到酶活性pH范圍之外。這些方法是本領域所屬技術人員公知的。過濾或離心所產生的水解物，例如在沉降式離心機中，來去除殘留的粗粉和細粉。根據本發(fā)明的另一實施方案，本發(fā)明提供從亞麻和油菜籽粗粉中制備含ACE抑制肽的水解物的方法，該方法利用蛋白水解酶消化所述粗粉來產生具有高度特異活性而不需進一步純化的含ACE抑制肽的水解物。以往沒有顯示亞麻和油菜籽是ACE抑制肽的來源。如上所述選擇所述的蛋白水解酶，并進行消化。如上所述，在蛋白水解消化之前可任意地將所述亞麻或油菜籽粗粉用有機溶劑進行提取。在對種子粗粉或細粉進行消化產生ACE抑制肽，并從殘余的粗粉或細粉中分離出所述的水解物后，可將該水解物用于可食用的產品或可進行噴霧干燥來產生適于用作可食用產品或藥物的水溶性粉末。蛋白和水解蛋白制劑作為可食用產品的用途及將其摻入食品中或作為食品補充劑的用途是食品加工領域所屬技術人員公知的，例如，Clemente，A(2000)"EnzymaticHydrolysatesinHumanNutrition，，，inTrendsinFoodScience&Technologyv.11，pp.254-262所述。在一個實施方案中，除進行常規(guī)的控制細菌污染的步驟，例如瞬間巴氏滅菌或微生物過濾外，不需進一步加工即可將所述水解物用作可食用的產品。液體或粉末形式的本發(fā)明的水解物可用作補充飲料，例如軟飲料、碳酸飲料、即混合飲料、奶和奶飲料及其衍生物；及食品，例如沙司、調味品、色拉調料、水果汁、糖漿劑、甜點(例如，布丁、明膠、糖霜和填充物、烤制品和諸如冰激凌和冰凍果子露的冷凍甜點)，軟冷凍產品(例如，軟冷凍奶油、軟冷凍冰激凌和酸奶酪、諸如奶制或非奶制煉乳的軟冷凍煉乳)、油類和乳化產品(例如，起酥油、人造黃油、蛋黃醬、黃油和色拉調料)、糖果和條形糖果(confection)、谷物食品和咀嚼口香糖片。很早就已經認識到血壓過度升高是一種威脅生命的疾病狀態(tài)。而最近證明甚至輕度高于正常值的血壓也會產生有害的作用。目前臨床定義的需要醫(yī)學干預的高血壓是收縮血壓為140mm汞柱或更高(在30歲以上的成年人群中的發(fā)生率約為20%)。然而目前一些流行病學家定義了高血壓的次級或"預防性模型"，將收縮壓高于120mm汞柱定義為人群應采取措施降低其血壓和相關心血管疾病發(fā)生風險的臨界點。血壓值在120-140mm汞柱范圍的人群一般不認為自己為病態(tài)，并因此不太可能接受藥物為基礎的治療。然而這類人群中正在尋找非藥物選擇來降低其中等升高的血壓的人口百分率不斷上升(Potentialbenefitsoffunctionalfoodsand皿traceuticalstoreducetheRiskandCostsofDiseasesinCanada.B.J.Holub.R印orttoAAFC2002)。本發(fā)明的水解物和粉末提供抗高血壓試劑，其是這種血壓輕度升高的病例的理想試劑，并可與食物一起或作為食物的一部分食用。與以往發(fā)現(xiàn)的來自奶或乳清的ACE抑制產品降低人血壓的作用相比，本發(fā)明的水解物具有約40-60iig/ml的IC50值，可以每天約2至5gm的初始劑量給予人類個體。當觀察到血壓降低作用時，可根據需要對這一劑量進行調整。本領域所屬技術人員可以理解，根據較高或較低的IC50值的水解物來調整所述的劑量。所述的水解物也可組方成片劑、膠囊、顆粒劑、粉劑、糖漿劑、懸浮劑或可注射的溶液。由本發(fā)明所述方法產生的水解物具有相當于或高于商業(yè)銷售的乳清水解物的ACE抑制活性。當利用本發(fā)明所述的ACE抑制分析進行分析時，所述商業(yè)銷售的乳清產物BioZate(DaviscoFoodsInternational)的ACE抑制IC50為137iig粉末/ml。如本發(fā)明所示，不需采用任何后續(xù)的純化策略，一些植物材料可產生ACE抑制IC50值顯著低于所述乳清產物的蛋白水解物，其因此具有較高的抑制活性。如實施例12所述，對油菜籽粗粉蛋白水解消化所得的水解物進行進一步純化，得到兩部分，各含有單一的純化ACE抑制肽。這些以往沒有描述為ACE抑制劑的肽具有氨基酸序列Val-Ser-Val和Phe-Leu。本發(fā)明含ACE抑制肽的水解物可進一步加工得到特異活性更強的部分或如上所述的純化的單一肽，其可作為可食用的產品或藥物使用。如果需要，通過本發(fā)明實施例所述的超濾作用可進一步強化本發(fā)明水解物的ACE抑制活性。已經發(fā)現(xiàn)，具有高多糖含量的種子，如亞麻和大麥，可產生高粘度的水解物。當水解物的粘度高于約10X10—3PaS(依據在25t:時的5%水溶液的粘度和200(I/s)的剪切率)，可使用孔徑高達100，000麗C0的超濾膜，但優(yōu)選孔徑高達10000的膜。[0065]對低粘度的水解物，如從油菜籽中獲得的水解物，可使用孔徑高達10000麗C0的膜，優(yōu)選孔徑高達3000麗C0的膜。實施例以下實施例僅是為了說明目的提供的，而不是對本發(fā)明范圍的限制。本發(fā)明涉及化學、分子生物學、蛋白和肽生物化學以及免疫學的方法，但沒有進行詳細描述，這些方法的例子在科學文獻中有報道并且是本領域所述技術人員公知的。[0068]試劑從以下來源獲得化學藥品和酶血管緊張素轉化酶(來自兔肺)和HHL(SigmaChemicalCo.，St丄ouis，M0，USA);HA禾口三氟乙酸(TFA)(Acros0rganics，NewJersey,USA);HPLC級乙腈(FisherScientific,N印ean，0N，Canada)。其它的所有化學藥品均是試劑級的，并且也是從FisherScientific獲得的。通過Milli-Q系統(tǒng)(Millipore，Bedford,MA，USA)產生HPLC級水。[0070]方法[0071]ACE抑制活性的測定通過改進的新HPLC方法(Wu，J.P.etal.，(2002))檢測了離體的抗高血壓活性(ACE抑制活性)，所述新HPLC方法是Cushman與Cheung(1971)方法的改進方法。該方法利用反相高效液相色譜(HPLC)來分離和量化所述的ACE催化產物馬尿酸(HA)。在SymmetryC18柱中，利用三氟乙酸(TFA)/乙腈和TFA/水的混合物作為溶劑通過梯度洗脫分離馬尿酰-組氨酰-亮氨酸(HHL)和HA。與常規(guī)分光光度法比較，該新HPLC方法避免了使用乙酸乙酯萃取HA，并使得可將ACE反應混合物直接注射到該HPLC柱中。[0073]用于HPLC分析的樣品制備對于直接HPLC分析，總的反應體積為70ill，由50ill的2.17mMHHL、10的2mUACE和lOiU不同濃度的蛋白水解物(全部由100mM硼酸鹽緩沖液制備，含有300mMNaCl，pH8.3)組成。對于對照試驗，使用10iU緩沖液。將所述HHL和蛋白水解物或對照緩沖液混合，并在1.5ml聚乙烯微型離心管中于37t:保持10分鐘。將ACE也在37。C保持10分鐘，然后將所述兩禾中溶液在450rpm連續(xù)攬摔下，在EppendorfThermomixerR(BrinkmarmInstruments,Inc.NewYork，美國)中混合，并在37。C孵育。30分鐘后，通過加入85的INHC1來終止所述反應，并通過0.45m尼龍注射器式過濾器過濾所述的溶液以用于反相RP-HPLC(RP-HPLC)分析。[0075]高效液相色譜在配備有996光電二極管陣列檢測器(996PhotodiodeArrayDetector)的2690S印arationModule(WatersInc，MA.美國)上進行HPLC。利用Millennium色譜管理軟件2.15片反(ChromatographyManagerSoftwareversion2.15)(WatersInc，MA.美國)進行設備控制、數(shù)據采集和分析。在SymmetryC18柱(3.OX150mm，5pm，WatersInc.，MA，美國)上分析樣品(10Pi)，并在228nm檢測HA和HHL。用兩種溶劑體系(A)0.05%的三氟乙酸(TFA)水溶液和(B)O.05%TFA的乙腈溶液對所述柱進行洗脫(0.5ml*min—0，首先用5-60%的乙腈梯度溶液洗脫10分鐘，并在60%的乙腈保持2分鐘，然后返回到5%乙腈1分鐘。隨后以恒定的O.5ml*min—"流速無梯度洗脫(isocraticelution)4分鐘。使用新鮮制備的外部標準HA樣品來計算有蛋白水解物(HA,，物)存在或無蛋白水解物(HA^m)存在下ACE反應形成的HA的濃度，空白樣品按照如下制備首先在孵育前加入HC1使ACE失活。ACE抑制活性計算根據以下方程式計算抑制活性抑制活性(％)=[(HA水解物-HA對照)/(HA對照-HA空白)]X100IC50值定義為產生50%的ACE活性抑制時所述反應混合物中的抑制劑的量，如上所述進行檢測。利用至少5個不同濃度的相同水解物樣品來繪制抑制活性(％)對蛋白水解物濃度(Pg粉末/ml)的曲線圖。利用微軟Excel97SR-1軟件(微軟公司)進行回歸。[0081]蛋白水解程度(DH)的測定在堿性或中性條件下，通過加入堿來控制和維持恒定的pH。以規(guī)定的時間間隔記錄堿的加入量，并用于計算水解程度(DH)。根據Adler-Nissen(1986)公式，從用于維持恒定pH的堿的體積和摩爾濃度計算出DH，并表示為肽鍵斷裂數(shù)(h)對單位重量的總肽鍵數(shù)的百分比率。[0083]在酸性水解條件下，根據Adler-NissenJ.(1979)方法確定水解程度(DH)。[0084]水解物樣品的制備在不同時間間隔采集水解反應混合物的樣品并快速轉移至檢測管中。對于每種樣品，將每份2.0ml樣品快速用吸管轉移到兩只含有10ml的1%NaDodS04的檢測管中，并通過浸入水浴中將所述檢測管保持在75t:，并搖動至少15分鐘來分散所述的蛋白水解物。[0086]每一檢測管的內容物定量轉移至50ml容量瓶中并利用1%NaDodS04稀釋到該體積。通過TNBS反應來分析游離氨基基團的含量，并表示為亮氨酸等價物。[0087]TNBS反應將0.25ml制備的樣品或空白(1.0%SDS)溶液或標準溶液與pH8.2的2.0ml的磷酸鹽緩沖液混合。加入2ml的0.1%TNBS溶液，搖動所述的檢測管，并在50°C的水浴中放置60分鐘，用鋁箔覆蓋。加入4.00ml的0.INHC1來終止所述的反應，30分鐘后在340nm處檢測相對于水的吸光度。利用以下改進的Beak等人的方法(1995)來計算所述的DH:[0092]DH=(L「Lo)/(L隨-L。)X100其中Lt為在時間t釋放的a-氨基酸的量；L。為原始油菜籽溶液中a-氨基酸的量；及Lmax為酸性水解(在10(TC、6NHC1中進行24小時)后油菜籽粗粉中a-氨基酸的最大量。實施例1.從脫脂油菜籽粗粉制備ACE抑制肽(ACEIP)的酶篩選[0095]在配備有攪拌器、溫度計和pH電極的反應容器中分批進行所述的反應。將商業(yè)銷售的溶劑提取壓榨餅油菜籽粗粉(CanbraFoods,Lethbridge，Alberta，加拿大)(31.16g)研磨并通過40目篩子(蛋白含量40.1%)，并利用磁力攪拌器與蒸餾水充分混合形成250ml的5%蛋白漿。所評價的蛋白水解酶以及其適宜的pH和溫度條件如表2所列。將所述漿液的pH調整到適合待檢測酶的pH和溫度。加入酶(4X，w/w，以漿液的蛋白含量為基礎)來引發(fā)反應。通過加入O.5NNaOH或lNHC1來維持所述反應pH值的恒定。在特定的時間間隔記錄堿的加入體積用于水解程度(DH)的計算。在30、60、120、180、300分鐘的間隔采集樣品，并在沸水中加熱15分鐘來使酶失活。隨后將所述漿液的pH調節(jié)到pH4.0左右來沉淀未水解的蛋白、大肽和所有的固體顆粒。在10，000Xg離心25分鐘來去除所述的沉淀。隨后將所產生的澄清的上清凍干，并儲存在-5t:直到進一步的分析。利用相同的方法制作了對照(無蛋白水解酶)樣品。隨后對凍干的上清進行ACE抑制活性評價。通過不同的酶消化的油菜籽蛋白水解物的ACE抑制活性(％)如圖1所示。結果顯示，所述的ACE抑制活性(％)差別較大，從0%至50.5%，平均值為28.4±13.47%。Alcalase2.4從油菜籽粗粉產生最強力的ACE抑制水解物。產生顯著的ACE抑制活性的其它酶包括蛋白酶S、蛋白酶M、堿性蛋白酶和中性蛋白酶。盡管沒有包括在此研究中，隨后對嗜熱菌蛋白酶的檢測表明其產生與所觀察到Alcalase2.4水解物具有相似ACE抑制活性的肽成分。通常，優(yōu)選3小時消化后產生具有>35%ACE抑制作用的水解物的任何蛋白水解酶。在未水解的對照油菜籽粗粉樣品中沒有檢測到ACE抑制活性，表明通過蛋白水解酶作用使油菜籽蛋白斷裂從而形成ACE抑制肽。當將Alcalase2.4和蛋白酶M的孵育時間延長至24小時時，孵育超過5小時后沒有顯著的ACE抑制活性增加。水解程度(DH)與孵育時間的關系如圖2所示；DH隨孵育時間的增加而增加。堿性蛋白酶和Alcalase2.4具有最高的DH值。蛋白酶M和蛋白酶S酶處理具有中度的DH值，而其對應的水解物顯示相對高的ACE抑制活性。胃蛋白酶、胰凝乳蛋白酶和胰蛋白酶具有最低的DH值，這表明這些酶具有非常有限的水解油菜籽蛋白的能力。在DH值與ACE抑制活性間沒有正相關性。用不同水解酶對油菜籽粗粉進行了后續(xù)處理的研究。用Alcalase2.4水解3小時后，將所述溶液的PH和溫度分別調整到對其它4種能夠產生具有較高ACE抑制活性的水解物的酶中每一種的最佳的條件。隨后加入第二種酶并將所述溶液進一步孵育3小時。兩種不同酶的后續(xù)水解的蛋白水解物中，只有產生自Alcalase2.4和堿性蛋白酶的后續(xù)水解產物，其IC50值(40.0iig粉末/ml)與單一酶產物(Alcalase2.4=68.6yg粉末/ml)、或任何其它酶自身的產物(55.7-78.6iig粉末/ml)比較得到顯著改善。[0100]實施例2亞麻子粗粉酶水解物的制備如實施例1所述，反應在反應容器中分批進行。將商業(yè)銷售的溶劑提取壓榨餅亞麻子粗粉(CanAmeraFoods,Atton，Manitoba,Alberta)(50g)研磨并通過40目篩子(蛋白含量33.9%)，并利用磁力攪拌器與蒸餾水充分混合形成750ml的漿液。為進行Alcalase2.4酶水解，將漿液pH值調節(jié)至8.0、溫度調整到6(TC。以4%(w/w，以漿液的蛋白含量為基礎)的比例加入所述酶。在反應過程中，通過加入0.5NNaOH來維持所述漿液pH值的恒定。利用6NHC1將pH調整到4.0左右來使所述酶失活。在6，000Xg離心25分鐘來去除未水解的蛋白、大肽和不溶物質。將殘余物在250ml水中重懸，并在相同的條件下離心。隨后將所產生的澄清的上清合并、凍干、并儲存在-5t:直到進一步的分析。同時，在相同條件下制備了對照提取物(無酶)。所述水解物的產率為53.54%(重量比)，蛋白含量為39.9%，ACE抑制IC50為64.3iig粉末/ml。如實施例l所示，隨后對多種蛋白水解酶進行了評價；亞麻的結果與油菜籽粗粉的結果相似。實施例3從大豆粉制備ACE抑制肽利用磁力攪拌器將Nutrisoy7B大豆粉(87g，ArcherDanielsMidlandCO.，Decatur，Illinois)與蒸餾水充分混合形成600ml漿液。如實施例2所述，為進行Alcalase2.4酶水解，將所述漿液調整到pH8.0、溫度60°C。以4%的比例(w/w，以漿液的蛋白含量為基礎)加入所述酶。在反應過程中，通過加入O.5NNaOH來維持所述漿液的pH值的恒定。利用6NHC1將pH調整到4.0左右使所述酶失活。通過6，000Xg離心25分鐘來去除未水解的蛋白、大肽和其它多聚物。將殘余物在300ml水中重懸，并在相同的條件下離心。隨后將所產生的澄清的上清合并、凍干、并儲存在-5t:直到進一步的分析。由Alcalase2.4產生的水解物的ACE抑制IC50為126.3iig粉末/ml，產物產率為82.8%W/W。[0105]實施例4從豌豆粉和燕麥粉制備ACE抑制肽在與實施例2所述相同的條件下將豌豆粉和燕麥粉(ParrheimFoods,Saskatoon,加拿大)與Alcalase2.4孵育。所述的燕麥粉水解物在所有檢測的植物材料中ACE抑制活性(1200iig粉末/ml)最弱。豌豆粉的ACE抑制活性為IC5087.1Pg粉末/ml。[0107]實施例5從全蕎麥粗粉制備ACE抑制肽從當?shù)氐氖称冯s貨店中購得蕎麥，將其研磨并通過40目篩子。如實施例2所述，用alcalase2.4L或嗜熱菌蛋白酶水解所述樣品粗粉。由嗜熱菌蛋白酶產生的蛋白水解物的ACE抑制IC50為78.6iig粉末/ml、產率為18%，而Alcalase2.4L處理的水解物的ACE抑制IC50為174.3iig粉末/ml、產率為37.1%。實施例6乙醇處理的油菜籽粗粉ACE抑制水解物的制備將如實施例1所述的商業(yè)銷售的脫脂油菜籽粗粉(31.2g)，研磨并通過40目篩子，以1:10(重量/體積)的比例用70%(v/v)乙醇水溶液提取，同時在室溫下攪動12小時或在5(TC下3小時。回收所述的粗粉，用蒸餾水洗滌并利用Alcalase2.4、蛋白酶M、蛋白酶S或Alcalase2.4和堿性蛋白酶的后續(xù)處理，每種酶處理不超過3小時(組合孵育共計6小時)來進行水解。隨后通過離心將乙醇處理油菜籽粗粉酶消化物分離產生含有水解的肽的上清以及含有未水解蛋白和殘余粗粉的沉淀。這些水解物顯示40.0iig粉末/ml至64.3i！g粉末/ml的ACE抑制活性(IC50)(表3)。除與蛋白酶S孵育產生的水解物蛋白含量僅為28.7%之外，從乙醇處理粗粉制備的水解物的蛋白含量從41.7%至54.6-60.4%顯著增加。實施例7.乙醇處理脫脂亞麻子粗粉酶水解物的制備將如實施例2中的脫脂亞麻子(50g)，研磨并通過40目篩子(蛋白含量33.9%)，用70%(v/v)乙醇水溶液(1/15.w/v)在5(TC下處理3小時。通過過濾回收所述的提取亞麻子，并利用磁力攪拌器將其分散在水中形成750ml漿液。如實施例2所述用Alcalase2.4來產生酶水解物。依據產物重量，所述乙醇處理的脫脂亞麻子水解物的產率為52.0%，蛋白含量為45.5X，ACE抑制IC50為51.4iig粉末/ml。根據Westcott&Muir(美國專利第5，705，618號)所報道的木聚糖(SDG)提取后，將回收的脫脂亞麻子粗粉也用于ACE抑制水解物的制備。利用Alcalase2.4處理這種材料得到的蛋白水解物具有類似的ACE抑制活性(IC50=55.7iig粉末/ml)，表明從所述粗粉中回收有價值的植物化學SDG并沒有干擾從殘余粗粉制備生物活性肽的能力。實施例8.利用Alcalase2.4和/或嗜熱菌蛋白酶從乙醇處理的大豆粉制備ACE抑制肽用70%乙醇在50。C將Nutrisoy7B大豆粉(87g，ArcherDanielsMidlandCO.，Decatur,Illinois)處理3小時。用磁力攪拌器將過濾的殘余物與蒸餾水充分混合得到600ml槳液。為進行Alcalase2.4L或嗜熱菌蛋白酶的消化，將所述的槳液調整到適合的pH和溫度，如表2所述。以4%(w/w，以槳液的蛋白含量為基礎)加入Alcalase2.4酶或以1%(w/V，以漿液的蛋白含量為基礎)加入嗜熱菌蛋白酶。在反應過程中，如果需要通過加入0.5NNaOH來維持所述漿液的pH值的恒定。利用6NHC1將pH調整到4.0左右來使所述酶失活。通過6，000Xg離心25分鐘來去除未水解的蛋白，大肽和其它多聚物。將殘余物在300ml水中重懸，并在相同的條件下離心。隨后將所產生的澄清的上清合并、凍干、并儲存在_5°〇直到進一步的分析。由嗜熱菌蛋白酶產生的水解物的ACE抑制IC50為42.9iig粉末/ml，產率為64.7%;而Alcalase2.4處理產生的水解物的ACE抑制IC50為118.1yg粉末/ml，產率為55.7%。實施例9.利用嗜熱菌蛋白酶從亞麻子制備ACE抑制肽[0117]將如實施例2所述的脫脂亞麻子粗粉(50g)，研磨并通過40目篩子(蛋白含量33.9%)，并利用磁力攪拌器與蒸餾水充分混合形成750ml漿液。將所述漿液的pH調整到適合以下酶的pH和溫度嗜熱菌蛋白酶(39單位/mg固體)，或與Alcalase2.4孵育3小時并隨后與嗜熱菌蛋白酶進一步孵育3小時。以4%(w/w，以漿液的蛋白含量為基礎)的比例加入Alcalase2.4酶或以1%(w/V，以漿液的蛋白含量為基礎)的比例加入嗜熱菌蛋白酶。反應引發(fā)后，如果需要通過加入O.5NNaOH來維持所述漿液的pH值的恒定。利用6NHC1將pH調整到4.0左右來使所述酶失活。通過6，000Xg離心25分鐘來去除未水解的蛋白，大肽和其它多聚物。將殘余物在250ml水中重懸，并在相同的條件下離心。隨后將所產生的澄清的上清合并、凍干、并儲存在-5t:直到進一步的分析。由嗜熱菌蛋白酶產生的水解物的ACE抑制IC50為37.1iig粉末/ml。由嗜熱菌蛋白酶和Alcalase2.4連續(xù)水解產生的水解物的ACE抑制IC50為34.2iig粉末/ml。對于從亞麻子制備ACE抑制肽，與單獨使用Alcalase2.4酶比較嗜熱菌蛋白酶是更有效的酶，Alcalase2.4產生的水解物的IC50為64.3iig粉末/ml。實施例10油菜籽ACE抑制肽的超濾加工將脫脂油菜籽粗粉(62.3g)研磨并使其通過40目篩子，隨后用70%的乙醇(v/v)以l:10的比例W/V)進行處理。過濾除去乙醇水溶液后，用Alcalase2.4對所得的殘余物進一步消化得到乙醇處理的油菜籽蛋白水解物。所得蛋白水解物用截留分子量(麗CO)超過10000、3000、1000的膜進行超濾來進一步純化。利用AmiconUltrafiltrationCellModel8200(AmiconDivision,W.R.Grace&Co.，Beverly,美國)，通過對所述膜滲余物側的溶液施加35PSI壓力的氬氣來進行超濾。利用10000麗C0膜將所述肽水解物初步分離為滲余物和滲透物部分。隨后將10000膜分離的滲透物部分在3000麗C0膜上進行超濾，得到3000麗C0滲余物和3000麗C0滲透物。通過在1000麗C0膜上對所述3000MWC0滲透物進一步分離產生iooo麗co滲透物和iooo麗co滲余物。進行第二組試驗，其中在沒有進行10000麗C0膜預處理下，將全部的蛋白水解物在3000麗C0和iooo麗co膜上進行超濾。為進行ACE抑制IC50檢測，收集滲透物和滲余物并凍干。與對應的滲余物部分比較，所有的含肽滲透物具有較高的ACE抑制活性。發(fā)現(xiàn)在1000麗C0膜上對蛋白水解物直接超濾所獲得的滲透物的ACE抑制活性(IC50=25.7iig粉末/ml)最高(表4)。通過直接用3000麗C0膜超濾或在10000麗C0膜超濾后進行3000麗C0膜超濾獲得的肽部分也有較高的ACE抑制活性(IC50=30.0-31.4iig粉末/ml)。由于3000麗CO滲透物產率高于IOOO麗CO膜獲得的產率，因此進行IOOO麗CO的步驟益處不大。由于膜的流量隨孔徑的降低而降低，因此利用3000麗CO膜可獲得最佳的產率。實施例11亞麻子ACE抑制肽的超濾處理如實施例10所述對實施例7和9中制備的液體水解物通過截留分子量(麗CO)超過10000和100000的膜進行超濾。分別進行超濾，并收集和凍干兩者的滲透物和殘余物用于ACE抑制IC50測定。如上述實施例，所有含肽的滲余物的ACE抑制活性高于滲余物中發(fā)現(xiàn)的活性(表5)。該亞麻子水解物的粘度高于油菜籽蛋白水解物的粘度，因此用3000和IOOO麗CO的膜進行超濾是不可行的。當用IOK和100K麗CO膜進行操作時，由于在所述膜表面形成膜，因此進行超濾時遇到了困難?？赏ㄟ^A)攪拌和加熱所述的溶液至高于4(TC的溫度；B)將pH調整至pH3-4;或C)A與B的組合來避免形成所述膜。與所述原始亞麻子水解物的ACE抑制IC50值(64.2iig粉末/ml)比較，由于使用大孔徑的100K麗CO膜，大肽可通過所述膜進入滲透物中，因此這些超濾步驟沒有獲得顯著的改進。在乙醇處理的水解物的情況下，與原始的51.4g粉末/ml值比較，所述滲透物具有30.0和35.7g粉末/ml的改進IC50值，表明可借助通過10K或100K麗CO膜來改善從乙醇洗滌的脫脂粗粉制備的ACE抑制肽成分的活性。實施例12通過反相色譜對從油菜籽蛋白水解物制備的高生物活性ACE抑制肽的純化和鑒定將如實施例6中制備的脫脂油菜籽粗粉Alcalase2.4水解物以lOOmg/ml濃度溶于1%(v/v)的乙酸水溶液中用于制備色譜。將由三根Pr印Pak40mmCartridges(BondapackC-1815-20iim，40XlOOmm，Waters)和保護柱(40X10mm)組成的分段柱與Pr印LC4000系統(tǒng)(Waters)配接。利用Millennium色譜管理軟件2.15版(WatersInc，MA.美國)進行設備控制、數(shù)據采集和分析。通過溶劑傳輸系統(tǒng)來自動注射所述樣品(20ml)。利用2487吸光度檢測儀(2487AbsorbanceDetector)在280nm處監(jiān)測吸光度譜。利用Waters成分收集器(WatersFractionCollector)自動收集各成分。用兩種溶劑體系來洗脫所述柱(50ml*min—0:A:含有1X乙酸的水和B:甲醇(100%)(表6)。對所有收集的成分進行ACE抑制活性的評價。通過制備色譜對全部32.6g的油菜籽粗粉Acalase水解物進行分離，得到2.8g(8.5%)活性最高的肽組分，其ACE抑制IC50為2.0iig粉末/ml。通過Unicorn系統(tǒng)(PharmaciaBiotech,瑞典)控制的配接有l(wèi)KTikexplorer10XT系統(tǒng)的S印hasil"1P印tideC18ST10/250柱對從制備C-18得到的活性成分作進一步純化。用兩種溶劑體系A:20mm磷酸二氫鈉緩沖液(0.05%TFA)和B:20mm磷酸二氫鈉(含0.05%TFA的80%乙腈)，以5ml/min的流速對所述柱進行洗脫，在5倍柱容積(CV)的5%B無梯度洗脫后，以15CV從5%B-20%B進行梯度洗脫。注射體積為500ml的200mg/ml活性最高的制備色譜成分的溶液。在214nm處檢測吸光度，并收集所得成分。共收集到21組成分，其中活性最高的成分為Fu和F『在重復注射后，獲得了1.30gF^和0.85gF18，其ACE抑制活性IC50值分別為38.6和312.9yg粉末/ml。由于在所述色譜分離中使用了不揮發(fā)的緩沖液，這些IC50值高于原料的值。在S印hasilf1P印tideC18ST10/250柱(粒度12iim，PharmaciaBiotech，瑞典)上，利用兩種溶劑體系A水(含0.1%TFA)和B乙腈(含0.1%TFA)對每一種F13和F18進行再次色譜分離，以7個CV的10%B-30%B梯度溶液和5ml/分鐘的流速對這些活性組分進行脫鹽和進一步純化。從F13的色譜得到的主要的強力成分的峰鑒定為F13—n，從F18色譜得到的則為F18—5。F13—n的產出為18.32mg，ACE抑制IC50為0.44yg/ml;而F18—5的產出為4.89mg，IC50值為0.37yg/ml。在S印hasil"P印tideC1812ST4.6/250柱(PharmaciaBiotech,瑞典)上，利用兩種溶劑體系A水(含0.1%TFA)和B乙腈(含0.1%TFA)在10個CV的5%B_40%B梯度和1.5ml/分鐘的流速下對組分F13—n和F18—5進一步純化(圖3)。注射體積為30ml25mg/ml的溶液。在214nm監(jiān)測吸光度并收集各成分。通過常壓化學電離(APCi)質譜，利用配備有APCi探針、Z-噴射界面、分離模塊和光電二極管陣列檢測儀(WatersInc.MA，美國)的QuattroLC液相色譜/質譜儀(Micromass，英國)對從ST4.6/250柱得到的純化的單峰成分F13—lla和F18—5a中的肽進行鑒定。利用MassLynx軟件(Micromass，英國)進行設備控制和數(shù)據分析。在SymmetryC18柱上(2.OX150mm;5mm)色譜分離肽樣品(10ml)。利用兩種溶劑體系:(A)O.1%甲酸(FA)水溶液和(B)O.1XFA的乙腈溶液來洗脫所述樣品(0.3ml*min—0，首先用5-60%的乙腈梯度溶液進行10分鐘，在60%乙腈處維持2分鐘，隨后返回至5%乙腈維持1分鐘。隨后對此以0.3ml^in—1恒定流速進行4分鐘的無梯度洗脫。以1.5秒的掃描時間記錄50_500m/z的陽離子和陰離子強度。分析儀的真空度為2.2e—5托(torr)。生物活性最高的兩種肽鑒定為纈氨酸_絲氨酸_纈氨酸和苯丙氨酸_亮氨酸(表7)。以往沒有報道這兩種氨基酸序列中的任何一種具有ACE抑制活性。參考文獻Adler-Nissen，A.，(1979)，J.Agric.FoodChem.，^I，1256—1262;Adler-Nissen，J.(1986)，〃EnzymicHydrolysisofFoodProteins〃，ElsevierAppliedSciencePublishers,Barking,U.K.;Beaketal.，(1995)，J.FoodSci.，迎，929-935;Cushmanetal.，(1971)，Biochem.Pharmacol.，巡，1637—1648;Kawakamietal.，(1975)，in"CurrentAdvancesinBuckwheatResearch"，pp.927_934;Pedrocheetal.，(2002)，J.Sci.FoodAgric.，型，960-965;Skeggsetal.，(1956)，J.Exp.Med.，巡，259—299;Westcott&Muir，U.S.PatentNo.5，705，618;Wuetal.，(2002a)，F(xiàn)oodRes.Intnl.，星，367-375;Wuetal.，(2002b)，J.Chrom.A.，950(1/2)，125—130;Yangetal.，(1970)，Biochem.Biophys.Acta，lH，374-376;Yanoetal.，(1996)，Biosci.Biotechnol.Biochem.，迎，661-663.表lAlcalase2.4消化的植物水解物的ACE抑制IC50<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>表6.Pr印LC4000梯度譜<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>表7.從脫脂油菜籽alcalase2.4水解物中鑒定兩種活性最強的ACE抑制肽<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>權利要求制備含血管緊張素轉化酶(ACE)抑制肽的水解物的方法，包括(a)將基本不含油的種子粗粉或細粉與有機溶劑接觸，所述有機溶劑選自甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、丙酮、乙酸乙酯或其混合物；(b)從所述的有機溶劑中分離出步驟(a)的粗粉或細粉；及(c)利用至少一種蛋白水解酶處理步驟(b)分離的粗粉或細粉來產生含ACE抑制肽的水解物。2.如權利要求1所述的方法還包括從所述水解物中分離出所述處理的種子的粗粉或細粉。3.如權利要求l所述的方法，其中所述溶劑為乙醇。4.如權利要求1所述的方法，其中所述溶劑為含水有機溶劑。5.如權利要求4所述的方法，其中所述的溶劑為70:30v/v的乙醇水。6.如權利要求1-5中任一權利要求所述的方法，其中將所述種子粗粉或細粉在一定溫度下與所述溶劑接觸一段時間，其中所述溫度為2(TC至所述溶劑的沸點，所述時間為1小時至24小時。7.如權利要求1-5中任一權利要求所述的方法，其中對所述含ACE抑制肽的水解物進行超濾。8.如權利要求7所述的方法，其中用孔徑從1000至100，OOO麗CO的超濾膜對所述水解物進行超濾。9.如權利要求1-5中任一權利要求所述的方法，其中將所述水解物干燥形成粉末。10.如權利要求1-5中任一權利要求所述的方法，其中所述種子粗粉或細粉來自選自亞麻、油菜籽、棉籽、向日葵、花生、芥菜、豆、小麥、燕麥、大麥、黑麥和蕎麥的植物。11.如權利要求10所述的方法，其中所述豆選自大豆、豌豆、扁豆和鷹嘴豆。12.如權利要求1-5中任一權利要求所述的方法，其中所述至少一種蛋白水解酶的濃度為0.25%至8.0%w/w。13.如權利要求1-5中任一權利要求所述的方法，其中所述至少一種蛋白水解酶的濃度為0.5%至4.0%w/w。14.如權利要求1-5中任一權利要求所述的方法，其中所述至少一種蛋白水解酶是蛋白酶。15.如權利要求14所述方法，其中所述蛋白酶選自絲氨酸肽鏈內切酶和金屬肽鏈內切酶。16.如權利要求10所述的方法，其中所述至少一種蛋白水解酶是蛋白酶。17.如權利要求16所述方法，其中所述蛋白酶選自絲氨酸肽鏈內切酶和金屬肽鏈內切酶18.如權利要求1-5中任一權利要求所述的方法，其中所述至少一種蛋白水解酶選自Alcalase2.4L、堿性蛋白酶L-FG、中性蛋白酶NBP-L、Umamizyme、蛋白酶PAmano6、肽酶R、蛋白酶M"Amano"、ProleatherFG-F和嗜熱菌蛋白酶。19.如權利要求10所述的方法，其中所述至少一種蛋白水解酶選自Alcalase2.4L、堿性蛋白酶L-FG、中性蛋白酶NBP-L、Umamizyme、蛋白酶PAmano6、肽酶R、蛋白酶M"Amano"、ProleatherFG-F和嗜熱菌蛋白酶。20.如權利要求1-5中任一權利要求所述的方法，其中所述至少一種蛋白水解酶為堿性蛋白酶，且通過加入堿將所述的反應混合物的pH調節(jié)至堿性，所述堿選自NaOH、KOH和NH4OH。21.如權利要求20所述的方法，其中所加入的堿為KOH。22.如權利要求1-5中任一權利要求所述的方法，其中所述至少一種蛋白水解酶為酸性蛋白酶，且將所述的反應混合物的pH調節(jié)至酸性。23.如權利要求1-5中任一權利要求所述的方法，其中通過改變孵育時間來控制所述蛋白水解的程度。24.如權利要求1-5中任一權利要求所述的方法，其中所述種子粗粉為油菜籽粗粉，且所述水解物含有肽Val-Ser-Val。25.如權利要求16所述的方法，其中所述種子粗粉為油菜籽粗粉，且所述水解物含有肽Val-Ser-Val。26.如權利要求19所述的方法，其中所述種子粗粉為油菜籽粗粉，且所述水解物含有肽Val-Ser-Val。27.如權利要求1-5中任一權利要求所述的方法，其中所述種子粗粉為亞麻粗粉或大豆粗粉，且所述蛋白水解酶為金屬肽鏈內切酶。28.如權利要求16所述的方法，其中所述種子粗粉為亞麻粗粉或大豆粗粉，且所述蛋白水解酶為金屬肽鏈內切酶。29.通過權利要求1-28中任一權利要求所述的方法制備的含ACE抑制肽的水解物。30.如權利要求29所述的水解物，其中所述水解物的ACE抑制IC50低于200yg粉末/ml。31.如權利要求29或30所述的水解物，其包括肽Val-Ser-Val。32.通過干燥權利要求29-31中任一權利要求所述的水解物制備的粉末。33.如權利要求32所述的粉末，其包括肽Val-Ser-Val。34.含有權利要求29-31中任一權利要求所述的水解物或權利要求32或33所述的粉末的可食用產品。35.如權利要求34所述的產品，其中所述產品為食品或飲料。36.如權利要求34所述的產品，其中所述產品為食品補充劑。37.如權利要求34-36中任一權利要求所述的產品，其包括肽Val-Ser-Val。38.權利要求29-31中任一權利要求所述的水解物、或權利要求32或33所述的粉末、或權利要求34-37中任一權利要求所述的產品在制備抑制哺乳動物中ACE活性的藥物中的用途。39.如權利要求38所述的用途，其中所述抑制哺乳動物ACE活性的藥物用于降低所述哺乳動物中已升高的血壓。專利摘要本發(fā)明提供了從諸如種子粗粉或細粉的植物材料制備含有ACE抑制肽的水解物的改良方法。在一實施方案中，在消化前將所述的種子粗粉或細粉用有機溶劑來提取。本發(fā)明還提供了ACE抑制肽Val-Ser-Val和Phe-Leu。文檔編號A23L1/305GKCN1731934B發(fā)布類型授權專利申請?zhí)朇N200380107565公開日2010年4月28日申請日期2003年12月24日發(fā)明者吳建平,羅蒂米·E·阿呂科,阿利斯特·D·繆爾申請人:加拿大農業(yè)及農業(yè)食品導出引文BiBTeX,EndNote,RefMan專利引用(1),非專利引用(4),